Talleres Laboratorio de Biologa General.

Perodo: Marzo-Julio
de 2016.
Docente Titular: Jaime Cantera-Kintz. Docentes Asistentes: Diego Hernndez, Mnica Gmez, Karen
Ospina.
Actualizacin en 2016 de Castro et al. 2008.

INSTRUMENTACIN PARA LA INVESTIGACIN EN BIOLOGA

INSTRUMENTATION FOR BIOLOGIC RESEARCH
Vanessa Salazar, David Rodrguez, Ximena Rodrguez, Alexander Toro 1.
Universidad del Valle, Departamento de Ciencias Biolgicas.
john.zarama@correounivalle.edu.co1
RESUMEN: Se ver resaltado cada uno de los usos que se le dio al microscopio, desde su
correcta utilizacin hasta el enfocar y distinguir medidas microscpicas en cada uno de los
objetivos (4X, 10X, 40X); la correcta preparacin de los materiales, para as al momento de
enfocar poder determinar a detalle ya sea el cabello, la letra, el algodn o el peridico y ver
cmo cambia dependiendo en el aumento en que se encuentra. Se evidenci que en el objetivo
de menor aumento (4X) era ms el brillo que traspasaba, pero era menor el detalle de nuestra
muestra, y que al trabajar con el objetivo de mayor aumento (40X) se poda dimensionar el
grosor y profundidad de las muestras con mayor detalle y menos brillo que al abarcar gran parte
del campo visual, aunque con ambos objetivos se logra distinguir lo poco uniforme que est
dispuesta la tinta en el caso de la letra y el peridico. Por ltimo, se determina el dimetro del
campo visual en cualquiera de los objetivos de aumento pasando los milmetros (papel
milimetrado) a micras.
PALABRAS CLAVE: Microscopio, resolucin, aumento, detalle, profundidad, dimetro.
ABSTRACT: Each one of the different uses of the microscope will be highlighted, from its proper
use to focus and distinguish the different measures of the objectives 4x, 10x and 40x; the right
way for mounting the samples, so they can be properly described, and the observation of the
change variations in the sample. A brighter incoming of light was evidenced with the lesser
magnification objective, while a dark and more detailed sample was shown using the 40x
magnification objective. The increasing in zoom over the samples revealed very particular
characteristics usually covered from naked eye, like the different textures in paper, cotton and
human hair, concluding that the detail level of life at its different scales is the basis of the
biologic research.
KEYWORDS: Microscope, resolution, detail, depth, diameter, magnification objective.
INTRODUCCIN: El desarrollo de este experimento se construye de acuerdo al manejo general
del microscopio, que ha permitido importantes avances en la investigacin y que ayudar a
observar e investigar los diferentes niveles de la vida. Esta prctica se basa en el nivel de
visualizacin de la imagen invertida, visualizacin del poder de aumento, visualizacin del
grosor y profundidad, y mediciones microscpicas que se visualizarn a travs de los diferentes
objetivos de aumento del microscopio, los cuales son 4x,10x,40x y 100x. Esto permitir que el
estudiante se familiarice con el manejo adecuado del microscopio, obteniendo variedad de
datos visibles y calculables, despus de haber observado y realizado cada uno de los ejercicios,
pasando por cada uno de los objetivos del microscopio; el estudiante se familiarizar con las
diferentes caractersticas que emanan de las muestras observadas bajo los diferentes
aumentos.
OBJETIVOS:
1. Identificar cada una de la partes del microscopio con cada uno de sus significados y as
obtener un buen manejo del mismo
2. Observar por cada uno de los objetivos teniendo en cuenta si la imagen al pasar por cada uno
de ellos ira elevando su poder de aument al ser visualizado por el microscopio.
3. Aplicar el manejo de materiales y el enfoque en el microscopio adecuadamente para realizar
la prctica, alcanzando un gran potencial de experiencia y aprendizaje por medio de normas
dadas en el laboratorio.

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MARCO TERICO: El estudio detallado de clulas y tejidos, y sus componentes, requiere de

instrumentos que permitan ampliar varias veces el tamao real de stos, para as identificar las
estructuras que los constituyen. El microscopio fue la herramienta de los primeros bilogos para
estudiar la clula y los tejidos, y todava es el componente principal de la investigacin
biolgica. El nombre deriva de mikrs, que significa pequeo, y skopoo, que significa observar.
La funcin del microscopio es la de aumentar el tamao de muestras y estructuras pequeas
para que sean visibles para el investigador. (Montalvo, 2010)
Los primeros microscopios compuestos fueron desarrollados por Hans y Zacaras Janssen,
quienes tallaron lentes biconvexas cuidadosamente para construirlos. El microscopio
desarrollado por los Janssen fue perfeccionado a travs de los aos, y hoy es el instrumento
ms utilizado en el estudio de clulas y tejidos. Pero no slo las lentes han sido mejoradas,
tambin lo han sido las partes mecnicas y estructurales de esta herramienta. En la actualidad,
el microscopio es un instrumento de uso cotidiano en los laboratorios de investigacin y de
diagnstico, as como en las aulas de enseanza de Biologa, Embriologa, Histologa,
Microbiologa y Patologa. (Montalvo, 2010)
La parte del microscopio que tiene una mayor relevancia y representa en s misma el
fundamento de la microscopa son los objetivos de aumento. De ellos depende que la calidad de
la imagen y los detalles que se visualizan a travs de ellos se traduzcan en la mayor cantidad de
datos posibles. Esto, en ltimas, hace responsable a los objetivos de aumento de ofrecer
imgenes mejor resueltas. (Montalvo, 2010)
Por otro lado, el aumento de un objetivo determina la capacidad que posee ste para ampliar la
imagen de una muestra; se define como la relacin entre el tamao de la imagen y el objeto en
valores lineales de largo y ancho. Al factor entre el aumento del ocular y el aumento del objetivo
se le denomina poder de aumento, y es el aumento final o total del microscopio. (Montalvo,
2010)
Otra caracterstica importante del microscopio es su poder de penetracin o de profundidad de
campo. Las muestras tomadas y preparadas en el microscopio poseen tres dimensiones, no dos.
Por ende, la visualizacin de una muestra se lleva a cabo en estas tres dimensiones. El eje de la
profundidad se navega usando el micromtrico, que genera varios planos de imgenes:
profundos, intermedios y superficiales. Cuando se examina un tejido con objetos de bajos
aumentos como el de 4x o 10x, la imagen que se observa puede enfocarse con facilidad sin que
se diferencien los planos de enfoque. Sin embargo, al usar objetivos de 40x o 100x, es necesario
utilizar el micromtrico para ajustar el plano deseado. El plano ajustado se ver claramente,
mientras que los dems se vern difusos y desenfocados. La capacidad que tiene el microscopio
de surcar la profundidad del campo en una muestra es su poder de penetracin. (Montalvo,
2010)
Si bien la imagen es aumentada varias veces con precisin detallada, la construccin de los
microscopios y la fsica de la luz (las propiedades de sus lentes) generan una imagen invertida.
Algo similar ocurre con la visin humana, en la que el cerebro es quien acaba de ajustar la
imagen para que arriba sea arriba y abajo sea abajo. No obstante, la estructura mecnica del
microscopio s se ajusta a esta inversin de la imagen, de modo que no exista confusin al
operar los movimientos en la muestra. (Montalvo, 2010)
El detalle de la imagen obtenida del microscopio es denominado resolucin. La resolucin existe
cuando hay una diferenciacin evidente entre un determinado punto y otro, de forma que entre
ambos se pueda establecer una distancia. Conforme esta distancia disminuya, mayor ser el
poder de resolucin, pues se establecer, en un determinado campo de dimetro, una mayor
diferenciacin de cada objeto de luz. Esto aumenta el detalle de la imagen, permitiendo percibir
una mayormente fiel representacin de la muestra, que es el cnit de la caracterizacin
biolgica: la clasificacin. A esta capacidad del microscopio se le denomina poder de resolucin.
(Montalvo, 2010)

METODOLOGA: Identificando cada uno de los componentes y normas de manejo con el

microscopio se dio por comenzado el experimento que tena que ver con la visualizacin de la

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imagen invertida, visualizacin del poder de aumento, visualizacin del grosor y profundidad y
por ultimo medidas microscpicas, se empez con el primer ejercicio que era cortar una letra de
un pedazo de papel peridico hacindole su respetivo montaje, ubicando la preparacin en la
lmina lista para ponerla en el microscopio. haciendo una observacin de dicha preparacin por
cada uno de los objetivos :4x,10x,y 40x teniendo en cuenta que al momento del enfoque se le
realizara en forma lenta evitando quebrar la lmina portaobjetos, finalizando la visualizacin se
pas a responder unas preguntas de acuerdo a cada poder de aumento que obtenan los
objetivos observados; luego de responderlas se pas al segundo ejercicio en donde la
preparacin se realizara con un pedazo de cabello de cualquiera de los integrantes del equipo o
cualquier compaero del curso, teniendo lista la preparacin la subimos al microscopio teniendo
cuidado al enfocar la visualizacin, la cual ser observada por los siguientes objetivos:4x,10x y
40x teniendo como pregunta, que se observa o que caracterstica aparece en cada uno de ellos,
calcular y analizar si el poder de aument es directa o inversamente proporcional a los valores
de los objetivos utilizados; manteniendo el valor del lente ocular constante, dndole una breve
explicacin a cada pregunta y realizando los esquemas de cada una de las preparacin por cada
ejercicio resuelto. teniendo resultados en los primeros ejercicios procedimos a pasar al tercero
que cuenta con una preparacin de algodn lista para ser observada por los siguiente objetivos :
10x y 40x en diferentes planos, dibujando lo observado por cada objetivo en las hojas del
laboratorio que sern entregadas luego de realizar todas las preparaciones y los clculos;
pasando al cuarto ejercicio donde la preparacin la realizamos con un pedazo de papel
milimetrado que se puso sobre la platina de manera que al ser enfocado pueda visualizarse
bien, pasando por cada uno de los objetivos las caractersticas eran diferentes, pero nos pidi
medir el dimetro del campo correspondiente del objetivo de menor aumento en milmetros y su
conversin en micras; l procedimiento se repiti con los otros aumentos disponibles, con el
dato anterior se determin el dimetro correspondiente a cualquiera de los objetivos pticos,
luego de este paso se respondieron unas peguntas breves que constituan de clculos y
anlisis de los milmetros y las micras de la letra observada anteriormente, pasando al ltimo
ejercicio donde la preparacin la realizamos con un pedazo de revista enfocando bien la
preparacin en el microscopio y respondiendo algunas preguntas sobre la dicha preparacin
para llenar una tabla con datos calculables encontrados por la misma.

RESULTADOS: Visualizacin de la imagen invertida

Aumento objetivo
4X

Aumento Objetivo
10X

Aumento objetivo
40X

Imagen
obtenida
(letra/periodico)

Figura 1. Desde el primer objetivo se observa, que la tinta est salpicada, cortada y no
uniforme, debido a que el papel donde est impresa no tiene una superficie uniforme, presenta
una especie de surcos que impiden la llegada de la tinta sobre esta. Tambin se puede inferir
que la impresin no posee mucha resolucin.

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Adems se observa que el desplazamiento de la imagen coincide con los movimientos que se
realizan en la platina, todo lo anterior debido a que la imagen que el observador recibe esta
invertida.
A medida que se cambia de objetivos menores a mayores, se puede notar, que la posicin de la
imagen es la misma, lo que vara es el campo de observacin, hacindose mayor al aumentar
el valor del aumento del objetivo. Tambin vara la iluminacin que se percibe; al crecer el valor
de aumento de los objetivos, la imagen que se recibe es menos brillante.

Visualizacin del poder de aumento

Aumento objetivo
4X

Aumento Objetivo
10X

Aumento objetivo
40X

Imagen
obtenida
(Cabello)

Figura 2. Se observa que el cabello posee una tonalidad ms clara que a simple vista, en este
caso ms amarillo y parece una lnea recta. Al usar el aumento de 4X no se observan
demasiados detalles, pero al usar el objetivo de 40X, se alcanzan a ver las escamas de la
keratina que contiene el cabello.

Posteriormente, se procedi a calcular el poder de aumento correspondiente a cada uno de los

objetivos (4X, 10X y 40X). Para esto se us el siguiente planteamiento.
Clculos del poder de aumento.

Poder de aumento= Aumento ocular Aumento objetivo

Aumento ocular=10 X (costante)

1Aumento ocular (10X) x Aumento objetivo (4X) = 40X
2Aumento ocular (10X) x Aumento objetivo (10X)=100X
1Aumento ocular (10X) x Aumento objetivo (40X)=400X

Los resultados se resumen en la tabla 1.

Tabla 1. Poder de aumento de los objetivos.

Aumento del ocular
Aumento del objetivo

Poder del aumento

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10X
10X
10X

4X
10X
40X

40X
100X
400X

Se observ que el poder de aumento es directamente proporcional al aumento del objetivo; es

decir, que entre mayor sea el aumento del objetivo, mayor ser el poder de aumento.

Visualizacin del grosor y profundidad (algodn)

Aumento objetivo
4X

Aumento Objetivo
10X

Aumento objetivo
40X

Imagen
obtenida
(algodn)

Figura 3. Usando el menor objetivo, se observa que las fibras de algodn poseen una
apariencia traslcida, que no todas tienen forma cilndrica, y que estn superpuestas. Al usar
objetivos de mayor aumento y variando el enfoque, se es posible observar de manera clara los
diferentes planos de la muestra.

Mediciones Microscpicas (Papel milimetrado)

Aumento objetivo
4X

Aumento Objetivo
10X

Aumento objetivo
40X

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Imagen
obtenida
(Papel
milimetrado)

Figura 4. Utilizando el objetivo con aumento de 4X y con ayuda del papel milimetrado, se logr
dar como medida aproximada al dimetro del campo correspondiente al menor objetivo, el valor
de 4,3 mm o 4300 m

. Conociendo este valor se procede a calcular el campo del dimetro

correspondiente a los dems objetivos. Para esto se plantea lo siguiente:

Clculos del dimetro del campo visual.

Y =Razon entre las magnificaciones del objetivode trabajo y el de aumento menor

Y=

Aumentoobjetivo de trabajo
Aumento objetivo menor

Dimetro del campo visual cualquier objetivo =

Objetivo 4X:

Y=

Dimetro del campo visual =

4x
=1
4X

4300 ( m )
=4300 ( m )
1

Objetivo 10x:

Y=

Dimetro del campo visual =

10 x
=2,5
4X

4300 ( m )
=1720 ( m )
2.5

Objetivo 40x:

Y=

40 x
=10
4X

Diametro objetivo menor(m)

Y

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Dimetro del campo visual =

4300 ( m )
=430 ( m )
10

Objetivo 100x:

Y=

Dimetro del campo visual =

100 x
=25
4X

4300 ( m )
=172 ( m )
25

Los datos se registraron en la siguiente tabla.

OCULAR

OBJETIVO

AUMENTO

DIAMETRO
(mm)

DIAMETRO
(m)

RELACIN

10x
10X
10X
10X

4.0X
10X
40X
100X

40X
100X
400X
1000X

4.3 mm
1.72 mm
0.43 mm
0.172 mm

4300 m
1720 m
430 m
172 m

1
2.5
10
25

Tabla 2.
Dimetro del
campo
visual.

Poder de resolucin (revista)

Aumento objetivo
4X

Imagen
obtenida
(Revista)

Figura
5. En el
campo
visual

correspondiente al objetivo de 4X, se observ que el dimetro es equivalente a 30 puntos; es

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decir que en 4300 m podemos encontrar 30 puntos de tinta en la muestra. Observando a

travs del objetivo de 10X se identificaron 12 puntos en un dimetro de 1720 m. Y por ltimo
utilizando el objetivo de 40X, se observa 3 puntos presentes en un dimetro de 430 m.

Posteriormente, se calcul la distancia promedio entre el centro de un punto a otro, utilizando el

siguiente planteamiento:
Clculo de la distancia entre cada punto.

D=Distancia entre el centro de un punto a otro (centro a centro)

D=

Diametro campo visual objetivo X

Puntos observados objetivo X

Objetivo 4X:
Puntos observados: 30
Dimetro campo visual: 4300

D=

4300 m
143.3 m
30

Objetivo 10X:
Puntos observados: 12
Dimetro campo visual: 1720

D=

1720 m
143.3 m
12

Objetivo 40X.
Puntos observados: 3
Dimetro campo visual: 430

D=

430 m
143.3 m
3

Resultados resumidos en la siguiente tabla.

Tabla 3. Distancia entre puntos de grabado de revista
Valor
Puntos observados
Diametro
Objetivo
visual
4X
30
4300 m
10X
12
1720 m
40X
3
430 m

Distancia entre punto

a punto
143.3 m
143.3 m
143.3 m

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La distancia promedio entre cada punto fue de 143.3 m.

DISCUSIN: La estructura mecnica del microscopio es la maquinaria que hace posible el

incremento de la imagen de las muestras. No obstante, esta imagen es una imagen virtual. Las
leyes fsicas que determinan el comportamiento de la luz y, ms importante an, la
conformacin de los lentes que constituyen el microscopio, terminan por invertir la imagen. Pese
a que podra, a priori, representar un engorro a la hora de navegar entre la muestra, la
maquinaria misma del microscopio se encarga de compensar por esta inversin de eje. De modo
que, al mover el tornillo de la platina en ambos ejes, vertical y horizontal, la imagen se desplace
de acorde a estos movimientos. La letra a visualizada, se encuentra de cabeza, pero no posee
una inversin horizontal. Esta inversin vertical podra determinar un factor crucial a la hora de
facilitar el manejo de la mecnica estructural del microscopio, que es indispensable para una
labor
investigativa
fluida.
El poder de aumento total del microscopio usado en la prctica era de 1000x. No fue sorpresa
que las imgenes de las distintas muestras que se tomaron estuvieran amplificadas con tal
magnitud. Diversos detalles, ocultos a simple vista, eran revelados conforme se incrementaba el
aumento de los objetivos. Puesto que el ocular de 10x era constante, el poder de aumento
variaba de forma directamente proporcional al aumento del objetivo. Esto demostr la
capacidad que tiene el microscopio como herramienta para analizar tejidos como el cabello, o
texturas
de
objetos
como
el
papel
peridico.
No obstante, no slo la imagen se amplifica, sino que tambin se especifica. Conforme se
increment el aumento de los objetivos, fue cada vez ms difcil enfocar en un nuevo plano, el
de la profundidad. En el objetivo de menor aumento la imagen se mostraba clara y ntida en
todas sus dimensiones, pero en el objetivo de 40x el campo visual revelaba la dimensin de la
profundidad, en la que se mostraban diferentes planos del algodn. Se entrevea fibras del
algodn en la parte posterior o anterior al punto enfocado en las fibras. De esta forma,
moviendo el micromtrico, se pudo intercambiar planos entre el algodn, haciendo visibles unas
fibras y desenfocando otras. Esto dej en claro el poder de penetracin del aumento del
microscopio. Pero demostr que podra haber dificultades con objetos muy slidos y no
traslcidos, de los cuales no se podra observar ms que una cara. Adems, que un objeto as
debera ser observado con un microscopio en el que la luz entre por una fuente distinta que
ilumine directamente la superficie que se quiera observar. Sin embargo, para un objeto tal como
el algodn, e incluso el cabello, que pese a que posee una forma y un volumen determinado,
posee a la vez determinada transparencia, se puede diferenciar entre los planos claramente.
Conocer el aumento del tamao de los objetivos, as como el campo de visin es importante
para la investigacin. De hecho, es algo de importancia capital. El tamao de las muestras es
aumentado, por lo que para medir su tamao real, requerido siempre en la caracterizacin de
organismos o de cualquier estructura de un tejido, es posible realizar clculos breves para
determinar el tamao preciso de alguna caracterstica. En la prctica se determin el tamao
del campo a travs de una relacin entre los objetivos, midiendo inicialmente con un papel
milimetrado. Esto permiti fcilmente determinar el tamao del campo del ltimo objetivo,
usando como referencia el de menor. Algo que, de no determinarse mediante clculos, sera
imposible. De esta forma, estando en el objetivo de mayor aumento se conoce el dimetro
exacto, y pueden registrarse datos de las observaciones con base a este. Teniendo en cuenta
que el registro debido de datos es fundamental en la investigacin cientfica, esta propiedad de
microscopio es vital para la correcta aplicacin de la investigacin biolgica.
Otra propiedad que se pudo experimentar en la prctica fue la del poder de resolucin del
microscopio, algo de suma importancia a la hora de registrar detalles fieles; es decir, que estos
detalles sean representados con la mayor cantidad de informacin y exactitud. A simple vista, el

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color de un grabado de la revista se vea uniforme, de un solo tono perceptible. No obstante, al

ubicarlo en la platina y ajustar el aumento de 4x, se pudo ver cmo este color no era uniforme
sino que estaba compuesto de muchos otros, en combinaciones variadas. Esto es un ejemplo
claro de que lo que a simple vista puede parecer de determinada manera, en una escala de
menor dimetro, o mayor aumento, puede cambiar drsticamente. Sobra decir que para la
representacin fiel de una caracterstica, de un tejido o un organismo, esto es fundamental.
CONCLUSIONES: Como resultado de la prctica, es posible concluir con el buen manejo que se le
dio al microscopio y sus componentes, ya que con ellos se obtuvieron bastantes observaciones
visibles y calculables de la imagen rotada por cada uno de los objetivos del microscopio,
permitiendo demostrar que cuando se observaba por cada uno de ellos la imagen se visualizaba
de una manera muy diferente partiendo de que en cada objetivo se iba agrandando su poder de
aumento en cada uno de los elementos que requeran ser observados. Esto, en ltimas, se
traduce en el fundamento de la investigacin cientfica en la biologa, pero tambin de reas
interdisciplinares que se encarguen del estudio de materiales o las ciencias en general.

BIBLIOGRAFA:
1. MONTALVO, Cesar E. Microscopa. UNAM, Histologa. Agosto del 2010. Disponible en:
http://histologiaunam.mx/descargas/ensenanza/portal_recursos_linea/apuntes/2_microsco
pia.pdf