Crescimento microbiano

Escherichia coli: bactria bacilar Gramnegativa, anaerbica facultativa e que no

produzem esporos

Escherichia coli no
microscpio,
ampliada 10.000
vezes.

 Aspergillus niger : incubao (fontes de

nutrio: acar e nitrognio).

 A relao entre o nmero de clulas e de

geraes pode ser expressa em uma srie de
equaes matemticas:
sendo a populao inicial = N0

1 gerao
2 gerao
3 gerao
n gerao

N = N0 x 21
N = N0 x 22
N = N0 x 23
N = N0 x 2n

populao final (N) = N0 x 2n

Superfcie

CONTROLE MICROBIANO

CONTROLE MICROBIANO

Controlar: destruir, inibir ou remover.

Agentes fsicos e qumicos que podem ser
utilizados para manter os microrganismos em nveis
aceitveis
AES DOS AGENTES:

Alterao na permeabilidade
da membrana
Danos s protenas e aos
cidos nuclicos

Condies que Afetam a Atividade de um

Agente de Controle Microbiano
Tamanho da populao

intensidade ou concentrao do agente

tempo de exposio

temperatura do ambiente
natureza do meio: umidade, pH...
tipo de microrganismo

CONTROLE MICROBIANO
Mtodos Fsicos do
Controle Microbiano
Calor: mido e seco

Mtodos Qumicos do
Controle Microbiano
Antimicrobianos

Filtrao

Fenol e compostos fenlicos

Baixas temperaturas

Bifenis

Alta presso

Halognios (iodo e cloro)

Dessecao

lcoois

Presso osmtica

Quaternrio de amnio

Radiao
O mtodo de escolha depende do tipo de material que contm o
microrganismo

ASPECTOS FUNDAMENTAIS DOS AGENTES FSICOS E QUMICOS :

1. Padro de morte em uma populao microbiana
Morte = perda da capacidade de reproduo
2. Condies que influenciam a atividade antimicrobiana

Quanto maior a populao microbiana, mais tempo para destruio;

Quanto menor a concentrao de antimicrobiano, mais tempo para
destruir;
Quanto maior o tempo de exposio, maior o nmero de clulas mortas;
Quanto mais alta a temperatura, mais rpido ocorrer a morte;
Natureza do material que contm os microrganismo
Caractersticas dos microrganismos que esto presentes
3. Mecanismo de destruio das clulas microbianas
Mecanismo de ao
Pr determinar as condies sob as quais atuar com mais eficincia
Espcies de microrganismos mais susceptveis

Agentes Fsicos - Temperatura

1. Calor mido
Mais eficiente que o calor seco (menos tempo e menor
temperatura)
Causa oxidao dos constituintes orgnicos da clula
(queima lentamente)
Esporos bacterianos: formas mais resistentes de vida
Clulas vegetativas de bactrias T= 5-10 min a 60-70 C

Clulas vegetativas de fungos T= 5-10 min a 50-60 C

Esporos de fungos T= 5-10 min a 70-80 C

Desnaturao de Protenas: Dissolve

lipdeos

gua Fervente: gua levada ao ponto de ebulio (100C)

- clulas vegetativas x esporos

Vapor d'gua - Autoclave

Sob presso (autoclavagem) 121 C a 1,1 kg cm-2
- rpido aquecimento
- grande penetrao
Temperaturas abaixo do ponto de ebulio:
Pasteurizao - 62,8 C/30min ou 72 C/ 15s

Agentes Fsicos - Temperatura

2. Calor Seco
Calor seco ou ar quente em temperaturas suficientemente
altas levam os microrganismos morte.
Causa desnaturao e coagulao das protenas vitais e
enzimas
Leva mais tempo que o calor mido
Usado para materiais que no podem ser esterilizados por
calor mido
3. Incinerao

Utilizada em ala ou agulhas

bacteriolgicas no bico de Bunsen

de

semeaduras

Agentes Fsicos - Temperatura

Agentes Fsicos - Radiaes

Energia na forma de ondas eletromagnticas
Quanto maior o comprimento de onda - menor o contedo
energtico
Radiaes de alta energia (comprimento de onda baixo)
provocam a morte das clulas - raios X, gama e luz UV
1 - Radiao Ionizante:

Alta energia - causam ionizao das molculas formando radicais

livres que so altamente reativos e destroem compostos celulares
como o DNA e protenas
Ex.: raios X e raios gama.

Alto poder de penetrao esterilizaao de alimentos e

equipamentos mdicos

Agentes Fsicos - Radiaes

Radiao No-Ionizante
Radiao UV: excita os eltrons - resultando em
uma molcula que reage diferente das
molculas no-irradiadas.
Provoca danos no DNA da clula

Lmpadas especiais: emitem luz UV com

comprimento de onda microbicida so utilizadas
para matar microrganismos
Esterilizao de superfcies

Sensibilidade de Microrganismos e de Funes Biolgicas

Radiao

Gray (Gy) representa a quantidade

de energia de radiao ionizante
absorvida (ou dose) por unidade de
massa, onde:
1 Gy = 1kg.m-2 s-2

Agentes Fsicos - Filtraes

Membranas filtrantes: esterilizao, separao
de diferentes tipos de microrganismos e para
coletar amostras microbianas
Tamanho dos poros que retem ou no os
microrganismos :
Bactrias - 0.5 a 1.0 m (geral)
Leveduras - 1.0-5.0 m x 5-30 m
Alguns tamanhos de poros comerciais : 0.25 m ;
0.45 m ; 0.5 m ; 1 m

Membranas Filtrantes

Fonte: Madigan et al., 2004, 2010. Microbiologia de Brock

Filtros Microbiolgicos

Filtro de profundidade
(Fibras de papel ou de
borossilicato)

Membrana Filtrante
(Acetato de celulose,
nitrocelulose ou
polissulfona)

Filtro Nucleoporo
(Filmes de
policarbonato)

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Micrografia Eletrnica de Varredura de Bactrias e Algas

Aquticas Retidas em um Filtro Nucleopore

Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock

Agentes Fsicos - Dessecao

Clulas
microbianas
vegetativas
quando
dessecadas interrompem suas atividades
metablicas
No provoca a morte
Liofilizao: os microrganismos so submetidos
desidratao extrema em temperaturas de
congelamento mantidas em ampolas fechadas
vcuo

Agentes Qumicos
Reduo do nmero de microrganismos na
superfcie de materiais como mesas e utenslios.
Usado em leses de pele para prevenir a
infeco
No existe um nico composto qumico que seja
ideal para todos os propsitos. Assim
importante conhecer algumas propriedades para
que se possa escolher o mais adequado:

Agentes Qumicos
Caractersticas de um agente qumico ideal
Atividade antimicrobiana:
Solubilidade:
Estabilidade:
Ausncia de toxicidade:
Homogeneidade
Atividade em temperatura ambiente ou corporal

Poder de penetrao
Ausncia de poderes corrosivos e tintoriais
Poder desodorizante

Capacidade detergente

Disponibilidade a baixo custo

Definies:
Esterilizante: o composto qumico que realiza uma
esterilizao, ou seja, elimina completamente todas as
formas bicrobianas (esporos e celulas vegetativas). Estril
um termo absoluto, ou seja, um material est estril ou no.
No pode ser "parcialmente estril" ou "quase estril.
Desinfetante: uma substncia qumica que mata as
formas vegetativas de microrganismos patognicos, mais
no necessariamente suas formas esporuladas. Refere-se
normalmente a substncias utilizadas em objetos.
Germicida: sinnimo do desinfetante; entretanto os
microrganismos mortos por um germicida no so
necessariamente patgenos. So usados mais termos
especficos como fungicida, bactericida, etc.

 Anti-sptico: um composto qumico usualmente

aplicado na superfcie do corpo humano para prevenir a
multiplicao
dos
microrganismos.
Mata
os
microrganismos, ou inibe seu crescimento e sua
atividade metablica.
Sanitizante:
agente
que
mata
99,9%
dos
microrganismos contaminantes de uma rea. So
normalmente aplicados em objetos (copos, talheres,
pratos e utenslios em restaurantes), e tambm na
limpeza de equipamentos de lacticnio e industrias de
alimentos

Agentes Qumicos
Principais Grupos de Desinfetantes e Anti-spticos :

Agentes Qumicos
Esterilizantes Qumicos - so utilizados para a esterilizao de
materiais sensveis ao calor.
1. xido de Etileno (gs)
Vapor altamente irritantes para os olhos e a mucosa .
So inflamveis mesmo a baixa concentrao
Grande poder de penetrao;
Baixa velocidade de ao tempo de exposio longo
Aplicao: esterilizao de materiais mdicos e laboratoriais.
Mecanismos de ao : inativa as enzimas e outras protenas que
tem tomos de hidrognio lbeis (grupos sulfidrilas)

2. -Propiolactona (liquido)
No inflamvel
Causa bolhas quando em contato com a pele e irritao nos olhos
Bactericida, esporicida, fungicida e viricida
No possui poder de penetrao, mais considerado mais ativo
contra os microrganismos que os xidos de etileno.
Possui propriedades carcinognica

Agentes Qumicos
Continuao...

3. Glutaraldedo (lquido oleoso)

Efeito contra vrus, clulas vegetativas e esporuladas de
bactrias e fungos
utilizado na medicina para esterilizar instrumentos
urolgicos, equipamentos respiratrios
4. Formaldedo (gs)
extremamente txico e seus vapores intensamente
irritantes mucosa
Quando em soluo, utilizado para desinfeco de
certos instrumentos.
Na forma gasosa pode ser utilizado para desinfeco e
esterilizao de reas fechadas
Mecanismo de ao : inativao de constituintes
celulares (protenas e cidos nuclecos)

Agentes Qumicos
Mecanismos de ao de vrios compostos
qumicos antimicrobianos em clula bacteriana:

Sntese Protica
(inibidores de 50S)
Eritromicicina (macroldeo)

Sntese Protica
(inibidores de 30S)

* Principais alvos:
- Parede celular
- Membrana plasmtica
- Processos biossintticos:
sntese de protenas
sntese de c. nuclicos

Fonte: Madigan et al., 2010

Meios de cultura de uso

industrial

 Nutrio: Fornecimento de substncias

nutritivas para o crescimento
bacteriano

Cultura: Propagao do microrganismo

em condies adequadas
- Exigncias Nutricionais e Ambientais

MEIO DE CULTURA
Associao qualitativa e quantitativa de substncias que fornecem os
nutrientes necessrios ao desenvolvimento (cultivo) de microrganismos fora
do seu meio natural.

Devem satisfazer as exigncias nutricionais dos microrganismos e fornecer

condies favorveis ao desenvolvimento (pH, umidade, temperatura)
Slidos, semi-slidos e lquidos.
So classificados como:
Naturais ou Quimicamente Definido: aquele em que a composio
qumica exata conhecida.
Complexo: so aqueles compostos de nutrientes como extratos de
levedura, de carne ou de plantas ou de produtos de digesto protica
dessas ou de outras fontes. A composio qumica exata no
conhecida.

Meios de Cultura
Principais elementos qumicos para o crescimento
celular: C, N, O, S e P
Carbono:
Nitrognio:
Hidrognio (H), Oxignio (O), Enxofre (S) e Fsforo (P)
H e O: componente dos compostos orgnicos e da gua
S: Biossntese dos aminocidos cistena, cistina, e metionina
P: Sntese de cidos nuclicos e ATP

Outros Elementos - Micronutrientes

Sdio, ferro, molibdnio, cobalto, zinco, cobre mangans

Sdio, Na+: Permeabilidade da membrana celular

Ferro, Fe+2: Cofator das enzimas: citocromo e catalases
Zn+2, Cu+2, Mn+2, Mo+6, Co+2: cofatores para ativar enzimas.
O Mo+6 nitrogenase - catalisa a converso do N2 para o NH3
(fixao do N2)

CARACTERSTICAS DESEJVEIS DOS

MEIOS DE CULTURA:
Baixo custo
Atender
as
microrganismos

necessidades

nutricionais

dos

Auxiliar no controle do processo. Ex.: evitar variaes

drsticas do pH.

No provocar problemas na recuperao do produto

Os componentes devem permitir algum tempo de
armazenagem

Possuir composio razoavelmente fixa

No causar dificuldade no tratamento final do efluente

A definio do meio de cultura adequado

assim como do microrganismo adequado,
uma etapa fundamental para um processo
fermentativo
mais
eficiente.

Aplicao dos Meios de Cultura

Meios
de
pr-enriquecimento:
permitem
a
dessensibilizao de microrganismos injuriados. Ex. gua
peptonada, caldo lactosado (isolamento de salmonelas de
leite em p).

Meios de Enriquecimento: proporcionam nutrientes adequados ao

crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos nmeros ou
de crescimento lento. Esses meios tm a propriedade de estimular o
crescimento de determinados microrganismos, mas existem alguns que tambm
podem inibir o crescimento de outros. Ex. Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina
para cultivo de Salmonelas
Diferenciais:
quando
contm
substncias que permitem estabelecer
diferenas entre microrganismos muito
parecidos. Ex.:gar sangue, agar BairdParker
gar Sangue

Baird Paker

Aplicao dos Meios de Cultura

Seletivos - os que contm substncias que
inibem o desenvolvimento de determinados
grupos de microrganismos, permitindo o
crescimento de outros.

Meios de triagem - avaliam determinadas

atividades metablicas permitindo caracterizao
e identificao perfunctria ou presuntiva de
muitos microrganismos. Ex.: gar trplice acar e
ferro

Identificao - prestam-se para a realizao de

provas bioqumicas e
verificao de funes
fisiolgicas
de organismos submetidos a
identificao. EX.: gar Citrato, Caldo nitrato
ALOA

Aplicao dos Meios de Cultura

Contagem: empregados para a determinao quantitativa da populao
microbiana. Ex.: Agar de Contagem em Placas, Agar Batata Dextrose, gar
Baird-Parker

gar Nutriente

Plate count gar (PCA)

Estocagem ou manuteno: utilizados para conservao de microrganismos

no laboratrio. Garantem a viabilidade de microrganismos. Ex.: gar sangue,
gar Simples, gar nutriente

Meios Especiais

Utilizados para: isolar, identificar ou

contar os microrganismos

Fornecem informaes
sobre os microrganismos

especficas

Meios para Anaerbios

Primeiros cultivos: Camadas profundas

de meios solidificado pois a camada de
gar da superfcie exclui o oxignio
atmosfrico

MEIO REDUZIDO: o agente redutor

remove o oxignio
Ex.: tioglicolato de sdio

Vide modo de preparo no meio

MEIOS DE USO INDUSTRIAL

Meios complexos: mais adequados

Mais baratos
Melhor rendimento
Maior produtividade.
Maior variedade de molculas orgnicas

Os meios quimicamente definidos:

Melhor controle das condies ambientais
Fcil excluir substncias txicas ou inibidoras
Fcil incluir precursores e/ou indutores nos nveis
adequados.
Fermentao Requer controle estrito das condies ambientais
Mais produtivas quando se utiliza meios quimicamente definidos.

MEIOS DE USO INDUSTRIAL

FONTES DE CARBONO
Carboidratos

leos vegetais co-substratos

Cana de acar, sorgo sacarino,

etc.

- Soja,

Frutas - uva, laranja, jabuticaba,

etc.

- Palma

Malte - cevada, trigo, milho, etc.

Melao - subproduto da fabricao

do acar
Licor sulftico - subproduto da
fabricao do papel

Lgno-celulsicos - palha, bagao

cana, resduos madeira
Carboidratos puros - acares e
amidos = preos elevados

- Algodo,
lcoois
- Etanol,

- Metanol
Alcanos C12 C14

MEIOS DE USO INDUSTRIAL

FONTES DE NITROGNIO
Inorgnico
amnia e sais de amnio

Orgnica

Lquido de macerao de milho = subproduto (amido)

Farinha de soja = subproduto da fabricao de leo
Extrato de levedura = preo elevado
Peptonas = preo elevado
Uria adubo

COMPONENTE DE MEIOS COMPLEXOS USADOS EM

PROCESSOS INDUSTRIAIS

COMPONENTE DE MEIOS QUIMICAMENTE DEFINIDOS

USADOS EM PROCESSOS INDUSTRIAIS