Ritmos leucocitarios en caninos

Nelsa Widenhorn, Mara C. Scaglione, Ezequiel N. Giordano, Antonio Sartore, Ral D.

Cerutti
Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral. Proyecto CAI+D 2006: Ritmos
biolgicos en caninos y su sincronizacin con el ambiente Email: mcscagli@fcv.unl.edu.ar

Introduccin: Los ritmos biolgicos no constituyen un fenmeno casual ni un seguimiento pasivo de las
condiciones ambientales, sino que forman parte de una adaptacin al entorno que es fundamental para la
supervivencia de las especies. Actualmente se admite que la ritmicidad es una propiedad fundamental de
todos los organismos, regulada por el reloj biolgico. La endogeneidad de los ritmos proporciona a la
especie una capacidad predictiva, que le permite organizar recursos y actividades antes de que sean
necesarios. Se encuentran afectados por los llamados sincronizadores, que incluyen tanto a factores
ambientales externos, como a hbitos de vida. El reconocimiento de una estructura temporal en las
clulas sanguneas, resulta valioso para la investigacin y la exploracin clnica. El objetivo del presente
trabajo fue estudiar las variaciones cronobiolgicas leucocitarias en caninos, determinando su ritmicidad y
su dependencia a fenmenos ambientales o al reloj interno.
Materiales y mtodos: La fase experimental del presente trabajo se llev a cabo en el Hospital de
Clnica de la Facultad de Ciencias Veterinarias de Universidad Nacional del Litoral, durante Septiembre
de 2007. Con el fin de analizar las variaciones cronobiolgicas leucocitarias, determinar si se ajustan a
ritmos diarios y si estos son una respuesta a fenmenos ambientales cclicos, en cuyo caso lo
consideraramos de origen exgeno, o bien, si son generados por el organismo mismo, se consideraran
de origen endgeno, se utilizaron seis caninos, clnicamente sanos, de peso similares (comprendido
entre 15 y 20 kg.). Los animales fueron sometidos a dos muestreos, en el primero (A) los animales
estuvieron sujetos a la variacin natural del ciclo luz-oscuridad (LO 12:12), en el segundo (B) los mismos
se sometieron a condiciones ambientales constantes (LO 24:00), 19 + 1 C , 50 + 10 humedad relativa.
Durante toda la fase experimental los caninos dispusieron de alimento balanceado y agua ad libitum. En
cada muestreo, a cada animal, se le extrajo durante un perodo de 24 h y a intervalos de 2 horas, 12
muestras de sangre de 1,5 ml cada una. Las muestras fueron analizadas inmediatamente con un
contador hematolgico (Arcus) para cuantificar los leucocitos. Por tratarse de animales que fueron
muestreados en diferentes horarios, se utiliz el anlisis de la varianza (ANOVA) para muestras
repetidas, mediante la opcin REPEATED del procedimiento GLM (General Lineal Model). El modelo
estadstico fue el siguiente: Yijk = m + [H]i + [A]j + eijk
Donde: Yijk = variable dependiente, m = media general, [H]i = efecto hora del da (i = 12 : 0, 2, 4, 6, 8, 10,
12, 14, 16, 18, 20 y 22 hs), [A]j = efecto individual del animal (l = 6), eijk = error residual del modelo.
El modelo para el ajuste de datos a una funcin cosenoidal fue el siguiente: y i = A0 + A1 * Cos (w * t + )
Donde: yi: = es el valor del i-simo punto de la serie de datos de N puntos; A 0 = mesor; A1 = amplitud;
w = frecuencia angular; t = tiempo expresado en hora y = acrofase.
Resultados y discusin: Los resultados del ANOVA ponen de manifiesto que tanto el modelo como los
factores animal y hora del da resultaron significativos (p< 0,05) en ambos fotoperodos. Los niveles
cuantificados para leucocitos concuerdan con los rangos fisiolgicos de 6-17 cel x 10 9/l (Meyer y Harvey
2000), 6-12 cel x 109/l (Coppo, 2001). La aplicacin de un ajuste no lineal de una funcin coseno a los
datos de la concentracin leucocitaria registrada en caninos sujetos a diferentes fotoperodos arroja los
resultados observados en la tabla 1.

Tabla 1. Parmetros estadsticos que expresan los modelos rtmicos de niveles leucocitarios de caninos
sujetos a diferentes perodos de ciclo luz-oscuridad (LO 10:14 y LO 24:00).
Fotoperiodo L/O Modelo: [GB] = A0 + A1*Cos (w*t + ) R
12:12 [GB] = 8,500 + 1,021 * Cos (0,041 * time + 17:36) 0,75
24:00 [GB] = 9,775 + 0,982 * Cos (0,038 * time + 14:37) 0,65
A0; A1= cel x 109/l; w=1/h; t=h; =h; r: coeficiente de correlacin del modelo

Los valores de los perodos (T) se calcularon teniendo en cuenta las frecuencias (W) de la Tabla 1,
evidenciando que las variaciones en la concentracin de leucocitos se ajustan a un ritmo diario, con
perodos de 24:01 h (LO10:14) y 26:10 h (LO 24:00). A partir de los parmetros rtmicos descriptos en
Tabla 1 se construy la Figura 1 donde se visualizan las medias de la concentracin leucocitaria
determinadas en este trabajo en funcin Hora, as como tambin las curvas ajustadas mediante el
modelo cosenoidal, para los caninos sujetos a diferentes perodos de ciclo luz-oscuridad A (LO 12:12) y
B (LO 24:00). En lo que respecta a los coeficientes de concordancia (R, Tabla 1), se han obtenido valores
comprendidos entre 0,75 y 0,65. Estos valores en sistemas biolgicos revelan un adecuado ajuste
alcanzado mediante la aplicacin del modelo no lineal.

Fig. 1. Ritmo de la concentracin leucocitaria en caninos sometidos a ciclo luz oscuridad 12:12 (A) 24:00
(B) y curvas ajustadas mediante el modelo cosenoidal (lnea continua). El rea gris indica las horas de
oscuridad.

GBlancos (celx109/l)
GBlancos (celx109/l)

A B

En la bibliografa disponible sobre caninos, existen trabajos referentes a variables hematolgicas, pero no
se han encontrado estudios cronobiolgicos donde se describa el comportamiento rtmico de las variables
sanguneas. El ritmo circadiano en la cuenta leucocitaria es altamente reproducible, con gran variabilidad
entre sujetos, como ha sido demostrado en diversos estudios en humanos (Hermida y col., 1986) y en
bovinos (Cerutti y col., 2006).HorasLa variacin diaria del nmero total de glbulosHoras
blancos, responde a la
caracterstica rtmica individual que presenta cada subtipo, los cuales muestran diferentes
comportamientos rtmicos (Suzuki y col. 1997). En Tabla 1 y Figura 1 se pone en evidencia que la
variacin rtmica observada en los niveles leucocitarios de caninos en condiciones naturales presenta una
frecuencia diaria. Esto sugiere un ajuste del perodo de sus oscilaciones al ciclo ambiental ms
importante que es la alternancia da/noche. En ausencia de seales externas de luz (condiciones
controladas), la ritmicidad biolgica para los glbulos blancos sigui expresndose si bien el perodo se
volvi ligeramente diferente de aquel exhibido en condiciones naturales, respondiendo a la expresin de
relojes biolgicos endgenos. La amplitud y la acrofase observada en ambas situaciones mostraron gran
similitud.
Conclusiones: Los resultados aqu presentados muestran que las concentraciones leucocitarias
presentan ritmicidad diaria que responden a mecanismos endgenos de medicin del tiempo, queda por
determinar cual es la causa de esta variacin, esto lleva al estudio de la interaccin entre los ncleos
supraquiasmticos, el sistema inmune y el sistema endcrino.
Referencias:
Cerutti, R.D.; Scaglione, M.C.; Tarabla, H.D.; Boggio, J.C. Biological rhythm of leukocyte concentrations
in calves under natural conditions. ISSN 0929-1016 Biological Rhythm Research. October 2006;
37(Number 5):451-454.
Coppo, J.A. (2001). Fisiologa Comparada del Medio Interno, Ed. Dunken, Buenos Aires, p. 212217;
289290.
Hermida, R.C.; Halberg, F. y Langevin, T.R. (1986). Serial white blood cell counts and chronotherapy
according to highest values (macrophases) or by model characteristics (acrophases). In: Halberg F, Reale
L, Tarquini B, eds. Chronobiologic Approach to Social Medicine (Aspetti Medico-Sociali della
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Meyer, D.J y Harvey, J.W. (2000).El laboratorio en medicina veterinaria. Interpretacin y diagnstico, Ed.
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Marques, M.D.; Golombek, D.A. y Moreno, C. (1997). Adaptacin temporal. En: Cronobiologa: principios
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Suzuki, S.; Toyabe, S.; Moroda, T.; Tada, T.; Tsukahara, A.; Hai T.; Minagawa, M.; Maruyama, S.;
Hatakeyama, K.; Endoh, K.; Abo, T.(1997). Circadian rhythm of leucocytes and lymphocyte subsets and its
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508.