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Quito 2011
Fecha: 31/03/11
___________________________
Mgtr. Pablo Pozo
DEDICATORIA
ii
AGRADECIMIENTOS
A mi director de tesis Mgtr. Pablo Pozo, por ser un gran apoyo y gua. A todos mis amigos
pasados y presentes; pasados por ayudarme a crecer y madurar como persona y presentes por
estar siempre conmigo apoyndome en todo las circunstancias posibles, tambin son parte de
esta alegra: David, Kari, Adrin, Tefa, Santy, Michelle, Raque, Gabi y Ale .
iii
TABLA DE CONTENIDOS
RESUMEN .................................................................................................................................. 1
ABSTRACT ................................................................................................................................ 3
INTRODUCCIN ....................................................................................................................... 4
CAPTULO I ............................................................................................................................... 7
1. ANTECEDENTES GENERALES ......................................................................................... 7
1.1. LA VITAMINA C ............................................................................................................. 7
1.1.1. HISTORIA ....................................................................................................................... 7
1.1.2. ESTUCTURA QUMICA ............................................................................................... 7
1.2. FUNCIONES ..................................................................................................................... 9
1.3. FUENTES DE VITAMINA C ......................................................................................... 10
1.3.1. CITRICOS. Naranja (Citrus aurantium), Limn (Citrus aurantifolia) y Mandarina
(Citrus reticulata). .............................................................................................................. 12
1.4. CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA EFICIENCIA (HPLC) ............................. 14
1.4.1. COMPONENTES DE HPLC ....................................................................................... 15
CAPITULO II ............................................................................................................................ 18
2. MATERIALES Y METODOS ............................................................................................. 18
2.1. EQUIPO ........................................................................................................................... 18
iv
LISTA DE TABLAS
vi
LISTA DE FIGURAS
vii
LISTA DE ANEXOS
viii
ABREVIATURAS
ix
RESUMEN
Este trabajo fue desarrollado en el Laboratorio Centrocesal Cia. Ltda, donde se determinaron
las condiciones analticas adecuadas para cuantificar vitamina C en: naranja (Citrus
aurantium), limn (Citrus aurantifolia) y mandarina (Citrus reticulata), por cromatografa
lquida de alta eficiencia con detector ultravioleta visible (HPLC UV-VIS), utilizando para la
extraccin cido metafosfrico al 6%.
ABSTRACT
This Study was developed in the laboratory Centrocesal Cia. Ltda, where the proper analytical
conditions to quantify vitamin C in: orange (Citrus aurantium), lemon (Citrus aurantifolia)
and tangerine (Citrus reticulate), by high performance liquid chromatography with ultraviolet
visible detector (HPLC UV-VIS), using an extraction with 6% metaphosphoric acid solution.
The aplication of this method was to try the optimum conditions to determine the
concentration of vitamin C, because this is unestable and photosensible, for that, it was
important to know the circumstances that evaded analyte loss. These circunstances were:
sample amount, eluent and analysis time. The chromatographic conditions were optimized to
HPLC with a C18 column, brand Waters, 5 m of particle diameter, 150 x 3,9 mm diameter,
the established conditions were: mobile phase methanol : water with an isocratic elusion of
90:10, sample amount of 20 L, 1.2mL/min flow, wavelength 245nm and room temperature,
always evading sunlight presence.
Vitamin C in citric fruits was determined from the elaboration of 3 calibration curves for the
day of analysis, using a certified ascorbic acid standard; giving results that in orange we have
56.46 mg/g, lemon, 41.57 mg/g and tangerine 32.75 mg/g
INTRODUCCIN
Las vitaminas son sustancias orgnicas que mantienen el funcionamiento metablico, no son
sintetizadas en el organismo y por tanto se deben obtener de fuentes externas. Las vitaminas
son sensibles a diferentes agentes fsicos y qumicos, la ms sensible es la vitamina C que se
degrada fcilmente por cambios de temperatura, exposicin a la luz solar y concentracin de
oxgeno [1]. La vitamina C es una vitamina hidrosoluble que se encuentra en forma natural en
varias frutas y verduras.
Debido a que la vitamina C es termolbil se puede tener una variacin en la concentracin con
el paso del tiempo, por esto, es importante establecer los mecanismos que afectan a su
estabilidad y que influyen en el tiempo de vida til. Por su inestabilidad se utiliz una tcnica
sensible y rpida que permiti evaluar su concentracin [2] [3].
Para este estudio se tom como variable tres frutos ctricos, considerados de mayor consumo,
como son: naranja (Citrus aurantium), limn (Citrus aurantifolia) y mandarina (Citrus
reticulata).
El objetivo de este trabajo fue aplicar un mtodo analtico para la extraccin, identificacin y
cuantificacin de vitamina C en naranja (Citrus aurantium), limn (Citrus aurantifolia) y
mandarina (Citrus reticulata), considerando la inestabilidad de esta vitamina. Adems, la
comparacin entre la concentracin de vitamina C presente en los frutos mencionados
anteriormente.
El Captulo I contiene la parte terica, donde se describe conceptos y principios, los cuales
fundamentan este estudio. Se detalla la matriz, el analito, la solucin extractante y tcnicas
analticas que contribuyen al anlisis qumico para la determinacin de vitamina C en naranja
El Captulo II, contiene la parte experimental, donde se describen los materiales, reactivos,
equipos utilizados y la metodologa de anlisis.
5
En el Captulo III, se presentan los resultados obtenidos mediante tablas para un mejor
entendimiento con su respectiva discusin.
CAPTULO I
1. ANTECEDENTES GENERALES
1.1. LA VITAMINA C
1.1.1. HISTORIA
Finalmente, el cido L-ascrbico puede reaccionar fcilmente con radicales libres actuando
como antioxidante y pasando el mismo a ser un radical ascorbilo, que rpidamente se
descompone para producir cido dehidroascrbido [6] [7]. Mediante estas reacciones, el cido
L-ascrbico, captura radicales libres potencialmente txicos como son los hidroxilos.
Fuente: John W. Baynes,Marek H. Dominiczak, (2005), Biomdica Mdica, Segunda edicin, Espaa.
Fuente. Propia
1.2. FUNCIONES
Es antioxidante.
10
En la tabla 1.1 se presenta la lista de algunos alimentos que contienen vitamina C [13] [14].
Fuente
Guayaba
Grosella negra
Pimiento rojo
Perejil
Kiwi
Brcoli
Grosella
Coles de Bruselas
Papaya
Fresa
Naranja
Limn
Meln
Coliflor
Frambuesa
Mandarina
Espinacas
Mango
Lima
Vitamina C (mg/100 g)
300
200
190
130
90
80
80
80
60
60
60
50
40
40
30
35
30
28
20
11
Figura 1.4 Naranja (Citrus aurantium), Limn (Citrus aurantifolia) y Mandarina (Citrus
reticulata).
Poseen nutrientes importantes entre ellos: azcares, aminocidos y sales minerales; entre las
vitaminas, se analizar vitamina C en naranja (Citrus aurantium) que en la literatura se conoce
que posee un aporte de 60 mg por cada 100 g, limn (Citrus aurantifolia) 50mg y la
mandarina (Citrus reticulata) que posee 35 mg [17]. A continuacin se presenta una tabla
donde se detalla la composicin qumica de los tres frutos en estudio.
12
Caloras
Protena
Grasa
Vit. C
Ac. Flico
Ca
Mg
Carotenos
(%)
(cal)
(g)
(g)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
Naranja
88
35 - 50
0.8-1
0.1
60
35
40
15
200
50
Limn
82.8
29
0.8-1
0.1
50
11
26
137
3.4
Mandarina 88.3
37
0.8-1
0.1
35
21
36
11
185
1600
Existen una gran variedad de tcnicas para la determinacin analtica tanto cuantitativa como
cualitativa de cido ascrbico, que abarca mtodos tan simples, como puede ser una titulacin,
hasta la determinacin espectrofotomtrica. Se utiliza ms las tcnicas espectrofotomtricas en
la determinacin del cido ascrbico pero, el principal inconveniente de la aplicacin de este
tipo de tcnicas es la presencia de impurezas, que pueden enmascarar los resultados; en cuanto
a mtodos de titulacin la desventaja es, que la apreciacin del color no es la misma con cada
analista y en ambos casos la gran cantidad de solventes que se utiliza para la extraccin es
mayor. Por ello,
13
14
Bomba: una bomba para HPLC es de material inerte a los disolventes empleados. La
presin de las bombas es variable segn el modelo y fabricante, pero su rendimiento se
mide en su habilidad para generar un flujo constante y reproducible [22]. La bomba
trabajar con gradiente de elusin dependiendo del mtodo a utilizar.
Fase mvil: los solventes que se pueden utilizar en HPLC son varios principalmente
15
simtricos. Los picos sobre el eje de los tiempos se emplean para identificar tanto
cualitativa (posicin en el eje) como cuantitativamente (rea bajo los picos) los
componentes de la muestra. [22]
16
que establece que para una misma especie absorbente, la absorbancia es directamente
proporcional a la concentracin.
La vitamina C posee enlaces conjugados y transicin de electrones que son caractersticas que
presentan seal en el espectro UV-VIS. Este detector se puede emplear en la determinacin de
alimentos, aditivos, pesticidas y medicinas con grupos funcionales C=C-, -C=O, -N=O y
N=N-, los cuales absorben radiacin UV [23].
17
CAPITULO II
2. MATERIALES Y METODOS
El mtodo utilizado en esta investigacin consisti en la extraccin del cido ascrbico, con
reactivos y condiciones que eviten al mximo su deterioro. Esto se logr utilizando una
solucin extractora de cido metafosfrico al 6% que ayuda a la estabilidad del cido
ascrbico y lo protege de la oxidacin por el aire y la luz. El extracto fue analizado por
cromatografa lquida de alta resolucin. La cuantificacin e identificacin del cido ascrbico
se realiz inyectando patrones de concentracin conocida.
2.1.
EQUIPO
18
Equipo para microfiltracin de la fase mvil marca Sartorius, para usar con filtros para
solventes acuosos de 47 mm.
Refractmetro.
Extractor elctrico.
19
2.2.
REACTIVOS
Solucin de trabajo: a partir del estndar de cido ascrbico chemservice con pureza del
100%, se prepar una solucin patrn de 1000 mg/L (se pesa 0,1g de cido ascrbico en 100
20
Nivel
Alcuota
Volumen de aforo
Concentracin
0.5 mL
50 mL
10 mg/L
2 mL
50 mL
40 mg/L
2 mL
25 mL
80 mg/L
5 mL
50 mL
100 mg/L
4 mL
25 mL
160 mg/L
21
La fase mvil que presenta mayor resolucin es metanol: agua (90:10), a una longitud de onda
de 245 nm, usando un detector UV-VIS; luego de realizar las pruebas de flujo de 1 a 2
mL/min, se defini el flujo de 1.2 mL/min. El tiempo de anlisis del equipo fue de 5 min.
Las extracciones y estndares se inyectaron por triplicado para evaluar la precisin del
mtodo.
Las muestras de naranja, limn y mandarina se obtuvieron de manera aleatoria en tres lugares
de expendio de frutas, durante todas las etapas del proceso, se protegi tanto a los estndares
como a las muestras de la luz para evitar el deterioro de la vitamina C, recubriendo a los
balones con papel aluminio y realizando el anlisis de las muestras de manera inmediata.
Una vez tomadas las frutas se lavan y se rebanan en mitades para obtener el jugo mediante un
extractor elctrico. Se miden los slidos solubles totales (grados Brix) del jugo de cada fruta
22
utilizando un refractmetro, para determinar el punto ptimo de consumo. Los grados Brix
recomendados en ctricos fluctan entre (9 12 grados) [27].
Se pesa por triplicado 5g de la muestra y se afora a 50mL con cido metafosfrico al 6%. Para
determinar la concentracin de vitamina C, se realizaron curvas de calibracin mediante
estndares de concentracin que van en un rango de 10 a 160 mg/L, ya que segn reportes
bibliogrficos la concentracin en ctricos es alrededor de 60mg/100g de muestra. Se filtra con
un poro de 45m para evitar que los compuestos slidos de partcula grande pueda taponar la
columna de HPLC.
Se analizan por triplicado y por tres das en las mismas condiciones cromatogrficas teniendo
as las curvas de calibracin respectivas.
23
CAPTULO III
3. RESULTADOS Y DISCUSIN
A continuacin se presentan los resultados de las pruebas que se realizaron para determinar las
condiciones apropiadas del mtodo de separacin y cuantificacin de cido L-ascrbico por
cromatografa lquida de alta eficiencia.
24
probaron las fases inyectando un estndar por triplicado para cada una. Al analizar los
cromatogramas se encontr que existe una mejor resolucin de los picos de los analitos con la
fase metanol agua, adems el tiempo disminuye a 5 minutos. Por lo tanto se escogi la fase
mvil metanol agua para el anlisis de cido L-ascrbico.
Determinacin del uso de gradiente: inicialmente se prob una separacin isocrtica de agua
50 %: metanol 50 %, dando como resultado una corrida excesivamente larga (20 minutos). Al
probar con metanol 10%: agua 90% el tiempo disminuy considerablemente y el pico de cido
L-ascrbico estaba 100% definido, sin problemas de colas o ensanchamiento, como fue en el
caso de las otras mezclas de fase mvil a diferente gradiente.
Flujo de fase mvil: se prob 5 diferentes flujos de fase mvil, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5
mL/min. Con el flujo de 1.0 y 1.1 mL/min se obtuvo mayor tiempo de separacin y existe la
presencia de colas en los picos. El flujo de 1.2 mL/min dio buena resolucin en un tiempo
adecuado. Finalmente el flujo de 1.3-1.5 mL/min present un tiempo de separacin menor
pero sacrificando la resolucin de los picos. El flujo de 1.2 mL/min es el escogido para la
determinacin.
25
Longitud de onda de deteccin: se probaron las longitudes de 240 y 245 nm, segn
recomendaciones bibliogrficas. La sensibilidad es considerablemente mejor en la longitud de
onda de 245nm, mientras que con la longitud de 240 nm, la altura del pico es menor.
26
Parmetro
Condicin optimizada
Fase mvil
A: metanol
B: agua
Gradiente
A 90 %, B 10 %
Volumen de inyeccin
2.0 mL/min
Temperatura de columna
25 C
245 nm
27
Preparacin de la muestra
extraccion con cido
metafosforico al 6%
Preparacin cromatgrafo
lquido
Encendido y purga de lneas
Estabilizacin fase mvil
Inyeccin en el cromatgrafo
lquido de alta eficiencia
Cuantificacin
Clculo y expresin de
resultados
28
Las curvas de calibracin se realizaron para cuantificar y analizar las muestras, con el fin de
comparar la concentracin de cido L-ascrbico entre ellas.
Para el clculo de la concentracin de cido L-ascrbico se tom como base la relacin entre
la concentracin conocida del estndar y el rea del pico correspondiente; as, conociendo el
29
rea del pico de cada muestra de cido L-ascrbico, se pudo calcular la concentracin
respectiva.
Tabla 3.2 Lectura de los estndares de calibracin para el anlisis de las muestras del da
1.
CONCENTRACIN (mg/L)
rea (mV*min)
Estndar 1
0 mg/L
Estndar 2
10 mg/L
0,7
Estndar 3
40 mg/L
1,6
Estndar 4
80 mg/L
3,0
Estndar 5
100 mg/L
3,4
Estndar 6
160 mg/L
5,8
Area
(mV*min)
ESTNDARES
7
6
5
4
3
2
1
0
y = 0,035x + 0,140
R = 0,995
0
50
100
150
200
Concentracin mg/L
y = 0,035x + 0,1404
La tabla 3.2 presenta los datos con los que fue construida la curva de calibracin que
corresponde al da dos, figura 3.2.
Tabla 3.3 Lectura de los estndares de calibracin para el anlisis de las muestras del da
2.
ESTNDARES
CONCENTRACIN (mg/L)
rea (mV*min)
Estndar 1
0 mg/L
Estndar 2
10 mg/L
0,6
Estndar 3
40 mg/L
1,5
Estndar 4
80 mg/L
2,9
Estndar 5
100 mg/L
3,7
Estndar 6
160 mg/L
5,7
31
rea (mV*min)
6,0
5,0
4,0
3,0
y = 0,034x + 0,121
R = 0,998
2,0
1,0
0,0
0
50
100
150
200
Concentracin mg/L
Y = 003494x + 0,1215
La tabla 3.3 presenta los datos con los que fue construida la curva de calibracin de la figura
3.3 que corresponde al da tres.
32
Tabla 3.4 Lectura de los estndares de calibracin para el anlisis de las muestras del da
3.
CONCENTRACIN (mg/L)
rea (mV*min)
Estndar 1
0 mg/L
Estndar 2
10 mg/L
0,6
Estndar 3
40 mg/L
1,5
Estndar 4
80 mg/L
2,9
Estndar 5
100 mg/L
3,7
Estndar 6
160 mg/L
5,7
rea (mV*min)
ESTNDARES
7
6
5
4
3
2
1
0
y = 0,036x + 0,069
R = 0,999
50
100
150
200
Concentracin mg/L
33
Despus de obtener los resultados de las tres curvas de calibracin, se procede a calcular la
media y la desviacin estndar de los coeficientes de correlacin lineal, las pendientes y los
interceptos, que se presenta en la tabla 3.4.
Coeficiente de
Intercepto (b)
Curva
Pendiente (m)
Correlacin Lineal
(R2)
Da 1
0.9956
0,0350
0,1404
Da 2
0,9984
0,0349
0,1215
Da 3
0,9991
0,0360
0,0693
Medias (x)
0,0353
0,1104
0,0006
0,0368
0,0335
0,0000
0,0371
0,2209
Desviacin estndar
(s)
Lmite inferior
(x-3s)
Lmite Superior
(x+3s)
34
Con los datos de la tabla 3.4 se puede definir lmites de aceptacin o rechazo que sirve para
determinar parmetros de control en anlisis futuros, adems se demuestra la robustez del
mtodo al generar curvas reproducibles.
Los coeficientes de correlacin para el ajuste de las curvas de calibracin se puede observar
que son mayores a 0.99. Lo que demuestra que el ajuste a una funcin lineal es vlido para la
relacin respuesta concentracin.
El anlisis de las muestras se realiz en tres das, en cada uno de los cuales se analiz un total
de 10 muestras, distribuidas de la siguiente manera:
35
Curva 1
M1 Naranja
M2 Naranja
M3 Naranja
M4 Limn
Dia 1
M5 Limn
M6 Limn
M7 Mandarina
M8 Mandarina
M9 Mandarina
M10 Mandarina
Curva 2
M1 Naranja
M2 Naranja
M3 Naranja
M4 Naranja
Dia 2
M5Mandarina
Mandarina
M6 Mandarina
M7Mandarina
Mandarina
M8 Limn
M9 Limn
M10 Limn
Curva 3
M1 Naranja
M2 Naranja
M3 Naranja
M4Mandarina
Dia 3
M5Mandarina
M6Mandarina
M7 Limn
M8Limn
M9Limn
M10Limn
Figura 3.5
3 Diagrama de anlisis de muestras por da.
36
Nombre de la muestra
Programa instrumental:
Mtodo de cuantificacin:
Tiempo de corrida (min):
M1 N aranja
D et ec t or_U V_Vis
mV
cidoA
scrbico
-3.091
30. 0
M1 Naranja
VITAMINA C
VITAMINA C
5,00
25. 0
20. 0
15. 0
10. 0
3.949
1.698
3.589
5. 0
0. 0
-5. 0
0. 00
min
0. 50
1. 00
No.
Ret.Time
min
3,09
1. 50
2. 00
2. 50
NOMBRE
cido Ascrbico
37
3. 00
3. 50
4. 00
4. 50
5. 00
Height
Area
Rel.Area
Conc.
Type
mV
21
mV
1,83488
%
97,197634
g/100g
50,275
BMb
En las tablas 3.6, 3.7 y 3.8 se pueden observar las medias aritmticas de la concentracin de
vitamina C, para la naranja, limn y mandarina.
Tabla 3.6 Resultados del promedio de la concentracin por triplicado para los tres das
de anlisis.
CONCENTRACIN (mg/L)
MUESTRA
Da 1
Da 2
Da 3
Naranja
56.20
56.93
56.25
Mandarina
32.90
32.69
32.67
Limn
41.31
41.75
41.64
La tabla 3.6 corresponde a los resultados de las concentraciones de las muestras para los tres
das de anlisis. Un total de 10 muestras por triplicado con un peso aproximado de 5g.
38
ANOVA de un factor
Descriptivos
Intervalo de confianza para la
Muestras /Das
Naranja
Mandarina
Limn
media al 95%
Desviacin
N
Media
tpica
Error tpico
Lmite inferior
Lmite superior
Mnimo
Mximo
56.2011
10.97176
3.65725
47.7675
64.6348
47.96
71.36
56.9322
6.37101
2.12367
52.0350
61.8294
51.16
65.58
12
56.2542
3.25633
.94002
54.1852
58.3231
52.09
62.19
Total
30
56.4417
6.96668
1.27194
53.8403
59.0431
47.96
71.36
32,6678
,60369
,20123
32,2037
33,1318
31,87
33,40
32,6844
2,79377
,93126
30,5370
34,8319
29,16
35,84
12
32,9042
1,86829
,53933
31,7171
34,0912
29,43
34,66
Total
30
32,7673
1,89490
,34596
32,0598
33,4749
29,16
35,84
41,3078
3,34935
1,11645
38,7332
43,8823
38,04
46,04
41,6411
,73974
,24658
41,0725
42,2097
40,43
42,72
12
41,7525
1,53695
,44368
40,7760
42,7290
39,52
43,69
Total
30
41,5857
2,04403
,37319
40,8224
42,3489
38,04
46,04
39
ANOVA
Suma de
Muestra
Naranja
Mandarina
Limn
cuadrados
gl
Media cuadrtica
Sig.
Entre das
3,108
1,554
,030
,971
Dentro de das
1404,396
27
52,015
Total
1407,504
29
Entre das
,376
,188
,049
,952
Dentro de das
103,753
27
3,843
Total
104,128
29
Entre das
1,057
,528
,119
,888
Dentro de das
120,107
27
4,448
Total
121,164
29
Al realizar ANOVA de un factor se puede demostrar que los valores de los resultados entre
das de anlisis no varan significativamente ya que el da 1 es igual al 2 y al 3 por lo tanto se
acepta la hiptesis nula, otro factor para aceptar esta hiptesis es que al analizar las media no
hay diferencia sobre la variacin de cada grupo.
DISCUSION
40
CAPTULO IV
4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
4.1. CONCLUSIONES
42
Las muestras fueron analizadas en tres das, para ello se realiz una curva de
calibracin por cada da de anlisis; con el fin de asegurar la concentracin del
estndar de vitamina C.
4.2. RECOMENDACIONES
El mtodo es aplicable para determinar vitamina C en ctricos, pero sera bueno que se
pruebe este mismo mtodo para analizar vitamina C en todo tipo de matrices.
43
5. BIBLIOGRAFIA
[2] Serra Marcelo Horacio, (2007) Acta bioqumica clnica Latinoamericana, Buenos Aires
Argentina.
27 de
44
[10] Murillo E., Carrasquilla L., (2000) Actividad Antioxidante en Frutas Tropicales.
Rev. Lat. Qum.
[11] Sun F., et al.(2000) Antioxidative Activity of Propolis Evaluated by the Interaction with
Vitamins C and E and the Level of Lipid Hydroperoxides in Rats J.Agric. Food Chem. USA.
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[14] Muoz de Chvez Miriam y Ledesma ngel Jos (2002), Los alimentos y sus nutrientes.
Tablas de valor nutritivo de alimentos.
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Cromatografa
Liquida
de
alta
eficiencia.
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/hplc.htm#Tipos . 20 de noviembre
de
2010.
[19] Skoog, D., Holler, J., Nieman, T., (2001) Principios de Anlisis instrumental, quinta
edicin, McGraw Hill, Espaa.
[20]Rubinson K., Rubinson K., (2000). Anlisis Instrumental, Pretice Hall, Pearson
Educacin, S.A., Madrid, Espaa.
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Farmacologa. Espaa.
[29] U.S. (1995), Pharmacopeia National Formulary 23 NF 18, United States.
[30] AOAC, (2005), Official Methods Of Analysis of Aoac International, 18TH edition, United
States.
47
48
49
50
Detector_UV_Vis
mV
cido As
crbico
- 3.086
9.0
7.5
6.3
5.0
3.8
2.5
1.3
min
-1.0
0.00
0.50
No.
Ret.Time
min
3,09
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
NOMBRE
cido Ascrbico
3.50
4.00
4.50
5.00
Height
Area
Rel.Area
Conc.
Type
mV
6
mV
0,60249
%
100
g/100g
16,812
BMB
Detector_UV_Vis
mV
cido A
scrbico
- 3.088
25.0
20.0
15.0
10.0
5.0
-2.0
0.00
min
0.50
No.
Ret.Time
min
3,09
1.00
1.50
2.00
2.50
NOMBRE
cido Ascrbico
51
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
Height
Area
Rel.Area
Conc.
Type
mV
16
mV
1,50973
%
100
g/100g
42,128
BMB
Detector_UV_Vis
mV
cido As
crbico
- 3.090
45.0
30.0
20.0
10.0
-5.0
0.00
min
0.50
No.
Ret.Time
min
3,09
1.00
1.50
2.00
2.50
NOMBRE
cido Ascrbico
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
Height
Area
Rel.Area
Conc.
Type
mV
31
mV
2,86339
%
100
g/100g
79,900
BMB
Detector_UV_Vis
mV
cido As
crbico
- 3.087
60.0
50.0
40.0
30.0
20.0
10.0
-5.0
0.00
min
0.50
No.
Ret.Time
min
3,09
1.00
1.50
2.00
2.50
NOMBRE
cido Ascrbico
52
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
Height
Area
Rel.Area
Conc.
Type
mV
42
mV
3,63355
%
100
g/100g
101,391
BMB
Detector_UV_Vis
mV
cido As
crbico
- 3.090
90
75
63
50
38
25
13
-10
0.00
min
0.50
No.
Ret.Time
min
3,09
1.00
1.50
2.00
2.50
NOMBRE
cido Ascrbico
53
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
Height
Area
Rel.Area
Conc.
Type
mV
60
mV
5,65712
%
100
g/100g
157,857
BMB
Anexo 3:
METODOS DE DETERMIANCION DE VITAMINA
C DE LA AOAC Y USP
54
55
56
57
58
DECLARACIN Y AUTORIZACIN
Yo, Mara Fernanda Montao Alarcn, C I.171941762-6, autor del trabajo de graduacin
intitulado Determinacin, cuantificacin y comparacin de la concentracin de vitamina C
en naranja (citrus aurantium), limn (citrus aurantifolia) y mandarina (citrus reticulata) por
HPLC previa a la obtencin del grado acadmico de LICENCIADA EN CIENCIAS
QUMICAS en la Facultad de Ciencia Exactas y Naturales:
2. Autorizo a la Pontificia Universidad Catlica del Ecuador a difundir a travs del sitio
web de la Biblioteca de la PUCE el referido trabajo de graduacin, respetando las
polticas de propiedad intelectual de Universidad.
59