Organizacin del material hereditario

Necesidad de compactacin
Volumen limitado
Neutralizacin de cargas del ADN

Organizacin funcional del ADN

Mecanismos de segregacin en duplicacin
Accesibilidad de protenas reguladoras de la expresin gnica

El nucleoide bacteriano
El genoma bacteriano incluye un cromosoma
circular y molculas pequeas circulares
(plsmidos).
No existe ncleo definido.
ADN en regin nucleoide.

Varios dominios de 40-80 Kb superenrollados

asociado a ARN y protenas

El ncleo eucariota
10,000 nm

El genoma nuclear humano

comprende 46 molculas de ADN
lineales
El largo sumado de este ADN es
ms de 1.5 metros
El dimetro del ncleo es aprox. 10
m

El nucleo interfsico

Cromatina
complejo compuesto por ADN y
protenas
Eucromatina zonas menos condensadas

Heterocromatina zonas ms
condensadas

Toda la cromatina se condensa

previamente a la divisin celular

El ciclo celular
Durante la divisin se visualizan
cromosomas individuales.
Los cromosomas metafsicos
son la forma ms condensada
de la cromatina.

Los cromosomas son herramientas de

segregacin del material hereditario
Cules son los pasos de compactacin?
6

La cromatina: microscopa
A partir de ncleos aislados se puede aislarse cromatina
Al microscopio electrnico se observan fibras de 30 nm y
collar de cuentas de 10 nm

La cromatina: bioqumica
Anlisis bioqumico
Cantidades similares de ADN y protenas
Digestin de ADN con nucleasas

repetidos de 160-200pb
Protenas bsicas HISTONAS

Las histonas

Protenas bsicas pequeas

Altamente conservadas
Centro globular y colas ricas en Lys y Arg
Sitios de acetilacin de Lys en colas N terminales (+)
Sitios de fosforilacin en Ser en colas de H1

H1

H2A

H2B

hlice

variable

H3
Histone Fold

H2A/H2B Dimer handshake

H4

conservado

El octmero de histonas
Las histonas H2A y H2B forman un
dmero.
Dos H3 y dos H4 forman un tetrmero.
Dos dmeros H2A-H2B y un tetrmero
H3-H4 forman un octmero con forma
de disco aplanado.

10

El nucleosoma
Sobre el octmero se enrolla el ADN.
Cada octmero organiza 145 pb en 1 vuelta.
48 nm ADN en un disco de 6x11nm.
Sitios distantes en el ADN se aproximan (accesibilidad).
Otros sitios quedan cubiertos (en la cara interna).

11

Las colas de las

histonas del core
Cargadas positivamente
Pasan entre las vueltas de ADN
Contactan con el ADN adyacente
y del octmero prximo

12

La histona H1

No forma parte del

octmero
Organiza el ADN a la
entrada y salida del
octmero

13

El solenoide

Hlice nucleosomal
6 nucleosomas por vuelta

14

Correlacin Estructura-Funcin
La modificacin de histonas es VITAL en la expresin gnica.
La acetilacin y desacetilacin de histonas es cclica.

Colas cargadas +
Se unen al ADN de
nucleosomes adyacentes
Alto nivel de histona H1

NO es posible la transcripcin

Fibra de 30 nm

15

Colas acetiladas
NO se unen al ADN
Bajo nivel
de histona H1

Existe transcripcin gnica

Cuentas 10 nm

Protenas no histonas en la cromatina

Eliminacin de histonas
(Tratamiento con detergentes leves o
altas concentraciones salinas)
DNA loops

Matriz nuclear proteica y bucles de ADN

unidos a la matriz
Matriz nuclear
+ 2M NaCl

histonas

16

El andamiaje (scaffold)
Igual tratamiento en cromosomas metafsicos revela un esqueleto proteico del
cromosoma (scaffold) del que salen bucles de ADN de 30 a 100 Kb.
La matriz nuclear proteica es el scaffold durante la interfase.

17

Bucles de cromatina
Existen regiones de ADN que se unen al
scaffold:
SARs (scaffold attachment regions)
MARs (matrix attachment regions)
SARs=MARs

Loops of 30 90 kb

18

Bucles como dominios de cromatina

Cada bucle fijado al scaffold puede presentar una estructura diferente, mas o
menos condensada.
Pueden ser dominios funcionalmente independientes.

19

Dominios condensados
Los bucles de ADN fijados al scaffold se pliegan formando una superhlice

1mm
cromtida
20

Cromosoma mittico

10 mm

radial loop
chrosomosome model

cromtidas

21

El cromosoma metafsico
Forma de mxima compactacin de la cromatina

Unidad estructural segregacional de la

informacin hereditaria

Constriccin secundaria
Regin organizadora
nucleolar
Con genes ribosomales
Centrmero
Constriccin primaria
Sitio de unin de protenas
que forman cinetocoro

Brazos
Porciones del cromosoma
entre el centrmero y el
telmero

22

El cromosoma
Unidad funcional de la informacin hereditaria
Telmeros
Regiones terminales de los cromosomas
Secuencias repetidas particulares
Mecanismo de duplicacin particular
Funcin = Integridad cromosmica

Orgenes de replicacin
ARS (sec. de replicacin autnomas)
Varios por cromosoma
Funcin = replicacin

Centrmero
Constriccin primaria
Rico en secuencias repetidas
Sitio de unin de protenas que forman
cinetocoro
Funcin = segregacin

23

Citogentica: tcnicas de estudio de los cromosomas

La CITOGENETICA analiza la cantidad y
morfologa de los cromosomas.
Los cromosomas se pueden describir en base
a la posicin del centromero.
Bandeo cromosmico:
Tratamiento desnaturalizante o enzimtico
del cromosoma y posterior tincin.
Cada cromosoma revela un patrn
especfico de bandas claras y oscuras.

24

25

Tcnicas de bandeo cromosmico

Revelan diferencias estructurales en la cromatina que constituye cada banda.

Tratamiento desnaturalizante o enzimtico y tincin

Bandas oscuras y claras (1-10 Mb)
Bandeo G
tratamiento con tripsina
Bandas claras
zonas activas
replicacin temprana
Bandas oscuras zonas inactivas
replicacin tarda
Bandeo R
patrn opuesto a Bandeo G
Bandeo C
heterocromatina constitutiva
pericentromrica

26

Tcnicas de localizacin cromosmicas

FISH
Hibridacin in situ sobre cromosomas con
sondas fluorescentes

Cariotipo Espectral

Mltiple FISH con sondas especficas de

cada cromosoma marcadas con un
fluorocromo diferente.

27

Niveles de
compactacin

Compactacin debida al scaffold / matriz nuclear

Compactacin debida a histonas
Tamao compacto

28

DNA

longitud

compactado

Ncleo (humano)

2 x 23 = 46 cromosomas

92 molculas ADN

10 mm esfera

12,000 Mbp

4 m DNA

400,000 x

Cromosma mittico

2 cromtides, 1 mm espesor

2 molculas ADN

10 mm forma X

2x 130 Mbp

2x 43 mm DNA

10,000 x

Dominio de ADN

Bucle de ADN anclado

1 replicn ?

60 nm x 0.5 mm

60 kbp

20 mm DNA

35 x

Fibra de cromatina

approx. 6 nucleosomas por vuelta of 11 nm

30 nm dimetro

1200 bp

400 nm DNA

35 x

nucleosoma

disco 1 vueltas de ADN (146 bp) + ADN linker

6 x 11 nm

200 bp

66 nm DNA

6 - 11 x

1 bp

0.33 nm DNA

1x

Par de bases

0.33 x 1.1 nm

Correlacin
estructura-funcin
mecanismos de segregacin en duplicacin

Dominios topolgicos
independientes
(Regulacin independiente)

Compactacin

Represor transcripcional
Problemas

Neutralizacin de cargas
del ADN

29

Que sucede durante la

duplicacin y la
transcripcin?

Por disminuir el lmite

de resolucin del
microscopio ptico

30

Microscopa STED

31

Por el descubrimiento de que las cdulas maduras pueden ser

reprogramadas para volverse pluripotenciales.

33

34

35

Induced pluoripotent stem cells

iPSC

APLICACIONES:
Medicina regenerativa- terapia de reemplazo sin rechazo
Estudio de enfermedad en el laboratorio
Screening de drogas efectivas para el paciente en el laboratorio
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