UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

CALLAO
FACULTAD DE INGENIERA QUMICA

TEMA
COMPROBACIN DE LA LEY DE BEER-LAMBERT
LABORATORIO
ANLISIS INSTRUMENTAL 90G
ALUMNO
CRUZ ESPINOLA, DENIS JAICOL
CODIGO
1126120176
PROFESOR
ING. MG. RODRIGUEZ VILCHEZ, RICARDO
FECHA
24 DE ABRIL

2015-I

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

I.

OBJETIVOS:

Construir la grfica de calibracin de la absorbancia contra la concentracin

de las soluciones Mn+2 y Ni+2 de preparadas, utilizar la longitud de onda
ptima para determinar la absorbancia mediante el espectrofotmetro.

Determinar la absortividad molar.

Determinar las concentraciones Mn+2 y Ni+2

II.

INTRODUCCIN
El concepto de absorcin es establecido en la Ley de Lambert, propuesta
por primera vez en 1760, desde entonces los avances han sido en gran
escala, hasta realizar diversos tipos de espectrometra de absorcin y de
emisin. Esta tcnica ha sido utilizad para determinar diversos
componentes y caractersticas de sustancias puras y molculas, debe de
reunir ciertas caractersticas en su procedimiento de anlisis para que los
resultados sean confiables y verdaderos.
La ley de Lambert-Beer es de vital importancia en los mtodos
espectrofotomtricos de anlisis, ya que permite calcular la concentracin
de una sustancia a partir de la radiacin absorbida por una disolucin de la
misma.
La ley de Lambert- Beer se expresa en la siguiente ecuacin

=
Dnde: , , = = 1

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III.

MARCO TEORICO

ESPECTROFOTOMETRA ULTRAVIOLETA VISIBLE. LEY DE LAMBERTBEER.

Los mtodos espectroscpicos de anlisis estn basados en la medida de la
radiacin electromagntica que es absorbida o emitida por una sustancia. En
funcin de ello se clasifican fundamentalmente en:
Mtodos de absorcin: Se basan en la disminucin de la potencia de
un haz de radiacin electromagntica al interaccionar con una sustancia.
Mtodos de emisin: Se basan en la radiacin que emite una sustancia
cuando es excitada previamente por medio de otro tipo de energa
(trmica, elctrica).
Mtodos de fluorescencia: Se basan en la radiacin que emite la
sustancia cuando es excitada previamente por un haz de radiacin
electromagntica.
Otras clasificaciones de los mtodos espectroscpicos se establecen en funcin
de la regin del espectro electromagntico que interviene en la tcnica. As,
pueden utilizarse regiones como rayos X,
microondas,

etc.

En

la

Figura

ultravioleta,

visible,

infrarrojo,

1 pueden verse las regiones del espectro

electromagntico, en funcin de los valores de la longitud de onda () de cada

radiacin:

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En esta figura puede tambin observarse como la luz visible para el ojo
humano constituye nicamente una pequea parte del espectro electromagntico.
Dado que los primeros mtodos espectroscpicos desarrollados corresponden a la
regin del visible recibieron la denominacin de mtodos pticos, la cual se utiliza
todava con frecuencia. A continuacin, se ofrece una breve informacin sobre la
ley de Lambert-Beer y la espectrofotometra de absorcin en la regin visible del
espectro.
Si se considera que se dispone de una fuente de radiacin que hace llegar a la
muestra un haz de radiacin, de longitud de onda previamente seleccionada, cuya
potencia es P0, la muestra de espesor b absorbe una parte de esa radiacin
incidente, de forma que la potencia del haz disminuye despus de atravesar la
muestra siendo su nueva potencia P. El cociente entre la potencia de la radiacin
que sale de la muestra y la de la que incidi sobre ella, se define como
transmitancia:
T=P/P0

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La transmitancia tambin puede expresarse en tanto por ciento, multiplicando el

cociente anterior por 100. Es ms frecuente utilizar el concepto de absorbancia, o
densidad ptica, que se define como el logaritmo de la transmitancia cambiado de
signo:
A = log (P0 /P) = - log T
De acuerdo con estas expresiones, si la muestra no absorbe radiacin, P y P0
coinciden, por lo tanto A=0, y se transmite toda la radiacin T=1 (100% de
transmitancia). Si, en otro caso, se transmite solo un 1% de radiacin (T=0.01),
P=P0 /100, la absorcin de radiacin que ha tenido lugar corresponde a A=2.
Al incidir radiacin electromagntica visible sobre la materia puede ser totalmente
absorbida o totalmente reflejada. En el primer caso el objeto aparecer de color
negro y en el segundo de color blanco. Puesto que nosotros percibimos los
objetos por medio de la luz reflejada, si hacemos incidir un haz de luz blanca (que
contiene todas las longitudes de onda) sobre un objeto, ste absorber ciertas
longitudes de onda y reflejar otras, siendo stas ltimas las responsables del
color. Se dice que este color (observado) es complementario del que se percibira
si la luz absorbida se pudiera detectar. Dado que en la parte experimental de esta
prctica las medidas van a realizarse con espectrofotometra visible, es
conveniente conocer para qu longitud de onda tiene cada color su mxima
absorcin, lo que se muestra en la tabla siguiente:

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Para medir los valores de absorbancia y transmitancia de una disolucin se

utilizan espectrofotmetros UV-Vis, que, como puede verse en la figura, se
componen de cinco elementos principales:

Una fuente de radiacin que suele ser una lmpara de filamento de

wolframio .

Un monocromador que permite seleccionar una longitud de onda

determinada originando un haz monocromtico.

Un recipiente para contener la muestra denominado cubeta fabricado con

un material que permite el paso de la radiacin en la regin del espectro de
inters. Suelen ser de vidrio, plstico o cuarzo. El espesor de la cubeta ms
habitual es 1 cm.

Un detector que convierte la energa radiante en una seal elctrica.

Una pantalla de visualizacin.

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La absorbancia est relacionada con la concentracin de la sustancia, c, por la ley

de Lambert-Beer, que se resume con la ecuacin: A = b c , donde c se expresa
en mol/L, b es la longitud del camino ptico (anchura de la clula que contiene la
disolucin de la sustancia) y se expresa en cm, y es la absortividad molar,
propiedad caracterstica de cada sustancia correspondiente a la cantidad de
radiacin que absorbe a una longitud de onda determinada por unidad de
concentracin, siendo sus unidades L mol-1cm-1 (tngase en cuenta que la
absorbancia no tiene unidades).
Para poder aplicar la ley de Lambert-Beer es necesario seleccionar previamente
una longitud de onda puesto que tanto A como varan con ella. Para ello
se obtiene previamente el espectro de absorcin de la sustancia, que consiste en
una representacin de los valores de absorbancia frente a la longitud de onda
expresada en nanometros (nm). Del espectro de absorcin puede seleccionarse el
valor de longitud de onda para el cual la absorbancia es mxima. La Figura, se
muestra dos ejemplos de espectro de absorcin.

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Si bien la ley de Lambert-Beer indica que a una representacin grfica de la

absorbancia frente a la concentracin le correspondera una lnea recta, esto slo
tiene lugar para disoluciones diluidas, por ello, no es conveniente utilizar la
expresin matemtica directamente, sino construir en cada caso la recta de
calibrado que confirme que la ecuacin de Lambert-Beer se cumple en el intervalo
de concentraciones en el que se trabaja. Esta recta se construye midiendo la
absorbancia de una serie de disoluciones de concentracin perfectamente
conocida.

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IV.

MATERIALES Y EQUIPOS:
ESPECTOFOTMETRO Perkin Elmer Lambda 3B
CELDAS
SOLUCIN PATRN DE MANGANESO ( 100 mgMn/L )
PREPARAR SOLUCIONES DE NIQUEL
7 FIOLAS DE 25 mL
AGUA DESTILADA
VASO DE PRECIPITADOS
BURETA
BALANZA Y ESPATULA

V.

PARTE EXPERIMENTAL Y CLCULOS:

CASO I: MANGANESO

1) Construccin de la curva de calibracin con la longitud de onda optima del

Manganeso.

i.

Preparar una solucin patrn de 100 mg/Lt de Mn+2 usando KMnO4, 250
mL. En laboratorio, ya tenemos preparado la solucin, pero los clculos
fueron los siguientes:
Calculamos la cantidad de KMnO4 que se utilizara.
KMnO4 = 158.04
Datos:
100

Mn = 54.938

1
1
1KMn4 158.04KMn4
3

10 54.938
1
1KMn4
0.25 = 0.0719174342 KMn4

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Pesamos la cantidad hallada de permanganato de potasio y la aadimos

en una fiola de 250 mL y agregamos agua destilada hasta aforarla.
ii.

Luego a partir de la solucin patrn de 100 mgMn/Lt preparar las

soluciones de 5, 10, 15 y 20 mg/Lt de Mn+2 en 25 mL y completar con
agua hasta aforarla.

Para la primera solucin 5 mgMn/Lt

Expresamos la concentracin en Molar
5

1
1

= 9.1012 105

10 54.938

Volumen a utilizar de la solucin patrn:

En una dilucin se cumple:
1 1 = 2 2
100

1 = 5
25

1 = 0.8
Utilizar el volumen hallado de la solucin patrn y luego aforar
con agua destilada en una fiola de 25 mL.

Para la primera solucin 10 mgMn/Lt

Expresamos la concentracin en Molar
10

1
1

= 1.820 104

10 54.938

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Volumen a utilizar de la solucin patrn:

En una dilucin se cumple:
1 1 = 2 2
100

1 = 10
25

1 = 0.4

Utilizar el volumen hallado de la solucin patrn y luego aforar

con agua destilada en una fiola de 25 mL.

Para la primera solucin 15 mgMn/Lt

Expresamos la concentracin en Molar
15

1
1

= 2.7304 104

10 54.938

Volumen a utilizar de la solucin patrn:

En una dilucin se cumple:
1 1 = 2 2
100

1 = 15
25

1 = 0.267
Utilizar el volumen hallado de la solucin patrn y luego aforar
con agua destilada en una fiola de 25 mL.

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Para la primera solucin 20 mgMn/Lt

Expresamos la concentracin en Molar
20

1
1

= 3.6405 104

10 54.938

Volumen a utilizar de la solucin patrn:

En una dilucin se cumple
1 1 = 2 2
100

1 = 20
25

1 = 0.2

Utilizar el volumen hallado de la solucin patrn y luego aforar

con agua destilada en una fiola de 25 mL.
iii.

Calibrar el espectrofotmetro Perkin Elmer Lambda 3B, en este caso

se utilizara el agua destilada por ser el blanco de la muestra

iv.

Enjuagar cuidadosamente la cubeta espectrofotomtrica (celda) con el

agua para ambas celdas luego presionar el botn auto Zero , el aparato
estar calibrado cuando se verifique que la Absorbancia (A = 0 ) Y
Transmitancia (%T = 100 )

v.

Luego se desecha el agua que se encuentra en la primera celda, y se

reemplaza con la muestra de concentracin 5 mg/Lt, enjuagamos de
igual manera con la disolucin y llenamos entre 3 a 5 ml con la
condicin de q no est completamente llena.

vi.

Digitamos en teclado la longitud de onda ptima para el manganeso en

un rango de 500-550 nm, teniendo conocimiento que la optima del Mn
es 520 nm.

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vii.

Tomar lectura de la absorbancia registrada en el equipo, realizar la

lectura de 5, 10, 15, 20 mL.

viii.

Realizar una tabla de concentraciones de cada solucin y absorbancia

leda en cada solucin.

ix.

Construir la grfica de calibracin de la absorbancia contra la

concentracin de las soluciones de Mn.

x.

Determinar la absortividad molar mediante la grfica realizada.

Datos recopilados
(nm)
500
505
510
515
520
525
530
535
540
545
500

5 (mL)
0.06
0.067
0.066
0.068
0.077
0.083
0.077
0.071
0.074
0.079
0.072

MANGANESO (Mn+2)
Absorbancia
10 (mL)
15 (mL)
0.135
0.156
0.148
0.176
0.146
0.173
0.150
0.181
0.169
0.208
0.180
0.223
0.165
0.201
0.155
0.187
0.165
0.201
0.172
0.212
0.154
0.187

20 (mL)
0.242
0.268
0.262
0.271
0.310
0.330
0.300
0.280
0.297
0.315
0.284

Valores para graficar: Sabemos ptima del Mn+2 = 520 nm

N Solucin

C (*10-4 mol/ L )

Absorbancia

0.91012

0.077

1.8201

0.169

2.7304

0.208

3.6405

0.310

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Grfica CURVA DE CALIBRACIN

Absorbancia vs Concentracin
0.35

0.3

y = 0.0825x + 0.0026

Absorbancia

0.25
0.2

Concentracin vs
Absorbancia

0.15
0.1

Lineal (Concentracin vs
Absorbancia)

0.05
0

Concentracin (*10^-4 mol /L)

Se obtiene una grfica de lnea recta cuya ecuacin por mnimos cuadrados
resulta:

= + = 0.0825 + 0.0026
Donde
= , = =
El valor de la pendiente es

= 0.0825 104

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De la ecuacin de Beer Lambert:

=
Dnde:
= , =
= () () = 1

= =

Entonces determinamos la absortividad molar

825

De la ecuacin se puede despejar X = Concentracin, para determinar las

concentraciones
= 0.0825

+ 0.0026

0.0026
=
0.0825

2) Determinacin de las concentraciones de las muestras A ,B Y D de Mn

i.

Inmediatamente despus de terminar la lectura de las soluciones de

distintas concentraciones, agregar la muestra A a la primera celda.

ii.

Tomar lectura de la absorbancia registrada en el equipo.

iii.

Repetir los pasos 1 y 2 para las muestras B Y D.

iv.

Determinar la concentracin de las muestras con ayuda de la curva

de calibracin.

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Datos recopilados
(nm)
A
0.126
0.140
0.137
0.145
0.168
0.178
0.159
0.150
0.162
0.169
0.147

500
505
510
515
520
525
530
535
540
545
500

Absorbancia
B
0.199
0.216
0.211
0.223
0.256
0.265
0.239
0.229
0.246
0.254
0.223

D
0.117
0.125
0.123
0.128
0.148
0.151
0.138
0.131
0.139
0.145
0.130

De la curva de la calibracin se puede obtener las concentraciones, pero tambin

se conoce la absortividad molar entonces determinaremos las concentraciones
mediante la expresin:

0.0026
(
)

Dnde:

825

Para A
= 0.168
=

0.168 0.0026

= 2.004848485 104

825

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Expresamos en mg/ litros:

2.004848485 104

54.938 103

= 11.01423661
<>
1
1

Para B
= 0.256
=

0.256 0.0026

= 3.071515152 104

825

Expresamos en mg/ litros:

3.071515152 104

54.938 103

= 16.87428994
<>
1
1

Para D
= 0.148
=

0.148 0.0026

= 1.762424242 104

825

Expresamos en mg/ litros:

1.762424242 104

54.938 103

= 9.682406303
<>
1
1

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CASO II: NIQUEL

1) Construccin de la curva de calibracin con la longitud de onda optima del

niquel.

i.

Preparar una solucin patrn de 0.15 M de Ni+2, en 100 mL.

Calculamos la cantidad de Ni que se utilizara.
= 58.69
Datos:
0.15

ii.

58.69

0.1 = 0.88

Luego a partir de la solucin patrn de 0.15 M, preparar las soluciones

de 10, 15 y 20 mL de Ni+2 en 25 mL y completar con agua hasta aforarla.
Calcular las concentraciones de c/u de las soluciones.

Para la primera solucin 5 mL

En una dilucin se cumple:
1 1 = 2 2
0.15

5 = 2 25

2 = 0.03

No consideramos ya que no se aprecia la tonalidad del color con

respecto a las dems soluciones. (Absorbancia: negativo o cero)

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Para la segunda solucin 10 mL

En una dilucin se cumple:
1 1 = 2 2
0.15

10 = 2 25

2 = 0.06

Para la tercera solucin 15 mL

En una dilucin se cumple:
1 1 = 2 2
0.15

15 = 2 25

2 = 0.09

Para la cuarta solucin 20 mL

En una dilucin se cumple:
1 1 = 2 2
0.15

20 = 2 25

2 = 0.12

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iii.

Calibrar el espectrofotmetro Perkin Elmer Lambda 3B, en este caso

se utilizara el agua destilada por ser el blanco de la muestra

iv.

Enjuagar cuidadosamente la cubeta espectrofotomtrica (celda) con el

agua para ambas celdas luego presionar el botn auto Zero , el aparato
estar calibrado cuando se verifique que la Absorbancia (A = 0 ) Y
Transmitancia (%T = 100 )

v.

Luego se desecha el agua que se encuentra en la primera celda, y se

reemplaza con cada una de las muestras, enjuagamos de igual manera
con la disolucin y llenamos entre 3 a 5 ml con la condicin de q no est
completamente llena.

vi.

Digitamos en teclado la longitud de onda ptima para el manganeso en

un rango de 600-750 nm, para ello primero debemos conocer la
ptima del nquel.

vii.

Tomar lectura de la absorbancia registrada en el equipo, realizar la

lectura de 10, 15, 20 mL.

viii.

Realizar una tabla de concentraciones de cada solucin y absorbancia

leda en cada solucin.

ix.

Construir la grfica de calibracin de la absorbancia contra la

concentracin de las soluciones de Mn.

x.

Determinar la absortividad molar mediante la grfica realizada.

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Datos recopilados

ABSORBANCIA DE NIQUEL

(nm)
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
710

Nquel (Ni+2)
Absorbancia
10 (mL)
15 (mL)
0
-0.006
0.001
-0.003
0.004
0.002
0.007
0.006
0.011
0.010
0.013
0.014
0.014
0.015
0.013
0.014
0.013
0.014
0.014
0.015
0.015
0.017

20 (mL)
0.002
0.007
0.013
0.019
0.026
0.030
0.031
0.030
0.030
0.032
0.034

720

0.016
0.016

0.018
0.018

0.036
0.037

730
740

0.016
0.015

0.018
0.015

0.035
0.032

750

0.013

0.012

0.028

Calculando la longitud ptima del Ni+2, para ello debemos usar la siguiente
formula:
A = log (P0 /P) = - log %T
Con ayuda de Excel, los valores salen automticamente.

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% TRASMITANCIA DEL NIQUEL

(nm)
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
710
720
730
740
750

Nquel (Ni+2)
Porcentaje de Trasmitancia
10 (mL)
15 (mL)
20 (mL)
1
1.013911
0.995405
0.9977
1.006932
0.984011
0.990832
0.995405
0.97051
0.984011
0.986279
0.957194
0.97499
0.977237
0.94189
0.97051
0.968278
0.933254
0.968278
0.966051
0.931108
0.97051
0.968278
0.933254
0.97051
0.968278
0.933254
0.968278
0.966051
0.928966
0.966051
0.961612
0.924698
0.963829
0.959401
0.92045
0.963829
0.959401
0.918333
0.963829
0.959401
0.922571
0.966051
0.966051
0.928966
0.97051
0.972747
0.937562

Tomando los valores de la solucin de Ni+2 de 20 mL, tanto absorbancia como %

trasmitancia. Obtenemos con ayuda de la grfica, la ptima del nquel.
De la grfica: optima = 720 nm

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optima Ni+2 (20mL)

1

0.035

0.99

0.03

0.98

0.97

0.025

0.96

0.02

0.95

0.015

0.94

0.01

0.93

0.005

0.92

0.91
600

620

640

660

680

700

720

% Trasmitancia

Absorbancia

0.04

vs Absorbancia
vs % Trasmitancia

740

600 - 750 nm

Valores para graficar: Considerando la ptima del Ni+2

N Solucin

C ( mol/ L )

Absorbancia

0.06

0.016

0.09

0.018

0.12

0.037

Con estos datos podemos elaborar una curva de calibracion, para luego con
ayuda del ajuste lineal, calcular E.

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Grfica CURVA DE CALIBRACIN

Absorbancia vs Concentracin

0.04
0.035

y = 0.2829x - 0.0013

0.03
Absorbancia

0.025
0.02
Concentracion vs Absorbancia
0.015
Lineal (Concentracion vs
Absorbancia)

0.01
0.005
0
-0.005

0.03

0.06

0.09

0.12

0.15

Concentracin (mol / Litro)

Se obtiene una grfica de lnea recta cuya ecuacin por mnimos cuadrados
resulta:

= + = 0.2829 0.0013
Donde
= , = =
El valor de la pendiente es

= 0.2829

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De la ecuacin de Beer Lambert:

=
Dnde:
= , =
= () () = 1

Entonces determinamos la absortividad molar

0.2829

De la ecuacin se puede despejar X = Concentracin, para determinar las

concentraciones.

= 0.2829 0.0013

+ 0.0013
=
0.2829

2) Determinacin de las concentraciones de las muestras I y II de Ni+2

i.

Inmediatamente despus de terminar la lectura de las soluciones de

distintas concentraciones, agregar la muestra I a la primera celda.

ii.

Tomar lectura de la absorbancia registrada en el equipo.

iii.

Repetir los pasos 1 y 2 para la muestra II.

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iv.

Determinar la concentracin de las muestras con ayuda de la curva

de calibracin.

Datos recopilados
(nm)

Absorbancia
I
0.031
0.040
0.049
0.060
0.068
0.076
0.077
0.075
0.076
0.079
0.083
0.086
0.087
0.085
0.080
0.073

600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
710
720
730
740
750

II
0.130
0.143
0.159
0.173
0.176
0.202
0.202
0.196
0.201
0.209
0.216
0.222
0.224
0.221
0.213
0.201

De la curva de la calibracin se puede obtener las concentraciones, pero tambin

se conoce la absortividad molar entonces determinaremos las concentraciones
mediante la expresin:

+ 0.0013
(
)

Dnde:

0.2829

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Para I
= 0.087
=

0.087 + 0.0013

= 0.3121244256

0.2829

Para II
= 0.224
=

0.224 + 0.0013

= 0.7963944857

0.2829

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VI.

CONCLUSIONES
Resulta relevante construir nuestra curva de calibracin con la
longitud de onda ptima, utilizando un grfico a partir de varias
soluciones con concentraciones distintas contra las absorbancias que
presenten.
Se lleg a determinar la absortividad molar mediante la curva de
calibracin, siendo este el valor de la pendiente para el Mn+2: = 825
L/(cm*mol) y del Ni+2: = 0.2829 L/(cm*mol)
Se puede conocer cualquier concentracin desconocida de solucin
de Mn y Ni con la curva de calibracin. Las concentraciones de las
muestras fueron las siguientes.
Muestra
Mn

+2

Ni+2

VII.

Concentracin
A
B
D
I
II

11.014 ppm
16.874 ppm
9.682 ppm
0.312 M
0.796 M

RECOMENDACIONES

Realizar una buena calibracin del equipo

Asegurarse de que las celdas no tengan burbujas ni estn expuestas

a altas temperaturas al momento de agregar la muestra.
Ser lo ms precisos en las pesadas para preparar las soluciones y
obtener la concentracin deseada y por ende una lectura ms precisa en
el espectrofotmetro

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VIII.

BIBLIOGRAFIA

MELOAN G.E. Kiser R.W Problemas y experimentos en anlisis

instrumental. Editorial Revert.

DOUGLAS A. SKOOG, Principios de anlisis Instrumental, 6ta Edicin.

Pginas Web.

IX.

ANEXOS

PROBLEMA PROPUESTO
1. Datos de estndares de Cd+2 como Cd(CN)4= por medicin de %T usando
espectrofotmetro.

mg/Litro

%T

0.04

96

0.10

90.6

0.16

84.7

0.20

81.4

0.40

66.1

0.8

47.3

1.20

35.8

Determinar las concentraciones de las muestras que dieron:

i)

%T = 62.5 Ai

ii)

%T = 92

Aii

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RESOLUCION:
A partir de la frmula:

= log(% )
De la ecuacin de Beer Lambert:

=
Dnde:
= , =
= () () = 1

= <> =

Calculamos la A de c/u de los datos.

%T

0.96

0.017728767

0.44321917

0.906

0.042871802

0.42871802

0.847

0.07211659

0.45072869

0.814

0.089375595

0.44687798

0.661

0.179798541

0.44949635

0.473

0.325138859

0.40642357

0.358

0.446116973

0.37176414

Calculando el promedio de la absortividad molar:

= .

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Ahora podemos calculas las concentraciones que nos piden:

%T

0.625

0.204119983

0.92

0.036212173

Finalmente, aplicamos la siguiente formula:

PARA i:
=

0.204119983

= 0.47672046
0.42817542

0.0362112173

= 0.08457322
0.42817542

PARA ii:

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