Professional Documents
Culture Documents
e-mail: danijela.djukic.cosic@pharmacy.bg.ac.rs
kolska 2015/2016. godina
Sadraj
Vrste toksinih efekata po organizme u ivotnoj sredini
Praenje i odreivanje toksinih efekata po organizme u
ivotnoj sredini
TESTOVI
METODE
PROCEDURE
Prednosti, nedostaci i alternativa konvencionalnim
metodama ispitivanja ekotoksinosti
Znaaj
Poznavanje efekata
toksinih supstanci ili
smea po organizme u
ivotnoj sredini se koristi za
procenu njihove opasnosti
po ivotnu sredinu Pravilnik
o klasifikaciji, pakovanju, obeleavanju i
oglaavanju hemikalije i odreenog
proizvoda u skladu sa Globalno
harmonizovanim sistemom za
klasifikaciju i obeleavanje UN
Slubeni glasnik RS, br. 64/10, 26/11)
Sa stanovita ekologije
Izloenost individue subletalnim dozama ili
koncentracijama toksine supstance moe
za posledicu imati i smrtnost.
Subletalne doze i koncentracije mogu
umanjiti sposobnost jedinke da izbegne
predatora, pronae hranu ili se razmnoava.
Ekoloka smrt vs. somatska smrt dejstvo
toksinih supstanci na individualne
karakteristike jedinke moe da bude
jednako/ravno somatskoj smrtnosti (efekti
koji se ispoljavaju u sledeoj generaciji).
Promene u rastu
Promene u razvoju
Promene u reprodukciji
Promene u fiziolokim procesima
Promene u seksualnim karakteristikama
Promene u ponaanju
Efekti:
Malformacije (teratogeneza)
Efekti po reprodukciju
Smanjena individualna sposobnost jedinke zbog
reproduktivnih oteenja
- DDT/DDE izaziva smanjenje debljine ljuske jajaca (inhibicija Cazavisne ATPaze)
- promena pola - mekuci, ribe
Efekti na ponaanje
Toksine supstance izazivaju irok spektar promena u ponaanju
jedinke kako u laboratorijskim uslovima, tako i u ispitivanjama u polju
- teko za objektivno procenjivanje
- znatna normalna varijabilnost
- oteana ekstrapolacija izmeu laboratorijskih nalaza i situacije u
polju
- preferencija/izbegavanje npr. svetlost, temperatura, salinitet
- kretanje ka i od stimulusa
- nivoi aktivnosti; npr. umor, hiperaktivnost
- ishrana; npr. redukovana ili skroz ukinuta
Biotiki faktori
Aklimacija i aklimatizacija (prilagoavanje novim uslovima ivotne
sredine) - Modifikacija
Abiotiki faktori
Razliiti fiziki i hemijski faktori mogu modifikovati toksino dejstvo
supstance u ivotnoj sredini
Svetlost
Fotoindukovana toksinost (toksinost produkata razgradnje supstance pod
uticajem svetlosti npr. ekspozicija riba (Lepomis macrochirus) antracenu,
policiklinom aromatinom ugljovodoniku iji produkt razgradnje pod dejstvom svetlosti
ispoljava toksini efekat)
Doza-odgovor
Doza-odgovor
Odreivanje subletalnih i letalnih efekata toksinih
supstanci zasniva se na konceptu DOZA-ODGOVOR
Omoguava kvantifikaciju odnosa izmeu
ekspozicije toksinoj supstanci i njenog efekta
Nezavisna varijabla doza/koncentracija
Zavisne varijable efekat letalitet ili subletalni odgovor
(promene u rastu, razvoju, reprodukciji, ponaanju,...)
Doza-odgovor
Grafiki metod
Odreivanje
LD50/LC50 interpolacija sa
grafika
100
% smrtnosti
24 h
6h
50
48 h
LC50
24 h
LC50
6h
LC50
1h
0
0
25
50
75
100
cumulative offspring
body length
60
50
40
30
200
100
20
0
10
15
20
25
30
35
time
10
15
20
25
30
time
fraction surviving
0.8
0.6
0.4
0.2
10
15
20
time
25
30
35
35
Probit jedinice
Izraunavanje
LD50/LC50
ED50/EC
ID50/IC50
pomou
regresionog
modela
Podsetnik
LD50 srednja letalna doza
LC50 srednja letalna koncentracija
ED50 srednja efektivna doza
EC50 srednja efektivna koncentracijia
ID50 srednja inhibitorna doza
IC50 srednja inhibitorna koncentracija
NOEC, LOEC
Podsetnik
NOAEC/NOAEL (no observed adverse effects concentrations/level) maksimalna koncentracija/doza bez tetnog efekta
Eksperimentalni dizajn
Test organizmi
Medijum
Efekat
Test organizmi
Definisana vrsta
Razliiti trofiki nivoi
Nekoliko vrsta
IZBOR RIBA
-zdrave, bez vidljivih deformiteta
-sline veliine
-sline starosti
-adekvatno uvane
-dostupne za ponavljanje
ispitivanja
-relevantne za poreenje sa
drugim rezultatima
-najee: zebrice i
kalifornijske pastrmke
* u nekim sluajevima svi navedeni putevi mogu da budu naini ulaska hemikalija u jedan
organizam u istom trenutku.
Medijum za ispitivanje
Voda
Zemljite
Sediment
Test sistemi
Statian u toku ispitivanja nema protoka ispitivanog rastvora
Polustatian ispitivani rastvor ne protie, ali se u komorama za
ispitivanje rastvori redovno obnavljaju na svaka 24 h
Efekat
Subletalni sve testirane jedinke su u ivotu i prate se efekti toksine supstance na njeno ponaanje
i/ili biohemijske i fizioloke procese, kao i rast, razvoj i reprodukciju
Akutni vidljiv tetan efekat koji nastaje u organizmu usled izlaganja u kratkom
vremenskom periodu (dani); uobiajeno mortalitet ili imobilizacija
Hronini
Period izlaganja: znaajni deo ivotnog veka jedinke (10%); mujaci i enke u
reproduktivnom periodu
Rezultat NOEC , ECx
Preliminarno ispitivanje
Izvodi se pre konkretnih testova toksinosti
Orijentaciona procena toksinosti hemikalije
Omoguava planiranje konkretnog testa
(npr. kod ispitivanja akutne toksinosti po ribe preliminarno
ispitivanje supstance vri se za koncentraciju od 100 mg/L, kako bi
se utvrdilo da je vrednost LC50 via od ove koncentracije.
OECD metode
EU metode
C.1. 530-539
C.2. :
Daphnia sp. 540-549
C.3. 550-559
C.4. 559-605
C.5. 605-606
C.6. 606-608
C.7. : PH 609-624
C.8. : 624629
C.9. ZAHN-WELLENS 629-636
C.10. 637-651
C.11. 652-657
C.12. SCAS 657-663
C.13. : 664-685
C.14. 685-698
C.15. :
699-717
C.16. 718-723
C.17. 724-728
C.18. / 729-779
C.19. (KOC)
(HPLC) 780-789
C.20. Daphnia magna 789-811
C.21. : 812-820
C.22. : 820-829
C.23. 829-844
C.24.
845-863
Vrste testova
Akutni
(Sub)hronini
Rast, reprodukcija,..
Produena ekspozicija
Kontinuirani odgovor (broj
jedinki, veliina)
Potrebno bar jedna jedinka
po dozi/koncentraciji (i vie
za NOEC)
Analiza pomou regresionih
modela (fitovanje podataka)
NOEC, EC50, EC10
Prednosti
Pruaju relevantne podatke o toksinom dejstvu
supstanci na nivou individue
Na osnovu dobijenih podataka vri se procena opasnosti
toksine supstance po ivotnu sredinu
Nedostaci
Ograniena mogunost ekstrapolacija podataka o toksinosti sa
jedne vrste na drugu
Nehumanost ispitivanja na kimenjacima
Zahtevaju mnogo vremena, skupe su, neophodna je posebna
oprema i strogi uslovi prostora u kome se izvode kao i veoma
edukovano i struno osoblje
-gajenje i odravanje ispitivanih vrsta veoma
zahtevno i sloeno
-angaovanje osoblja 24/7 tokom ispitivanja
Varijabilnost dobijenih podataka i njihova analiza (uticaj
koncentracije, uslova ispitivanja, trajanje ekspozicije, unos hrane
tokom ispitivanja...)
Nedostaci - primer
Kako unos hrane utie na efekat Cd?
100
Vii unos hrane
80
60
40
20
0
0
0.05
0.1
0.15
0.2
Cd koncentracija (mg/L)
0.25
Alternativa
Intenzivan razvoj alternativnih metoda za ispitivanje
dejstva toksinih supstanci u ivotnoj sredini
U testovima toksinosti koji se izvode na kimenjacima
primenjuje se koncept (3R)
Za testove toksinosti koji se izvode na beskimenjacima
razvoj metoda koje bolje koreliraju efekte na
beskimenjacima i kimenjacima
Modeli za predvianje (QSAR modeli)
Podsetnik
Pitanja
U emu se ogleda znaaj poznavanja dejstva toksinih supstanci na
nivou individue?
Koje vrste toksinih efekata se mogu pratiti na nivou jedinke, tj.
celog organizma?
Koje su karakteristike subletalnih efekata toksinih supstanci u
ivotnoj sredini?
Navesti i objasniti vrste subletalnih efekata na nivou individue.
Kako se vri procena dejstva toksinih supstanci na jedinke?
Navesti i objasniti komponente metoda ispitivanja dejstva supstanci
na nivou individue.
Objasniti znaaj preliminarnog ispitivanja ekotoksinosti.
Navesti najznaajnije karakteristike akutnih testova.
Navesti najznaajnije karakterisitke sub(hroninih) testova.
Prednosti, nedostaci i alternativa konvencionalnim metodama
ispitivanja dejstva toksinih supstanci u ivotnoj sredini.