You are on page 1of 207

VALIDACIN DE MTODOS

ANALTICOS POR HPLC.

M. en C. Ramiro Rojas Hernndez


Octubre 2016
TEMARIO
DA 1
Horario Tema
Introduccin y antecedentes
Guas y normatividad relacionada a la validacin de mtodos analticos por
08:30 10:00
HPLC.
Requisitos previos a la validacin del mtodo analtico.
10:30 10:45 Receso

Ejercicios y escenarios (comparte tu experiencia).


10:45 13:30
Diseo del protocolo de validacin.

13:30 14:30 Comida


Caractersticas de la validacin, sus criterios de aceptacin y el anlisis de
resultados:
Especificidad / Selectividad.
14:30 17:30
Linealidad del Sistema y rango
Precisin del sistema.
Determinacin del Lmite de cuantificacin y Lmite de Deteccin.
TEMARIO
DA 2
Horario Tema
Precisin Repetibilidad.
Precisin Intermedia.
08:30 10:30 Exactitud del mtodo.
Exactitud de la solucin muestra y de los estndares.
Pruebas de reto y equivalencia de filtros.
10:30 10:45 Receso

Robustez y Tolerancia.
Adecuabilidad del sistema.
10:45 14:00
Reporte de VMA.
Resultados fuera de especificacin e investigaciones.

14:00 15:00 Comida

Revalidacin de mtodos analticos.


15:00 17:30 Co-validacin de mtodos analticos.
Verificacin de mtodos compendiales.
INTRODUCCIN
Y ANTECEDENTES
Lnea de Tiempo del Desarrollo de un Nuevo Medicamento.

Desarrollo de la Desarrollo del Lotes de


Formulacin Proceso Estabilidad Estudio
Prueba de
Concepto Clnico
(Escala (Escala Lote Clnico
Laboratorio) Piloto)
TTP

Dossier
Idea de
Registro
0 1 3 6 9 12 18 24
Meses
Soporte a la Frmula
(Tradicional o PAT)
TTA
Desarrollo de Validacin de
Mtodos Mtodos Estabilidad Estabilidad
Estabilidad
Analticos Analticos 6 meses 12 meses
3 meses
(Buenas Prcticas (Buenas Prcticas
Cientficas) de Fabricacin)

Regido por Buenas Prcticas Cientficas

Regido por Buenas Prcticas de Fabricacin


Qu es validacin?

La validacin de un mtodo analtico es el


proceso por el cual se establece, mediante
estudios de laboratorio, que las
carctersticas de desempeo del mtodo
cumplen con los requisitos para las
aplicaciones analticas previstas.

USP 31, Captulo General <1225>


El objetivo de la validacin de un mtodo
analtico es el de demostrar que la
metodologa es adecuada para el propsito
intencionado.

ICH Guideline Q2A Text on Validation of Analytical


Procedures.
Clasificacin de Mtodos Analticos:

1.Pruebas de Identificacin.

2.Mtodos de Valoracin/Potencia.

3.Mtodos para Cuantificacin de Impurezas.

4.Pruebas Lmite de Impurezas.

5.Mtodos Especficos
Impurezas
Parmetro ID Valoracin Otros
Cuanti Lmite

Exactitud - + - + +4
- Normalmente NO evaluda.
+ Normalmente evaluada. Precisin
Repetibilidad - + - + +4
(1)En caso que la reproducibilidad se
lleve a cabo, la precisin
Precisin
intermedia no es necesaria.
Intermedia - +1 - +1 +4
(2)La falta de especificidad en un
procedimiento analtico puede ser
compensada con la adicin de
otro mtodo.
Especificidad +2 + + +5 +4
(3)P uede requerirse en algunos
Lmite de
casos.
Deteccin - -3 + - -
(4)Puede no requerirse en algunos
casos. Lmite de
(5)La falta de especificidad en un Cuantificacin - + - - -
ensayo para liberacin puede ser
compensado con un anlisis de
impurezas. Linealidad - + - + -

Rango - + - + -

Robustez - + -3 + +4
NOTAS GENERALES:
vLa falta de especificidad en algn
procedimiento analtico puede ser
compensado por otro mtodo
analtico de soporte.
vEn el caso de que se haya realizado
la prueba de reproducibilidad, la
prueba de precisin intermedia no es
requerida.
La validacin de un mtodo analtico es un pre-requisitos
para la pre-calificacin del registro de un medicamento.

a) En caso de usar un mtodo no compendial, sino desarrollado


por el fabricante.
b) En el caso de usar un mtodo compendial, la aplicabilidad
del mtodo sobre un producto en particular debe ser
demostrado (verificado).

Los mtodos analticos caseros deben ser validados


para ser usados en ambientes de Buenas Prcticas de
Fabricacin y/o Buenas Prcticas de Laboratorio.
La validacin debe ser fundamentada en el desarrollo del
mtodo, que a su vez debe realizarse dentro de
parmetros de adecuabilidad y robustez requeridos.

La validacin puede realizarse por diferentes vas


(propsito individual) pero de acuerdo a estndares en
comn (poltica de validacin).
Toxicidad
(Impurezas y
Prod. Degs)
Pre-formulacin Farmacocintica
(Permeabilidad,
(Solubilidad, Tamao
Absorcin, Cmax,
de Partcula, Estabilidad)
Cmin, AUC)

Validacin de
Mtodos
Analticos

Desarrollo
Farmacutico Distribucin
(Liberacin API, (Empaque,
funcionalidad Estabilidad)
de excipientes) Fabricacin
(Uniformidad,
Estabilidad,
Reproducibilidad)
FASE Innovador Genrico

I & D en el API/ Producto Algunos datos de


-
Terminado desarrollo/validacin.
Algunos datos de
Ensayos pre-clnicos -
desarrollo/validacin.
Resumen de la
Fases I y II de estudios
validacin -
clnicos
(validacin temprana).
Fase III de estudios Validacin del mtodo
-
clnicos completa
Validacin del mtodo
Fase IV post-marketing. -
completa.
Biodisponibilidad y Mtodos validados o
-
Bioequivalencia verificados.
En ocasiones cuando se trata de un mtodo empleado
tradicionalmente por el laboratorio que no est
normalizado, se puede realizar una Validacin
Retrospectiva, es decir, basada en los datos
experimentales que el laboratorio dispone (datos
histricos disponibles) para luego realizar un proceso de
ordenamiento y seleccin de los datos recopilados:
Curvas de calibracin.
Resultados de ensayos
Cartas de control
Ensayos de aptitud.
GUAS Y
NORMATIVIDAD
PNO
local de
Validacin de
Mtodos Analticos

Revistas
Procedimientos Cientficas y
Globales (HQ) o Disertasiones Conocimiento
Estndares
Corporativos Guas
de Expertos Pblico
Corporativas
Guas (Know-How)
Manual de
Calidad de la Bases de Datos
compaa ICH (SciFinder, PubMed)

FARMACOPEAS / Normas
FEUM / USP / WHO / TGA / Eur. Ph. /
Jap. Ph. / NOM / ISO
Lineamientos
Internacionales

Orange Calidad por


Book, PLM, Diseo
PDR, FDA, Anlisis en
AOAC, otros
NOM-059-SSA1-2015. Buenas Prcticas de fabricacin para establecimiento de la
industria farmacutica dedicados a la fabricacin de medicamentos.
NOM-177-SSA1-1998. Pruebas y procedimientos para demostrar que un
medicamento es intercambiable.
Gua de Validacin de Mtodos Analticos CNQFB, 2002.
CIPAM. Gua de validacin de mtodos analticos y otras Guas Selectas.
ICH Q2(R1). Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology (Q2A y
Q2B).
IUPAC Technical Report, Harmonized Guidelines for Single-Laboratory Validation of
Methods of Analysis, Pure Appl. Chem. 74 (5) 835/855, 2002.
L. Huber, Validation and Qualification in Analytical Laboratories, Infroma Healthcare,
New York, USA, 2007.
USP General Chapter 1225, Validation of Compendial Methods, 2009.
USP General Chapter 1226, Verification of Compendial Methods, 2009.
FEUM, Apendice III. Validacin de Mtodos Analticos.
Recomendaciones para su presentacin ante la FEUM.

Para la robustez, incluso propone un diseo


Placket Burman. El criterio de aceptacin se
basa en pruebas F
NOM-059-SSA1-2013 Buenas prcticas de fabricacin de
medicamentos

El punto 9.11 Validacin de mtodos analticos

Los mtodos analticos no farmacopeicos deben


validarse conforme a la FEUM y sus suplementos.
ISO 17025 Requisios generales para la competencia de
los Laboratorios de ensayo y de calibracin.

El punto 5.4.5 Validacin de los mtodos

El laboratorio debe validar los mtodos no normalizados,


los mtodos que disea o desarrolla, los mtodos
normalizados empleados fuera del alcance previsto, as
como las ampliaciones y modificaciones a los mtodos
normalizados, para confirmar que los mtodos son aptos
para el fin previsto.

La validacin debe ser tan amplia como sea necesario


para satisfacer las necesidades del tipo de apliacin o
del campo de aplicacin dado.
Incremento de
Cambios en el requerimientos
proceso de regulatorios en fases
manufactura posteriores

Cambio en la
formulacin

Cambio en la
ruta de
sntesis

MD = Desarrollo del mtodo


MV = Validacin del Mtodo
MT = Transferencia del Mtodo

Imagen adaptada de Particle Sciences. Technical Brief 2009 Vol. 5


Analytical Method Development and Validation .
Dentro de las metas al validar un mtodo estn:

q I d e n t i f i c a c i n d e f u e n t e s d e e r r o r y
cuantificacin de los mismos.

q Establecer que hay evidencia para que el


mtodo sea usado para una toma de
decisiones.
REQUISITOS PREVIOS
u Previo a la validacin de un
mtodo analitico, se debe contar
con un protocolo de ejecucin
debidamente aprobado por la
Unidad de Aseguramiento de la
Calidad.
uTodos los equipos / instrumentos
deben contar con su
calibracin / calificacion
vigente.
uCambios menores o mayores
deben documentarse y
registrarse de acuerdo a lo
indicado en los procedimientos
internos y segn el caso, baso el
sistema de control de cambios.
uAntes de iniciar la validacin, se debe verificar que se cuente con
insumos (estndares, reactivos, columnas, equipos, etc.) requeridos
por la metodologa.
u El analista asignado para la validacin debe estar capacitado en los
procedimientos de uso de los equipos/instrumentos que va a
utilizar, as como estar debidamente calificado en las operaciones
bsicas del laboratorio (ej. pipetear, pesar, aforar, medir, etc).

u El analista debe estar capacitado en buenas prcticas de


seguridad y llevar la ejecucin de la validacin de acuerdo a los
procedimientos de seguridad locales.

u Contar con un procedimiento de manejo de resultados fuera de


especificacin y de notificacin de eventos, previo al inicio de la
fase experimental de la validacin.
u Opcionalmente de acuerdo a procedimiento interno, para algunas
pruebas puede realizarse la parte experimental (ej pruebas de
placebo adicionado) con materia prima de pureza conocida en lugar
de estar de referencia.

u Contar con placebos previamente fabricados ya sea por la unidad de


formulaciones / manufactura o por el laboratorio de desarrollo
analtico / control de calidad.

u En el caso de tener varias concentraciones de un mismo producto a


considerar en la validacin, disear los experimentos para cubrir el
mayor rango posible y donde aplique seleccionar la formualcin con el
peor caso.
u En el caso de que un producto utilice el mismo sistema cromatogrfico
para diferentes mtodos analticos (ej. disolucin, UC de polvos, UC
tabletas) la validacin de las caractersticas comunes se realiza una
sola vez.

u En cada prueba de validacin se debe incluir la verificacin del


sistema (Adecuabilidad del sistema) y cumplir con sus criterios de
aceptacin. La primer propuesta de adecuabilidad del sistema
proviene del desarrollo del mtodo (mtodo casero) o de lo indicado
en el mtodo compendial.
u Para pruebas de estabilidad y robustez, no aplica el concepto fuera
de especificacin cuando los resultados no cumplan los criterios de
aceptacin. nicamente reportarn el rango en el cual los criterios de
aceptacin se cumplen.

u Donde sea factible, utilizar muestras autnticas.

u Finalmente debe existir un sistema de gestion de calidad y de


documentos que permitan trazabilidad en todo los datos, reportes y
cualquier otro documento generado de la validacin.
EJERCICIOS Y
ESCENARIOS.
DISEO DEL
PROTOCOLO
PROTOCOLO.

Redactarlo en el idioma local para cumplimiento


regulatorio.

Debe ser aprobado y oficializado por la Unidad de


Aseguramiento de la Calidad, previa ejecucin.

Debe incluir un cdigo y nmero de versin / edicin.

Debe tener referencias vigentes.

Debe ser controlado por un PNO local y oficial de


Validacin de Mtodos Analticos y a su vez ligado a un
Plan Maestro de Validacin.
PROTOCOLO.

1. Portada:
Encabezado con datos del laboratorio, datos del producto o
principio activo, nmero de proyecto, nmero de pginas del
documento, titulo del documento.

2. Cdigo del documento y fecha de edicin/versin.

3. Firmas / fecha de elaborador, revisor y aprobadores.

4. Pie de pgina con leyenda de confidencialidad.

5. ndice
PROTOCOLO.
PROTOCOLO.
PROTOCOLO.

6. Objetivo
Enunciar el objetivo para el cual el protocolo ha sido diseado.

7. Responsabilidades.
Establecer los roles de cada uno de los involucrados en la
validacin.

8. Metodologa Analtica
Referencia al reporte de desarrollo, farmacopea de referencia,
etc.

9. Tabla resumen de pruebas de validacin.


PROTOCOLO.
10. Cada una de las pruebas de validacin.
Describir cada prueba que se llevar a cabo en la VMA.
Preparacin de muestras y estndares
Datos a reportar
Criterios de aceptacin.

11. Referencias.

12.Anexos.
Listado de sustancias de referencia, equipos/instrumentos,
consumibles, etc. que se requieren en la VMA.

13.Observaciones

14.Control de Cambios.
ESPECIFICIDAD /
SELECTIVIDAD
La ICH y la USP, prefieren el uso del trmino Especificidad:
La capacidad de evaluar en forma unequvoca al analito en
presencia de los componentes cuya presencia debera
esperarse tal como impurezas, productos de degradacin,
componentes de la matriz.

La IUPAC, AOAC, prefieren usar el trmino Selectividad.


La FEUM en su captulo de validacin refiere que para el
caso de especificidad se debe determinar, la respuesta a
componentes como: aditivos, sustancias auxiliares,
sustancias relacionadas estructuralmente al frmaco, etc.

Para el caso de selectividad se debe determinar la


respuesta a componentes como sustancias de degradacin
del frmaco originadas por la influencia de condiciones de
almacenamiento (calor, humedad, luz, etc). o por
condiciones extremas (hidrlisis, oxidacin).
Tpicamente se incluyen impurezas, sustancias
relacionadas, productos de degradacin, ingredientes
activos, conservadores, antioxidantes.

La carencia de especificidad de un mtodo analtico puede


compensarse con otro procedimiento.
PROPSITOS DE LA VALIDACIN DE MTODOS

Identidad.
Para asegurar la identidad del analito.

Pureza.
Para asegurar la declaracin de la cantidad exacta de
impurezas de un analito (sustancias relacionadas, metales
pesados, disolventes residuales, etc).

Valoracin.
Para permitir la declaracin exacta del contenido de un analito
en la muestra.

Anlisis cualitativos.
Debe tener la capacidad de distinguir compuestos
estructuralmente relacionados (productos de degradacin).
La especificidad: Sobrelapar el cromatograma de la
solucin de impurezas con la solucin muestra.

Analito

Impurezas

Muestra

Solucin de referencia
de impurezas
Las muestra para especificidad incluyen:

Placebos (total y parciales).

Materia prima (APIs y excipientes)

Estndares de referencia (APIs e impurezas).

Diluente (blanco)

Producto terminado (con o sin entrs, de acuerdo al


propsito del mtodo).

Soluciones de estrs forzado


Si se dispone de impurezas conocidas, la especificidad
puede establecerse por adicin:
o Se agregan cantidades conocidas (API o PT) con niveles
adecuados de impurezas.
MW368 Naphtyridina API
(impureza) (degradado)
N-Oxide
(degradado)

!
Durante la validacin se requiere realizar pruebas de estrs
forzado del principio activo:
Parmetro de Estrs Degradacin Forzada

HCl 1 N (Temp. Ambiente & 60C) / 1h, 2h, 3h, 6h, 12h,
cido
24h y 7d
NaOH 1 N (Temp. Ambiente & 60C) / 1h, 2h, 3h, 6h, 12h,
Base
24h y 7d
2 10% de H2O2 (Temp. Ambiente / hasta 7 d & 60C /
H2O2 / Oxgeno
hasta 3h)

Calor 60 C en solucin / 1h, 2h, 3h, 6h, 12h, 24h y 7d

Calor 105 C slido / 1 a 7d

UV o Luz De acuerdo a ICH Q1B

Humedad 50C / 80% HR (2 4 semanas)

Asegurar que el API puede ser ensayado


especficamente en presencia de impurezas
generadas por estrs.
La Identificacin puede ser
llevada a cabo por mtodos
como: IR, Calorimetra
diferencial de barrido,
Difraccin de rayos-X y
tiempos de retencin por
HPLC.
Para el caso de HPLC se sugiere realizar la prueba de especificidad
tomando en consideracin el uso de detector DAD (Detector de
Arreglo de Diodos, PDA).
v Co-elucin a una longitud de
onda.

vLa co-elucin es la suma de la


absorbancia de 2 picos A y B.
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

vEl valor de pureza peak purity debe ser superior a 99.0% (990),
idealmente 99.5% (995) para considerar aun pico puro. En
Chromeleon, se busca una forma rectangular.

Lnea morada representa el


ndice de pureza del pico, y
la curva verde es el match
factor. .
PICO PURO
PICO IMPURO?
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

vEl tiempo de retencin del o los analito(s) de inters es unico con


respecto a todos los dems componentes que se presentan en el
anlisis (diluentes, impurezas, productos de degradacin, sustancias
relacionas, excipientes, agentes de limpieza, sanitizantes, etc.). Y estos
no interfieren en su cuantificacin.
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

Se busca que la relacin TR de un pico de inters entre el


estndar y la muestra se encuentre entre 0.98 1.02
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

v Para mtodos de impurezas y limpieza cualquier


interferencia con el activo o analito(s) deber ser 0.1%
o al lmite de reporte.

v La gua del CNQFB dice: La respuesta del mtodo


nicamente debe ser debida al analito.
LINEALIDAD DEL
SISTEMA Y RANGO
A qu concentraciones es una lnea
recta?
Concentracin mg/mL

Respuesta
La relacin lineal a lo largo de un rango determinado se
determina mediante:

Dilucin de una solucin stock estndar y/o materia


prima de pureza conocida.
Se requiere una evaluacin visual de la grfica de puntos
como funcin de la concentracin del analito vs. respuesta.

Anlisis estadstico de la Linearidad y el Rango


Pendiente = 34313.31

Intercepto = 96233.62403

Coeficiente de 0.9998
determinacin (r2)
y-intercepto como % = 2.2

Ecuacin de la recta = y = 34313.31152(x) + (96233.62403)

y = mx + b.

Se evala el comportamiento lineal mediante


mtodos estadsticos tales como clculo de la
regresin lineal por mnimos cuadrados.
Se realiza una regresin
por mnimos cuadrados.

Se hace la validacin del


modelo mediante un
ANOVA.
En trminos de rangos se suelen evaluar
tpicamente:

qValoracin (60 160%, la FEUM dice de 80 a


120%)

qUniformidad de contenido (70 130%)

qDisolucin (+/- 20% sobre el rango especificado).

qLimpieza ( 60 160% del LMP)

qImpurezas (50% 150% del LR o en lugar de LR


es a la especificacin de la impureza y de donde
saco eso?
NOTAS:

Esta prueba puede llevarse a cabo con materia prima


de pureza conocida.

Cada nivel debe realizarse al menos como un


triplicado.

Si la tcnica analtica posee estndar interno, se


debe incluir este tambin en las pruebas de
linealidad, primero de manera constante y despus
como una curva ms con sus propios niveles.
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

(1) Este criterio aplica para ingredientes activos, conservadores y antioxidantes.


ESCENARIO:

Un medicamento en ungento cuenta con el API1 en


concentracin de 5.0 mg/g. La preparacin de la solucin
estndar es: 20 mg en un matraz volumtrico de 50-mL y
posteriormente se toma una alcuota de 5 mL y se lleva a un
matraz volumtrico de 20-mL.
Cmo prepararas tu solucin stock?
Con esta solucin completa la tabla de abajo.

Alcuota de
Nivel (%) Aforo Final (mL) [Final] mg/mL
solucin stock (mL)
60
80
100
120
140
PRECISIN DEL
SISTEMA
La precisin expresa la cercana entre una serie de
mediciones obtenidas a partir de preparaciones mltiples
de una muestra homognea bajo condiciones iguales de
preparacin.

La precisin del sistema se realiza:

vPrecisin de la medicin.
vPrecisin de la preparacin.
La precisin de la medicin: Realizar una preparacin de
solucin estndar y realizar la medicin hasta 10 veces.
Determinar la variacin entre las mediciones (error debido
al instrumento).
Precisin de la Medicin

No. Inyeccin Estndar Area

1 4211748
2 4224937
3 4235605
4 4233847
5 4227235
6 4228839
7 4166996
8 4229071
9 4149503
10 4187006
Promedio = 4209479
CV (%) = 0.7
La precisin de la preparacin: Realizar la preparacin
de la solucin estndar de referencia por sextuplicado.
Determinar el coeficiente de variacin de las 6
preparaciones individuales (medir el error del analista).

Precisin de la preparacin

Estndar No. Relacin area / peso

1 140036
2 135222
3 140288
4 140634
5 138390
6 140113
Promedio = 139114
CV (%) = 1.5
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

vEn dependencia del tipo de mtodo analtico, objetivo y


tipo de analito se tiene lo siguiente:

En funcin del mtodo analtico, sus antecedentes, la


concentracin de analitos, etc. se pueden determinar
criterios diferentes.
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

vAlgunos otros criterios basados en Pharmaeuropea,


11(4), 571-577(1) y Pharm. Technol., 6(9), 120-137(2):
DETERMINACIN DEL
LMITE DE DETECCIN
Y DE CUANTIFICACIN
Saber que est
presente y que
tanto
El lmite de deteccin, es el valor mnimo que nos indica
que un analito se encuentra presente (Detectable) pero no
es necesariamente cuantificable como un valor exacto.

El lmite de cuantificacin, es el valor mnimo al cual se


puede determinar con precisin y exactitud la cantidad de
analito.
El lmite de deteccin se puede determinar mediante:

uObservacin/ evaluacin visual

uAnlisis de muestras de concentraciones conocidas y


ante las cuales se establece el mnimo nivel al cual
puede ser detectado con confianza.

El lmite de cuantificacin se puede determinar mediante:

uAnlisis de muestras de concentraciones conocidas y


ante las cuales se establece el mnimo nivel al cual
puede ser cuantificado con precisin y exactitud.
Lmite de Deteccin y Lmite de Cuantificacin
Nivel de
Relacin Seal /
concentracin del [ API ] ng/mL API rea de Pico
Ruido
estndar (%)
241.7 8737 44
0.20 241.7 8402 42
241.7 8854 44
217.6 7947 40
0.18 217.6 7600 38
217.6 7607 38
193.4 6863 34
0.16 193.4 6773 34
193.4 6683 34
169.2 5853 30
0.14 169.2 5912 30
169.2 5953 30
145.0 5078 26
145.0 4992 25
0.12
145.0 5038 25
120.9 4213 21
0.10 120.9 4256 21
120.9 4200 21
107.2 3997 20
0.09 107.2 3735 19
107.2 3751 19
95.3 3326 17
0.08 95.3 3408 17
95.3 3359 17
83.4 2896 15
0.07 83.4 2942 15
83.4 3027 15
71.5 2728 14
0.06 71.5 2489 13
71.5 2846 14
59.6 2121 11
LC = 0.05 59.6 2147 11
59.6 2093 11
47.6 1636 8
0.04 47.6 1647 9
47.6 2078 11
35.7 1355 7
0.03 35.7 1201 6
35.7 1243 6
23.8 882 5
0.02 23.8 875 5
23.8 835 5
11.9 400 3
LD = 0.01 11.9 501 3
11.9 491 3
Aplicamos un criterio de:

r2 0.98
y% 50.0% de la respuesta del lmite de
cuantificacin o del lmite mximo permisible.
En mtodos cromatogrficos tpicamente se usa la aproximacin
Seal/Ruido.

Se requiere que el procedimiento arroje una lnea base.

Se comparan mediciones de la seal de muestras con


concentraciones conocidas vs. muestras de blancos.

LC

Seal / Ruido = 10:1

LD
Seal / Ruido = 3:1
Ruido
Tambin se pueden determinar el LC y el LD mediante:

Medicin de la magnitud del fondo en soluciones de


blanco, calculando la desviacin estndar de estas
respuestas.

Basado en la curva de calibracin (diluciones de un


estndar stock de concentracin conocida), y de
donde se obtienen el valor de la desviacin estndar
y la pendiente de la curva S.
NOTAS:

Realizar por triplicado cada nivel de concentracin


conocida de la curva.

Considerar que cualquier interferencia en la lnea


base (artefacto analtico, arrastre o impureza)
afectar la determinacin de la seal/ruido y por
consecuencia el valor de LC y LD.

Se puede llevar a cabo este experimento con materia


prima de pureza conocida.

Al determinar el valor del LC, se requiere realizar una


precisin al lmite de cuantificacin
Precisin al Lmite de Cuantificacin

Estndar Tizanidine
No. Relacin area / peso
1 76
2 75
3 84
4 74
5 76
6 79
Promedio = 77
CV (%) = 4.6

Precisin al Lmite de Cuantificacin

No. Tizanidine
Estndar Relacin Seal / Ruido
1 33
2 39
3 34
4 33
5 29
6 34
Promedio = 34
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

vPara el Lmite de Deteccin si se determina la relacin


seal/ruido, esta debe estar en un radio 3:1.

vPara el Lmite de Deteccin si se determina a partir de la


desviacin estndar, se requiere:

DL = 3.3 / S
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

vPara el Lmite de Cuantificacin si se determina la


relacin seal/ruido, esta debe estar en un radio 10:1.

vPara el Lmite de Cuantificacin si se determina a partir


de la desviacin estndar, se requiere:

LC = 10 / S
API
A

A = Diluente (Agua)
B = Lmite de Reporte 0.1% (API 0.02 g/mL)
C = Lmite de cuan@cacin (API 0.44 g/mL)

QU OBSERVAN EN ESTOS CROMATOGRAMAS?


El lmite de cuantificacin y las impurezas.

El LC nunca debe estar por encima del lmite de


reporte (ICH-Q3B R2).

El LC debe ser reportado en relacin a la


concentracin de ensayo del API.

Para el caso de impurezas, la curva de determinacin


del LC debe realizarse a los niveles tpicos de
impureza.
LC

Imagen originalmente tomada de la ICH Q3B(R2) Impurities in New Drug


Products .
Impureza Adicionada

v Ingrediente activo a concentracin de valoracin

0.1 mg/mL (100%)

v Impureza adicionada a diferentes niveles.

0.001 mg/mL (1%) Lmite de especificacin.


0.0001 mg/mL (0.1%) Lmite de cuantificacin (requerimiento mnimo).

API al 100%

API a concentracin
de impurezas.
PRECISIN -
REPETIBILIDAD
Qu tan lejos
estoy de darle en el
blanco?
Exacto e Inexacto e
Impreciso Impreciso.

Preciso y
Exacto
Inexacto y
preciso
Inaccurate &
La precisin del mtodo, expresa la cercana que se tiene
entre una serie de mediciones obtenidas a a partir de
mltiples preparaciones de muestra problema a partir de
una poblacin homognea.

Normalmente se suele expresar como la desviacin


estndar (S) y varianza o coeficiente de variacin (%CV) de
una serie de mediciones:

2
n # n &
n xi % xi (
2
s
$ i=1 ' RSD% = CV % = 100
s= i=1 x
n(n 1)
El 68% de los valores de la variable estn comprendidos entre x .
El 95% de los valores de la variable estn comprendidos entre x 2 .
El 99% de los valores de la variable estn comprendidos entre x 3 .

xn P
0.6826895
2 0.9544997
3 0.9973002
4 0.9999366
5 0.9999994
Existen 3 niveles de evaluacin de la precisin del
mtodo:

Repetibilidad (precisin intra-ensayo).

Precisin intermedia (variabilidad dentro del


laboratorio).

Reproducibilidad (precisin entre laboratorios).


La Repetibilidad: Se realiza la preparacin de un cierto
nmero de preparaciones a partir de una poblacin
homognea.

Sacar su % promedio y
su CV% de manera
individual
NOTAS:

Para mtodos que cuantifican impurezas, usar


producto terminado que se encuentre entre 5.0% y
20.0% degradado.

Si el mtodo indica el uso de estndar interno, incluirlo


en cada preparacin a concentracin constante.

Para valoracin e impurezas, as como de verificacin


de limpieza, realizar preparaciones por sextuplicado.

Para Uniformidad de Contenido, realizar 10


preparaciones.
NOTAS:

Para Disolucin, realizar 12 preparaciones de acuerdo


a la metodologa de prueba de disolucin.

Muestrear de forma puntual de acuerdo a la metodologa


analtica.

Para el caso de matrices de liberacin modificada, extendida


o prolongada, realizar el muestreo en cada punto del perfil.
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

Anlisis Coeficiente de variacin


Valoracin 2.0% (API y PT)
(n= 6) 3.0% (Conservadores y antioxidantes en PT)

Uniformidad de Cumple con criterios USP


contenido (n= 10) 5.0% (API en producto en proceso)
Disolucin 10.0%
Perfil de disolucin 20.0% o ms (en el primer tiempo del perfil, solo
(n=12) si se justifica)
Impurezas individuales 8.0%
(n= 6) Tambin puede dividirse en funcin del recobro
promedio esperado.
Limpieza 3.0% ( > 1 mg/mL)
(n=6) 8.0% ( 1 a 999 g/mL)
20.0% ( 1 a 999 1 ng/mL)
PRECISIN
INTERMEDIA
La Precisin Intermedia, expresa la variacin existente
dentro del laboratorio (das diferentes, analistas diferentes,
equipos diferentes, preparaciones y reactivos diferentes).
NOTAS:

Utilizar producto estresado entre el 5% - 20% para el


caso de cuantificar productos de degradacin
(impurezas).

Para mtodos de valoracin e impurezas, cada


analista debe preparar 6 muestras para un total de 12.

Para mtodos de uniformidad de contenido y producto


en proceso, cada analista debe preparar 10 muestras
para un total de 20.

Para mtodos de disolucin, cada analista debe


preparar 6 muestras para un total de 12 muestras.
NOTAS:

Para mtodos de limpieza, cada analista debe


preparar 6 muestras de recobro (hisopo o enjuague)
para un total de 12.

Las muestras deben ser autnticas, sin embargo si no


es posible obtener muestra autntica homognea, puede
recurrirse a una muestra artificial.

Si el mtodo analtico incluye el uso de estndar


interno este se debe incluir de manera constante en
cada preparacin.
NOTAS:

En el caso especial de la regulacin Japonesa, se


requiere de un arreglo especial de combinacin de los
factores:
CRITERIOS DE ACEPTACIN:
Anlisis Coeficiente de variacin Diferencia Absoluta
2.0% (API y PT) 2.5% (API y PT)
Valoracin
5.0% (Conservadores y 3.0% (conservadores y
(n= 12)
antioxidantes en PT) antioxidantes en PT )
Cumple con criterios USP 3.0%
Uniformidad de
5.0% (API en producto en 5.0% (API en producto en
contenido (n= 20)
proceso) proceso)
Disolucin
Perfil de disolucin 10.0% 5%
(n=12)

El resultado global debe cumplir con CV:


Impurezas 8.0%
individuales
(n= 12) Tambin puede dividirse en funcin del recobro promedio
esperado.

3.0% ( para LMP > 1 mg/mL)


Limpieza
8.0% ( para LMP de 1 a 999 g/mL)
(n=12)
20.0% ( para LMP de 1 a 999 ng/mL)
REPRODUCIBILIDAD
La Reproducibilidad, expresa la precisin existente entre
laboratorios, suele ser usada en estudios colaborativos por
ejemplo.

Transferencias de Tecnologa Analtica

Validacin de Mtodos Compendiales


El criterio de aceptacin para la reproducibilidad puede
ser:

qEl mismo %CV utilizado en la prueba de precisin


intermedia.

qUsar una prueba F, normalmente con el 95% de


confianza, comparacin de la desviacin estndar.
EXACTITUD DEL
MTODO
La Exactitud expresa la cercana entre el valora aceptado
como un valor verdadero o el de un estndar de referencia y
el valor encontrado.

Promedio Verdadero
Tpicamente existen 4 maneras rutinarias de determinar la
exactitud de un mtodo:

1) Mezcla con excipientes (placebo con una cantidad


agregada conocida).

2) Agregado de estndar (muestra con cantidad


agregada conocida).

3) Se deduce a partir de los datos de especificidad y


linealidad.

4) Comparacin con un mtodo reconocido como


exacto (mtodo de referencia).
Para determinar si un mtodo es exacto:

vValoracin de API: Se realiza el mtodo analtico y se


determina el valor de recobro del analito de inters de
pureza conocida o se compara el resultado obtenido
con un segundo mtodo bien caracterizado.

vValoracin de analito en PT: Se fabrica una matriz


sinttica (placebo) de los componentes del PT al cual
se le aaden cantidades diferentes pero conocidas del
principio activo.

vValoracin de impurezas en PT-1: Se aplica el


mtodo analtico a muestras de una matriz sinttica
(placebo) adicionadas con estndar de impurezas en
cantidad conocida.
Para determinar si un mtodo es exacto:

vValoracin de impurezas en PT: Tambin se puede


aplicar el mtodo a placebo de la matriz de PT
adicionadas con el(los) principio(s) activo(s) en
concentracin del nivel de impurezas.
NOTAS:
Pudieran surgir problemas en la prueba de exactitud
cuando hay insuficiente selectividad/especificidad en
el mtodo (no se resuelven adecuadamente los picos
de impurezas).

Si el recobro es menor al 100%, puede ser porque hay


adsorcin irreversible del analito en las superficies del
sistema.

Incorrecto valor de referencia, por descomposicin del


estndar de referencia.

Incorrecto recobro por cambios en la matriz, el


laboratorio analtico an est usando una matriz
anterior a la final.
NOTAS:

La prueba puede realizarse aadiendo estndar o


materia prima de pureza conocida en solucin o
preferentemente pesado en estado slido.

En el caso de que existan diferentes concentraciones


de dosificacin del producto terminado, puede
recurrirse al uso del peor caso, es decir, la frmula
con la concentracin de activo en mayor proporcin.

Si se est usando estndar interno, incluirlo en las


preparaciones a concentraciones estndar de uso.
NOTAS:

Realizar cada nivel por triplicado, usando un mnimo


de 3 puntos (niveles) ideal de 5 puntos para generar la
curva.
El criterio de aceptacin para la exactitud:
El criterio de aceptacin para la exactitud:
El criterio de aceptacin para la exactitud:

Anlisis % Recobro Concentracin Mxima Permisible Coeficiente de Variacin


> 1 mg/mL 3.0%
Limpieza 50% 1 a 999 g/mL 8.0%
1 a 999 ng/mL 20.0%
ESCENARIO:

Un medicamento en ungento cuenta con el API1 en


concentracin de 5.0 mg/g. De un pool, pesar 2.0 g de
muestra y aadirlos a un tubo de separacin, registrar el peso.
Agregar 40 mL de n-Heptano y agitar, recobrar con 20 mL de
diluente y pasarlo a un matraz de 100 mL. Repetir 3 veces ms
la extraccin hasta completar 80 mL de extrado. Aforar con
diluente. Esta solucin, filtrarla y nombrarla como MTA.

Cmo disearas tu prueba de exactitud?


ESCENARIO:

Habiendo diseado tu prueba de exactitud, completa la siguiente


tabla.

Placebo de Alcuota de
Nivel (%) API-1 solucin stock Aforo Final (mL) [Final] mg/mL
(g) de API-1 (mL)
60%
80%
100%
120%
140%
ESCENARIO:

Para la exactitud al Lmite de Cuantificacin (lmite de


impurezas) como completaras la tabla. Tienes que preparar
alguna otra solucin?

Placebo de Alcuota de
Nivel (%) API-1 solucin stock Aforo Final (mL) [Final] mg/mL
(g) de API-1 (mL)
60% LR
80% LR
100% LR
120% LR
140% LR
ESTABILIDAD DE LA
MUESTRA Y
ESTNDARES
La estabilidad de la muestra y estndares bajo
condiciones particulares de almacenamiento nos permite
definir que tanto podemos confiar en las soluciones de
anlisis preparadas.

Se toma en consideracin las propiedades fsicas y


qumicas de los analitos ( fotosensibilidad, hidrlisis, etc.)
Durante su ejecucin cada da de evaluacin se comparan
las muestras problemas contra estndares frescos del da.

Realizar las preparaciones bajo condiciones particulares de


almacenamiento nos permite definir que tanto podemos
confiar en las soluciones de anlisis preparadas.
NOTAS:

Tambin probar la estabilidad del estndar de LC, y de


la solucin de resolucin, si aplica.

Probar tanto estndares en solucin stock como en


la solucin de uso.

Para la prueba se recomienda refrigeracin (5C) y


temperatura ambiental del laboratorio.

Se compara cada da marcado en el protocolo con el


valor inicial y en funcin del propsito del mtodo se
resuelve el cumplimiento al criterio de aceptacin.
El criterio de aceptacin de estndares y muestras en
estabilidad es:
PRUEBAS DE FILTROS
La evaluacin de filtros se lleva a cabo a tres niveles:

v Efecto el filtro
v Equivalencia de filtros
v Efecto de la purga.

Para el primer caso, el efecto del filtro se compara la


solucin a inyectar en el HPLC, de la misma muestra tanto
filtrada como sin filtrar (clarificada).
Para el el segundo caso, la equivalencia de filtros se realiza
para determinar que tipo de filtros se pueden usar de rutina,
tomando como base el filtro que se haya usado durante el
desarrollo del mtodo analtico.

Por ltimo el efecto de la purga, indica cuantos mL debemos


dejar pasar en el filtro, antes de tomar una alcuota para
inyeccin en el HPLC.
NOTAS:

Comparar 3 preparaciones sin filtrar y las mismas 3


preparaciones centrifugadas (clarificadas).

Realizar 3 preparaciones y filtrar por cada uno de los


tipos de filtros seleccionados.

Realizar 3 preparaciones, tomar fracciones de 1 o 2


mL y determinar la diferencia entre fracciones para
saber el valor de purga.
Valor sin filtrar
(centrifugado) 99.7
El criterio de aceptacin de la prueba de filtros es:

vLa diferencia absoluta del % de recobro entre cada


mililitro de muestra consecutivo debe ser 1.0%
(purga).

v En mtodos de valoracin y cuantificacin de


impurezas, la diferencia absoluta del % de recobro de
la muestra filtrada posterior a la purga y la muestra
centrifugada (clarificada) debe ser 1.0% absoluto
para los activos y de 0.1% para las impurezas/
degradaciones individuales.
El criterio de aceptacin de la prueba de filtros es:

vEn mtodos para Uniformidad de contenido y anlisis


en proceso, la diferencia absoluta del % de recobro de
la muestra filtrada posterior a la purga y la muestra
centrifugada (clarificada) debe ser 2.0% para los
activos.

vEn mtodos de disolucin, la diferencia absoluta del %


de recobro de la muestra filtrada posterior a la purga y
la muestra centrifugada (clarificada) debe ser 3.0%
para los activos.
El criterio de aceptacin de la prueba de filtros es:

v Y finalmente, considerar que los filtros son


equivalentes cuando posterior a su volumen de purga,
la diferencia absoluta del % de recobro es 2.0%
para los activos.
ROBUSTEZ
La Robustez de un procedimiento analtico debera mostrar
la confianza en el anlisis con respecto a variaciones
deliberadas del mtodo.

Una evaluacin previa de la robustez se hace durante la


fase de desarrollo.

Si las mediciones son susceptibles a variaciones en las


condiciones del procedimiento analtico, entonces deber
mantenerse controlado y/o una declaracin precautoria
deber ser incluida al procedimiento.
Como consecuencia de la evaluacin de la robustez,
debern realizarse ajustes a los parmetros de la
adecuabilidad del sistema.

Variables tpicas a evaluar:


Cromatografa de Lquidos
pH de la fase mvil ( +/- 0.5 unidades)

Composicin de la fase mvil (10% relativo o +/- 2% absoluto cualquiera que sea
mayor.
Fortaleza Inica (concentracin del agente de apareamiento inico o buffer) +/-
10% de la concentracin
Diferentes columnas (lotes o nmero de serie al menos).

Temperatura (+/- 5C), flujo (+/- 10%), volumen de inyeccin (+/- 5 L), cambios
de gradiente (10%), detector UV (+/- 2 nm).

cmo evaluaramos la robustez de un


gradiente?
Efecto del flujo

!
Efecto del radio
de la fase mvil

!
Efecto del pH

!
NOTAS:

Para las pruebas de robustez, se puede llevar a cabo


sin necesidad de cuantificar el recobro de los analitos
de inters, pero si vigilando el comportamiento de los
parmetros de la adecuabilidad del sistema (factor de
coleo, resolucin, NPT, selectividad, tiempo de
retencin, etc).

Cualquier rango de cambio premeditado que no sea


cubierto, no se considera como un RFE, sino que
requiere afinar el rango robusto (niveles).
La evaluacin de la robustez de una prueba de disolucin,
considera cambios intencionados en los parmetros de
disolucin tales como:
Prueba de disolucin
Velocidad de paletas +/- 4%
Velociddad DPM (dips por minuto) +/- 20%

Tamao de la malla (3 tamaos o los disponibles).

Desgasificacin del medio.

Toma de muestra (manual o automtica).

Concentracin del amortiguador del medio y/o


surfactante +/- 10%
pH del medio +/- 0.2 unidades

Temperatura del medio +/- 1.0C


Efecto de la velocidad
de las paletas
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

Usar soluciones muestra, solucin de resolucin (si


aplica), solucin al lmite de reporte.

Para mtodos de valoracin e impurezas cualquier


interferencia con los productos de degradacin,
impurezas o excipientes deber ser 0.1% o al lmite
de reporte.

Para mtodos de UC, anlisis en proceso y disolucin,


cualquier interferencia con el analito de inters deber
ser 2.0%
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

Tambin podemos usar de forma general:

Mtodos Diferencia absoluta


2.0 %
Cromatogrficos y volumtricos
3.0 %
Qumicos y espectrofotomtricos
5.0 %
Biolgicos
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

Para las muestras de disolucin, SI se requiere


realizar el anlisis de las muestras con los cambios en
la robustez y verificar recobro.

Verificar que no se haya afectado significativamente el


tiempo de corrida (ms del doble de tiempo de
corrida), de lo contrario considerar como sensible
respecto al elemento de robustez evaluado.

En caso de aplicar un DoE llevar a cabo el anlisis


estadstico de los datos para definir el rango de
robustez en cada variable del mtodo.
Robustez por medio de DoE

Definicin de factores para estudio de la Robustez, las letras (factores)


no asignadas se denominan factor falso. Estos sern usados para
estimar el error porcentual.
Robustez por medio de DoE

Definicin de los niveles (bajo y alto) de los factores depurados como


crticos.
Robustez por medio de DoE

Matriz de combinacin de experimentos.


Robustez por medio de DoE

Condiciones de las 8 corridas analticas y


establecimiento de la matriz para este caso.
Robustez por medio de DoE

Resultados y
Robustez por medio de DoE

Se calcula la F de Fisher y se compara contra tablas.


ADECUABILIDAD DEL
SISTEMA
Se basa en el concepto de la suma integral que
consitutye un anlisis: equipos / instrumentos,
electrnica, preparacin de muestras, etc.

Se establecen los parmetros de la adecuabilidad


del sistema por cada metodologa analtica de
manera individual.

Depende del tipo de mtodologa analtica.


Generalmente los criterios a cumplir en la adecuabilidad del
sistema son:

Resolucin (R), especialmente entre picos que eluyen


muy cercanamente.
Se recomienda el uso de una solucin de resolucin para
evaluar este parmetro.
Usualmente se recomienda > 1.5 para impurezas y
activo/impureza y > 2.0 para los analitos principales.

(2(t R )B (t R ) A )
RS =
WA + WB
Precisin del sistema, igual que la precisin de la
medicin, para establecer que el sistema est
estable y listo para iniciar una corrida de anlisis
cromatogrfico.

Usualmente, mnimo n=5, CV < 2.0% (depende de la


naturaleza del analito).
Factor de coleo (T) para verificar que la simetra del
pico no se ha perdido.
Usualmente < 1.5
Otros secundarios son el Nmero de Platos Tericos y
el factor de capacidad.
NOTAS:

Se pueden considerar cada una de las siguientes


variaciones mximas, a menos que la monografa
indique algo diferente o se haya reportado algo diferente
en la VMA.
pH de la fase mvil +/- 0.2 unidades.
Concentracin de la solucin amortiguadora: se permite +/- 10%
siempre y cuando conserve la variacin de pH.
Relacin de los componentes de la fase mvil 10% absoluto y 30%
relativo.
Longitud de onda del UV-vis: error permitido mximo del detecto +/- 3
nm.
Longitud de la columna puede ajustarse hasta el 70%
Diametro interno de la columna +/-25%
Longitud de la columna de HPLC +/- 50%
Tamao de partcula puede reducirse hasta el 50%
Factor de Respuesta Relativo.

FRR = (Area Deg / [Degradado])/(Area API /[API]

o Usando estndar de impureza, realizar preparacin


de la impureza al 1.0% (w/w) en solucin que
contenga 100% del API padre.

o Realizar la medicin a la longitud de onda que indica


la metodologa analtica.

o Si el FRR esta fuera del 0.8 a 1.2, se deber incluir


un factor de correccin en los clculos finales.
Factor de Respuesta Relativo.

En el caso de impurezas desconocidas o comercialmente


no disponibles, pueden ocurrir fenmenos como este:

240 nm longitud de
onda nomial.

220 nm longitud de
onda de chequeo.

Diferencias
significativas tienen
que ser estudiadas.
Factor de Respuesta Relativo.

o Si no hay disponibilidad del estndar de la impureza


el FRR no se puede determinar, se asume un FRR
de 1.0

o Si se usa estndar de impureza en la aplicacin del


mtodo ms all de su simple identificacin, se
corrige la ecuacin anterior incluyendo la pureza.

o El FRR tambin puede calcularse por medio de la


relacin de pendientes entre el estndar de impureza
y el API padre obtenidos en la prueba de linealidad.
REPORTE DE
VALIDACION
vEscrito en idioma del pas donde se registrar el
producto

vDebe estar trazable al protocolo de VMA.

vDebe ser aprobado previo uso de manera rutinaria en


control de calidad o antes de realizarse una TTA.
REPORTE.

1. Portada:
Encabezado con datos del laboratorio, datos del producto o
principio activo, nmero de proyecto, nmero de pginas del
documento, titulo del documento.

2. Cdigo del documento y fecha de edicin/versin.

3. Firmas / fecha de elaborador, revisor y aprobadores.

4. Pie de pgina con leyenda de confidencialidad.

5. ndice
REPORTE.

6. Propsito u Objetivo
Enunciar el objetivo para el cual el protocolo ha sido diseado.

7. Informacin del producto


Mencionar el producto y lote utilizado en la VMA.

8. Metodologa Analtica
Escritura completa de la metodologa analtica que incluya,
activacin, limpieza y acondicionamiento de la columna,
condiciones cromatogrficas, preparacin de muestra y
estndares, instrumentos, cromatograma tipo y clculos..
REPORTE.
9. Resultados de la Validacin.
Reporte de los resultados, estadsticos grficas obtenidas.
Respetando el orden establecido en el protocolo de VMA.
Seguir las indicaciones del PNO local de redondeo y reporte de
cifras significativas.

11. Requerimientos de la Adecuabilidad del Sistema


Establecimiento de los criterios de aceptacin para la
verificacin del sistema.

12.Investigaciones.
Reportar las investigaciones que se generaron en el transcurso
de la ejecucin del protocolo de VMA.

13.Conclusiones de la Validacin.
REPORTE DE
VALIDACIN DE
MTODOS
ANALTICOS
RESULTADOS FUERA
DE ESPECIFICACIN
TODO resultado fuera de especificacin debe ser
reportado de acuerdo al procedimiento interno de
Notificacin de Eventos y clasificarlo segn sea el
caso.

Pausar la validacin hasta haber determinado la causa


raz del fuera de especificacin, documentar, aprobar
por la unidad de calidad las acciones correctiva/
preventivas a seguir y cerrar la investigacin.

Si la conclusin de la investigacin genera la


necesidad de re-desarrollar la metodologa analtica, se
debe cerrar la validacin en ese momento.
TODO cambio al protocolo original de VMA, debe ser
documentado a travs del sistema de notificacin de
eventos.

Ponderar el impacto del cambio, documentar, aprobar


por la unidad de calidad las acciones a seguir y
reportar en el reporte.

Si alguna accin correctiva/preventiva surge como


consecuencia de la solicitud de cambio (ej. cambio a la
especificacin de una prueba y en consecuencia al
PNO de VMA, esta accin debe completarse previa
oficializacin del reporte de VMA.
REVALIDACIN
Cambios significativos a la metodologa analtica o que
afecten la formula y el proceso requieren la re-validacin
del mtodo analtico como son:

vCambios en el equipo/instrumento.

vCambios en la formulacin o proceso.

vCambios de proveedores de reactivos crticos o de


provisin de materia prima.

vCambios en el rango de utilizacin de la linealidad/


exactitud de un medicamento (cambio de dosis).
Cambio Impacta Parmetro a revalidar
Dispositivo de medicin Precisin del sistema
Variacin en sistema de
del instrumento de (Adecuabilidad del
medicin.
medicin sistema).
Concentracin de la Linealidad del sistema
Exactitud del mtodo
solucin de referencia y exactitud del mtodo
Exactitud y repetibilidad
Formulacin del del mtodo.
Exactitud del mtodo
producto Linealidad del mtodo.
Especificidad
Equipos Variacin del mtodo Tolerancia
Proveedor de columna
Variacin del mtodo Tolerancia
o columna
VERIFICACIN DE
MTODOS
COMPENDIALES
Qu es la verificacin de mtodos?

Es la confirmacin mediante la aportacin de evidencia


objetiva de que se han cumplido los requisitos
especificados.

Es la manera de demostrar la capacidad de un laboratorio


(recurso humano/tecnolgico) para ejecutar correctamente
un mtodo normalizado cuando lo realiza exactamente como
est descrito en la norma.
USP

<1225> Validacin de procedimientos farmacopeicos:


Los usuarios de los mtodos analticos descriptivos en la
USP-NF no necesitan validar la exactitud y confiabilidad de
estos mtodos, solamente deben verificar la aptitud en las
condiciones de uso. [ 21 CFR 211.194(a)(2)]

<1226> Verificacin de procedimientos farmacopeicos:


La verificacin consiste en la evaluacin de las
carctersticas de desempeo analtico seleccionadas,
como las que se describen en el captulo <1225>, para
generar datos relevantes y adecuados, en vez de repetir el
proceso de validacin.
Qu mtodos se verifican?

1. Los mtodos Normalizados.

2. Los mtodos oficiales o de


farmacopea.

3. Los mtodos de organizaciones


nacionales o internacionales
reconocidos.
Los usuarios de los procedimientos analticos farmacopicos no
necesitan validar estos procedimientos cuando los usan por
primera vez, pero debe establecer evidencias documentadas de
aptitud en las condiciones reales con su producto.

Tpicamente se realizan:

Especificidad/selectividad.
Repetibilidad (precisin).
Exactitud del mtodo (en el rango de la especificacin)

Adicionalmente, en el caso de ser un mtodo para impurezas, se


sugiere:

LC/LD, verificar deteccin al 50% de la especificacin.


Exactitud al nivel de impurezas (en el rango de la
especificacin de impurezas).
Otros experimentos recomendados:

u Equivalencia de columnas.

u Preparacin de fase mvil (tolerancia).

u Estabilidad de muestras y estndares.


EJEMPLOS: Caractersticas
Validacin Verificacin
de desempeo

Valoracin de Cloruro de sodio: Exactitud SI NO


Disolver en agua 50 mg pesados
con exactitud, de cloruro de Precisin SI Puede ser
sodio y diluir con agua a 50 mL.
Valorar con nitrato de plata 0.1N
Especificidad SI NO
Solucin Valorada,
determinando el punto final
potenciomtricamente. Cada LD NO NO
mL de nitrato de plata 0.1N
equivale a 5.844 mg de NaCl. LC NO NO

Linealidad SI NO

Rango SI NO
EJEMPLOS: Caractersticas
Validacin Verificacin
de desempeo

Exactitud NO NO
Identificacin por IR, UV
o HPLC de principio
Precisin NO NO
activo.
Especificidad SI Puede ser

LD NO NO

LC NO NO

Linealidad NO NO

Rango NO NO
EJEMPLOS: Caractersticas
Validacin Verificacin
de desempeo

Exactitud NO NO
Identificacin por HPLC
de Producto Terminado
Precisin NO NO
(medicamento)
Especificidad SI SI

LD NO NO

LC NO NO

Linealidad NO NO

Rango NO NO
EJEMPLOS: Caractersticas
Validacin Verificacin
de desempeo

Exactitud SI Puede ser


Valoracin HPLC
Precisin SI SI

Especificidad SI SI

LD NO NO

LC NO NO

Linealidad SI NO

Rango SI NO
EJEMPLOS: Caractersticas
Validacin Verificacin
de desempeo

Exactitud SI Puede ser


Impurezas HPLC
Precisin SI SI

Especificidad SI SI

LD SI Puede ser

LC SI SI

Linealidad SI NO

Rango SI NO
CRITERIOS DE ACEPTACIN:

Usualmente son los mismos usados en una validacin


convencional.
NOTAS:

Pruebas tales como, determinacin de agua, metales


pesados, prdida por secado y similares, no requieren
verificacin, pues son principalmente dependientes del
estado calibrado, verificado del equipo y/o solo se
requiere documentar que el analista esta capacitado
en el uso del equipo.
PREGUNTAS?
RECUERDEN QUE
TODO MEDICAMENTO EN EL MUNDO DEBE
POSEER TRES CUALIDADES
FUNDAMENTALES:

LA VALIDACIN DE MTODOS
ANALTICOS CONTRIBUYE A LOGRAR
ESTE OBJETIVO.
GRACIAS
EXAMEN GRUPAL

1. Qu parmetro evala el grado de cercana entre el valor


obtenido y el valor de referencia (real)?

2. Qu relacin seal / ruido se requiere cumplir para fijar el lmite


de cuantificacin?

3. cules son los tres niveles de la precisin?

4. qu criterios de adecuabilidad del sistema se usan normalmente


en mtodos por HPLC?

5. Es posible o no utilizar materia prima de pureza conocida o


reactivo de alta pureza para la validacin?
EXAMEN GRUPAL

6. En base a que se establece el criterio de aceptacin de la


estabilidad de la muestra y el estndar?

7. Cual es el propsito de realizar la prueba de especificidad?

8. cules son los rangos tipicos de la exactitud del mtodo en las


impurezas.?

You might also like