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Leccin 4.4.

- LAS
LAS INMUNOGLOBULINAS.
INMUNOGLOBULINAS. Estructura
Estructura yy funcin:
funcin:
Leccin
caractersticas generales,
generales, clases,
clases, subclases
subclases yy funciones.
funciones. Gentica
Gentica de
de
caractersticas
las inmunoglobulinas:
inmunoglobulinas: los
los genes
genes de
de las
las cadenas
cadenas ligeras;
ligeras; los
los genes
genes de
de
las
las cadenas
cadenas pesadas;
pesadas; generacin
generacin de
de lala diversidad;
diversidad; regulacin
regulacin de
de su
su
las
expresin. La
La reaccin
reaccin antgeno
antgeno anticuerpo:
anticuerpo: conceptos
conceptos de
de valencia,
valencia,
expresin.
afinidad yy avidez;
avidez; lala reaccin
reaccin de
de precipitacin;
precipitacin; lala reaccin
reaccin de
de
afinidad
aglutinacin; lala reaccin
reaccin de
de neutralizacin.
neutralizacin. Tcnicas
Tcnicas basadas
basadas en
en lala
aglutinacin;
reaccinantgeno-anticuerpo
antgeno-anticuerpo
reaccin

Maduracindel
dellinfocito
linfocitoBB
Maduracin

Clula
madre
Clula
ESTADO DE
Pre-B
MADURACIN
FUNCIN DEL
ANTGENO

Clula B
inmadura

Antgeno independiente
Mdula sea

LUGARES
ANATMICOS
ESTADO DE
citoplasma
PRODUCCIN
Ninguno
DE Ig
ESTADO
FUNCIONAL
Precursor

Clula B
madura

Incapaz de
respuesta

IgM en
membrana

Sensible a
tolerancia o a
induccin

Clula B
activada

Clula
plasmtica

Antgeno dependiente

Periferia
IgM e IgD
Baja tasa de secrecin de
en membrana Ig. Cambio de isotipo de
cadena pesada
Capaz de
respuesta

Estadios tempranos
de respuesta

Alta tasa de
secrecin de Ig

Respuestas
primarias y
secundarias

Lamolcula
molculade
deinmunoglobulina
inmunoglobulina
La

Sitios de
unin al
antgeno
Cadena ligera
24 kDa

Dominios
variables (V)

VH
VL
CH1

Cadena pesada
55-75 kDa

CL

bisagra
CH2
CH3

Papaina
Pepsina

Pepsina

Puentes
disulfuro
Sitio de unin
del complemento
Sitio de unin del
Receptor de Fc

Fragmento
F(ab)2

Fragmentos
de bajo Pm

Papaina

2 Fragmentos Fab

Fragmento Fc

Clasesde
deinmunoglobulinas
inmunoglobulinas
Clases
IgD
IgA 1

IgG 2
IgG 4

IgG 1

IgG 3

IgE

Cadena
J

IgM
Componente
secretor

Cadena J

sIgA

IgG

Flexibilidadde
dela
lamolcula
molculade
deinmunoglobulina
inmunoglobulina
Flexibilidad

Variantesde
deinmunoglobulinas
inmunoglobulinas
Variantes
Isotipo.Isotipo.-variaciones
variacionesen
enlas
lasregiones
regionesconstantes
constantesde
delas
lascadenas
cadenaspesadas
pesadasyy
ligeras
ligeraspresentes
presentesen
entodos
todoslos
losindividuos
individuosde
deuna
unaespecie.
especie.
Isotipos
Isotiposde
decadenas
cadenaspesadas:
pesadas:, ,, ,, ,, ,
Isotipos
Isotiposde
decadenas
cadenasligeras:
ligeras:, ,
Cada
Cada isotipo
isotipo de
de cadena
cadena pesada
pesada puede
puede estar
estar asociado
asociado con
con cualquiera
cualquiera de
de
cadena
cadenaligera.
ligera.
Alotipo.Alotipo.-variaciones
variacionesallicas
allicasen
enlos
losisotipos
isotiposde
decadenas
cadenaspesadas
pesadasyyligeras
ligeras
presentes
presentesen
enalgunos
algunosindividuos
individuosde
delalaespecie.
especie.
Idiotipo.Idiotipo.-configuracin
configuracinconformacional
conformacionalespecfica
especficadel
delparatopo
paratopode
deuna
una
inmunoglobulina.
inmunoglobulina.
Los
Los idiotipos
idiotipos de
de una
una inmunoglobulina
inmunoglobulina no
no compartidos
compartidos con
con ninguna
ninguna otra
otra se
se
denominan
denominanidiotipos
idiotiposprivados.
privados.
Los
Losidiotipos
idiotipospresentes
presentesen
enms
msde
deuna
unainmunoglobulina
inmunoglobulinase
sedenominan
denominan
idiotipos
idiotipospblicos
pblicosoode
dereaccin
reaccincruzada.
cruzada.

Cadenas pesadas
Isotipo de
cadena

Pm (kDa)

Clase

50
70
55
52
70

IgG
IgM
IgA
IgD
IgE

Cadenas ligeras

Otros componentes

Isotipo de
cadena

Pm (kDa)

Componente
secretor

Cadena J

23
23

En IgA
70 kDa

En IgA, IgM
15 kDa

Losdominios
dominiosde
deinmunoglobulina
inmunoglobulina(Ig).
(Ig).La
Lasuperfamilia
superfamiliade
delas
lasIg
Ig
Los

Las
Las estructuras
estructuras dibujadas
dibujadas representan
representan las
las hojas
hojas .. Las
Las de
de lala izquierda
izquierda de
de cada
cada tipo
tipo de
de
dominio
se
pliegan
sobre
la
de
la
derecha.
Los
puntos
rojos
indican
las
cistenas
que
dominio se pliegan sobre la de la derecha. Los puntos rojos indican las cistenas que
establecen
establecenlos
lospuentes
puentesdisulfuro
disulfuroentre
entrelas
lashebras
hebrasBByyFFde
deambas
ambascaras.
caras.El
Eldominio
dominioV-set
V-setes
es
similar
al
dominio
variable
de
las
Ig.
Los
dominios
C1
y
C2
sets
lo
son
a
los
dominios
similar al dominio variable de las Ig. Los dominios C1 y C2 sets lo son a los dominios
constantes
constantesde
delas
lasIg.
Ig.El
Eldominio
dominioI-set
I-setes
esintermedio
intermedioentre
entreambos.
ambos.

Dominiosde
deinmunoglobulina.
inmunoglobulina.Dominios
Dominiosvariables
variables
Dominios

n de aminocidos diferentes en un punto de muchas cadenas


Variabilidad =
Frecuencia del ms comn
Ejem.: 50 cadenas ligeras presentan en la posicin 7, Ser 40 veces y el resto en
cantidades variables, Val, Trp y Leu
Frecuencia del ms comn 40/50 = 08
Wu y Kabat (1970)

Variabilidad = 4/08 = 5

Propiedadesde
delos
losisotipos
isotiposde
deinmunoglobulinas
inmunoglobulinashumanas
humanas
Propiedades
IgG.IgG.- Monomrica.
Monomrica. Es
Es lala ms
ms abundante
abundante en
en elel suero
suero (75%).
(75%). Predomina
Predomina en
en lala
respuesta
respuesta secundaria.
secundaria. Posee
Posee capacidad
capacidad de
de neutralizar,
neutralizar, precipitar
precipitar yy opsonizar.
opsonizar.
Activa
Activalalava
vaclsica
clsicadel
delcomplemento.
complemento.Es
Eslalanica
nicaque
queatraviesa
atraviesalalaplacenta.
placenta.
IgM.IgM.- Pentamrica.
Pentamrica. Supone
Supone elel 10%
10% del
del total
total en
en elel suero.
suero. Predomina
Predomina en
en lala
respuesta
respuesta primaria.
primaria. Posee
Posee capacidad
capacidad de
de neutralizar,
neutralizar, precipitar
precipitar yy opsonizar.
opsonizar.
Activa
la
va
clsica
del
complemento.
Activa la va clsica del complemento.
IgA.IgA.-Supone
Suponeelel6%
6%del
deltotal
totalen
enelelsuero.
suero.Monomrica
Monomricaen
enelelMALT
MALTyydimrica
dimricaen
en
las
las secreciones.
secreciones. Inmunocomplejos
Inmunocomplejos de
de IgA1
IgA1 activan
activan lala va
va alternativa
alternativa del
del
complemento.
complemento.Posee
Poseecapacidad
capacidadde
deprecipitar
precipitaryyopsonizar.
opsonizar.
IgD.IgD.-Raramente
Raramentesecretada,
secretada,supone
suponeelel02%
02%del
deltotal
totalen
enelelsuero.
suero.Est
Estpresente
presente
en
en lala superficie
superficie de
de los
los linfocitos
linfocitos BB coexpresada
coexpresada con
con lala IgM.
IgM. Media
Media lala activacin
activacin
del
linfocito
B.
del linfocito B.
IgE.IgE.-Supone
Suponeelel0002%
0002%del
deltotal
totalen
enelelsuero.
suero.Se
Seencuentra
encuentrafundamentalmente
fundamentalmenteen
en
lala superficie
superficie de
de mastocitos
mastocitos yy basfilos
basfilos yy de
de eosinfilos
eosinfilos activados
activados en
en elel foco
foco de
de
infeccin.
infeccin. Participa
Participa en
en lala defensa
defensa contra
contra parsitos.
parsitos. Est
Est implicada
implicada en
en las
las
reacciones
reaccionesalrgicas.
alrgicas.

Receptoresde
deinmunoglobulinas
inmunoglobulinas
Receptores

Transportede
deIgA
IgA
Transporte

Lumen pH 6

Clula intestinal

FcRn

IgG

Superficie
basal pH 74

Transportede
deIgG
IgG
Transporte

Propiedadesbiolgicas
biolgicasde
delas
lasinmunoglobulinas
inmunoglobulinas
Propiedades

RESPUESTA
ADCC

NK
F
A
G
O
C
I
T
O
S
I
S
S

Clula diana

Aumento de la
permeabilidad
vascular

Dominio de
reconocimiento
Dominio de
funciones
biolgicas

Ig

ACTIVACIN DEL
COMPLEMENTO

FcR
Quimiotaxis
activacin
Fagocito

Anticuerposmonoclonales
monoclonales
Anticuerpos
Va de novo
Fosforibosil
pirofosfato

Uridilato

Va de recuperacin
Timidina

TK

Hipoxantina

HGPRT

Enzimas
mutadas en las
lneas mutantes
de mieloma
usadas en las
fusiones

aminopterina

NUCLETIDOS
Fundamento
Fundamentodel
delmedio
medioHAT
HAT

TK = timidina kinasa
HGPRT = hipoxantina guanina
fosforibosil transferasa

Fv

scFv

Fab
Fab-enzima

Anticuerpo
monoclonal de
ratn

Anticuerpo humano
con Fv de ratn

Inmunoadesina
Fc

Anticuerpo humano
con CDRs de ratn

mAb

F(ab)2

Fab
scFv

Radionclido

Toxina o Droga

Citocina

Biotina
Droga

Prodroga
enzima
Streptavidina

sc(Fv)2
monocatenario
triabodies

diabodies

scFv
conjugados
qumicamente

Deteccin
Deteccinmediante
medianteanticuerpos
anticuerpos
monoclonales
marcados
monoclonales marcados con
con
istopos
radiactivos
de
una
istopos radiactivos de una
metstasis
metstasisde
decncer
cncerde
decolon.
colon.

Antiguosmodelos
modelosexplicativos
explicativosde
dela
ladiversidad
diversidadde
deinmunoglobulinas
inmunoglobulinas
Antiguos
A)
A) Modelo
Modelo de
de las
las mutaciones
mutaciones somticas.somticas.- propugna
propugna una
una alta
alta tasa
tasa de
de
mutaciones.
mutaciones.
Qu
Qulas
lasprovoca?.
provoca?.
Por
Porqu
quno
nose
seven
venafectadas
afectadaslas
lasregiones
regionesconstantes?.
constantes?.
B)
B) Modelo
Modelode
dela
ladiversidad
diversidadde
dela
lalnea
lneagerminal.germinal.-propugna
propugnamultitud
multitudde
de
genes
genesgenerados
generadospor
porduplicaciones
duplicacionesgnicas.
gnicas.
No
Noexplica
explicalalaalta
altadiversidad
diversidad
Por
Porqu
quno
nose
seven
venafectadas
afectadaslas
lasregiones
regionesconstantes?.
constantes?.
C)
C) Modelo
Modelo de
de Dreyer
Dreyer yy Bennett.
Bennett. Un
Un gen
gen para
para la
la regin
regin constante
constante yy
mltiples
mltiplespara
paralas
lasvariables
variablesque
querecombinan.
recombinan.
Choc
Choccon
conelelmodelo
modelovigente
vigentede
deun
ungen
genuna
unaenzima
enzima
cmo
cmoexplicar
explicarlaladiversidad
diversidadde
deregiones
regionesvariables?.
variables?.
La realidad, como veremos, es la suma de los tres conceptos:
mltiples genes, mutaciones, recombinacin somtica.

Organizacinde
delos
losloci
locide
deIg
Ighumanas
humanas
Organizacin

Expresin
Expresinde
delos
losgenes
genesde
delas
las
cadenas
cadenaspesadas
pesadasyyligeras
ligeras

Exclusinallica
allica
Exclusin

Mecanismosde
derecombinacin
recombinacinde
desegmentos
segmentosgnicos
gnicos
Mecanismos

Larecombinacin
recombinacinsomtica
somticasigue
siguela
laregla
regla12/23
12/23
La

Mecanismosde
degeneracin
generacinde
dediversidad
diversidad
Mecanismos

MECANISMOS
MECANISMOSGENERADORES
GENERADORESDE
DEDIVERSIDAD
DIVERSIDAD
Diferentes
Diferentesposibilidades
posibilidadescombinatorias
combinatoriasde
delos
lossegmentos
segmentosV,
V,DDyyJ.J.
Imprecisin
Imprecisinde
dela
larecombinacin
recombinacinde
delos
lossegmentos
segmentosV,
V,DDyyJ.J.
Introduccin
Introduccinde
denuevos
nuevosnucletidos
nucletidosen
enlos
loslugares
lugaresde
de corte
corte yyempalme
empalme
durante
duranteelelproceso
procesode
derecombinacin
recombinacin
Diversidad
Diversidadderivada
derivadade
dela
launin
uninde
dediferentes
diferentesisotipos
isotiposde
decadenas
cadenasLLyyH.
H.
DIVERSIDAD DE INMUNOGLOBULINAS
Inmunoglobulinas
Cadena H

Cadenas +

Segmentos V

65

70

Segmentos D

27

Segmentos J

5
+ 4

Total combinaciones de segmentos


y cadenas

34X106

34X106

Diversidad por recombinacin

3X107

3X107

Diversidad Total

1014

Cambiode
deisotipo
isotipo
Cambio
GAGCT

GGGGGT

150

Exn I (iniciador de la
transcripcin)

Secuencia de las regiones de cambio


VDJ

IFN-

IgD

Seales de linfocitos Th: CD40 y citocinas

Ausencia de seal

IgM

IgG

IL-4

IgE

Lareaccin
reaccinantgeno-anticuerpo
antgeno-anticuerpo
La

El
El reconocimiento
reconocimiento del
del antgeno
antgeno por
por parte
parte del
del anticuerpo
anticuerpo tiene
tiene
diferentes
diferentesconsecuencias,
consecuencias,pudiendo
pudiendoprovocar:
provocar:
La
Laneutralizacin
neutralizacinde
dela
laactividad
actividadbiolgica
biolgicadel
delantgeno.
antgeno.
La
Laprecipitacin
precipitacinde
delos
losantgenos
antgenossolubles.
solubles.
La
Laaglutinacin
aglutinacinde
delos
losantgenos
antgenosparticulados.
particulados.
La
Laactivacin
activacindel
delcomplemento.
complemento.
Las
Las reacciones
reacciones de
de precipitacin
precipitacin yy aglutinacin
aglutinacin
requieren
multivalente del
del antgeno
antgeno yy
requieren del
del carcter
carcter multivalente
anticuerpo
anticuerpopara
paraproducirse.
producirse.

Multivalencia del antgeno

Antgeno (A)
univalente

Antgeno (A)
multivalente

Anticuerpos
anti-A

Anticuerpos
anti-A

Complejos A:anti-A no
entrecruzados

Complejos A:anti-A
entrecruzados

Multivalencia del anticuerpo

Antgeno (A)
multivalente

Antgeno (A)
multivalente

Fab anti-A

F(ab)2 anti-A

Complejos A:Fab anti-A


no entrecruzados

Complejos A:F(ab)2
entrecruzados

Basesfsico-qumicas
fsico-qumicasde
dela
lainteraccin
interaccinantgeno:anticuerpo
antgeno:anticuerpo
Bases

(A)

(B)

En
En (A),
(A), los
los paratopos
paratopos de
de los
los anticuerpos
anticuerpos aa yy bb pueden
pueden encajar,
encajar, uno
uno
mejor
que
otro,
con
el
hapteno.
En
(B),
la
introduccin
de
un
grupo
mejor que otro, con el hapteno. En (B), la introduccin de un grupo
nitro,
nitro, en
en azul,
azul, no
no les
les permitira
permitira encajar
encajar pero
pero sisi lo
lo hara
hara un
un tercer
tercer
anticuerpo
anticuerpoc.c.

Laafinidad
afinidadde
dela
lareaccin
reaccinantgeno:anticuerpo
antgeno:anticuerpo
La

La
La afinidad
afinidad de
de lala unin
unin antgeno
antgeno
anticuerpo
depende
del
equilibrio
anticuerpo depende del equilibrio
que
quese
seestablezca
establezcaentre
entrefuerzas
fuerzasde
de
atraccin
y
repulsin.
atraccin y repulsin.

Al
Alno
noser
sercovalente
covalentelalaunin
uninantgeno
antgenoanticuerpo,
anticuerpo,
sta
es
reversible
por
lo
que
le
es
de
sta es reversible por lo que le es deaplicacin
aplicacin
lala ley
de
accin
de
masas
y
calcular
ley de accin de masas y calcular as
as lala
afinidad
afinidadde
deun
unparatopo.
paratopo.La
Laafinidad
afinidadviene
vienedada
dada
por
el
valor
de
k
y
mide
la
fuerza
de
la
unin
por el valor de k y mide la fuerza de la unin
entre
entre un
un epitopo
epitopo yy un
un paratopo,
paratopo, su
su valor
valor se
se
calcula
mediante
la
ecuacin
calcula mediante la ecuacin
G

alcanzar valores de101111M-1-1


kka puede
a puede alcanzar valores de10 M

La
La dilisis
dilisis de
de equilibrio
equilibrio permite
permite calcular
calcular lala
afinidad
afinidadde
deun
unparatopo
paratopo

= RT

ln k

pero
pero lo
lo comn
comn es
es que
que en
en un
un suero
suero los
los anticuerpos
anticuerpos sean
sean alal menos
menos
divalentes
y
con
mltiples
especificidades
y
los
antgenos
divalentes y con mltiples especificidades y los antgenos sean
sean
multivalentes.
En
este
caso
a
la
fuerza
de
unin
se
le
denomina
avidez,
multivalentes. En este caso a la fuerza de unin se le denomina avidez, ee
implica
implica lala unin
uninde
de mltiples
mltiples paratopos
paratopos con
con mltiples
mltiples epitopos,
epitopos, cada
cada unin
unin
con
su
correspondiente
afinidad,
dando
lugar
al
denominado
efecto
bonus.
con su correspondiente afinidad, dando lugar al denominado efecto bonus.

El valor de la avidez, viene dado por: G = RT ln k avidez


y su valor es:

G = G 1 + G 2 = RT (ln k 1 + ln k 2 ) = RT ln (k 1 k 2 )
luego

k avidez = k1 k 2
la
la consecuencia
consecuencia es
es que
que aunque
aunque cada
cada
centro
de
reaccin
se
asocia
y
disocia,
centro de reaccin se asocia y disocia,
cuantas
cuantasms
msvalencias
valenciasinteraccionan
interaccionanmenor
menor
es
es lala probabilidad
probabilidad de
de que
que elel complejo
complejo
antgeno
anticuerpo
est
completamente
antgeno anticuerpo est completamente
disociado.
disociado.

Lareaccin
reaccinde
deprecipitacin
precipitacin
La

El
El descubrimiento
descubrimiento por
por Heidelberger
Heidelberger yy Avery
Avery en
en 1923
1923 de
de lala naturaleza
naturaleza
polisacardica
polisacardicadel
delantgeno
antgenodel
delneumococo
neumococopermiti
permitiaaHeidelberger
HeidelbergeryyKendall
Kendallen
en
1937
estudiar
la
reaccin
de
precipitacin.
Un
resultado
fue
la
curva
de
1937 estudiar la reaccin de precipitacin. Un resultado fue la curva de
precipitacin
precipitacin

Algunas
Algunasde
delas
lastcnicas
tcnicasbasadas
basadasen
enlalareaccin
reaccinde
deprecipitacin
precipitacinson:
son:

Inmunodifusin
Ouchterlony

doble

de

Inmunoelectroforsis de Grabar
y Williams

Inmunoelectoforsis cruzada de
Clarke y Freeman

Inmunoelectroforsis en cohete
de Laurell

Inmunodifusin radial de Mancini

Lareaccin
reaccinde
deaglutinacin
aglutinacin
La

Dilucin
Aglutinacin

1:4

1:8

Prozona

1:16
+

1:32
+

1:64

1:128

+
Aglutinacin

1:256
+
Ttulo

1:512
-

Test
Testde
deCoombs
Coombsdirecto
directo(A)
(A)eeindirecto
indirecto(B)
(B)

A)

+
Igs unidas a Ag

Anti-Fc

particulados

Anti-Fc unidos a Igs


unidas a Ag part.

B)

+
Ags part.

Igs anti-Ags
particulados

+
Igs unidas a Ags
particulados

Anti-Fc

Anti-Fc unidos Igs


unidas a Ags part.

Otrastcnicas
tcnicasbasadas
basadasen
enla
lareaccin
reaccinantgeno:anticuerpo
antgeno:anticuerpo
Otras

Radio
Radioinmunoanlisis
inmunoanlisis(RIA)
(RIA)

Enzyme-linked
Enzyme-linkedImmunosorbent
ImmunosorbentAssay
Assay(ELISA).
(ELISA).
(variante
(varianteen
ensandwhich)
sandwhich)

Citometra
Citometrade
deflujo
flujo

Inmunofluorescencia
Inmunofluorescencia

Microscopa
Microscopa
confocal
confocal

Inmunolocalizacin
Inmunolocalizacinde
deproductos
productosgnicos
gnicosen
en
tejidos
o
clulas
(aqu
con
anticuerpos
tejidos o clulas (aqu con anticuerpos
marcados
marcadoscon
conoro
orocoloidal).
coloidal).

Western
Western
blotting
blotting

Inmunoprecipitacin
Inmunoprecipitacin

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