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COMPLEXE MAJEUR
DHISTOCOMPATIBILITE
( CMH )
Pr Yanis MEDDOUR
Service dImmunologie
Hpital Central de lArme
Plan du cour
I- INTRODUCTION
II- ORGANISATION ET CARACTERISTIQUES DES GENES HLA
III- MOLECULES HLA
IV- DISTRIBUTION CELLULAIRE
V- FONCTION DES MOLECULES HLA
VI- ETUDE DU POLYMORPHYSME
VII. EXPLORATION DU SYSTME HLA
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I- INTRODUCTION
Toute tentative de greffe entre individus gntiquement diffrents
(hors jumeaux monozygotes) entrane une raction de rejet.
Le rejet du greffon est li la rponse immunitaire du receveur des
antignes exprims la surface des membranes des cellules du
donneur qui sont diffrents de ceux exprims par celles du receveur.
Ces antignes sont dnomms : Antignes de transplantation ou
dhistocompatibilit.
Cods par une srie de gnes troitement lis rpartis sur diffrents
loci sur une rgion chromosomique (6p21.31) dfinissant:
CMH : Complexe Majeur dHistocompatibilit
HLA: Human Leucocyte Antigen
Molcules HLA ou Antignes HLA:
Des glycoprotines membranaires.
La cible des anticorps et des cellules T cytotoxiques au cours du rejet.
Polymorphes : ce polymorphisme rgit les lois de la transplantation.
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CMH CLASSE I
CMH CLASSE II
HLA A,
HLA B,
HLA C.
HLA E,
HLA F,
HLA G.
HLA DR
HLA DQ
HLA DP
1000 Kb
1000 Kb
2000 Kb
C4B
C4A
MICB
MICA
HLA-B
HLA-C
DPB2DP
B1
DPA
BF
C2
HSP
DQB1
DQA1
DRB1
DRB2
DRB3
LTB
TNF
LTA
HLA-E
HLA-A
HLA-G
HLA-F
DRA
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Les gnes de classe III nont aucun rle dans la prsentation dantignes
Seuls les gnes de classe I et classe II ( HLA A, B, C, DR, DQ, DP) codent
pour les antignes dhistocompatibilit
- Polymorphisme extrme
- Codominance
- La liaison troite
- Le dsquilibre de liaison
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Polymorphisme extrme
100 Antignes
Plus de 1700
allles
19
46
10
21
111
59
463
617
179
388
B38(16)
B16
B*38 01
splits srologiques
B39(16)
B*38 15
splits allliques
B*39 01
B*39 041
HLA : nomenclature
Srologie et gnotypage
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Polymorphisme HLA
A
A1
A2
A3
A23(9)
A9
A10
A11
A19
A24(9)
A25(10)
A26(10)
A28
A29
A30
A31
A32
A33
A34(10)
A36
A43
A66(10)
A68(28)
A69(28)
A74
A80
B
B5
B7
B8
B16
B12
B13
B14
B15
B17
B18
B21
B22
B27
B35
B37
B38(16)
B39(16)
B40
B41
B42
B44(12)
B45(12)
B46
B47
B48
B49(21)
DR
B50(21)
B51(5)
B52(5)
B53
B54(22)
B55(22)
B56(22)
B56(17)
B58(17)
B59
B60(40)
B61(40)
B62(15)
B63(15)
B63(15)
B64(14)
B65(14)
B67
B70
B72(70)
B73
B75(15)
B76(15)
B77(15)
B78
B81
B82
B83
DR1
DR2
DR7
DR3
DR4
DR5
DR6
DR8
DR9
DR10
DR11(5)
DR12(5)
DR13(6)
DR14(6)
DR17(3)
DR18(3)
DR15(2)
DR16(2)
DQ
DQ1
DQ2
DQ7(3)
DQ3
DQ4
DQ5(1)
DQ6(1)
DQ8(3)
DQ9(3)
Les gnes HLA sont les gnes les plus polymorphes connu.
Si on prend en compte les loci HLA A, B, C, DR, DQ, DP, toutes les spcificits et tous les allles
dcrits, le nombre thorique des phnotypes est suprieur 4x1030.
Ce polymorphisme explique galement la difficult apparier deux individus compatibles HLA
en dehors de la fratrie lorsquune greffe est envisage !!!
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Liaison troite
Transmission des gnes HLA en bloc des parents aux enfants (sauf rares recombinaisons 0,8 1%)
Pre
Mre
A1 B8 DR3 a
A3 B7 DR4 b
A1 B8 DR3
a
A29 B44 DR2 c
A1 B8 DR3 a
A2 B51 DR5 d
E1
E5
A3 B7 DR4 b
A29 B44 DR2 c
E2
A3 B7 DR4 b
A2 B51 DR5 d
E3
E4
HLA gnoidentique
E1 et E5
HLA haploidentique
E2 et E3
HLA diffrent E4
Expression Codominante
Chaque enfant hrite des deux haplotypes parentaux dont lexpression est codominante.
DR4
DR5
B8
DQ2
DP1
A2
A3 B7 DR 4 DQ2 DP1
B7
A3
DP2
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Dsquilibre de liaison:
En thorie tout allle dun locus HLA peut tre associ nimporte quel allle
dun autre locus, mais:
Certains allles dun locus sont associs prfrentiellement avec des allles dun
autre locus
Cette association est plus frquente que ne le voudrait le hasard.
On parle de dsquilibre de liaison.
Ces dsquilibres de liaison existent entre les allles HLA de classe I et II et sont :
Gnralement particuliers une population
Ex :
A3, B7, DR2: Nord de l Europe.
A1, B8, DR3: Caucasodes.
A33, B14: Le sud de lEurope ; Maghreb.
Des marqueurs utiles pour lanthropologie.
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30/11/2016
1 gne HLA I:
8 Exons:
Chr 6
Cavit du peptide
2
Chr 15
3
2m
6
7
10
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HLAII/
Chr 6
11
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Molcule Classe I
Molcule Classe II
Gnes
E2
E2
E3
E3
3
2m
E4
membrane cytoplasmique
Gne B Gne A
6 exons 5exons
Gne A, B, C
8 exons
HLA classe II
Les molcules HLA de classe II ont
une expression restreinte.
Exprimes principalement la
surface des cellules prsentatrices de
lantigne (CPA): cellules
dendritiques (les cellules de
Langerhans de la peau, cellules
dendritiques des tissus, cellules
interdigites des ganglions), les
lymphocytes B et les macrophages.
Elles sont galement prsentes la
surface des lymphocytes T activs et
des prcurseurs rythrocytaires,
granulocytaires et monocytaires.
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Protines
cellulaires
Protines
cellulaires
Protines
Extra-cellulaires
Protines
Extra-cellulaires
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Ly TCD 4
Ly TCD 8
Peptide du soi
Peptide
endogne
(viral, tumoral)
2m
2
3
2
2m
Toutes cellules
Tolrance
Le TCR reconnait lensemble CMH-Peptide
RI : CTL
Peptide
xogne
CPA
RI T helper
Ctk + Ac
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Lymphocyte CD8
CD8+
CD4+
HLA I
HLA II
Cellule
s
CPA
Classe II
Locus gntique
Structure
Chane + 2 microglobuline
Chane + chane
Expression cellulaire
Cellules prsentatrices de
lantigne ,
Macrophages ,
Lymphocytes B.
Impliqu dans la
Lymphocytes T CD8+ (cytotoxiques)
Lymphocytes T CD4+ (auxiliaires)
prsentation de
lantigne aux :
Origine du peptide
Protines produites dans le cytosol +++ Protines extracellulaires +++
prsent
Domaines polymorphes
1 + 2
1 + 1
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DR4
DR5
Srologique spcificits
Microlymphocytotoxicit (LCT)
B8
DQ
2
DP1
A3 B7 DR 4 DQ2 DP1
A2
DQ3
A3
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Lymphocytes B
+ colorant
Batterie dAnticorps
anti-HLA (I, II)
connus
Cellules a typer
Complment
de lapin
Cellule morte
=
Raction positive
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1 Reaction
010% Cells
6 Reaction
5180% Dead Cells
2 Reaction
1120% Dead Cells
8 Reaction
81100% Dead Cells
4 Reaction
2150% Dead Cells
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La connaissance des squences spcifiques des allles HLA permet le gnotypage directement au niveau de
lADN aprs son amplification par PCR (Polymerase Chain Reaction)
La mise en vidence du polymorphisme peut se faire par deux techniques principales :
PCR-SSP (Sequence Specific Primer)
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ADN
100ng/ml
Squences amplifies et
marques au cours de la
PCR par incorporation de
nuclotides biotinyls.
Produit de
PCR marqu
Lecture au scanner
Numrisation des rsultats
Interprtation
Squences complmentaires
fixes sur des Bandelettes
(strip) de Nitrocellulose
Streptavidine marque la
Phosphatase Alcaline
permet la dtection
colorimtrique (LIPA)
Luminex:
Nouvelle technologie de cytomtrie de flux = PCR SSO Rverse en milieu liquide
Sur chaque type de microsphre est fix une sonde unique( jusqu 100 types de microsphres par
puits)
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Etapes:
La lecture en tubes ou en microplaques de 96 puits
La positivit des ractions gradue de 1 8 correspond une fluorescence plus ou moins
importante
Avantages :
Lecture automatise et adapte aux grandes sries comme au typage ponctuel
Un seul tube ou puits ractionnel par locus
On peut tester en mme temps dans une seule plaque de 96 puits 32 typages A+ B
ou 24 typages A+B+DR+DQ
Le typage est dtermin par la prsence ou labsence du produit de PCR visualis sur gel
dagarose avec Ethidium bromide sous UV
ADN pure
100ng/ml
Photo darchivage
Et Interprtation
Placer dans le
thermocycleur et
couvrir pour viter
lvaporation
Amplification
1h40mn
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Lis un rejet hyperaigu chez un individu avec crossmatch ngatif (Paul et col. 1979).
Lis un rejet aigu chez un patient ayant un rein apparent HLA compatible (Brasile 1996).
Ac anti HLA:
-Les plus frquents
-Dirigs contre les molcules I et II
- apparaissent aprs sensibilisation du R aux Ag HLA suite:
Transfusions
Immunognicit attribue aux leucocytes
Date apparition des AC: J15- J21
Grossesse
Ac anti molcule(s) HLA dorigine paternelle
Disparaissent aprs laccouchement
Rapparaissent si grossesse ou transfusion de sang mme dleucocyt
Date apparition : 3mois
Transplantations antrieures
Si incompatibilit pour les antignes HLA ports par le(s) premier (s) greffon
Ac dtects aprs transplantectomie
Ac anti HLA non spcifiques des Ag du greffon sont des marqueurs dalloimmunisation
Les Ac anti HLA spcifiques des Ag HLA de classe I du greffon sont responsables des lsions
observes au cours du RHA (Kiss Meyer Nelson 1966)
- survient dans les quelques minutes ou heures qui suivent le rtablissement de la continuit
vasculaire aboutissant la perte du transplant.
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HLA et maladies
Maladies multifactorielles :
facteurs gntiques de susceptibilit non rares dans la population
facteurs gntiques significativement augments chez les malades
transmission alatoire
Ex: totalit des maladies auto-immunes
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ANALYSE DE SEGREGATION
Transmission gntique non indpendante du marqueur et de la maladie dans
la famille des patients
Analyse de sgrgation = information familiale
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Slection du
gne
dintrt ?
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HLA B* 27, 51
HLA C* 02, 07
Typage alllique (HD)
HLA A* 0201, 3806
HLA B* 2703, 5101
Gnes HLA (Chromosome 6p)
HLA C* 0202, 0705
Densit dexpression
entre 50.000 et 500.000 molcules/cellule
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Bactries
LT CD4
LT helper
Cellule prsentatrice
dantigne
Virus
Dbris de tissu
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Rle de la diversit :
dfense anti-infectieuse
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Maladie dAddison
B8
(glande surrnale)
DR3
B8
DR3
DR4
25
DR3/4
B8
Polyarthrite rhumatode
DR4
Spondylarthrite ankylosante
14
90-100
HLA-B27
Risque relatif
30
30/11/2016
31
30/11/2016
32
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DQ*02
DQ*08
33
30/11/2016
HLA B*51
HLA B*52
(HLA B5)
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Conclusion
- Le systme HLA est un lment central dans lactivation du systme immunitaire.
- Rle central dans la prsentation des Antignes
- Diversit la base de limmunit anti-infectieuse MAIS source dautoimmunisation.
- Association allles HLA avec certaines maladies auto-immunes : intrt
diagnostique
- Association de certains allles HLA avec certains phnotypes : intrt pronostique
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