REA DE HEMATOLOGA

I.

DEFINICIN

La Hematologa es la especialidad mdica que se dedica al tratamiento de los

pacientes con enfermedades hematolgicas, para ello se encarga del estudio e
investigacin de la sangre y los rganos Hematopoyticos (medula sea,
ganglios linfticos, bazos, etc.) tanto sanos como enfermos.Estudio de la
sangre y de los rganos que la producen, en particular, el que se refiere a los
trastornos patolgicos de la sangre. (LINCH Y COLB 2000).

2.- RECOMENDACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA SANGUINEA

PRINCIPIOS GENERALES.

El recipiente para la obtencin de la muestra puede ser de vidrio o de

plstico. Los recipientes deben ser fuertes y no permitir fugas cuando la
tapa o el tapn est correctamente aplicado.

Los frascos deben estar limpios y secos ya que restos de agua, jabones
o detergentes pueden alterar la morfologa de las clulas o causar
hemlisis.

Deben usarse recipientes estriles ya que la sangre es un excelente

medio de cultivo tanto para bacterias como para hongos.

Los recipientes deben ser rotulados para facilitar la identificacin en el

laboratorio colocando el nombre o cdigo que identifique al paciente; as
como la fecha de la toma de muestra.

Las rdenes o formularios de exmenes no se deben envolver alrededor

de la muestra sino colocarlo por separado.

En la muestra que se sospeche la presencia de microorganismos

infectantes como hepatitis B, VIH, etc., deben ser rotulados con una
etiqueta especial o avisar al personal de turno para que tenga cuidado.

Los recipientes secundarios pueden ser de metal o plstico, se deben

descontaminar con regularidad en autoclave o usando desinfectantes
qumicos.

Una vez obtenida y colocada en el frasco la muestra, debe ser agitada

suavemente por rotacin hasta que el anticoagulante sea disuelto, lo
mismo se har antes de proceder al examen.

3. OBTENCIN DE LA MUESTRA SANGUNEA:

En la mayora de los anlisis hematolgicos se usan Anticoagulantes los que
impiden que el calcio intervenga en la hemostasis.
El cido etileno diamino tetra actico (EDTA) es empleado 0.1 mg. por cada
mililitro de sangre, ste debe mezclarse bien con la muestra por rotacin
3.1.

OBTENCIN DE SANGRE VENOSA

LUGARES DE OBTENCIN:

Vena antecubital o mediana baslica del brazo.

Vena del dorso de la mano.

Vena femoral.

Vena yugular (casos especiales).

MATERIALES:
-Aguja hipodrmica N 20 21 x 1 .

-Tubo de ensayo 13 x 100 mm.

-Algodn.
-Ligadura.
-Guantes.
-Alcohol yodado.
PROCEDIMIENTO

Verificar que los elementos por utilizar estn listos y que el paciente se
sienta cmodo. aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por
encima de la flexin del codo o a 10cm del codo, sujetar con un medio
nudo.

Limpiar la zona con alcohol a 70% o alcohol yodado en una rea de dos
pulgadas.
-El paciente deber abrir y cerrar la mano durante unos segundos y
despusla mantendr cerrada, esto ayudar a visualizar las venas
superficiales.
-Se retira el casquete protector de la aguja y se coge la jeringa de tal manera
que el bisel se encuentre hacia arriba.
-Fijar la vena con un dedo por debajo del sitio de puncin e introducir la aguja
con el bisel hacia arriba formando un ngulo de 30 paralela a la vena, en
un solo paso se debe atravesar la piel y recolectar la sangre en un tubo o
frasco la cantidad necesaria segn el examen solicitado.
-Soltar la liga y colocar una torunda de algodn con alcohol.
-Retirar la aguja con rapidez.
-Introducir la aguja en su cartucho y descartar en un frasco con leja al 1%.
USOS
Se obtiene cuando se requiere una mayor cantidad de sangre,
as mismo

para la obtencin de suero o plasma en diferentes

pruebas hematolgicas, bioqumicas, etc.

3.2 OBTENCION DE SANGRE CAPILAR:
LUGARES DE OBTENCIN:
-

Lbulo de la oreja.

Yema de los dedos.

En los recin nacidos taln o dedo gordo del pie.

MATERIALES:
-

Algodn.

Alcohol al 70%.

Lanceta descartable o aguja N 21.

Lminas portaobjetos o tubos capilares con anticoagulante.

Guantes.

Mandiln.

PROCEDIMIENTO:
-la sangre capilar se obtiene de la cara lateral del dedo medio o anular en
los adultos y el dedo gordo del pie o taln el los nios.
-Desinfectar a zona con alcohol y luego secar con algodn estril.
-Punzar en dedo con una lanceta estril desechable(2mm de profundidad).
-Usar algodn estril para desechar la primera gota y recoger la siguiente
en un tubo capilar.
-Evitar comprimir la extremidad para obtener sangre porque se altera la
composicin sangunea.
Despus de obtenida la sangre, colocar una torunda de algodn donde se
ha realizado el pinchazo presionando hasta que cese la hemorragia.
USOS:
-Gota gruesa.
-Recuento celular..
-Para el dosaje de hemoglobina.
-Hemograma.
4. PREPARACIN DE LA MUESTRA SANGUINEA
4.1.

OBTENCIN DEL SUERO:

-

Extraer la sangre en un tubo de ensayo, el que no contiene ninguna

clase de anticoagulante.

Con un palillo, tratar de romper el cogulo

Colocar a la centrfuga por 5 minutos a 3 000 revoluciones por

minuto.

Separar el suero del coagulo con una pipeta pasteur

Obtener el suero as, libre de hemlisis, en una cantidad que sea

necesaria para el tipo de anlisis requerido.

4.2 EXTENSION SANGUINEA

IMPORTANCIA:
La prctica del frotis sanguneo llamado tambin extendido es de gran
importancia

en la hematologa ya que el diagnostico de muchas

enfermedades

hematolgicas pueden realizarse

con solo observar las

caractersticas morfolgicas de las clulas sanguneas Se basa en extender

una gota de sangre con la finalidad de obtener una pelcula uniforme de
manera que se obtenga una capa de clulas.

MUESTRA:
-

Sangre venosa sin anticoagulante

Sangre venosa con anticoagulante (EDTA), la prueba se puede hacer 1

a 2 horas despus.

Sangre capilar.

MATERIAL:
-

Lminas portaobjetos.

Lminas extensoras.

PROCEDIMIENTO:
-

Una vez extrada la sangre

con cualquiera de las metodologas,

Colocar una gota mediana de sangre en un extremo del portaobjeto (1

cm. del borde).
-

Coger la lmina extensora, sostenerla por sus lados largos entre el

dedo ndice y pulgar de la mano derecha, tomar otro portaobjetos de
ngulos recortados que se apoye sobre la gota de sangre formando un
ngulo de45.

Deslizar suavemente ya velocidad moderada el porta objetos hasta que

la gota de sangre quede bien extendida sobre la superficie del primer
portaobjetos.

Dejar secar la extensin a temperatura ambiente

Rotular y enumerar la lmina.

ZONAS DE ESTUDIO
a. Zona excesivamente gruesa: se hallan en la regininmediata al punto
de partida de la extensin (cabeza).en ella se aprecia siempre el
aumento de linfocitos
b. Zona excesivamente fina: corresponde al final de la extensin y
termina en una rea donde las clulas adoptan una posesin
acartonada. en esta regin existen un exceso de granulocitos

monocitos.
c. Zona ideal: corresponde a la regin intermedia del frotas y en ella
existe un reparto equilibrado de clulas

5.

HEMOGRAMA DE SCHILLING
DEFINICION:
Es el anlisis cuantitativo y cualitativo de los elementos celulares de la sangre
contenidos en 1mm3.
El hemograma tiene dos partes:

Recuento total de leucocitos.

Recuento diferencial de glbulos blancos.

A. RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS

MTODO HEMOCITOMTRICO
FUNDAMENTO.
Se basa en diluir la sangre en la porcin exacta con el liquido de Turk,
en el cual la solucin hipotnica de cido actico destruye a los
glbulos rojos y la violeta de genciana tie el ncleo de los leucocitos
no alterndolos, permitiendo reconocerlos fcilmente en la cmara de

neubauer y se expresa el nmero de ellos en un milmetro cbico de

sangre.
MUESTRA:
-

Sangre venosa con EDTA o capilar.

REACTIVO:

reactivo de turk.

MATERIAL:
-

Tubos de ensayo 13 x 100 mm

Pipeta de glbulos blancos

Boquilla de caucho

Pipeta de 1 ml

Cmara de neubauer con laminilla (hemocitmetro)

Algodn empapado en alcohol

EQUIPO:
-

Microscopio

Agitador de pipetas (opcional)

Contmetro

PROCEDIMIENTO:
-

Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar se

procede a aspirar con la pipeta de GB hasta la marca de 0,5.

limpiar la punta con papel filtro o gasa.

Aspirar el lquido de turk hasta la marca 11 (dilucin 1/20),

colocando en forma vertical

Mesclar el reactivo con la sangre.2 - 3 minutos

-

Eliminar las 3 primeras gotas

Colocar, una pequea gota cerca de un extremo abierto de la

cmara (evitar hacer burbujas) y dejar en reposo 2 a 3 minutos para
que la clulas se sedimenten.

Observar en el microscopio con objetivo de menor aumento 10x

contando los glbulos blancos en los 4 cuadrados grandes.

LECTURA:
El recuento de glbulos blancos se hace en forma de L invertida en los
16 cuadrados de cada cuadrante, la diferencia de lectura entre

cuadrante y cuadrante no debe ser mayor de 10. Se consideran para la

lectura las clulas que abren o tocan por dentro o por fuera las lneas
limitantes superior e izquierda en el cuadrado grande de recuento y no
se consideran las clulas que tocan los limites inferior y derecho.
CLCULOS:
Rcto. GB/mm3 =

Clulas Contadas en 4 cuadrantes

A x Alt. Cmara x Dilucin sangre

N GB/mm3

GB contados
4 x 1/10 x 1/20

N de GB/mm3

N GB/mm3 x 50

VALORES NORMALES:
-

Adultos:

5 000 a 10 000 GB/mm3

Nios :

6 000 a 16 000 GB/mm3

Recin nacidos: 10 000 a 25 000 GB/mm3

INTERPRETACIN:
LEUCOCITOSIS:

En

infecciones

bacterianas,

inyecciones

de

adrenalina, anorexia, enfermedades hepticas, ingestin de vit. D.

LEUCOPENIA: En sarampin, fiebre tifoidea, anemia perniciosa,
paludismo, desnutricin, tuberculosis.

B.

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS:

MTODO SCHILLING
FUNDAMENTO:
Los colorantes cidos se unen a los componentes bsicos de las clulas
inversamente los colorantes bsicos son atrados por los compuestos

cidos de las clulas y se combinan con ellos, permitiendo diferenciar las

partes de las celular por los colores que los tien.
MUESTRA:
Sangre Venosa con EDTA o sangre capilar
REACTIVOS:colorante de Wright.
MATERIAL:
-

Lmina portaobjeto

Lmina extensora

Gradilla de coloracin

Aceite de cedro

EQUIPO:
-

Microscopio

Contmetro

PROCEDIMIENTO:
- Preparar un frotis sanguneo y dejar secar.
-

Poner la lmina en la gradilla de coloracin, cubrirla con colorante

Wright por espacio de 1 minuto.

Aadir un volumen doble de agua tamponada y mezclar mediante

soplos suaves durante 2 minutos.

Dejar reposar unos 5 a 7 min.

Lavar la lmina a chorro, secar al medio ambiente, colocando la

lmina en forma vertical.

Observar con objetivo de inmersin (100X)

LECTURA:
La lectura se realiza desde los bordes de la lmina en forma de zigzag,
contando 100 leucocitos, anotando nmero y tipos. Los resultados se
expresan en porcentaje (%).

 VALORES NORMALES:

Neutrfilos:
Abastonados : 2 a 5 %
Segmentados : 45 a 65 %
Juveniles

: 0 a 1%

Eosinfilos

: 1 a 4%

Basfilos

Linfocitos : 20 a 35 %

Monocitos

: 0 a 1%

: 4 a 8%

INTERPRETACIN:
NEUTROFILIA:

En casos de infecciones agudas determinadas

por Cocobacterias, virosis y en procesos inflamatorios como difteria,

meningitis, neumona.
NEUTROPENIA:

Se presenta en anemia aplsica, leucemia,

sarampin, septicemias, paludismo.

EOSINOFILIA:

En

enfermedades

alrgicas,

vacunas,

enfermedades parasitarias, asma bronquial.

EOSINOPENIA:
sarampin,

En infecciones febriles como tifoidea, difteria,

neumona

intoxicaciones

por

enfermedades

hematopoyticas.
BASOFILIA: En leucemia mieloide crnica, policitemia vera,
anemias hemolticas, cirrosis heptica.
MONOCITOSIS:

En paludismo, leucemia hemoltica, TBC,

salmonelosis, brucelosis, fiebre tifoidea.

MONOCITOPENIA: En Brucelosis, en la enfermedad de Hodgking.
LINFOCITOSIS:

En tosferina, paludismo, anemia perniciosa,

sfilis, tuberculosis, etc.

LINFOCITOPENIA:

En

enfermedad de Hodgking.

estrs,

traumatismo

hemorrgico,

6.

DETERMINACIN DE HEMATOCRITO
Es uno de los mtodos ms sencillos, exactos y valiosos en hematologa. Es mucho
ms til y de confianza que el recuento de glbulos rojos. As mismo por medio de
l, se puede obtener una medicin de la hemoglobina y el recuento de glbulos
rojos, pueden ser calculados los ndices absolutos. Adems la columna de clulas
blancas resultante, proporciona una idea aproximada del recuento de leucocitos.
6.1. MTODO MICROMTRICO.
FUNDAMENTO:
Es el volumen globular de una cantidad conocida de una muestra de
sangre anticoagulada y centrifugada a altas revoluciones. Se basa en medir
la fraccin que comprende a los glbulos rojos, respecto al volumen total de
una muestra de sangre. Se expresa en porcentaje (%).
MUESTRA:

Sangre capilar o venosa con EDTA

MATERIAL:
-

Tubos capilares con o sin heparina

Plastilina

Lanceta descartable

Algodn empapado en alcohol

Lector de hematocrito.

EQUIPO:
-

Micro centrfuga

Cronmetro

PROCEDIMIENTO:
-

Obtener la muestra en tubo capilar heparinizado del dedo anular, del

lbulo de la oreja o del taln del pi (recin nacido).

Llenar por capilaridad las partes del capilar

-

Ocluir un extremo del capilar con plastilina.

Colocar el capilar en la micro centrfuga con la parte ocluida hacia el

exterior del equipo.

Centrifugar a 6 000 rpm. por 5minutos.

Al trmino del centrifugado en el capilar se observan 3 capas:

Parte Superior:

Contiene el plasma.

Parte Intermedia:

Contiene una capa delgada de leucocitos.

Parte Inferior: Que es el paquete eritrocitario.

LECTURA:

Hacer la lectura en la regla o tabla milimetrada, sostener el capilar

frente a la escala de manera que el fondo de la columna de
eritrocitos (no el extremo del capilar) quede exactamente al mismo
nivel de la lnea horizontal al cero, descartando toda la altura de la
plastilina; desplazar el capilar a travs de la escala hasta que la lnea
marcada con el numero 100 quede al nivel del tope de la columna del
plasma. Vigilar que la columna de eritrocitos contine sobre la lnea
de cero, tambin verifique que el capilar este en posicin vertical.
La lnea que pasa por el nivel del tope de la columna de eritrocitos
indicar la fraccin del volumen total de la muestra y constituye el
valor del hematocrito. Se informa en porcentaje .
VALORES NORMALES:
-

Hombres :

40 53%.

Mujeres

37 47%.

Recin nacido: 44 64%.

INTERPRETACIN:
AUMENTADO: En quemaduras, policitemia, shock asociado con ciruga.
DISMINUIDO: En todos los casos de anemia, embarazo.

7. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR

MTODO WINTROBE:

FUNDAMENTO:

Este examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar , al

colocar sangre anticoagulada en un tubo de posicin vertical. Se lee
macroscpicamente la columna de plasma al cabo de una hora de
reposo.

MUESTRA:
Sangre venosa con anticoagulante EDTA

MATERIAL:

Pipeta.

Soporte o gradilla

Tapones de goma.

Jeringa de punta largao pipeta pasteur de vstago largo

EQUIPO: Reloj
PROCEDIMIENTO:

Obtener sangre venosa con anticoagulante en un tubo de 2 5

cm.

Llenar el tubo wintrobe con la ayuda de una jeringa de punta

larga.

Dejarlo reposar el forma vertical durante 1 hora..

Trascurrido 1 hora, realizar la lectura de arriba hacia abajo.

Reportar el resultado en mm/h.

VALORES NORMALES:
-

Hombres: Hasta 0 - 7 mm/h.

Mujeres: Hasta 0 - 14mm/h.

Nios:

Hasta

INTERPRETACIN:

0 13 mm/h

AUMENTADA: En infecciones crnicas tuberculosis, cncer, lupus

eritematoso, artritis reumatoidea, menstruacin, embarazo normal,
anemia hemoltica, etc.

DISMINUIDA: En insuficiencia cardaca, transfusiones sanguneas,

estados anafilcticos.

8.

RECUENTO DE RETICULOCITOS:
FUNDAMENTO:

Se basa en poner de manifiesto en un campo microscpico a los diferentes

Reticulocitos mediante el colorante vital azul brillante de cresilo que colorea
los eritrocitos con resto de basofilia citoplasmtica en forma de filamentos o
grnulos.
MUESTRA:
Sangre venosa con anticoagulante EDTA.
MATERIAL:
-

Tubo de ensayo de 13 x 100 mm.

Micropipeta de 50 ul.

Lmina portaobjeto.

Bao mara

EQUIPO:
- Cronmetro.
PROCEDIMIENTO:
-

Colocar 2 gotas de colorante de azul brillante de cresilo en un tubo.

Aadir 3 gotas de sangre capilar o venosa.

Mezclar e incubar 30minutos a 37a temperatura ambiente durante una

hora.

Realizar un frotis delgado..

Dejar secar al medio ambiente

Colocar una gota de aceite de cedro sobre el extendido y observar al

microscopio con el objetivo de inmersin.
RECUENTO:
Contar 1000 G.R con un objetivo de inmersin y contar los glbulos
de contengan grnulos o filamentos como redes de color azul oscuro
(reticulocitos)
Por ejemplo: si en mil eritrocitos hay 13 reticulocitos, se informa 1,3
reticulocitos por mm3.

VALORES NORMALES:
-

ADULTOS: hasta 1.5 %..

NIOS:

de 2.0 a 6.0 %..

INTERPRETACION:

AUMENTADO:

En

estado

de

hiperregeneracin

de

la

eritropoyesis, anemia hemorrgica y hemoltica, terapia de

anemia ferropnica.

DISMINUIDO: En anemia aplsica, procesos neoplsicos que

afectan al sistema reticuloendotelial.

9.

TIEMPO DE COAGULACIN
MTODO DE BURKER O DEL PORTAOBJETO
FUNDAMENTO:

Se basa en indicar el tiempo que transcurre desde el momento en que

se coloca una muestra de sangre en un portaobjetos hasta que se forme
la fibrina en cantidad suficiente para que una masa de sangre extrada y
puesta en condiciones determinadas, pase del estado fluido al de gel.
MUESTRA:
-

Sangre capilar o venosa.

 MATERIALES:
-

Lancetas descartables

Lminas portaobjetos

Agujas

Alcohol yodado

Algodn

EQUIPO:
-

Cronmetro

PROCEDIMIENTO

Realizar asepsia donde se va a realizar la puncin cutnea (eliminar

la primera gota).

Colocar tres gotas de sangre sobre el portaobjetos y hacer funcionar

el cronmetro

Cada 30 segundos, examinar si se forma el hilo de fibrina., detener

el cronmetro y tomar el tiempo transcurrido.

VALORES NORMALES:
De 3 8 minutos en ambos sexos.
INTERPRETACIN:

AUMENTADA: En la ingestin de anticuerpos y tetraciclinas, as

mismo en la hemofilia, trombocitopenia, despus del tratamiento con
heparina y por hipocalcemia consecutivas a transfusiones reiteradas.

DISMINUDA: Se da despus de hemorragias, esplenectoma,

cardiopata, anestesia general.

10.

GRUPO SANGUNEO.
DEFINICION.

Un grupo sanguneo es una clasificacin de la sangre de acuerdo

con las caractersticas presentes o no en la superficie de los glbulos
rojos y en el suero de la sangre. Las dos clasificaciones ms
importantes para describir grupos sanguneos en humanos son los
antgenos (el sistema ABO) y el factor RH.
El tipo de sangre es determinado, en parte, por los antgenos de los
grupos sanguneos A, B, O presentes en los glbulos rojos.
El tipo de sangre es determinado, en parte, por los antgenos de los
grupos sanguneos A, B, O presentes en los glbulos rojos .

FUNDAMENTO:
La identificacin de glbulos rojos en el sistema ABO se realiza
haciendo reaccionar los glbulos rojos desconocidos frente a sueros
conocidos conteniendo anticuerpos contra glbulos rojos A, B y AB
por separado producindose un fenmeno de aglutinacin en caso
de ser positiva la reaccin.
MATERIALES:
-

Aguja o lanceta

Reactivo. Anti A, Anti B, Factor RH.

Laminas portaobjetos.

Algodn.

PROCEDIMIENTO:
Se pone tres gotas de sangre en una lmina porta objeto.
Agregar a la primera gota el anti A, a la segunda el anti B, a la tercera el
FRH. Se homogeniza cada gota por separado y se observa resultado.

LECTURA Y CLCULO DE RESULTADO.

Si las clulas sanguneas se aglutinan al mezclarlas con suero anti-A, la

persona posee sangre tipo A

Si las clulas sanguneas se aglutinan al mezclarlas con suero anti-B,

la persona posee sangre tipo B

Si las clulas sanguneas se aglutinan al mezclarlas con sueros anti-

Ay anti-B, entonces la persona posee sangre tipo AB.

Si las clulas sanguneas no se aglutinan al mezclarlas con suero

Anti A y Anti B, la persona posee sangre tipo O

Si las clulas sanguneas no se aglutinan al mezclarse con suero

anti-Rh, el tipo de sangre es RH negativo.

Si las clulas sanguneas se aglutinan al mezclarlas con suero antiRh, el tipo de sangre es RH positivo.

INTERPRETACIN DE RESULTADO.

Aunque la estructura fsica general de las personas es la misma,

cada individuo es nico. Cada persona posee identificadores en las
clulas que permiten que el cuerpo reconozca esas clulas como
suyas. Los identificadores comunes e importantes son Ay B, mientras
que el tipo de sangre o designa la ausencia de los marcadores A y B .
Existe otro identificador de superficie o antgeno en la superficie de
los glbulos rojos denominado factor RH, cuya presencia o ausencia
es lo que identifica a la sangre como RH+ (positivo) o RH- (negativo).