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MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA APLICADA

VI.

CONCLUSIONES

VII.
CUESTIONARIO
1) Qu es el Caldo Lactosa Bilis (2%) verde brillante y cul es su importancia?
2) Qu otros mtodos existen para la determinacin de coliformes totales?
3) Qu otros anlisis microbiolgicos se realizan al agua, elabore un flujograma de cada
uno de ellos?
4) Qu parmetros contempla las Normas tcnicas de la calidad del agua en la industria
alimentaria?
5) Qu tipo de microrganismos se presentan en aguas residuales, estancadas y
porque?
6) Elabore en cuadro de las enfermedades de origen hdrico con su patgeno y
represente la incidencia actual de estos en nuestro pas.
Enumeracin de coliformes totales (ICMSF, 2000)

10-2

10 -1

1 ml

1 ml

10-3

1 ml

10 ml Caldo Lauril Simple / Caldo Lactosa

Incubar a 35 por 24 - 48 horas
Seleccionar los tubos positivos (presencia de gas)
Tomar una asada de c/tubo positivo e inocular en Caldo Brilla

Incubar a 35 por 24 48 horas

Blga. Maribel Huatuco Lozano & Blga. Kelly Vivanco Montoya

Para el resultado final verificar del NMP

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Nmero ms Probable NMP de bacterias (tres tubos por cada dilucin)

Segn ICMSF Alimentos

Nmero de tubos positivos en cada

dilucin
Dilucin
Dilucin
Dilucin
10-1
0
1
1
1
1
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3

10-2
1
0
0
1
2
0
0
1
1
2
0
0
1
1
2
2
2
3
3
3

10-3
0
0
1
0
0
0
1
0
1
0
0
1
0
1
0
1
2
0
1
2

NMP
por gramo

3
4
7
7
11
9
14
15
20
21
23
40
40
70
90
150
210
200
500
1100

Frmula:
Valor del NMP (tabla) * 10
NMP/ 100 ml =
Mayor volumen estudiado

Blga. Maribel Huatuco Lozano & Blga. Kelly Vivanco Montoya

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PRACTICA DE LABORATORIO N3
RECUENTO TOTAL DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESFILOS

OBJETIVOS
Conocer el mtodo para determinar el nmero de microorganismos viables.
Realizar un recuento de bacterias mesfilas viables en el agua de consumo h u m a n o
c o m o u n indicador microbiano de la calidad.

II.FUNDAMENTO TERICO
Tcnica que permite la determinacin de los microorganismos presentes en una muestra,
basndose en su crecimiento y desarrollo en forma de colonias, en un medio de cultivo
especfico en placa. Se determinan por este mtodo slo las clulas microbianas viables
en las condiciones de trabajo (nutrientes, atmsfera temperatura). Como las colonias
pueden originarse tanto a partir de una clula como de un grupo de clulas, se utiliza el
trmino unidades formadoras de colonias (ufc).
En el grupo de los mesfilos aerobios se incluyen todas las bacterias, mohos y levaduras
capaces de desarrollarse a 30 C en las condiciones establecidas. En este recuento se
estima la microflora total sin especificar tipos de microorganismos. Refleja la calidad
sanitaria del agua, del alimento, las condiciones de manipulacin, las condiciones
higinicas de la materia prima. Un recuento bajo de aerobios mesfilos no implica o no
asegura la ausencia de patgenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado
no significa presencia de flora patgena. Ahora bien, salvo en alimentos obtenidos por
fermentacin, no son recomendables recuentos elevados.
-

Un recuento elevado puede significar:

Excesiva contaminacin de la materia prima
Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin
La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son mesfilos
La inmediata alteracin del producto
El recuento de mesfilos nos indica las condiciones de salubridad de algunos alimentos.

III.MATERIALES Y EQUIPOS
a. Estufa de Incubacin, 35 - 37 C.
b. Pipetas bacteriolgicas de 1 ml
c. Asa de inoculacin
Blga. Maribel Huatuco Lozano & Blga. Kelly Vivanco Montoya

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d.
e.
f.
g.

Tubos de 150*15 mm
Agua Peptonada 0.1%
Agar Plate count
Muestra: agua potable

IV.PROCEDIMIENTO
A. DILUCIN DE LA MUESTRA
- Obtener la muestra con agua como se indic en la prctica N2.
- Inocular el agua peptonada con diluciones decimales de la muestra de agua problema
expresados en 10-1, 10-2, 10-3 y 10-4.
- De cada dilucin depositar 1ml en cada placa de Petri.
- Verter 15 ml de medio de cultivo de agar fundido y temperado a 45 C en cada placa
- Homogeneizar el inoculo mediante rotacin alternada, hacer rotaciones 5 veces sentido
horario, 5veces de abajo arriba, 5 veces antihorario y 5 veces derecha e izquierda sobre
una superficie plana.
- Dejar solidificar (5-10min), invertir las placas y meterlas en la estufa a 37C (+/-1C),
incubar durante 48h.
- Se puede realizar un computo de recuento estandar en placa o computo estimado de
recuento estandar en placa.
- Hay que elegir placas que tengan de 30 a 300 colonias.
- Para contar usamos el contador de colonias
B. LECTURA Y EXPRESIN DE RESULTADOS.
- Transcurridos 48h (+/-3h) contar todas las colonias desarrolladas en cada placa. El
resultado se expresar, como n de bacterias totales en 1ml.
- Cuadricular las placas en 1 cm2.
- Colocar la placa sobre el microscopio o con la ayuda de una lupa contar y caracterizar las
colonias existentes.
C. CLCULO DEL RECUENTO ESTANDAR EN PLACA
Eleccin de las placas de diluciones
b) Eleccin de las placas correspondientes a una dilucin que presentan entre 30 a 300
colonias.
Contar todas las colonias de cada placa con ayuda de un contador de colonias.
Hallar la media aritmtica de los 2 valores y multiplicar por el factor de dilucin.
Reportar el valor obtenido como recuento estndar en placa.
c) Si una de las placas de la dilucin escogida presenta algo menos de 30 colonias o algo
ms de 300 colonias, debe contarse todas las colonias de ambas placas y hallarse la
media aritmtica y multiplicar por el factor de dilucin.
d) Cuando las placas de 2 diluciones consecutivas presentan entre 30 y 300 colonias, debe
hallarse los recuentos estndar de cada dilucin y el resultado se obtendr de la media de
los 2 valores resultantes; a menos que uno de ellos se superior al doble del otro, en cuyo
caso se reportara como recuento estndar en placa el valor ms bajo.
El nmero total de colonias en la placa
Blga. Maribel Huatuco Lozano & Blga. Kelly Vivanco Montoya

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Luego del conteo multiplicar el nmero de colonias por el rea de la placa, luego se
multiplica el nmero obtenido de la operacin anterior por la dilucin de la muestra,
obtenindose finalmente el nmero de colonias por mililitro de muestra.
I

RESULTADOS

Dilucin10-1
N Colonias ___
DILUCIN

Dilucin10-2
N Colonias ___

Dilucin10-3
N Colonias ___

CONTEO
UFC/ml

10-1
10-2
10-3
VCONCLUSIN

VIII.

CUESTIONARIO
1) Desarrolle un flujograma de otros mtodos empleados para el Recuento de
microorganismos y fundamente cada uno.
2) Qu es una ISO? qu ISO se desarrollan en el Per actualmente para alimentos
para el consumo humano y porque .
3) Considera esa implementacin necesaria fundamente su respuesta.

Blga. Maribel Huatuco Lozano & Blga. Kelly Vivanco Montoya

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4) Qu otras sustancias se utilizan como diluyentes para realizar los anlisis

microbiolgicos?
5) Qu microoganismos se consideran dentro de los aerobios mesofilos viables.cite los
ms importantes en el Per ?
6) Qu otros medios a diferencia de plate count se pueden emplear

cuadro de comparacin y fundamente porque?

Blga. Maribel Huatuco Lozano & Blga. Kelly Vivanco Montoya

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