EPIDEMIOLOGA DE LA INFECCIN POR BATRACHOCHYTRIUM

DENDROBATIDIS EN COMUNIDADES DE ANFIBIOS NATIVOS DE LOS

ANDES VENEZOLANOS

Por

Dinora Snchez

Tesis de Grado presentada como requisito parcial para optar

al ttulo de Doctor en Ciencias, mencin Ecologa.

INSTITUTO VENEZOLANO DE INVESTIGACIONES CIENTFICAS

I.V.I.C.

CENTRO DE ESTUDIOS AVANZADOS

ALTOS DE PIPE

OCTUBRE, 2012.
La Tesis de Grado de Dinora A. Snchez H., titulada EPIDEMIOLOGA DE LA
INFECCIN POR BATRACHOCHYTRIUM DENDROBATIDIS EN COMUNIDADES
DE ANFIBIOS DE LOS ANDES VENEZOLANOS, ha sido aprobada por el jurado,
quien no se hace responsable de su contenido, pero la ha encontrado correcta en su
calidad y en su forma de presentacin en fe de lo cual firman,

Dr. Gustavo Nio Dr. Jon Paul Rodrguez

IVIC IVIC

Dr. Diego Rodrguez Dr. Jaime Pfaur

UCV ULA

Dra. Margarita Lampo

Tutor de la Tesis de Grado
IVIC

Centro de Estudios Avanzados, IVIC.

Altos de Pipe, octubre de 2012
 Resumen de la Tesis de Grado presentada como requisito parcial para optar al ttulo de
Doctor en Ciencias, mencin Ecologa

EPIDEMIOLOGA DE LA INFECCIN POR BATRACHOCHYTRIUM

DENDROBATIDIS EN COMUNIDADES DE ANFIBIOS NATIVOS DE LOS
ANDES VENEZOLANOS

Por
Dinora A. Snchez H.

CENTRO DE ESTUDIOS AVANZADOS

INSTITUTO VENEZOLANO DE INVESTIGACIONES CIENTFICAS
I.V.I.C

ALTOS DE PIPE, OCTUBRE, 2.012

Margarita Lampo
Tutor de la Tesis de Grado

En Venezuela, los reportes de disminuciones drsticas de poblacionales de

anfibios son, en su mayora, de especies distribuidas en la cordillera de los Andes. Las
evidencias sugieren que epidemias de quitridiomicosis, una enfermedad letal para
muchas especies de anfibios, estuvieron asociadas a las desapariciones de por lo menos
tres especies de los Andes venezolanos. Actualmente, Batrachochytrium dendrobatidis
(Bd), el agente causal de la quitridiomicosis, persiste con una alta prevalencia (92%) en
la especie extica Lithobates catesbeianus sin que haya signos clnicos de enfermedad en
los individuos infectados, lo que sugiere a esta especie como un importante reservorio y
vehculo de Bd. Realizamos un estudio epidemiolgico en la Cordillera de Mrida que
nos permitiera conocer qu tan frecuente es Bd en la regin, dilucidar cmo inciden
algunas variables sobre la prevalencia e intensidad de infeccin de Bd en los hospederos
y determinar el riesgo de infeccin en las poblaciones de Dendropsophus meridensis
una especie endmica en Peligro de Extincin. El estudio se realiz entre 2003 y 2007 en
el centro-oeste del estado Mrida, donde se registr la ubicacin geogrfica de las
especies, se midieron las variables consideradas en el estudio (densidad de hospederos,
altitud, tiempo, tipo de especie, estado de desarrollo y la presencia de L. catesbeianus) y
recolectaron muestras de tejido de los anfibios para diagnosticar la infeccin.
Batrachochytrium dendrobatidis fue detectado, entre los 80 m y 2.600 m de altitud, en
L. catesbeianus y en diez especies nativas, sin registrar eventos de mortandades.
Lithobates catesbeianus fue el reservorio ms importante con 85% de prevalencia y un
promedio de 2.768 zoosporas/1-3mg de tejido analizado. Entre las especies nativas, D.
meridensis, simptrica con L. catesbeianus, tuvo la mayor prevalencia de infeccin
(42%) y la ms elevada carga promedio de zoosporas (4.965 zoosporas/1-3 mg de tejido
analizado). Tanto la prevalencia como la intensidad de infeccin variaron con los
estados de desarrollo de D. meridensis, lo que sugiere que la susceptibilidad, exposicin
o vulnerabilidad a Bd puede ser mayor para ciertas fases del ciclo de vida de esta rana. La
prevalencia de infeccin increment con la densidad de D. meridensis, lo que sugiere una
transmisin dependiente de la densidad. La intensidad de infeccin tambin contribuy a
explicar parte de la variabilidad observada en la prevalencia de D. meridensis, indicando
que los individuos ms infectados tienden a ser ms infecciosos. El mayor riesgo de
infeccin para D. meridensis ocurre durante la poca reproductiva en las lagunas donde
L. catesbeianus est ausente. Este estudio indica que Bd se encuentra en niveles
endmicos la Cordillera de Mrida. Esto representa un riesgo para las poblaciones
hospederas debido a que cambios en las condiciones ambientales podran exacerbar la
vulnerabilidad de las ranas o la virulencia del patgeno, y como resultado, perturbar el
equilibrio endmico. Es importante implementar planes de supervisin de la infeccin
que permitan detectar brotes epidmicos, as como disponer de medidas que permitan
hacer frente a las epidemias y minimizar sus impactos en las poblaciones hospederas.
DEDICATORIA

A mi familia
 1

AGRADECIMIENTOS

Al IVIC por el apoyo logstico y financiero que permiti el desarrollo de esta tesis.

Al Centro de Estudios Avanzados y a la Coordinacin de rea del postgrado de Biologa,

mencin Ecologa por la asesora brindada durante mi carrera doctoral.

Al Departamento de Biologa Estructural y al Centro de Microbiologa y Biologa

Celular del IVIC por prestarme los termocicladores para realizar los PCR a tiempo real.

A Alex Hyatt por suplir los estndares para la cuantificacin de las zoosporas.

A LOCATEL, Conservacin Internacional, la Iniciativa de Especies Amenazadas y al

Servicio de Vida Silvestre y Pesca de los Estados Unidos por el financiamiento otorgado.

Al Ministerio del Poder Popular para el Ambiente por el apoyo brindado en campo.

A los curadores de las colecciones de reptiles y anfibios de los siguientes Museos por
facilitarme los registros de presencia de Dendropsophus meridensis: Museo de la
Estacin Biolgica de Rancho Grande, Coleccin de Vertebrados de la Universidad de
Los Andes, Coleccin de Anfibios y Reptiles del Laboratorio de Biogeografa de la
Universidad de Los Andes, Museo de Historia Natural La Salle, Museo del Instituto de
Zoologa Agrcola y Museo de Biologa de la Universidad Central de Venezuela.

A Jon Paul Rodrguez y Jess Eloy Conde por la asesora acadmica permanente.

A mi tutora, Margarita Lampo, por la asesora acadmica brindada en mi tesis. Por su

tiempo dedicado a la enseanza.

A Rodrigo Lazo por su asesora en el rea de sistema de informacin geogrfico.

 2

A la Unidad de Sistema de Informacin Geogrfico del IVIC por el prstamo de los

equipos (GPS) empleados en las salidas de campo.

A mis compaeros del laboratorio: Francisco, Carmen, Mariella, Angie, Aldemar,

Argelia, Ascanio, Milagro, Beatriz, Carlos y Ricardo por el apoyo logstico en las
diferentes facetas de la tesis. Por sus constantes consejos y compaerismo.

A los investigadores del Centro de Ecologa y a Diego Rodrguez, Csar Molina, Celsa
Searis por la revisin y crticas constructivas realizadas a mi proyecto de tesis doctoral.

A Barbara Han, Jhon Flores, Jos Luis Nava, Horacio Gonzlez, Julio Csar Snchez,
Aldemar Acevedo, Elba Guerrero, Mariella Mrquez, Francisco Nava, Javier Valera-Leal
y a Diego Cadenas por colaborar en los muestreos de campo.

A Fabiola Len, Carmen Garca y Aiskel Rodrguez por contribuir con la realizacin de
los ensayos de PCR para el diagnstico de Bd en muestras de tejido de anfibios.

A Mario Palacios y Edlin Guerra por su asesora en los anlisis estadsticos.

A mis compaeros: Mara Gabriela, Ada, Jos Rafael, Iliena, Yelitza, Lauri, Jos
Antonio, Antonio, Jorge, Yulimar, Elba, Jeannilet, Jhoan, Angiebelk, Andreina y Hector
por hacer tan ameno m transcurrir acadmico.

A Jess Manzanilla por compartir conmigo su experiencia en muestreos de campo.

A Javier (mi amor) por apoyarme en mi tesis de forma incondicional y por su amor.

A mi hija Valeria (mi sol), por llegar a mi vida y darme el empujn que necesitaba.

A mis padres y hermanos (mis columnas) por estar siempre a mi lado, por todo su amor,
por su paciencia inagotable, por sus palabras de apoyo, por confiar en m.
 3

INDICE GENERAL
Pgina

RESUMEN. iii

AGRADECIMIENTOS. vi

LISTA DE TABLAS. x

LISTA DE FIGURAS. xii

CAPTULO I. INTRODUCCIN GENERAL 1

CAPTULO II. REA DE ESTUDIO Y ESPECIES DE INTERS. 8

REA DE ESTUDIO. 9

ESPECIES DE INTERS. 12

Batrachochytrium dendrobatidis. 12

Especies de anuros: Lithobates catesbeianus y Dendropsophus meridensis. 22

CAPTULO III. UN PATGENO EMERGENTE AMPLIAMENTE

DISTRIBUIDO EN LAS COMUNIDADES DE ANFIBIOS DE LOS 30
ANDES VENEZOLANOS.

RESUMEN. 31

INTRODUCCIN. 32

MATERIALES Y MTODOS. 35

RESULTADOS. 39

DISCUSIN. 46

CAPTULO IV. MODELOS BASADOS EN POBLACIONES: EFECTO

DE LA DENSIDAD DEL HOSPEDERO SOBRE LA PREVALENCIA E
INTENSIDAD DE INFECCIN DE BATRACHOCHYTRIUM 53
DENDROBATIDIS EN DENDROPSOPHUS MERIDENSIS Y
LITHOBATES CATESBEIANUS.

RESUMEN. 54

INTRODUCCIN. 55
 4

MATERIALES Y MTODOS. 59

RESULTADOS. 72

DISCUSIN. 86

CAPTULO V. FACTORES QUE INFLUYEN EN EL ESTATUS DE

INFECCIN DE LA RANA DENDROPSOPHUS MERIDENSIS 92
INFECTADA CON BATRACHOCHYTRIUM DENDROBATIDIS.

RESUMEN. 93

INTRODUCCIN. 94

MATERIALES Y MTODOS. 96

RESULTADOS. 99

DISCUSIN. 101

CAPTULO VI. DISCUSIN GENERAL. 105

CAPTULO VII. BIBLIOGRAFA 111

ANEXOS. 137

CURRICULUM VITAE. 163

 5

LISTA DE TABLAS

Tabla
Pgina

I Especies de anfibios clasificados en las categoras de riesgo de

extincin del Libro Rojo de la Fauna Venezolana (Rodrguez y
Rojas-Surez 2008) y declarados en peligro de extincin segn
el Decreto 1.486.
7

II Repetibilidad y reproducibilidad de ensayos de PCR a tiempo

real realizados para diagnosticar Batrachochytrium
dendrobatidis en anfibios recolectados entre 2003-2007 en la
regin de Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
38

III Prevalencia y carga de zoosporas de Batrachochytrium

dendrobatidis en especie de ranas de la Cordillera de Mrida,
estado Mrida, Venezuela.
41

IV Anlisis de varianza del nmero de zoosporas de

Batrachochytrium dendrobatidis en muestras de tejido en
funcin de la especie y del estado de los individuos infectados.
44

V Ubicacin y rea de muestreo de 12 lagunas de la regin Jaj-La

Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
63

VI Presencia de Dendropsophus meridensis y Lithobates

catesbeianus durante 2006 en 12 lagunas de la regin de Jaj-La
Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
69

VII Densidades de Dendropsophus meridensis durante 2006 en 12

lagunas del sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida.
81

VIII Densidades de Lithobates catesbeianus durante 2006 en12

lagunas del sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida.
81
 6

IX Anlisis de varianza de la densidad de Dendropsophus

meridensis durante abril, agosto y octubre de 2006 en 12 lagunas
del sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida.
82

X Anlisis de varianza de la densidad de Lithobates catesbeianus

durante abril, agosto y octubre de 2006 en 12 lagunas del sector
Jaj-La Carbonera, estado Mrida.
83

XI Parmetros de las variables independientes empleadas en

modelos de regresin logstica para determinar la probabilidad
de infeccin de Dendropsophus meridensis con el hongo
Batrachochytrium dendrobatidis.
98

XII Diagnstico de modelos de Regresin Logstica empleados para

evaluar el efecto de variables biticas y abiticas sobre la
probabilidad de infeccin de Dendropsophus meridensis con el
hongo Batrachochytrium dendrobatidis.
100

XIII Coeficientes de regresin y cocientes de probabilidades de los

parmetros incluidos en el modelo de regresin logstica
seleccionado para determinar la probabilidad de infeccin de
Dendropsophus meridensis con el hongo Batrachochytrium
dendrobatidis.
100

XIV Diagnstico del modelo de regresin logstica seleccionado para

determinar la probabilidad de infeccin de Dendropsophus
meridensis con el hongo Batrachochytrium dendrobatidis.
101
 7

LISTA DE FIGURAS

Figura
Pgina

1 Ubicacin del rea de estudio en la Cordillera de Mrida,

Venezuela.
11

2 Diagrama del ciclo de vida in vitro de Batrachochytrium

dendrobatidis.
14

3 Tejidos de adultos y larvas de anfbios sanos e infectados con

Batrachochytrium dendrobatidis.
16

4 Distribucin de Batrachochytrium dendrobatidis en el mundo.

22

5 Ejemplares de Lithobates catesbeianus provenientes del sector

Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
23

6 Ejemplares de Dendropsophus meridensis provenientes del

sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
27

7 Prevalencia de Batrachochytrium dendrobatidis en diferentes

estados de desarrollo de Dendropsophus meridensis y
Lithobates catesbeianus.
42

8 Logaritmo del nmero de zoosporas de Batrachochytrium

dendrobatidis en individuos de Dendropsophus meridensis
(barras verdes) y Lithobates catesbeianus (barras azules).
43

9 Nmero promedio de zoosporas de los diferentes estados de

desarrollo de Dendropsophus meridensis (verde) y Lithobates
catesbeianus (azul).
44

10 Presencia de Batrachochytrium dendrobatidis en los Andes

Venezolanos.
45
 8

11 Relacin entre la carga promedio de zoosporas y el punto

medio de la distribucin altitudinal de los individuos
infectados con Batrachochytrium dendrobatidis de once
especies de ranas de la Cordillera de Mrida, Venezuela.
46

12 Ubicacin de los sitios de muestreo dentro del rea de estudio.

60

13 Ubicacin de 12 lagunas donde se registraron las densidades

de Dendropsophus meridensis y Lithobates catesbeianus
durante 2006, en la regin de Jaj-La Carbonera, estado
Mrida, Venezuela.
64

14 Abundancia mxima de Dendropsophus meridensis en funcin

del permetro promedio de 12 lagunas muestreas durante 2006
de la regin de Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
69

15 Distribucin de Dendropsophus meridensis en la cordillera de

los Andes Venezolanos.
74

16 Distribucin de Lithobates catesbeianus en la cordillera de los

Andes Venezolanos.
75

17 rea de distribucin de Dendropsophus meridensis invadida

por Lithobates catesbeianus.
76

18 Presencia y ausencia de Dendropsophus meridensis y

Lithobates catesbeianus en 12 lagunas de la regin de Jaj-La
Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
77

19 Residuales de las frecuencias observadas en la aparicin

conjunta de Dendropsophus meridensis y Lithobates
catesbeianus en 12 lagunas de la regin de Jaj-La Carbonera,
estado Mrida, Venezuela
78
 9

20 Proporcin de lagunas con Dendropsophus meridensis durante

2006 en el sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida,
Venezuela. 79

21 Proporcin de lagunas con Lithobates catesbeianus durante

2006 en el sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida,
Venezuela.
79

22 Variacin de la densidad de Dendropsophus meridensis en

funcin de la densidad de Lithobates catesbeianus
83

23 Relacin entre la prevalencia de Batrachochytrium

dendrobatidis en Dendropsophus meridensis y la densidad de
esta rana en lagunas del sector Jaj-La Carbonera, estado
Mrida, Venezuela.
84

24 Relacin entre la prevalencia de Batrachochytrium

dendrobatidis en Lithobates catesbeianus y la densidad de esta
rana en lagunas del sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida,
Venezuela.
85

25 Relacin entre la carga promedio de zoosporas de

Batrachochytrium dendrobatidis en Dendropsophus
meridensis y la densidad de esta rana en lagunas del sector
Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
85

26 Variacin entre la carga promedio de zoosporas de

Batrachochytrium dendrobatidis en funcin de la prevalencia
en Dendropsophus meridensis.
86
 10

CAPTULO I. INTRODUCCIN GENERAL

 11

En los ltimos 40 aos ha incrementado notoriamente los reportes de

disminuciones drsticas y extinciones de poblaciones de anfibios en todos los continentes
(Alford et al. 2001; Young et al. 2001; Stuart et al. 2004; Collins y Halliday 2005). Si
bien se conoce que las poblaciones de anfibios tienden a mostrar grandes fluctuaciones
naturales en sus tamaos (Pechmann et al. 1991; Alford y Richards 1999), no es sino en
las ltimas dcadas que los descensos observados no son contrarrestados por aumentos
equivalentes (Houlahan et al. 2000; Alford et al. 2001). Una evaluacin global sobre el
estado de conservacin de este grupo (GAA por sus siglas en ingles) publicada en 2004 y
actualizada en 2008, alert que 2.030 (32,4%) especies se encuentran amenazadas o
extintas (Stuart et al. 2004). Es probable que esta proporcin est subestimada debido a
que existen al menos 1.533 (24,5%) especies escasamente conocidas, de las cuales no se
pudo concluir sobre el estado de sus poblaciones (Stuart et al. 2004; UICN 2012).

Son diversos los factores que pudieran contribuir a las disminuciones en los
tamaos poblacionales la contaminacin (Blaustein et al. 2003; Rohr et al. 2004), la
introduccin de especies exticas (Kupferberg 1997; Kiesecker et al. 2001b), el
incremento en la incidencia de radiacin ultravioleta (Kiesecker et al. 2001a; Blaustein et
al. 2003), la destruccin del hbitat (Stuart et al. 2004; Lips et al. 2005; Cushmann
2006), los cambios climticos (Pounds y Crump 1994; Pounds y Puschendorf 2004), las
enfermedades infecciosas (Laurance et al. 1996; Berger et al. 1998; Lips et al. 2006) y la
sinergia entre algunos de estos factores (Kiesecker et al. 2001a; Blaustein et al. 2003;
Burrowes et al. 2004; Pounds et al. 2006; Lampo et al. 2006b; Alford et al. 2007). La
destruccin del hbitat ha sido la causa ms importante de las disminuciones de especies
de anfibios (Sala et al. 2000; Lips et al. 2005), especialmente aqullas asociadas a tierras
bajas (Young et al. 2001). Se estima que 183 de las especies (42%) cuyas poblaciones
estn disminuyendo rpidamente, lo hacen debido a la prdida acelerada de sus hbitat
(Stuart et al. 2004). Sin embargo, poblaciones de 207 especies (48%) han sufrido
declives drsticos en zonas prstinas -nmero equiparable al de zonas intervenidas (183
especies)- lo cual sugiere un efecto global e indirecto de las actividades humanas sobre
los sistemas naturales (Stuart et al. 2004). Las disminuciones que han ocurrido en zonas
prstinas presentan un patrn no-aleatorio con respecto a las preferencias ecolgicas, los
 12

intervalos geogrficos y los grupos taxonmicos de las especies afectadas (Stuart et al.
2004). Entre las hiptesis que cuentan con mayores evidencias para explicar estas
disminuciones, est la de epidemias de una enfermedad infecciosa de anfibios llamada
quitridiomicosis cutnea.

El agente causal de esta enfermedad, Batrachochytrium dendrobatidis (en

adelante Bd), fue descubierto en 1998 en ejemplares de anfibios depositados en museos
que fueron recolectados durante eventos de mortandad ocurridas en Australia y Centro
Amrica, a finales de la dcada de los ochenta y durante la dcada de los noventa (Berger
et al. 1998). Desde entonces se ha encontrado evidencias experimentales y de campo que
vinculan la presencia de este hongo con las disminuciones drsticas de poblaciones de
anfibios ocurridas en diversas partes del mundo (Berger et al. 1998; Longcore et al.
1999; Bosch et al. 2001; Nichols et al. 2001; Ouellet et al. 2004; Weldon et al. 2004;
Garner et al. 2005; Lips et al. 2006; Olson y Ronnenberg 2008; Kilpatrick et al. 2010).
Actualmente, se sabe de su presencia en una gran cantidad de lugares y de su capacidad
de infectar un gran nmero de especies. Existen registros de Bd para al menos 257
especies y 43 pases distribuidos en los cinco continentes (Barrionuevo et al. 2008; Yang
et al. 2009; Aanenses y Fisher 2012). No obstante, Bd ha incidido de forma diferencial
en estas especies y sus poblaciones. Mientras algunas son muy vulnerables a desarrollar
la quitridiomicosis al infectarse con el patgeno, otras se comportan como portadoras
sanas (Berger et al. 1998; Longcore et al. 1999; Nichols et al. 2001; Weldon et al. 2004;
Daszak et al. 2004; Hanselmann et al. 2004; Beard y O'Neill 2005).

Transcurridos 12 aos del descubrimiento de Bd, son numerosos los trabajos que
se ha publicado sobre el tema (Kilpatrick et al. 2010). Se ha descrito su distribucin
geogrfica, su ciclo de vida, su biologa, y algunos aspectos de su ecologa. Se ha
identificado algunos de sus hospederos y se han desarrollado tcnicas para el diagnstico
de la infeccin y la enfermedad. No obstante, es mucho lo que se desconoce an sobre la
ecologa de este patgeno, la vulnerabilidad de las especies, los mecanismos que
ocasionan la muerte y la dinmica de la interaccin con sus hospedadores. Asimismo,
permanece como tema de debate las hiptesis postuladas para explicar el origen de las
 13

epidemias de quitridiomicosis (Lips et al. 2008; Pounds y Coloma 2008; Kilpatrick et al.
2010; Lampo et al. 2011), cuya respuesta es fundamental para predecir dnde, cmo y
cundo podra ocurrir una nueva epidemia. Las consecuencias de nuevos eventos
epidmicos podran suscitar la extincin de otras especies de anfibios, principalmente,
aquellas que poseen distribuciones muy restringidas.

En Venezuela, el problema de prdida de diversidad de especies de anfibios es

preocupante; 26 especies estn incluidas en las categoras de riesgo de extincin del
Libro Rojo de la Fauna Venezolana, y una est considerada extinta (Rodrguez y Rojas-
Surez 2008) (Tabla 1). A su vez, seis especies han sido decretadas como especies en
peligro de extincin por la legislacin Venezolana (Presidencia de la Repblica de
Venezuela 1996) (Tabla I). Estudios retrospectivos realizados con ejemplares de museos
indican que cuatro de estas especies -Atelopus cruciger, A. carbonerensis, A.
mucubajiensis y A. sorianoi- pudieron haber disminuido drsticamente en la dcada de
los 90, por un efecto sinrgico entre algunos eventos climticos e infecciones con Bd
(Bonaccorso et al. 2003; Lampo et al. 2006b). Todas estas especies son endmicas de
regiones montaosas; la primera, de la Cordillera de la Costa y las tres ltimas, de la
Cordillera de los Andes.

Estudios recientes en Los Andes venezolanos (Hanselmann et al. 2004; Lampo et

al. 2006a; Lampo et al. 2006b) y algunos avances de esta investigacin (Snchez et al.
2008), sugieren que Bd ha estado presente en el estado Mrida durante los ltimos 24
aos, y que actualmente se encuentra en niveles endmicos en varias especies de ranas.
No obstante, se desconocen los factores que determinan su distribucin, prevalencia y
carga de zoosporas en la zona de los Andes y cmo estos factores podran favorecer el
desarrollo de epidemias en las zonas donde el patgeno est presente. Por ejemplo, Bd
est en 80% de las ranas toro (Lithobates catesbeianus) (Snchez et al. 2008), una
especie extica invasora introducida en la regin de La CarboneraJaj en el estado
Mrida a finales de 1990 (Barrio-Amors 2001). La alta prevalencia del patgeno en
adultos y larvas de rana toro, y la ausencia de signos clnicos de la enfermedad sugiere a
 14

esta especie como un importante reservorio y vehculo de transmisin de la enfermedad

en la regin (Hanselmann et al. 2004; Snchez et al. 2008).

Este proyecto tuvo como objetivo estudiar la epidemiologa de la infeccin por

Bd en las comunidades de anfibios del centro-norte de la Cordillera de Mrida, con el fin
de conocer la frecuencia de la infeccin (distribucin, prevalencia, intensidad de
infeccin), los factores que determinan dicha frecuencia y predecir el riesgo de infeccin
en las especies de anfibios. Para ello se recab informacin sobre variables geogrficas,
individuales y poblacionales. Luego se estudiaron las relaciones de estas variables con la
prevalencia y carga de zoosporas del hongo y con base en esta informacin, se construy
un modelo para estimar el riesgo de infeccin que existe para una de las especies nativas,
que por la prevalencia e intensidad de infeccin podran estar enfrentando el mayor
riesgo de epidemias por quitridiomicosis. Este estudio contribuir a priorizar las zonas
donde se deben establecer programas de seguimiento y control de las infecciones por Bd
para evitar que ocurran nuevas disminuciones en las poblaciones de anfibios a causa de
esta enfermedad.

Para facilitar la comprensin del manuscrito, presentamos las definiciones de las

variables respuesta; prevalencia e intensidad de infeccin en este capitulo introductorio.
Se define como prevalencia de una infeccin a la proporcin o porcentaje de individuos
infectados de una poblacin hospedera en un momento determinado (Begon et al. 2006).
La intensidad de infeccin, por su parte, es el nmero de parsitos (zoosporas en el caso
de Bd), que alberga un hospedero infectado, mientras, la intensidad en la poblacin se
refiere al promedio de zoosporas por huesped (Begon et al. 2006) (en este estudio, sin
incluir los individuos no infectados). La intensidad de infeccin tambin es referida, en
este documento, como carga de zoosporas.

Este manuscrito comprende cinco captulos, adems de esta introduccin general

(captulo I). En el captulo II se describen las especies focales - las ranas Dendropsophus
meridensis y L. catesbeianus y el hongo Batrachochytrium dendrobatidis- y se
caracteriza la zona de estudio. El captulo III aborda las preguntas 1) Cun amplia es la
 15

distribucin espacial del patgeno en La Carbonera?, 2) Qu especies estn infectadas?

y 3) Cmo vara la prevalencia e intensidad de infeccin entre especies, estados de
desarrollo, hbitats y a lo largo del gradiente altitudinal? El captulo IV tiene como
objetivo evaluar 1) cmo vara la prevalencia y la intensidad de la infeccin de Bd con
las densidades de D. meridensis y L. catesbeinaus? y 2) cmo vara la prevalencia e
intensidad de la infeccin de Bd en D. meridensis con la presencia y densidad de L.
catesbeianus? El captulo V pretende integrar informacin recabada en los captulos
anteriores en un modelo que permita predecir el riesgo de infeccin en D. meridensis la
especie endmica amenazada de extincin con la ms alta prevalencia e intensidad de
infeccin de Bd y que comparte hbitat con L. catesbeianus. Finalmente, el captulo VI
contiene la discusin general sobre los resultados obtenidos en este proyecto de
investigacin, seguido de las secciones de bibliografa y anexos.
 16

Tabla I. Especies de anfibios clasificados en las categoras de riesgo de extincin del Libro Rojo
de la Fauna Venezolana (Rodrguez y Rojas-Surez 2008) y declarados en peligro de extincin
segn el Decreto 1.486 (Presidencia de la Repblica de Venezuela 1996).
Categora de
Nombre comn Nombre cientfico
amenaza
Rana mapurite Aromobates nocturnus En Peligro Crtico
Sapito amarillo de La Carbonera Atelopus carbonerensis* En Peligro Crtico
Sapito amarillo y rojo de Niquitao Atelopus chrysocorallus En Peligro Crtico
Sapito rayado Atelopus cruciger* En Peligro Crtico
Sapito amarillo de Mucubaj Atelopus mucubajiensis* En Peligro Crtico
Sapito amarillo de Mrida Atelopus oxyrhynchus* En Peligro Crtico
Sapito verdirrojo de Piango Atelopus pinangoi* En Peligro Crtico
Sapito anaranjado de San Francisco Atelopus sorianoi* En Peligro Crtico
Sapito arlequn de Guaramacal Atelopus sp. nov. En Peligro Crtico
Sapito arlequn de Tam Atelopus tamaense En Peligro Crtico
Sapito acollarado de Rancho Grande Mannophryne neblina En Peligro Crtico
Rana arborcola del Socop Dendropsophus amicorum En Peligro
Ranita de cristal del vila Hyalinobatrachium guairarepanensis En Peligro
Sapito silbador del Socop Leptodactylus magistris En Peligro
Sapito acollarado del Socop Mannophryne lamarcai En Peligro
Sapito rojo del Yapacana Minyobates steyermarki En Peligro
Sapito niera del Murisipn Colostethus murisipanensis Vulnerable
Sapito acollarado de Churuguara Mannophryne caquetio Vulnerable
Sapito rugoso de cerro El Sol Oreophrynella huberi Vulnerable
Sapito rugoso del Kukenn Oreophrynella nigra Vulnerable
Sapito rugoso del Roraima Oreophrynella quelchii Vulnerable
Sapito rugoso del Il Oreophrynella vasquezi Vulnerable
Rana estefana de Brewer Stefania breweri Vulnerable
Rana estefana del Yuruan Stefania riveroi Vulnerable
Ranita tepuyana del Ptari Tepuihyla rimarum Vulnerable
Salamandra de La Carbonera Bolitoglossa spongai Vulnerable
Las categoras de amenazas empleadas en el Libro Rojo de la Fauna Venezolana (Rodrguez y Rojas-Surez 2008)
se basan en los criterios empleados por la Unin Internacional para la Conservacin de la Naturaleza (UICN 2001). Asteriscos
(*) indican las especies incluidas en el Decreto 1.486 (Presidencia de la Repblica de Venezuela 1996).
 17

CAPTULO II. REA DE ESTUDIO Y ESPECIES DE INTERS

 18

REA DE ESTUDIO

La Cordillera de Los Andes de Venezuela se ubica al occidente del pas y est

conformada por la Sierra de Perij (90-1120N, 7215-7330O) y la Cordillera de
Mrida (730-1010 N, 6920-7250O), las cuales se originan de la bifurcacin de Los
Andes Colombianos en el Nudo de Pamplona (Schubert y Vivas 1993). Tiene una
superficie de 36.120 km2 que abarca a los estados Tchira, Mrida y Trujillo y, en una
menor proporcin, a los estados Barinas, Apure, Portuguesa y Lara. Los Andes
venezolanos se caracterizan por tener un relieve muy variado conformado por valles,
mesetas, pramos, llanuras y cumbres nevadas; distribuidos a lo largo de un amplio
gradiente altitudinal que va desde el nivel de mar hasta casi 5.000 m de altitud.

La Cordillera de Mrida, de inters en este estudio, comprende los estados

Tchira, Mrida, Trujillo, Apure, Barinas y Lara. En sentido suroeste-noreste, comienza
en la Depresin de Tchira extendindose a largo de unos 400 km y un ancho de 80 km
para finalizar en la Depresin de Barquisimeto (La Marca 1997). Entre las principales
sierras que conforman esta Cordillera, se encuentra la Sierra del Norte o La Culata, La
Sierra Nevada y la Sierra de Santo Domingo, las cuales junto a otras sierras constituyen
las divisorias de agua entre la cuenca del ro Orinoco y la del Lago de Maracaibo. Los
picos ms importantes, en trminos de altura, se ubican en el estado Mrida y se conoce
al menos unos 70 distribuidos en las tres sierras mencionadas, entre los que resaltan el
Bolvar, Humbolt, Bompland, La Concha, El Toro y El Len en la Sierra Nevada;
Mucuuque en la Sierra de Santo Domingo y Campanario y Piedras Blancas en la Sierra
de La Culata (Silva Len 2001). Por su parte, entre los valles ms importantes estn los
del Ro Chama, Ro Motatn, Ro Santo Domingo y el del Ro Mocotes.

En la Cordillera de Mrida, la zona de estudio se ubica en el centro y al oeste del

Estado Mrida colindando con la Sierra de La Culata, entre los 71,50-71,84 norte y los
8,30-8,92 oeste con una superficie aproximada de 2.600 km2 y entre los 80 m y 2.600 m
de altitud (Figura 1). Entre los principales centros poblados se encuentran Jaj,
Miraflores, Macho Capaz, Palo Negro y La Carbonera del Municipio Campo Elas; San
 19

Eusebio, La Azulita y la Osa del Municipio Andrs Bello; Chiguar, San Juan de
Lagunillas y Lagunillas del Municipio Sucre. La temperatura promedio anual vara desde
27C en las zonas ms bajas hasta -2C en las cumbres. Existen dos estaciones climticas
una de sequa entre diciembre y marzo, y una estacin lluviosa entre los meses de abril y
noviembre (Huber 1997; Ataroff y Sarmiento 2004).

En la zona de estudio existen cinco de las nueve unidades ecolgicas descritas

para la Cordillera de Mrida por Ataroff y Sarmiento (2004). En las vertientes hmedas
dominan las unidades ecolgicas con vegetacin selvtica (selva semicaducifolia
montana, selva nublada montana baja, selva nublada montana alta), mientras que, las
vertientes ms secas estn compuestas principalmente por bosques bajos y arbustales
(arbustal espinoso, bosque siempre verde seco montano bajo). La selva nublada abarca la
mayor superficie de la zona, caracterizada por una vegetacin de estructura compleja,
con estratos difciles de diferenciar, dominada por rboles siempreverdes de dosel alto y
gran diversidad de epfitas (Ataroff y Sarmiento 2004). En general, por debajo de los
1000 m s.n.m. el rea se encuentra muy intervenida, con zonas urbanizadas en los
sectores de menor altitud (e.g., El Viga; Lagunillas, Ejido, La Azulita) y otras menos
urbanizadas, pero con desarrollo de actividades agrcolas y ganaderas en zonas ms altas,
(e.g., Jaj, la Carbonera, Chiguar).

La hidrografa se caracteriza por presentar numerosos cuerpos de agua tanto

naturales como artificiales que incluyen ros, quebradas y lagunas de tamaos variables;
estas ltimas ubicadas principalmente en las terrazas y los valles. Estos cuerpos de agua
forman parte de la cuenca del ro Chama, cuyos principales afluentes son los ros
Quebrada Azul, La Gonzlez, Capaz y la quebrada La Sucia.
 20

Figura 1. Ubicacin del rea de estudio en la Cordillera de Mrida, Venezuela.

 21

ESPECIES DE INTERS

En esta seccin se describen aspectos generales de las principales especies

empleadas en el estudio: el hongo qutrido y dos especies de anuros. Aunque en el
captulo III se consideraron 16 especies de ranas, gran parte de las hiptesis planteadas
en la tesis son puestas a prueba empleando slo dos de ellas: una endmica del estado
Mrida, Dendropsophus meridensis y la rana toro, L. catesbeianus, autctona de los
Estados Unidos de Norteamrica. La informacin de ambas ranas es sintetizada de
manera sistemtica a modo de ficha descriptiva, en la cual se resume brevemente las
principales caractersticas morfolgicas, historia natural y distribucin. Para la rana toro
se incluye una seccin que trata sobre su impacto como especie invasora.

Batrachochytrium dendrobatidis Longcore, Pessier y Nichols, 1999

Clasificacin taxonmica y ciclo de vida

Este patgeno pertenece al Phyllum Chytridiomycota por producir zoosporas

uniflageladas, a la clase Chytridiomicetes por poseer un flagelo situado en la parte
posterior de la zoospora, y al orden Chytridiales por la presencia de esporangios
inoperculados (Longcore et al. 1999; Gleason y Lilje 2009). Debido a la presencia de
caractersticas ultraestructurales nicas de sus zoosporas y a la exclusiva secuencia de
ADN de la subunidad pequea del ribosoma (ssu-rDNA) se defini un nuevo gnero,
Batrachochytrium, y una nueva especie, Batrachochytrium dendrobatidis Longcore,
Pessier et Nichols 1999 (Longcore et al. 1999). El aislado de este organismo empleado
para su descripcin se hizo de un individuo de Dendrobates azureus (rana azul punta de
flecha); de all la procedencia del epteto especfico asignado al nuevo taxn (Longcore
et al. 1999; Pessier et al. 1999).

Todas las especies de Chytridiomicetes previamente conocidas parasitan hongos,

algas, plantas vasculares, rotferos, nematodos o insectos (Powell 1993) por lo que Bd
representa la primera especie de esta clase que infecta una especie de vertebrado (Berger
 22

et al. 1998; Longcore et al. 1999). Las especies pertenecientes a este grupo, incluyendo a
Bd, degradan la queratina de los hospederos para su desarrollo. En los anfibios, Bd se
aloja en el stratum corneum y stratum glanulosum de la piel (Berger et al. 1998;
Longcore et al. 1999; Berger et al. 2005a). En los estadios metamrficos,
postmetamrficos y en adultos, el hongo se localiza principalmente en los dedos,
membranas interdigitales y en la regin inguinal. En los estadios larvales, el hongo
infecta slo las estructuras bucales que son las nicas zonas queratinizadas (Berger et al.
1998; Longcore et al. 1999; Pessier et al. 1999).

El ciclo de vida del hongo ha sido descrito a partir de cultivos in vitro (Longcore
et al. 1999; Berger et al. 2005a); sin embargo, se ha determinado que los mismos
estadios ocurren en la piel de los anfibios, aunque se desconoce si se desarrollan a la
misma tasa (Figura 2). Este ciclo tiene una duracin de cuatro a cinco das a 22C y se
puede dividir en cinco etapas: (1) consiste de una zoospora flagelada que puede
movilizarse y dispersarse (2) la zoospora se enquista, reabsorbe el flagelo y se forma la
pared celular (zoosporangio joven); (3) desde el zoosporangio crecen finos rizoides para
la fijacin y absorcin del hongo; (4) ocurren divisiones mitticas en el citoplasma
multinucleado para formar nuevas zoosporas flageladas; (5) se forman una o ms papilas
de descarga por donde saldrn las zoosporas una vez el zoosporangio ha madurado
(Berger et al. 2005a). En cultivos in vitro, los esporangios tienden a alcanzar un mayor
tamao (hasta 40m de dimetro) que en infecciones en la piel (Longcore et al. 1999;
Berger et al. 2005a).
 23

Figura 2. Diagrama del ciclo de vida in vitro de Batrachochytrium dendrobatidis. Despus de un

periodo de movilidad (usualmente < 24 h), la zoospora se enquista y reabsorbe su flagelo formndose un
zoosporangio joven. Luego los rizoides aparecen de una o ms reas y el talo crece y se convierte en un
esporangio maduro entre el cuarto y el quinto da. El contenido del talo se hace multinucleado a travs de
divisiones mitticas y el contenido entero se divide en zoosporas, mientras se forman los tubos de descarga.
Los tubos de descarga permanecen cerrados por una especie de tapa que se abre cuando las zoosporas estn
listas para liberarse. Algunos talos se desarrollan colonialmente con delgadas septas que dividen el
contenido en mltiples esporangios, cada uno con su propio tubo de descarga. A = zoospora, B =
zoosporangio inmaduro, C = zoosporangio desarrollado, D = zoosporangio monocentrico, E = Talo colonial.
(Tomado de Berger et al. 2005a).

.
La tasa de desarrollo de los zoosporangios coincide con la de maduracin de las
clulas epidermales. Los zoosporangios inmaduros estn asociados a las clulas ms
jvenes en las capas ms profundas de la epidermis, mientras que los esporangios
maduros y vacos se localizan en las clulas totalmente queratinizadas en las capas ms
externas, para completar su desarrollo. Los tubos de descarga se unen a la membrana
celular epidermal y la disuelven para liberar las zoosporas sobre la superficie de la clula
y dispersarlas al ambiente (Berger et al. 2005a). Estas adaptaciones especializadas que le
permiten vivir en la piel, sugieren que Bd ha tenido un largo tiempo de evolucin (Berger
et al. 2005a). Sin embargo, an se desconoce el mecanismo de penetracin del hongo en
la piel, aunque se ha sugerido que las zoosporas podran fijarse en la piel e inyectar los
ncleos y contenidos a travs de un tubo germinal (Berger et al. 2005a).
 24

Un nuevo estado de Bd fue reportado ms recientemente en una poblacin de

Rana lessonae en el lago Trasimento, Italia. El tamao y otras caractersticas de esta
nueva forma sugieren que se trata de zoosporas enquistadas, las cuales son
condicionalmente no patognicas (Di Rosa et al. 2007). Los ejemplares de R. lessonae
estuvieron infectados entre 1999-2002 con este estadio sin manifestar signos clnicos de
la enfermedad, pero luego del efecto de una sequa extrema en el 2003, el 18% de los
individuos desarrollaron la quitridiomicosis (Di Rosa et al. 2007). El enquistamiento o
descanso de las zoosporas ha sido sealado como una de las fases del ciclo de vida de los
quitridiomicetes y se ha sugerido que los cambios en temperatura pueden inducir a las
zoosporas a entrar en esta fase de latencia con el fin de incrementar su supervivencia
(Gleason y Lilje 2009). Sin embargo, aun es necesario corroborar que este organismo se
corresponde con una fase de Bd y de ser as, es necesario comprobar experimentalmente
el carcter de latencia de ese estado (Kilpatrick et al. 2010).

Patologa causada por Batrachochytrium dendrobatidis: quitridiomicosis cutnea

Signos clnicos y mecanismos que explican la mortalidad. En individuos

metamrficos y postmetamrficos (juveniles y adultos), generalmente, las infecciones
causan un marcado engrosamiento del stratum corneum (hiperqueratosis) y la erosin y
el desprendimiento anormal e irregular de las clulas epidermales. Las zonas infectadas
se observan ms oscuras debido a la prematura queratinizacin de las clulas. Tambin se
ha observado cambios epidrmicos ms profundos como la hiperplasia moderada del
stratum intermedium y la inflamacin de la dermis (muy raramente en la epidermis)
(Nichols et al. 1998; Berger et al. 1999; Longcore et al. 1999; Pessier et al. 1999)
(Figura 3). Con menor frecuencia ocurren ulceraciones epidrmicas, hemorragias en la
piel, los msculos y los ojos, hiperemia de la piel ventral y digital, y congestin de las
vsceras (Berger et al. 1999). Generalmente, el hongo se encuentra en grupos dispersos
sobre la piel, excepto, en el caso de infecciones severas en donde los esporangios se
distribuyen en toda la epidermis ventral (Berger et al. 2005a). Algunos signos clnicos
son ms evidentes e involucran cambios en el comportamiento de los individuos como
anorexia, letargo, postura anormal y prdida de los reflejos (Berger et. al. 1999). En las
 25

larvas, la infeccin con Bd puede causar anormalidades en las estructuras bucales tales
como prdida y despigmentacin de las hileras de dientes y del queratostoma, y
despigmentacin, inflamacin y enrojecimiento de las papilas labiales (Fellers et al.
2001) (Figura 3).

Hiperplasia

Hiperqueratinizacin

Figura 3. Tejidos de adultos y larvas de anfibios sanos e infectados con Batrachochytrium

dendrobatidis. Corte histolgico de una piel sana (arriba izquierda, Foto: Richard Speare) y de una piel
infectada por B. dendrobatidis (arriba derecha, Foto: Argelia Rodrguez). Disco oral de una larva de Rana
mucosa saludable (abajo izquierda) y anormalidades en un disco oral en una larva de R. mucosa infectada
por B. dendrobatidis (abajo derecha); ambas fotos tomadas de Feller et al. 2001.

Se ha propuesto que Bd puede causar la muerte a sus hospedadores por

interrumpir la funcin osmorregulatoria de la piel. Esta fisiopatologa fue descrita en
ejemplares de la rana Litoria careula infectados experimentalmente. Los individuos
enfermos de esta especie redujeron su transporte de electrolitos en ms de un 50%, la
 26

concentracin de sodio y potasio en aproximadamente 20% y 50%, respectivamente, y

finalmente sufrieron un paro cardiaco que les ocasion la muerte (Voyles et al. 2009). No
obstante, es necesario continuar profundizando sobre la manera mediante la cual Bd
puede ocasionar la muerte, debido a que otros procesos podran estar implicados en ello
e.g., la absorcin de productos txicos liberados por el hongo (Berger et al. 1998; Pessier
et al. 1999) y/o el crecimiento de bacterias, durante estados avanzados de la infeccin por
Bd. En algunos casos se ha observado bacterias creciendo y multiplicndose en los
esporangios vacos y en las zonas afectadas de la piel (Pessier et al. 1999; Berger et al.
2005a).

Susceptibilidad, patogenicidad y virulencia. Batrachochytrium dendrobatidis se

ha encontrado en una cantidad notable de especies de anfibios al menos 257 especies
pueden infectarse (Aanenses y Fisher 2012). Los hospedadores, con una gran
variabilidad de caractersticas taxonmicas, de modos reproductivos y afinidad por
microhbitats diferentes, varan en su vulnerabilidad a la infeccin. Individuos
postmetamrficos 1 y adultos de Dendrobates tinctorius (Longcore et al. 1999; Nichols et
al. 2001), Dendrobates auratus (Nichols et al. 2001) y Mixophyes fasciolatus (Berger et
al. 1998), expuestos a Bd en ensayos experimentales, han contrado la infeccin (e.i., son
susceptibles); registrndose hasta un 100% de mortalidad por la quitridiomicosis (e.i.,
alta vulnerabilidad del hospedador). Por el contrario, otras especies de ranas como L.
catesbeianus, Eleutherodactylus coqui, Xenopus laevis, Rana draytonii y Ambystoma
californiense pueden contraer la infeccin pero no desarrollar la enfermedad (e.i., son
susceptibles pero poco vulnerables) (Weldon et al. 2004; Daszak et al. 2004;
Hanselmann et al. 2004; Beard y O'Neill 2005; Padgett-Flohr 2008). Hospedadores con
estas caractersticas se denominan portadores y con frecuencia representan excelentes
reservorios del patgeno (McCallum y Dobson 1995; Watt et al. 1995; Hanselmann et al.
2004).

A diferencia de los estados postmetamrficos, la mayora de las evidencias

sugieren que Bd no afecta significativamente a la supervivencia de los renacuajos (Berger

1
Postmetamrfico: indiviudo de anuro recien metamorfoseado.
 27

et al. 1998; Lamirande y Nichols 2002; Parris y Cornelius 2004; Kilpatrick et al. 2010).
Este parsito puede permanecer en larvas infectadas, por largos perodos,
asintomticamente, y tornarse patognico cuando la metamorfosis ha terminado
(Lamirande y Nichols 2002). Por esto se ha propuesto a los renacuajos como uno de los
principales reservorios de Bd. Cientos de individuos postmetamrficos del sapo Alytes
obstetricans fueron encontrados muertos en el Parque Nacional Pealara de Espaa a
causa de una epidemia de quitridiomicosis, a pesar de que no se encontraron renacuajos
muertos o moribundos (Bosch et al. 2001). No obstante, infecciones experimentales han
demostrado que Bd puede aumentar la incidencia de anormalidades de las partes bucales
(Blaustein et al. 2005), retardar el desarrollo larval, reducir la masa corporal al momento
de la metamorfosis y exacerbar los efectos adversos de la competencia interespecfica y
la depredacin (Parris y Cornelius 2004; Parris y Beaudoin 2004). No obstante, an
cuando son pocas, existen evidencias experimentales que indican que la quitridiomicosis
puede tambin afectar la supervivencia de las larvas de algunas especies (Kilpatrick et al.
2010). Larvas de Bufo boreas infectadas experimentalmente mostraron incrementos
significativos en su mortalidad (Blaustein et al. 2005).

Es poco lo que se conoce sobre los factores y mecanismos que explican la

variabilidad observada en la susceptibilidad, vulnerabilidad, patogenicidad y virulencia.
Al igual que para otras enfermedades, el comportamiento de las infecciones depende de
variables inherentes al ambiente, al hospedador y al parsito (Camel 1990; Verduzco
1998; Begon et al. 2006). En cuanto a las variables ambientales, probablemente la
influencia de la temperatura sea uno de los aspectos ms conocidos. Se ha determinado,
para cultivos in vitro, que el intervalo ptimo de temperatura para el crecimiento y
desarrollo de Bd es 1923C, an cuando este puede sobrevivir a 4C y no muere sino a
temperaturas por encima de los 29C (Longcore et al. 1999). Adems, infecciones
experimentales de M. fasciolatus, han demostrado que la proporcin de muertes es menor
a los 29C que a temperaturas dentro del intervalo ptimo de crecimiento del patgeno
(Berger et al. 2004). Por otra parte, se ha propuesto que la temperatura del ambiente
puede comprometer la capacidad de respuesta del sistema inmune y, por tanto, resultar en
una mayor susceptibilidad o vulnerabilidad del hospedador (Rollins-Smith et al. 2002b;
 28

Berger et al. 2004), aunque todava no existen datos que permitan comparar las
respuestas del hospedero a diferentes temperaturas.

Los hospederos pueden presentar mecanismos que le ayuden a disminuir el

impacto de las infecciones por Bd. Ensayos de laboratorio y de campo han demostrado
que algunas especies son capaces de eliminar el hongo una vez infectadas (Kriger y Hero
2006; Richards-Zawacki 2010; Mrquez et al. 2010). Se ha propuesto al incremento de la
temperatura corporal como uno de los mecanismos que podran explicar cmo las ranas
pueden eliminar la infeccin. Uno de los primeros ensayos de laboratorio realizados para
el estudio del qutrido, demostr que ranas de Litoria chloris infectadas pueden eliminar
la infeccin si la temperatura es incrementada a 37C por al menos 16 h (Woodhams et
al. 2003). Esto se corresponde con hallazgos recientes que demuestran que en vida
silvestre Atelopus zeteki incrementa su temperatura corporal y con ello disminuye la tasa
de infeccin del patgeno. En un estudio de marcaje y recaptura, la temperatura corporal
promedio de esta especie aument con la prevalencia de la infeccin durante el
transcurso de una epidemia de quitridiomicosis, lo cual los autores interpretaron como
una fiebre corporal que les permite a los individuos eliminar la infeccin (Richards-
Zawacki 2010). Ms recientemente, se encontr que otros mecanismos independientes de
la temperatura pueden estar permitiendo que las ranas eliminen la infeccin (Mrquez et
al. 2010). Ejemplares de Hypsiboas crepitans infectados experimentalmente y
mantenidos a una temperatura favorable para el crecimiento de Bd (23C), eliminaron la
infeccin a pocas semanas de haber sido expuestas al hongo; lo que sugiere que
mecanismos del sistema inmune podran estar implicados en ello (Mrquez et al. 2010).
Se ha sugerido tambin que un incremento en la frecuencia de la muda de piel podra
contribuir a que los animales se curen de la infeccin (Davidson et al. 2003). Sin
embargo, ejemplares de A. californiense infectados experimentalmente con Bd
permanecieron infectados durante los 18 meses que dur el estudio, a pesar de que
triplicaron la tasa de muda con relacin a los ejemplares no infectados (Padgett-Flohr
2008).
 29

La produccin de pptidos antimicrobianos en la piel de los anfibios, tambin

podra contribuir a la resistencia de algunas especies. Algunos pptidos antimicrobianos
producidos por varias especies de la familia Ranidae pueden inhibir el crecimiento in
vitro de Bd (Rollins-Smith et al. 2002a; Rollins-Smith et al. 2002b). Sin embargo,
disminuciones notorias de rnidos como Rana tarahumare sugieren que en condiciones
silvestres, los mecanismos de proteccin natural actan de una manera ms compleja
porque la produccin de estas sustancias podra inhibirse o disminuir a consecuencia de
factores ambientales estresantes (Rollins-Smith et al. 2002b). Otros factores vinculados
al husped que pudieran influir en su vulnerabilidad a la quitridiomicosis, estn
relacionados con las caractersticas de sus hbitats. Se ha propuesto que especies que se
reproducen en quebradas son ms propensas a contraer infeccin, debido a que Bd es un
patgeno generalmente vinculado a cuerpos de agua, an cuando no existen suficientes
datos que permitan concluir al respecto (Berger et al. 1998).

Algunas diferencias en cmo se manifiesta la quitridiomicosis en diferentes ranas

pudiera ser inherente a la cepa del patgeno y no al hospedador mismo. Aunque se ha
observado una baja variabilidad gentica entre aislados de Bd procedentes de cinco
continentes (James et al. 2009), la evidencia indica que existen cepas con diferentes
virulencias y comportamientos (Berger et al. 2005b). En ensayos de laboratorio, tres
grupos de la rana Litoria caerulea (de 15 individuos cada uno) fueron expuestos a tres
aislados de Bd obtenindose en todos los casos mortalidades del 100%. Sin embargo, el
tiempo a la muerte vari entre los tres grupos. As, aunque la patogenicidad fue igual en
todos los casos, la virulencia fue marcadamente mayor en uno de los grupos. Sin
embargo, an debe determinarse cuales presiones de seleccin afectan la virulencia
(Berger et al. 2005b).
 30

Distribucin de Batrachochytrium dendrobatidis

Desde el descubrimiento de Bd, en Australia y Panam, han surgido registros de

la presencia de este hongo en varios pases del mundo. Actualmente, Bd infecta
poblaciones de anfibios en, al menos, 43 pases (Barrionuevo et al. 2008; Yang et al.
2009; Aanenses y Fisher 2012) (Figura 4), distribuidos en los cinco continentes. Esta
cifra podra aumentar en la medida que se realicen nuevos estudios en pases donde aun
no se conoce la presencia de este patgeno. La distribucin temporal de los registros de
presencia de Bd indican que el reporte ms antiguo de este hongo es de un ejemplar de X.
laevis recolectado en 1938 en Sur frica (Weldon et al. 2004), seguido de dos ejemplares
de la rana verde, Rana clamitans, capturados en 1961 en Saint-Pierre-de-Wakefield,
Qubec, Canad (Ouellet et al. 2005). El resto de los reportes de anfibios infectados con
quitridiomicosis son de individuos recolectados posteriormente a 1978, aun cuando
algunos estudios han analizado muestras de anfibios recolectados antes de la fecha
mencionada (Bonaccorso et al. 2003; Lips et al. 2003; Carnaval et al. 2006; Lampo et al.
2006b; Ruiz y Rueda-Almonacid 2008).

Batrachochytrium dendrobatidis no slo se distribuye ampliamente a escala

mundial sino que tambin muestra un amplio patrn de distribucin en algunos de los
pases donde esta presente. Este hongo ha sido detectado en poblaciones de anfibios de
diversos hbitats y en diferentes pisos altitudinales (Berger et al. 2004; Puschendorf et al.
2006; Carnaval et al. 2006; Snchez et al. 2008). Sin embargo, el mayor nmero de
diagnsticos positivos procede de zonas altas (Puschendorf et al. 2006; Carnaval et al.
2006; Felger et al. 2007; Snchez et al. 2008). Independientemente del hbitat, se ha
observado en algunas regiones un comportamiento estacional en la prevalencia de Bd,
encontrndose un mayor nmero de individuos infectados en las pocas ms fras del ao
(Berger et al. 2004; Retallick et al. 2004). Estos resultados son consistentes con los
obtenidos en ensayos de laboratorio que han evaluado el efecto de la temperatura sobre el
desarrollo y crecimiento in vitro de Bd. De all que los resultados de estudios de
poblaciones silvestres de anfibios indican que la temperatura puede ser uno de los
factores que limita la distribucin, incidencia y prevalencia de Bd.
 31

Figura 4. Distribucin de Batrachochytrium dendrobatidis en el mundo. Mapa tomado y

modificado de Olson y Ronnenberg (2008). Los cuadros rojos orresponden a reportes de presencia de B.
dendrobatidis que fueron publicados posterior a la elaboracin del mapa (Barrionuevo et al. 2008; Yang et
al. 2009; Aanenses y Fisher 2012).

Especies de anuros: Lithobates catesbeianus y Dendropsophus meridensis

Lithobates catesbeianus (Shaw, 1802).

Principales caractersticas morfolgicas: es una especie de rana de la familia

Ranidae que se caracteriza por ser de gran tamao (Figura 5). Los adultos miden entre
10cm y 20cm de longitud hocico-cloaca (LHC) 2 y pueden pesar entre 60g y 900g. Su
dorso puede ser de color verde brillante, oliva o verde-marrn, frecuentemente con un
patrn moteado de verde y marrn. El vientre es liso y de color blanco, aunque a veces
puede estar moteado con gris (Crayon 2005). Otras caractersticas notorias de la especie,
son la presencia de un pliegue de piel muy conspicuo que va desde el ojo hasta el
tmpano y de dedos completamente palmeados en las patas. Los adultos poseen
dimorfismo sexual; las hembras son ms grandes que los machos, y stos ltimos tienen
la garganta de color amarillao y presentan almohadillas nupciales (Shaw 1802; Ryan
1980; Daz de Pascual y Chacn-Ortiz 2002; Bruening 2002; Kaefer et al. 2007). El
2
LCH: Longitud desde la punta del hocico hasta la cloaca, es decir, la talla total del animal.
 32

canto de los machos se asemeja al bramido de un toro, de all el nombre comn que se le
ha dado a la especie de rana toro.

Figura 5. Ejemplares de Lithobates catesbeianus provenientes del sector Jaj-La Carbonera,

estado Mrida, Venezuela. Izquierda: Macho adulto. Derecha: larva.

Historia natural: la rana toro habita en cuerpos de agua lnticos permanentes

como lagos, pantanos y cursos de agua con poca corriente (Crayon 2005; Govindarajulu
et al. 2006; Wang y Li 2009). Los renacuajos prefieren las reas con poca vegetacin y
de profundidades intermedias en los estadios ms tempranos y aguas un poco ms
profundas en los ltimos estadios (Smith 1999). Los adultos pueden ser observados entre
la vegetacin asociada al permetro de las lagunas o dentro del agua. Los machos son
territoriales pudiendo establecer su espacio desde 3m a 25m de la orilla (Ryan 1980). En
cuanto a su dieta, esta especie es generalista, existiendo reportes de depredacin sobre
serpientes, lombrices, insectos, crustceos, ranas y renacuajos, murcilagos e incluso
individuos de la misma especie (canibalismo) (Daza-Vaca y Castro-Herrera 1999; Daz
de Pascual y Chacn-Ortiz 2002; Bruening 2002). Para capturar sus presas las ranas
esperan inmviles a que stas se acerquen.

En zonas templadas, como su rea de distribucin natural, las hembras depositan

entre 7.360-13.014 huevos (de apariencia espumosa) en cada puesta o nidada (Ryan
 33

1980; Govindarajulu et al. 2006). Los huevos eclosionan entre el cuarto y quinto da
despus de la fertilizacin y las larvas que emergen pueden tardar entre dos a tres aos en
completar la metamorfosis, en lugares en donde pasan por perodos de hibernacin. Los
estadios post-metamrficos alcanzan la madurez sexual a los dos aos siguientes
(Govindarajulu et al. 2006). La rana toro tiene una prolongada estacin reproductiva y
una alta tasa de supervivencia de premetamorfos, lo cual contribuye a que sta sea ms
exitosa que otras especies (Bruening 2002). Puede vivir entre siete y nueve aos
(Bruening 2002).

Impactos de la rana toro como una especie extica invasora: estudios

experimentales y de campo han demostrado que la rana toro es capaz de afectar a otras
especies de anfibios en los sitios donde ha sido introducida, a travs de diferentes
mecanismos como la competencia, la depredacin o la transmisin de enfermedades. La
mayora de los estudios de competencia se han realizado con estadios larvales, debido a
que en esta fase podra estar ocurriendo la mayor sobreposicin con otras especies en el
uso de los recursos. En encierros experimentales de campo, se evidenci que tanto los
adultos como las larvas de L. catesbeianus pueden alterar el uso del microhbitat,
incrementar la tasa de metamorfosis y disminuir la masa corporal al momento de la
metamorfosis de larvas de Rana aurora (Kiesecker y Blaustein 1998). Otros autores
tambin han reportado competencia entre larvas de L. catesbeianus y R. aurora
(Kiesecker et al. 2001b), y con otras especies como Rana boylli, Hyla regilla
(Kupferberg 1997) y Bufo marinus (Daza-Vaca y Castro-Herrera 1999) lo cual ha
causado una disminucin en la supervivencia de estas especies nativas. Sin embargo,
aunque en menor medida, se ha reportado que algunas especies, como Pseudacris regilla,
pueden cambiar sus patrones de comportamiento y desarrollar una mayor capacidad
competitiva o expresar mecanismos antidepredadores ante la presencia de L.
catesbeianus (Monello et al. 2006).

La rana toro puede depredar a una gran variedad de especies de diversos grupos y,
en algunos casos, su introduccin ha coincidido con la disminucin de sus presas. Este es
el caso de la serpiente Thamnophis eques en Mxico y la tortuga Clemys marmorata en
 34

Oregn (Kupferberg 1997). Tambin se ha reportado depredacin sobre peces, como el

pez Xyrauchen texanus, el cual es una especie amenazada de EE.UU. (Mueller et al.
2006). Entre las especies de anfibios para las cuales se ha registrado depredacin por
rana toro, se encuentran Dendropsophus colombianus, Leptodactylus colombiensis,
Rhinella marina y Typhlonectes natans (Daza-Vaca y Castro-Herrera 1999). El impacto
que L. catesbeianus puede tener a causa de la depredacin puede verse incrementado
cuando sta afecta, de manera sinrgica con otras especies exticas, a las diferentes
especies nativas (Kiesecker y Blaustein 1998; Mueller et al. 2006).

Lithobates catesbeianus tambin puede contribuir con la introduccin y

transmisin de enfermedades. Su usual movilizacin por el mundo para comercializar sus
ancas de rana, y el hecho de que frecuentemente se encuentre infectada por Bd, sugiere a
esta rana como un dispersor del patgeno a escala global (Fisher y Garner 2007). Sin
descartar adems la introduccin accidental de ejemplares infectados de rana toro que
puede ocurrir a travs de otras actividades como la comercializacin o desplazamiento de
peces criados en estanques donde rana toro est presente (Green y Dodd JR. 2007).
Adems, la alta prevalencia de Bd, en muestras de rana toro recolectadas en campo, as
como la ausencia de signos clnicos de enfermedad sugieren a esta especie como un
reservorio del parsito (Daszak et al. 2004; Hanselmann et al. 2004).

En Venezuela, el Ministerio del Poder Popular Para el Ambiente (Minamb)

durante la dcada de 1990 recibi solicitudes de importacin y zoocra de esta especie,
las cuales no fueron aprobadas (Ojasti et al. 2001). Sin embargo, en 2001 fue publicado
el registro de esta especie para Venezuela (Barrio-Amors 2001). Desde estonces,
instituciones como la Universidad de Los Andes (ULA) y el Instituto Venezolano de
Investigaciones Cientficas (IVIC) han realizado estudios enfocados a evaluar el impacto
que puede tener sobre las comunidades de anfibios (Daz de Pascual y Chacn-Ortiz
2002; Daz de Pascual et al. 2005; Daz de Pascual y Guerrero 2008; Snchez et al. 2008;
Lampo et al. 2008a). Asimismo, el Minamb ha llevado a cabo un programa de control de
la especie enfocado en reducir sus densidades (Sistema Venezolano de Informacin sobre
Diversidad Biolgica 2012).
 35

Distribucin: esta especie es nativa del este de los Estados Unidos. Sin embargo,
debido a su comercializacin a nivel internacional ha sido introducida en otros pases,
donde ha establecido poblaciones silvestres. Existen registros de su presencia para 29
pases: Argentina, Alemania, Blgica, Brasil, Canad, China, Colombia, Cuba, Repblica
Dominicana, Ecuador, Espaa, Filipinas, Francia, Grecia, Indonesia, Italia, Jamaica,
Japn, Malasia, Mxico, Los Pases Bajos, Per, Puerto Rico, Singapur, Taiwn,
Tailandia, Reino Unido, Uruguay y Venezuela (Lynch 2005; Crayon 2005;
Govindarajulu et al. 2006; Martn et al. 2006; Avila-Villegas et al. 2007; Santos-Barrera
et al. 2009).

Categora UICN: se encuentra en la categora de Preocupacin Menor (LC)

debido a su amplia distribucin, tolerancia a un intervalo amplio de hbitats, porque se
presume que tiene grandes tamaos poblacionales y porque es improbable que est
declinando como para ser incluida en una categora de amenaza (Santos-Barrera et al.
2009). Adems, de acuerdo al estado del conocimiento de los impactos que tiene sobre
las especies nativas, ha sido catalogada como una de las 100 peores especies invasoras
del mundo por el Grupo de Especialistas de Especies Invasoras de la UICN (Lowe et al.
2004).

Dendropsophus meridensis (Rivero 1961)

Principales caractersticas morfolgicas: es una especie de rana de la familia

Hylidae caracterizada porque los adultos son de cuerpo robusto y tamao mediano
(Duellman 1989), aunque las hembras son significativamente ms grandes que los
machos (H: 39,35mm LHC, M: 31,77mm LHC) (datos obtenidos en este trabajo) (Figura
6). Los adultos tienen una coloracin dorsal principalmente entre marrn y oliva, aunque
se pueden encontrar individuos con el dorso marrn claro y dorado, uniformemente verde
limn o con patrones de coloracin dorsal ms llamativos que consisten de manchas
verdes o violceas sobre un fondo marrn. Una caracterstica notoria en la coloracin de
esta especie es una banda transversal marrn en las muecas. Hacia la parte ventral los
flancos son marmreos, con manchas blancas, azuladas y amarillas. La regin gular es de
 36

color dorado. El pecho y la regin ventral presentan grnulos de color crema sobre fondo
violceo. Las porciones anteriores y posteriores de los muslos exhiben un patrn de
coloracin similar a la posterior de los flancos (Gottberg et al. 1999). Adems de la
coloracin, existen otras caractersticas morfolgicas que ayudan a diferenciar a D.
meridensis de otras especies del gnero, entre las que se pueden apreciar: 1) un pliegue
supratimpnico que va desde el borde posterior del ojo hasta el margen posterior del
hombro; 2) dedos de las manos con membranas interdigitales basales; 3) el primer dedo
de la mano ms corto que el segundo; 4) los discos ms grandes son casi del mismo
tamao del tmpano, 5) dorso ligeramente granular; 6) vientre con grnulos planos muy
conspicuos y 6) un pliegue pectoral transversal (Rivero 1961; Gottberg et al. 1999). Las
larvas entre los estadios 33-39, miden en promedio 1,434cm de longitud corporal y
4,966cm de largo total (datos obtenidos en este trabajo).

a b

c d e

Figura 6. Ejemplares de Dendropsophus meridensis provenientes del sector Jaj-La

Carbonera, estado Mrida, Venezuela. a) Macho (ejemplar ms pequeo) y hembra (ejemplar ms
grande). Fotografa de Horacio Gonzlez. b) Ejemplar macho. Fotografa de Francisco Nava. c) Vista
ventral, lateral y dorsal de una larva. Fotografas del Departamento de Fotografa Cientfica del IVIC.
 37

Historia natural: esta especie es observada con frecuencia en humedales

naturales, lagunas artificiales y potreros anegados que se encuentran en los espacios
abiertos de los Andes merideos. Tambin ha sido registrada, aunque en menor
frecuencia, en pequeos pozos y bromelias dentro de la selva nublada (Gottberg et al.
1999), observaciones personales). En las lagunas artificiales, D. meridensis puede
observarse junto a L. catesbeianus, mientras que en los potreros anegados coexiste con
Scinax flavidus y dentro de las reas boscosas con Pristimantis vanadisae e
Hyalinobatrachium sp. (datos obtenidos durante este estudio). Sin embargo, se
desconoce que tipo de interaccin existe entre D. meridensis y la mayora de estas
especies. No obstante, existen registros de depredacin de rana toro sobre D. meridensis
y una especie de rana del gnero Leptodactylus en el rea de estudio (Daz de Pascual y
Guerrero 2008). Lithobates catesbeianus tambin podra ser un competidor para D.
meridensis.

El pico de reproduccin de la ranita meridea parece ocurrir al inicio de las

lluvias, entre los meses de abril y mayo. Durante esta poca hemos observado un mayor
nmero de hembras, amplexos y nidos en los cuerpos de agua. Esta especie tiene un
modo reproductivo del tipo huevos y renacuajos exotrficos en aguas lnticas (modo 1)
(datos obtenidos durante este estudio) el cual consiste en que la especie coloca sus
huevos en cuerpos de agua sin corriente, donde se desarrollaran las larvas hasta
completar el proceso de metamorfosis (Duellman y Trueb 1994; Haddad y Prado 2005).
En los anfibios, el concepto de modo reproductivo se basa en una combinacin de
variables que incluyen, entre otras, el sitio de oviposicin, las caractersticas de la nidada
y de los huevos, la tasa y duracin del desarrollo y el tipo de cuidado parental si lo
hubiere (Salthe y Duellman 1973). Entre los 39 modos reproductivos reportados en
anfibios (Haddad y Prado 2005), el modo 1, donde asignamos a D. meridensis, es
considerado como el ms generalizado y ancestral. Los otros modos representan
diferentes grados de especializacin asociados con radiaciones adaptativas en varios
ambientes (Duellman y Trueb 1994). Sus nidadas tienen en promedio 395,67 huevos
(datos obtenidos durante este estudio), lo que indica que la especie tiene una estrategia
reproductiva baja (< 1.000 huevos) (Salthe y Duellman 1973).
 38

Distribucin: se distribuye en la regin andina venezolana del estado Mrida

desde los 1.200 a los 2.400 m s.n.m. (Rivero 1961; La Marca 2004). Sin embargo, sus
poblaciones ms numerosas se localizan sobre los 2.000 m de altitud en la regin de la
Carbonera (Gottberg et al. 1999). En el captulo IV se presenta un anlisis ms
exhaustivo sobre la distribucin de esta especie.

Categora de la UICN: esta especie ha sido clasificada en la categora de En

Peligro porque su extensin de la presencia 3 es menor que 5.000 km2 y su rea de
distribucin est severamente fragmentada (La Marca 2004). Sin embargo, carecemos de
estudios cuantitativos sobre cmo y cunto ha afectado la destruccin del hbitat a las
poblaciones de D. meridensis y, en general, a las comunidades de anfibios de Venezuela.
Adems de la destruccin del hbitat, la ranita meridea est amenazada por la presencia
de L. catesbeianus (ver captulo IV) y Bd (ver captulo III). Estos tres factores podran
actuar de forma combinada y ocasionar disminuciones de las poblaciones de D.
meridensis a mediano plazo, por lo que resulta urgente avanzar en los estudios que
evalen el impacto de estos factores de riesgo.

3
La extensin de la presencia es el rea contenida dentro de los lmites imaginarios continuos ms cortos que pueden
dibujarse para incluir todos los sitios conocidos, inferidos o proyectados en los que un taxn se halle presente, excepto
los casos de vagabundeo. Esta medida puede excluir a las discontinuidades o disyunciones en las distribuciones
generales de los taxones (e.g., grandes reas de hbitat obviamente inadecuado) (UICN 2001).
 39

CAPTULO III. UN PATGENO EMERGENTE AMPLIAMENTE

DISTRIBUIDO EN LAS COMUNIDADES DE ANFIBIOS DE LOS ANDES
VENEZOLANOS
 40

RESUMEN

Muchas de las disminuciones recientes de anfibios han sido asociadas con la

quitridiomicosis, una enfermedad cutnea causada por el hongo quitrido
Batrachochytrium dendrobatidis. No obstante, cada vez son mayores las evidencias que
sugieren que este patgeno puede coexistir con algunas especies de anfibios sin causar
disminuciones. En los Andes venezolanos, la desaparicin de tres especies de anuros
durante la dcada de los ochenta fue atribuido a B. dendrobatidis. Ms recientemente, se
detect en esta misma regin en ejemplares de la especie extica Lithobates catesbeianus
(rana toro). Como un primer paso para evaluar el riesgo de las comunidades de anfibios
frente al hongo B. dendrobatidis en los Andes venezolanos, llevamos a cabo un muestreo
a travs de diversos hbitats, a lo largo de un gradiente altitudinal de 2.520 m.
Diagnosticamos 1143 ranas de 17 especies usando ensayos de PCR a tiempo real y PCR
convencional. La infeccin fue detectada, desde los 80 m hasta los 2.600 m de altitud, en
la rana toro y en 10 especies nativas -nueve de ellas constituyen nuevos registros de
hospederos- provenientes de lagunas, de quebradas y de ambientes terrestres. Lithobates
catesbeianus fue el reservorio ms importante con 85% de los individuos infectados y un
promedio de 2.768 zoosporas/1-3mg de tejido analizado. Entre las especies nativas,
Dendropsophus meridensis, una especie En Peligro simptrica con L. catesbeianus,
tuvo la mayor prevalencia de infeccin y la ms elevada carga promedio de zoosporas
(42%; 4.965 zoosporas/1-3mg de tejido analizado). Tanto la prevalencia como la
intensidad de infeccin variaron con los estadios de desarrollo de D. meridensis, lo que
sugiere que la exposicin o vulnerabilidad a Bd puede ser mayor para ciertas fases del
ciclo de vida de esta rana. No detectamos signos clnicos de la enfermedad en ninguno de
los hospederos. Batrachochytrium dentrobatidis parece encontrarse en niveles endmicos
en las comunidades de anfibios del estado Mrida, sin embargo especies como D.
meridensis pudieran estar en riesgo ante cambios ambientales que exacerben la
vulnerabilidad de las especies.
 41

INTRODUCCIN

Cada vez ms la evidencia sugiere que varios factores pudieran estar involucrados
en la reciente emergencia de la quitridiomicosis (Pounds et al. 2006; Lips et al. 2006;
Alford et al. 2007; Di Rosa et al. 2007; Pounds et al. 2007), una enfermedad fngica
vinculada a las disminuciones y extinciones de diversos anfibios en el mundo (Berger et
al. 1998; Berger et al. 1999; Longcore et al. 1999; Daszak et al. 1999; Lips et al. 2006).
Mientras que algunos estudios aseveran que la dispersin reciente del agente causal de
esta enfermedad, Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), ha causado mortandad en
poblaciones de ranas sin exposicin previa al patgeno (Berger et al. 1999; Daszak et al.
1999; Lips et al. 2006; Skerratt et al. 2007), otros indican que algunos cambios
climticos ocurridos en dcadas recientes han incrementado la vulnerabilidad de los
anfibios a esta enfermedad, especialmente en tierras altas (Pounds et al. 2006). Tambin
se ha sugerido que las aglomeraciones que se producen durante episodios de sequa y el
estrs fisiolgico debido a condiciones climticas adversas o coinfecciones, pudieran
promover el desarrollo de la quitridiomicosis (Pounds et al. 1999; Lampo et al. 2006b;
Alford et al. 2007; Di Rosa et al. 2007; Pounds et al. 2007). Sin embargo, cmo
contribuye cada uno de stos en desencadenar brotes de quitridiomicosis en varias
regiones del mundo es an materia de debate (Alford et al. 2007; Di Rosa et al. 2007;
Pounds et al. 2007; Skerratt et al. 2007; Lips et al. 2008; Pounds y Coloma 2008; Lampo
et al. 2011a).

A pesar de su impacto negativo sobre algunas especies de ranas, Bd ha sido

detectado en otras especies que no estn declinando (Beard y O'Neill 2005; Ouellet et al.
2005; Woodhams y Alford 2005; Kriger y Hero 2006; Lips et al. 2006; Puschendorf et
al. 2006). La capacidad de algunas de estas ranas de desarrollar infecciones subclnicas y
mantener altas prevalencia de infeccin (e.g., Lithobates catesbeianus) sugiere que son
menos vulnerables a este hongo (Daszak et al. 2004; Hanselmann et al. 2004). Los
patgenos tambin pueden infectar poblaciones vulnerables sin efectos notables, si las
tasas de trasmisin son lo suficientemente bajas para mantener la mortalidad por debajo
de la tasa de reclutamiento. Por otro lado, Bd actualmente persiste en especies de rana
 42

que presumiblemente sufrieron disminuciones poblacionales en el pasado a causa de este

hongo, pero que ahora estn recuperndose (e.g., Taudactylus eungellensis en Australia y
Atelopus cruciger en Venezuela) (Retallick et al. 2004; Rodrguez-Contreras et al. 2008;
Lampo et al. 2012). Son diversas las posibles explicaciones: (1) la virulencia del
patgeno ha decrecido desde el brote epidmico inicial, (2) algunos estresores
ambientales que comprometieron la vulnerabilidad de las ranas en el pasado ya no estn
presentes y (3) la tasa de trasmisin en las poblaciones en recuperacin esta an por
debajo del umbral epidmico. Entender los factores que inciden sobre la prevalencia y la
intensidad de infeccin de Bd y qu hace a algunos hospederos tolerantes y a otros
vulnerables, es clave para predecir el impacto que este patgeno puede tener sobre las
comunidades de anfibios.

En Centro y Sur Amrica, las disminuciones de al menos 56 especies de anfibios

han sido asociadas con la presencia de Bd (Berger et al. 1998; Lips 1999; Ron y Merino-
Viteri 2000; Puschendorf 2003; Bonaccorso et al. 2003; Lips et al. 2003; Burrowes et al.
2004; Lips et al. 2004; La Marca et al. 2005; Seimon et al. 2005; Lips et al. 2006;
Carnaval et al. 2006; Lampo et al. 2006b); cuatro de stas son especies endmicas de
Venezuela En Peligro Crtico segn la IUCN y el Libro Rojo de la Fauna Venezolana
(Rodrguez y Rojas-Surez 2008). Aunque slo una pequea proporcin de los
ejemplares de museo disponibles en el pas han sido diagnosticados para la presencia de
Bd (431 ejemplares de museo recolectados entre 1920 y 2002 (Bonaccorso et al. 2003;
Lampo y Searis 2006; Lampo et al. 2006a), la primera evidencia del patgeno en el pas
data de 1986, de un ejemplar de A. cruciger de la Cordillera de la Costa (Bonaccorso et
al. 2003). Siete ejemplares de otras tres especies de Atelopus colectadas durante 1988
tambin fueron encontradas infectadas en la Cordillera de Mrida (Lampo et al. 2006b),
una regin que tiene 11 especies En Peligro Crtico (IUCN, Conservation International y
NatureServe, 2006. Global Amphibian Assessment. www.globalamphibians.org
(revisado el 08 de agosto 2007)). Todos estos ejemplares pertenecieron a los ltimos
registros disponibles en sus colecciones de origen, antes de que estas especies
desaparecieran por casi dos dcadas.
 43

Recientemente, varios autores propusieron un modelo de onda expansiva para

explicar el patrn espacio-temporal de cmo han ocurrido las disminuciones de
poblaciones de anfibios en Centro y Suramrica. El modelo sugiere que, entre 1977 y
1988, la onda epidmica se propag a travs de la Cordillera de la Costa y la Cordillera
de Mrida en Venezuela (Lips et al. 2008). Sin embargo, la aparicin de casos positivos
slo en cuatro localidades temporalmente concentradas (1986-1988) pero espacialmente
separadas (70-445km), sugiere que Bd pudo haber estado presente endmicamente a
bajos niveles de deteccin, y condiciones climticas particulares desencadenaron
epidemias sincronizadas durante finales de la dcada de 1980 (Lampo et al. 2006b).
Aunque no existen registros de eventos de mortalidad masiva en Venezuela, todas las
especies de Atelopus infectadas desaparecieron por al menos una dcada (La Marca y
Ltters 1997; Manzanilla y La Marca 2004; Lampo et al. 2006a; Rodrguez-Contreras et
al. 2008). En los Andes venezolanos, Bd fue detectado tambin en un ejemplar de
Leptodacylus sp. y en uno de Mannophryne cordilleriana colectado en 1996 y 2002,
respectivamente (Lampo et al. 2006a), al igual que en poblaciones de L. catesbeianus
(rana toro americana, previamente Rana catesbeiana), una especie extica recientemente
introducida en el pas (Barrio-Amors 2001) que porta altas cargas del patgeno sin
mostrar sntomas clnicos de la enfermedad (Hanselmann et al. 2004).

Aunque la mayora de las especies En Peligro Crtico de la Cordillera de

Mrida no han sido observadas durante las dos ltimas dcadas, el hallazgo reciente de
una de ellas sugiere la posibilidad de que algunas poblaciones se estn recuperando
(Barrio-Amors 2004a). Sin embargo, Bd podra continuar amenazando a las poblaciones
de anfibios andinas si los escenarios climticos que promovieron las epidemias en el
pasado se repiten (Pounds et al. 2006). El riesgo histrico y potencial de la
quitridiomicosis para los anfibios hospederos, especialmente en la regin andina, y el
incipiente estado del conocimiento sobre la epidemiologa de Bd refuerzan la necesidad
de supervisar la infeccin en poblaciones hospederas silvestres para dar seguimiento al
impacto de esta enfermedad en reas potencialmente vulnerables (Daszak et al. 2007).
Como un primer paso hacia la identificacin de las prioridades de conservacin y la
evaluarcin del riesgo epidemiolgico que representa la quitridiomicosis para las anfibios
 44

andinos, nos planteamos responder 1) Qu especies estn infectadas?, 2) Cun amplia

es la distribucin espacial del patgeno? y 3) Cmo vara la prevalencia e intensidad de
infeccin entre especies, estados de desarrollo, hbitats y a lo largo del gradiente
altitudinal?

MATERIALES Y MTODOS

rea de estudio.

El estudio fue realizado en la Cordillera de Mrida (Estado Mrida, Venezuela)

entre los 71,50-71,84 norte y los 8,30-8,92 oeste, en un intervalo altitudinal que
abarca desde los 80 m hasta los 2.600 m (Figura 1). Esta zona alberga varios tipos de
vegetacin entre los que predominan el bosque nublado, el bosque montano semideciduo,
y el bosque hmedo submontano (Ataroff y Sarmiento 2004), aunque muchos han sido
reducidos o degradados debido a las actividades agropecuarias, principalmente, la
ganadera de altura. Para apoyar a esta ganadera, se han cimentado numerosas lagunas
artificiales entre los 1.800 m y 2.600 m que sirven de abrevaderos para el ganado. Estas
lagunas han modificado la hidrologa original del rea y hoy constituyen uno de los
hbitats preferidos de la rana toro.

Muestreos en campo.

Realizamos muestreos en 30 lagunas, 19 quebradas y ros, diez lugares a orilla de

carretera y un lote de bosque nublado entre octubre de 2003 y diciembre de 2006 para
maximizar el nmero de especies recolectadas. En total se hicieron 31 salidas de campo
con una frecuencia aproximadamente mensual (excepto enero de 2004, enero, septiembre
y noviembre de 2005, y junio y noviembre de 2006). Adicionalmente, se hizo un
muestreo en un potrero anegado en agosto de 2007 para un total de 32 salidas de campo.
Aunque los muestreos abarcaron ambas estaciones -sequa y lluvia-, 87% de los
individuos fueron recolectados durante la poca de lluvia (abril-noviembre). En total, se
 45

capturaron 505 ranas adultas de 16 especies. Adems, se recolectaron 85 larvas, 38

metamorfos 4 , 13 postmetamorfos 5 y 6 juveniles de D. meridensis (Anexo 8.a) y 119
larvas, 38 metamorfos, 32 postmetamorfos y 47 juveniles de L. catesbeianus (Anexo 8.b)
para comparar la prevalencia de la infeccin y la concentracin de zoosporas entre
estados de desarrollo. Tambin, se recolect una larva de la rana Pseudis paradoxa la
cual represent el nico ejemplar de esta especie. A cada individuo se le tom una
muestra de tejido, para posteriormente diagnosticar la infeccin en el laboratorio. A los
individuos metamorfos, postmetamorfos, juveniles y adultos se les extrajo un pequeo
trozo del dedo V del pie. La mayora de los ejemplares de las especies nativas fueron
liberados inmediatamente y unos pocos fueron sacrificados para anlisis posteriores.
Todos los ejemplares de la rana toro fueron sacrificados debido a que esta especie est
sujeta a un programa de control del Ministerio del Poder Popular para el Ambiente
(Ministerio del Poder Popular para el Ambiente 2002; Sistema Venezolano de
Informacin sobre Diversidad Biolgica 2012). Todas las larvas se sacrificaron y
posteriormente se removieron los discos orales para el diagnostico de Bd. Estimamos que
el nmero de larvas removidas debe tener un impacto mnimo en las poblaciones de las
dos especies de ranas, ya que la denso-dependencia en la supervivencia de las larvas,
caracterstica de muchas especie de anfibios, tiende a compensar la remocin de estadios
pre-metamrficos (Lampo y De Leo 1998). Para la toma de muestras se emplearon tijeras
y pinzas de diseccin desinfectadas y se colocaron las muestras en viales esterilizados
con 1,5 ml de etanol al 70%. Todos los procedimientos para la recoleccin y la toma de
muestra se hicieron de acuerdo a protocolos de bioseguridad que tienen como objeto
minimizar la infeccin cruzada entre individuos y entre localidades (Lips et al. 1999;
Aguirre y Lampo 2006). Excepto por una especie de Leptodactylus que se encuentra en
descripcin (E. La Marca, comunicacin personal), todos los ejemplares recolectados
fueron identificados hasta el nivel taxonmico de especie.

4
Metamorfo: estado de desarrollo, posterior al de larva, donde ocurren los mayores cambios del proceso de
metamorfosis de los anuros. Entre los principales cambios estn la aparicin de los miembros anteriores, la formacin
de la boca y la reabsorcin de la cola (Duellman y Trueb 1994). Este estado comprende los estados 41-46 descritos
por Gosner (1960).
5
Postmetamorfo: este trmino ha sido ampliamente empleado para referirse a los individuos que acaban de concluir el
proceso de metamorfosis; aunque, no es un estado descrito por Gosner (Gosner 1960). En esta fase los ejemplares de
anuros han reabsorvido casi totalmente su cola (Daz de Pascual y Chacn-Ortiz 2002).
 46

Diagnsticos de laboratorio.

Se tom 1-3 mg de tejido de cada individuo para extraer el ADN de Bd mediante

ruptura mecnica de las paredes celulares en un bead Beater y el uso del detergente
PrepMan Ultra (Boyle et al. 2004). Para diagnosticar la presencia del hongo en las
muestras de tejido empleamos sondas de ADN ribosomal de las regiones ITS1 y 5.8S
descritas en Boyle et al (2004). La amplificacin se llev a cabo mediante ensayos de
Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) a tiempo real usando un termociclador
Opticon JM Research. Cada ensayo de PCR incluy ocho controles positivos y cuatro
controles negativos. Los controles positivos consistieron en dos rplicas de cuatro
estndares a concentraciones de 100, 10, 1 y 0,1 zoosporas equivalentes a ADN. Los
estndares se prepararon a partir de una solucin madre con concentracin conocida de
Bd (2x105 zoosporas en 1 ml) suministrados por el Australian Animal Health Laboratory-
AAHL, CSIRO (Australia). Se construyeron curvas de calibracin que permitieron
estimar la cantidad de zoosporas contenidas en cada muestra a partir de estos estndares.
Se seleccionaron aquellas curvas que mostraron un R2 > 0,94. A los fines de verificar las
concentraciones de los estndares preparados, estimamos el valor promedio para los
ciclos umbrales de reaccin (Ct) de los cuatro estndares internos (0,1; 1; 10; 100) los
cuales fueron similares a los reportados por AAHL (Tabla II) (Hyatt et al. 2007). Los
cuatro controles negativos consistieron en una mezcla de los reactivos sin muestra de
tejido para la deteccin de contaminacin con ADN. Cada muestra de tejido fue corrida
por triplicado y consideramos que fue positiva si las tres rplicas tuvieron un valor de
zoosporas equivalente a ADN mayor de 0,01. La carga de zoospora para cada muestra
fue estimada a partir del nmero promedio de zoosporas detectada en las tres rplicas
multiplicado por un factor igual a las diluciones realizadas entre la extraccin y la
muestra final (x80). Alternativamente, se utilizaron ensayos de PCR convencional
siguiendo el protocolo de Annis et al. (2004) para diagnosticar 259 ejemplares de rana
toro.
 47

Tabla II. Repetibilidad y reproducibilidad de ensayos de PCR a tiempo real realizados

para diagnosticar Batrachochytrium dendrobatidis en anfibios recolectado entre 2003-2007 en la
regin de Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
Estadstica descriptiva de los ciclos de Estndares internos (nmero de zoosporas)
temperatura (Ct) 0,1 1 10 100
N de casos (ensayos de PCR) 125 134 133 136
Media 37,2986 34,8457 31,8549 28,5353
Lmite inferior Intervalo de Confianza 95% 36,8827 35,1924 31,5276 28,1762
Lmite superior Intervalo de Confianza 95% 37,7148 34,4992 32,1825 28,8950
Desviacin Estndar 2,3503 2,0285 1,9087 2,1197
La repetibilidad y la reproducibilidad son expresados en trminos de la desviacin estndar.

Anlisis de datos.

Con base en los diagnsticos obtenidos, se calcul la prevalencia de la infeccin,

para aquellas especies en las que fue posible recolectar al menos 20 ejemplares,
dividiendo el nmero de individuos infectados por el nmero total de individuos
diagnosticados. Este tamao de muestra garantiza un error menor a 14% en el estimado
de la prevalencia (DiGiacomo y Koepsell 1986) (Tabla III). El tamao de muestra de
cada especie estuvo limitado por la dificultad de detectarla y/o capturarla. Los
diagnsticos obtenidos con los ensayos de PCR a tiempo y real y PCR convencional
fueron analizados de manera separada debido a las diferencias en sensibilidad de estos
ensayos (Kriger et al. 2006).

Las variaciones en la prevalencia de la infeccin entre especies y entre estadios

fueron comparadas por medio de pruebas de Chi-cuadrado, empleando tablas de
contingencia de dos vas. Las muestras empleadas fueron lo suficientemente grandes para
garantizar que no ms de 20% de las frecuencias esperadas fueron menores a cinco
(Siegel y Castellan 1995; Agresti 1996; Milton 2001), por lo que el nivel de significacin
de la prueba se bas en la distribucin asinttica del estadstico Chi-cuadrado. Debido a
que encontramos diferencias en la prevalencia entre los estadios de desarrollo de D.
meridensis y a que se ha reportado diferencias en susceptibilidad segn el estado para
otras especies (Lamirande y Nichols 2002; Marantelli et al. 2004), seleccionamos slo
 48

los ejemplares adultos para comparar la prevalencia entre especies. Determinamos la

distribucin de la carga de zoosporas entre los individuos infectados de D. meridensis y
de L. catesbeianus, las especies con mayor prevalencia de la infeccin (y por lo tanto un
tamao de muestra mayor para los anlisis de las cargas de zoosporas). Tal distribucin
de densidad fue ajustada a una funcin binomial negativa a travs de mtodos de mxima
verosimilitud (Wessa 2008). Evaluamos, a travs de un ANOVA factorial, si la carga de
zoosporas vari entre las dos especie, entre los diferente estados o con la interaccin
entre variables (Sokal y Rohlf 1995), empleando para ello el programa STATISTICA
(StatSoft 1997). Para el resto de las especies infectadas, estimamos nicamente la carga
de zoospora promedio y posteriormente analizamos, a travs de una regresin lineal, la
relacin entre la carga promedio de zoosporas por especie y la altitud media en la que fue
recolectada una especie (Sokal y Rohlf 1995). Estos anlisis se hicieron con el programa
SYSTAT versin 10 (SPSS Inc. 2000). Para todos los anlisis de la intensidad de
infeccin se transform previamente el nmero de zoosporas a una escala logartmica.

RESULTADOS

Batrachochytrium dendrobatidis fue encontrado en 617 ranas de un total de 1143

muestras diagnosticadas; 189 de stas pertenecen a 10 especies nativas mientras que las
restantes 428 son ejemplares de rana toro (Tabla III). Nueve de las 10 especies nativas-
D. meridensis, Gastrotheca nicefori, Hypsiboas crepitans, Hyloscirtus jahni, Hyloscirtus
platydactylus, Mannophryne collaris, Engystomops pustulosus, P. paradoxa y Scarthyla
vigilans- son nuevos registros de hospederos de Bd. Entre stas, tres son endmicas de
los Andes Venezolanos y tres estn actualmente amenazadas de extincin (Tabla 2)
(UICN 2012). De manera similar a otras poblaciones de anfibios que coexisten con Bd
(Retallick et al. 2004; Kriger y Hero 2006; Lampo et al. 2012), no observamos
evidencias de mortandad o morbilidad en ninguna de las poblaciones muestreadas.

De los once hospederos identificados, slo calculamos la prevalencia de la

infeccin para los adultos de cinco de ellos (n 20). Se detectaron diferencias
 49

significativas en la prevalencia de infeccin entre estas cinco especies ( 2= 90,527; gl =

4; p < 0,001). Esto sugiere que la exposicin o vulnerabilidad de los hospederos a la
infeccin por Bd vari significativamente entre especies. As, la rana toro tuvo la ms
alta prevalencia (85%) seguida por su especie simptrica D. meridensis (42%); mientras
que Rhinella marina, H. crepitans y S. vigilans, mostraron una prevalencia menor al 20%
(Tabla II). La prevalencia de infeccin de rana toro estimada a partir de PCR
convencional fue ms baja (61,78%) que la obtenida de los ensayos de PCR a tiempo real
(85%). Estas diferencias pueden ser atribuidas a la mayor sensibilidad de la PCR a
tiempo real comparada con la PCR convencional (Kriger et al. 2006); 11% de los
ejemplares positivos detectados a travs de PCR-rt estuvieron por debajo del umbral de
deteccin de los ensayos de PCR convencional (1 zoospora equivalente a ADN).
 50

Tabla III. Prevalencia y carga de zoosporas de Batrachochytrium dendrobatidis en

especie de ranas de la Cordillera de Mrida, estado Mrida, Venezuela.

Promedio de
No de Prevalencia (%) zoosporas Altitud (m) indv.
Especie N positivos (IC 95%) (IC 95%) positivos (+) Hbitat reproductivo
Dendropsophus meridensis* 42 4.965
(EN) 414 173 (37 47) (2.185-7745) 2.000-2.505 Laguna permanente
Laguna permanente y
Dendropsophus microcephalus 20 0 *** *** *** efmera
Laguna permanente y
Dendropsophus minutus 8 0 *** *** *** efmera
12
Engystomops pustulosus 3 2 *** (11,54-12,79) 98 Laguna efmera

1.701 Terrestre (rana

Gastrotheca nicefori 2 2 *** (0-23.269) 1.656-2.327 marsupial)
Hyalinobatrachium duranti* 3 0 *** Quebrada permanente
2.658
Hyloscirtus jahni* 2 2 *** (0-24.863) 2.390 Quebrada permanente
Hyloscirtus platydactylus (VU) 1 1 *** 1.151 2.000 Quebrada permanente
3 Laguna permanente y
Hypsiboas crepitans 39 1 (0 9) 54 971 efmera
Laguna permanente y
Leptodactylus sp.* 13 0 *** *** *** efmera
85 2.768
Lithobates catesbeianus 315 268 (81 89) (1.834-3.700) 1.837-2.601 Laguna permanente
Mannophryne collaris* (EN) 3 1 *** 5 978 Quebrada permanente
Pristimantis vanadise* 1 0 *** *** *** Terrestre
Pseudis paradoxa 1 1 *** 26 127 Laguna permanente
10 12 Laguna permanente y
Rhinella marina 20 2 ( 0 23) (0-45) 861-1.837 efmera
11 46
Scarthyla vigilans 35 4 (0 22) (0-126) 810-1.837 Laguna permanente
Scinax flavidus 4 0 *** *** *** Laguna permanente
* Especies endmicas de los Andes Venezolanos. Las letras maysculas en parntesis indican las categoras de riesgo de extincin
segn la UICN: EN, En Peligro; VU, Vulnerable (UICN 2001). *** Valores no calculados debido a que no se encontraron individuos infectados
en las especies sealadas. (+) Altitud a la que fueron recolectados los individuos infectados; se indica un intervalo para el caso de las especies
que tuvieron ms de un diagnostico positivo y un valor para aquellas con un slo ejemplar infectado. Los diagnsticos de B. dendrobatidis se
hicieron empleando PCR a tiempo real. El promedio de zoosporas est expresado como n de zoosporas equivalente a ADN/ 1-3 mg de tejido. IC
95%: intervalo de confianza del 95%.

La prevalencia de la infeccin tambin vari dentro de una misma especie a lo

largo de su desarrollo. Esto sugiere que la exposicin o vulnerabilidad de los hospederos
a la infeccin por Bd tambin puede variar entre estados. Se encontraron diferencias
significativas entre la prevalencia de los estadios en D. meridensis (2 = 12,840; gl = 4; p
= 0,012) y en L. catesbeianus (2 = 10,482; gl = 4; p = 0,033) (Figura 7). En L.
 51

catesbeianus la prevalencia tiende a ser mayor en los metamorfos, mientras que en D.

meridensis la prevalencia es mayor tanto en los metamorfos como en los adultos.

D. meridensis
110
38 L. catesbeianus
100 32
90 119 47
79
80
Prevalencia (%)

70
60
38 272
50
40 13 6
30 85
20
10
0
larvas metamorfos posmetamorfos juveniles adultos

Estados (edad)

Figura 7. Prevalencia de Batrachochytrium dendrobatidis en diferentes estados de desarrollo de

Dendropsophus meridensis y Lithobates catesbeianus. Valores sobre las barras muestran el tamao
de la muestra.

Las distribuciones de zoosporas en ejemplares de L. catesbeianus y D. meridensis

mostraron distribuciones binomiales negativas tpicas de macroparsitos (Hudson y
Dobson 1995; Shaw et al. 1998), con una concentracin de zoosporas muy agregada en
unos pocos individuos (Figura 8). La mayora de las ranas mostraron menos de 103
zoosporas por muestra de tejido y slo en unas pocas la concentracin de zoosporas
excedi el valor de 104. El parmetro binomial negativo (k) indic que la infeccin tiende
a estar ms agregada en pocos individuos en D. meridensis (k = 0,8818; SD = 0,0706)
que en L. catesbeianus (k = 2,0889; SD = 0,0816). Sin embargo, el anlisis de la varianza
mostr que el nmero promedio de zoosporas en individuos infectados no fue
significativamente diferente entre ambas especies (D. meridensis: 4.965 equivalentes a
zoosporas/1-3 mg de tejido; L. catesbeianus: 2.768 equivalentes a zoosporas/1-3 mg de
tejido) (F = 0,2308; gl = 1; p = 0,6312) (Tabla IV). La mayor variabilidad en el nmero
 52

de zoosporas se puede atribuir al estado de los ejemplares y las diferencias entre estados
fueron dependientes de la especie (Tabla IV). En D. meridensis, los adultos, los juveniles
y las larvas tuvieron intensidades de infeccin menores que los metamorfos y los
postmetamorfos (Figura 9, Anexo 7a y 8). En L. catesbeianus, por el contrario, no hubo
diferencias entre las medias de los estadios (Figura 9, Anexo 7 y 8). Cuando se
compararon los promedios de zoosporas de los estadios entre especies; en los adultos,
juveniles y larvas de D. meridensis fueron menores que en los estados equivalentes de L.
catesbeianus (Figura 9, Anexo 9). Por el contrario, los metamorfos y postmetamorfos de
D. meridensis mostraron mayores cargas que los mismos estados de L. catesbeianus
(Figura 9; Anexo 9).

D. meridensis
L. catesbeianus

Figura 8. Logaritmo del nmero de zoosporas de Batrachochytrium dendrobatidis en individuos

de Dendropsophus meridensis (barras verdes) y Lithobates catesbeianus (barras azules).
 53

Tabla IV. Anlisis de varianza del nmero de zoosporas de Batrachochytrium dendrobatidis en

muestras de tejido en funcin de la especie y del estado de los individuos infectados.
Origen de las Suma de Grados de Promedio de los
variaciones cuadrados libertad cuadrados F Probabilidad
Especie 0,2322 1 0,2322 0,2308 0,6312
Estadios 90,0408 4 22,5102 22,3678 0,0000
Especie y
estado 33,5170 4 8,3793 8,3263 0,0000
Error 433,7431 431 1,0064
Las especies consideradas en el anlisis son Dendropsophus meridensis y Lithobates catesbeianus.
Los estados incluidos son: larva, metamorfo, postmetamorfo, juvenil y adultos.

5
Log N zoosporas (1-3 mg de tejido)

-1
Larva Metamorfo Postmetamorfo Juvenil Adulto

Estado de desarrollo

Figura 9. Nmero promedio de zoosporas de los diferentes estados de desarrollo de

Dendropsophus meridensis (verde) y Lithobates catesbeianus (azul). Puntos denotan la media para
cada estado y las lneas verticales el intervalo de confianza del 95%.

Batrachochytrium dendrobatidis mostr una distribucin geogrfica amplia. Se

encontraron especies infectadas en un rea aproximada de 1.000 km2 ubicada entre los 90
m y 2.600 m de altitud (Figura 10). No obstante, la mayora de los individuos fueron
recolectados sobre los 1.000m (Tabla III). Adems, detectamos una relacin positiva
entre la carga promedio de zoosporas por especie y la altitud (R2 = 0,6227; F = 14,8595;
p = 0,0038) (Figura 11).
 54

Figura 10. Presencia de Batrachochytrium dendrobatidis en los Andes Venezolanos. Los crculos indican los sitios de muestreo para los cuales se
diagnostic la infeccin por Bd en muestras de tejido de anfibio. En la Figura 12 se puede apreciar el total de lugares para los cuales se recabaron muestras, sin
embargo, slo se diagnosticaron las provenientes de las localiades sealadas en esta figura por circulos rojos y blancos.
 55

4.00

3.50

Log zoosporas (1-3 mg tejido)

3.00
2.50

2.00

1.50

1.00
0.50

0.00
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
Altitud (m)
Log promedio zoosporas (1-3 mg de tejido)
Regresin lineal (pronstico del Log zoosporas)

Figura 11. Relacin entre la carga promedio de zoosporas y el punto medio de la distribucin
altitudinal de los individuos infectados con Batrachochytrium dendrobatidis de once especies de
ranas de la Cordillera de Mrida, Venezuela. E. pustulosus P. paradoxa M. collaris H.
crepitans R. marina S. vigilans G. nicefori H. platydacylus L. catesbeianus D. meridensis H.
jahni. El nmero de zoosporas esta expresado en escala logartmica.

DISCUSIN

Actualmente Bd parece estar ampliamente distribuido en la Cordillera de Mrida

a niveles endmicos, sin causar disminuciones notorias en las poblaciones. ste fue
detectado en 11 de las 17 especies examinadas, pertenecientes a seis familias
(Aromobatidae, Hemiphractidae, Bufonidae, Hylidae, Leiuperidae y Ranidae), y se
encontraron ranas infectadas todos los meses en lagunas (efmeras y permanentes),
quebradas y hbitats terrestres localizados entre los 98 m y 2.600 m de altitud. A pesar de
la extensa distribucin de esta infeccin, no observamos evidencia de mortalidad durante
los muestreos, ni declinaciones recientes comparables con las registradas durante la
dcada de 1980, aunque la evidencia histrica sugiere que Bd ha persistido en la
 56

Cordillera de Mrida por al menos 24 aos (Hanselmann et al. 2004; Lampo et al. 2006a;
Lampo et al. 2006b).

La distribucin heterognea de Bd entre las especies de la Cordillera de Mrida,

sugiere que existen diferencias interespecficas en los niveles de exposicin de los
hospederos a este patgeno o en las respuestas de los hospederos a la infeccin. La
prevalencia ms alta de la infeccin fue observada en L. catesbeianus, un reservorio
probable de Bd dada su capacidad de mantener infecciones subclnicas (Daszak et al.
2004). Aunque la distribucin geogrfica de esta especie introducida aun se encuentra
restringida a unos 45 km2 (captulo IV), encontramos evidencia de la infeccin en todas
las lagunas donde tomamos muestras de rana toro. Se ha reportado que los anfibios que
estn asociados principalmente a cuerpos de agua permanentes pueden experimentar un
riesgo ms alto de infeccin que aquellos que habitan en cuerpos de agua efmeros (Lips
1999; Stuart et al. 2004; Kriger y Hero 2007). A diferencia del resto de las especies
diagnosticadas, los hbitos principalmente acuticos de L. catesbeianus pueden
contribuir a que esta especie tenga la mayor exposicin a Bd.

Entre las especies nativas, D. meridensis, la nica especie que comparte hbitat
con L. catesbeianus, mostr la mayor prevalencia de infeccin. Es posible que este
reservorio constituya una fuente importante desde donde la transmisin de zoosporas a
D. meridensis es ms probable. La transmisin entre especies puede jugar un papel
importante en la dinmica de patgenos con hospederos mltiples (Thorne y Williams
1988; McCallum y Dobson 1995). Por ejemplo, la presencia de los perros de pradera
increment la incidencia del virus de moquillo canino en los hurones de patas negras
(McCallum y Dobson 1995). La exposicin a Bd tambin puede ser alta para D.
meridensis por habitar en lagunas; aunque en menor grado que L. catesbeianus. Esta
ltima pasa la mayor parte de su tiempo asociada al cuerpo de agua (Pearl et al. 2004;
Govindarajulu et al. 2006), mientras que D. meridensis, habita dentro de los bosques y se
agrega en las lagunas para su reproduccin slo en la poca de lluvia (La Marca 2004).
En poblaciones de R. areolatus infectadas con Bd, se encontr que la mayor prevalencia,
 57

carga de zoosporas y eventos de mortalidad ocurrieron durante la primavera cuando las

ranas se agregan en las lagunas para reproducirse (Kinney et al. 2011).

Aunque la diferencia entre la prevalencia de D. meridensis y L. catesbeianus

puede estar asociada con el tiempo de exposicin a Bd, la intensidad de infeccin de estas
especies parece ser independiente de ello. La similar carga de zoosporas de D. meridensis
y L. catesbeianus a pesar de que difieren en el tiempo que permanecen en las lagunas,
sugiere que existen diferencias en la vulnerabilidad de stas a Bd. Una respuesta desigual
del sistema inmune de D. meridensis y L. catesbeianus a la infeccin, podra determinar
la vulnerabilidad de estas especies. Varias especies de Ranidos, incluyendo a L.
catesbeianus, producen pptidos antimicrobianos muy potentes que inhiben el
crecimiento in vitro de Bd (Rollins-Smith et al. 2002a; Rollins-Smith y Conlon 2005).
Ademas, L. catesbeianus tambin puede combatir la infeccin a travs de la activacin
de las clulas blancas del sistema inmune innato (Davis et al. 2010). Para D. meridensis
se desconoce cuan efectivo es su sistema inmune combatiendo la infeccin por Bd, pero
se sabe que individuos infectados pueden eliminar la infeccin espontneamente aun en
condiciones de temperaturas ptimas para el crecimiento del hongo, lo que sugiere una
activacin del sistema inmunolgico (Villarroel 2011). Otras especies de hlidos
producen pptidos antimicrobianos que logran inhibir el crecimiento in vitro del hongo
(Woodhams et al. 2007), aunque estos son menos potentes que el de los rnidos (Rollins-
Smith y Conlon 2005). As, una mejor respuesta del sistema inmunolgico de L.
catesbeianus para combatir la infeccin por Bd podra explicar que haya una
acumulacin de zoosporas similar a la D. meridensis aunque la primera pase ms tiempo
dentro del agua y sujeta a continuas reinfecciones.

Los cambios en prevalencia en D. meridensis y L. catesbeianus y en la intensidad

de infeccin en D. meridensis en los estados de desarrollo indican que estas especies
pueden estar ms expuestas o ser ms vulnerables a Bd en ciertas etapas de su vida. El
patrn observado en la curva edad-intensidad de infeccin de D. meridensis se asemeja a
las descritas para los macroparsitos. Las curvas intensidad-edad frecuentemente
muestran un incremento despus de la edad a la cual el husped es por primera vez
 58

expuesto al patgeno, debido a la adquisicin de nuevos estados infectivos. Se ha

referido tres patrones generales para estas curvas y el encontrado en D. meridensis parece
corresponderse con el Tipo III; en el cual la relacin intensidad de infeccin-edad es
descrita por una curva convexa (Hudson y Dobson 1995). La declinacin de la curva
puede resultar de diferentes procesos como la mortalidad inducida por el parsito o por
cambios en la tasa de infeccin, debido a su vez, por cambios en el comportamiento,
exposicin al patgeno y un incremento a la resistencia de la infeccin. El estado larval
de los anfibios es el primero que cuenta con zonas queratinizadas para que el hongo
pueda desarrollarse, por lo tanto es el primer estadio susceptible de infectarse con el
hongo. A medida que el cuerpo se queratiniza durante la metamorfosis la infeccin puede
dispersarse a otras zonas del mismo. Esto podra explicar el incremento en el nmero de
zoosporas desde el estadio de larva a los estadios metamorfos y postmetamorfos de D.
meridensis. Este patrn de diseminacin de Bd en la piel de los anfibios ha sido descrito
para la rana Mixophyes fasciolatus (Marantelli et al. 2004). Desconocemos qu causa el
descenso observado en la curva edad-intensidad de infeccin de D. meridensis pero
podra deberse a una mayor mortalidad en estos estadios (que no fue detectada en los
muestreos) a los diferentes procesos anteriormente sealados para los macroprasitos.
Finalmente el incremento del nmero de zoosporas de juvenil a adultos, pudiera estar
representado por individuos que se infectan por primera vez en estadios
postmetamrficos.

Adems del tipo de hbitat, otra variable fsico-natural del rea de estudio que
puede influir en el tiempo de exposicin o en la vulnerabilidad de las especies es la
altitud. La mayora de las lagunas permanentes presentes en el rea de estudio se ubican a
las mayores altitudes, donde se ha propuesto que las temperaturas son ideales para el
crecimiento de Bd (Daszak et al. 1999; 2003). Aunque nuestros resultados muestran que
las especies hospederas de las mayores altitudes tienen las prevalencia y cargas de
zoosporas ms altas, no es posible separar el efecto de la altitud sobre la prevalencia del
efecto de otras variables como el riesgo de exposicin asociado al tipo de hbitat o de la
respuesta especifica a la infeccin por Bd. Por ejemplo, L. catesbeianus, una especie
capaz de mantener niveles altos de infeccin, habita en lagunas permanentes a
 59

elevaciones entre 1.800 m y 2.800 m. Por lo tanto, no es sorprendente que esta especie
tenga la prevalencia y la carga de zoosporas ms alta.

Aunque una alta exposicin a Bd puede resultar en una prevalencia elevada de la

infeccin, sta ltima slo puede ser mantenida en poblaciones estables, si la especie es
poco vulnerable al patgeno. No observamos ningn ejemplar infectado de D. meridensis
con signos clnicos de la enfermedad, tales como postura anormal, letargo o perdida del
reflejo righting (Daszak et al. 1999), a pesar de que su prevalencia de infeccin (42%)
y su carga de zoosporas fue relativamente alta (4.965 zoosporas). Esto sugiere que
miembros de esta especie podran desarrollar infecciones subclnicas y actuar como
reservorios del patgeno, tal como ocurre con Litoria wilcoxi, una rana australiana para
la cual se han reportado prevalencia entre 27% y 28% (Retallick et al. 2004; Kriger y
Hero 2006). Sin embargo, en un ensayo de laboratorio cerca de 50% de los ejemplares
infectados de D. meridensis murieron a causa de la quitridiomicosis (Villarroel 2011). Es
necesario hacer estudios de campo para monitorear la infeccin en las poblaciones de
esta rana y evaluar cmo sta afecta la supervivencia de la especie.

A pesar de la evidencia que sugiere que D. meridensis no es altamente vulnerable,

el seguimiento de su estatus epidemiolgico debe seguir siendo prioritario. En la medida
que el deterioro ambiental y los cambios climticos pudieran exacerbar la infeccin y
promover el desarrollo de la enfermedad, la vulnerabilidad de las especies podra ir
cambiando. De aumentar su vulnerabilidad ante la infeccin con Bd y mantenerse una
prevalencia de cerca de 42%, cerca de la mitad de la poblacin de D. meridensis en la
regin de La Carbonera podra estar en riesgo de desarrollar quitridiomicosis.
Dendropsophus meridensis est catalogada como En Peligro por la UICN (La Marca
2006) debido a su limitada distribucin geogrfica (< 5.000km2) y a la continua
fragmentacin de su hbitat. La combinacin de todos estos factores podra incrementar
el riesgo de extincin de D. meridensis y justifica la implementacin de programas de
seguimiento epidemiolgico en las poblaciones de esta rana.
 60

Si bien la mayora de las otras especies muestreadas presentaron cargas de Bd y

prevalencia de la infeccin ms bajas comparadas con D. meridensis y L. catesbeianus,
no es posible inferir sobre la susceptibilidad que tienen las poblaciones de estas especies
a desarrollar la quitridiomicosis. Algunas de las especies podran curarse de la infeccin
por Bd espontneamente. Ensayos experimentales han demostrado que algunas especies
de rana expuestas a altas temperaturas pueden eliminar la infeccin por Bd (Woodhams
et al. 2003). De all surge la posibilidad de que los hospederos infectados puedan, a
travs de su comportamiento, incrementar su temperatura corporal y eliminar la
infeccin. Sin embargo, la evidencia emprica sobre las respuestas conductuales a la
infeccin en anfibios expuestos a Bd es escasa (Han et al. 2008). Estudios de marcaje y
recaptura tambin muestran que las ranas infectadas pueden eliminar la infeccin a travs
del tiempo, presumiblemente debido a las variaciones estacionales en la temperatura
(Kriger y Hero 2006). Tambin se ha descrito para varias especies infectadas
experimentalmente que stas pueden eliminar la infeccin por Bd a temperaturas
constantes ideales para el crecimiento del hongo, lo que sugiere una respuesta del sistema
inmunolgico a combatir la infeccin (Mrquez et al. 2010; Woodhams et al. 2011;
Villarroel 2011). Alternativamente, otras especies podran ser altamente vulnerables pero
experimentar unas tasas de transmisin tan bajas que hacen difcil la deteccin de la
mortalidad y otros impactos a escala poblacional. Las especies vulnerables son ms
probables que estn en riesgo de desarrollar la quitridiomicosis si factores extrnsecos
conducen a un incremento en las tasas de transmisin.

Evaluar el riesgo de las especies de anuros con respecto a la quitridiomicosis en

reas donde Bd se distribuye es un reto que requiere de un conocimiento detallado de las
variaciones espacio-temporal en los parmetros epidemiolgicos. En la Cordillera de
Mrida, la distribucin de Bd entre las especies de ranas es heterognea. Para caracterizar
con precisin el riesgo de la enfermedad dentro de estas comunidades de anfibios, es
necesario entender los factores, intrnsecos o extrnsecos, que contribuyen a una baja
prevalencia de la infeccin y una baja carga de zoosporas en la mayora de las especies.
Los ensayos experimentales son cruciales para identificar la especificidad en la
susceptibilidad de las especies a la infeccin por Bd y la vulnerabilidad a la
 61

quitridiomicosis. Asimismo, la identificacin de aquellos factores que potencialmente

median la exposicin de las ranas al patgeno podra contribuir de una manera
importante al diseo de estrategias de conservacin de especies hospederas distribuidas
en paisajes heterogneos.
 62

CAPTULO IV. MODELOS BASADOS EN POBLACIONES: EFECTO DE LA

DENSIDAD DEL HOSPEDERO SOBRE LA PREVALENCIA E INTENSIDAD
DE INFECCIN DE BATRACHOCHYTRIUM DENDROBATIDIS EN
DENDROPSOPHUS MERIDENSIS Y LITHOBATES CATESBEIANUS.
 63

RESUMEN

La quitridiomicosis cutnea es una de las enfermedades infecciosas en vida

silvestre de mayor impacto debido a que ha causado la disminucin de un significativo
nmero de especies de anfibios en el mundo. Sin embargo, Batrachochytrium
dendrobatidis (Bd), su agente causal, tambin puede coexistir con algunas especies sin
impactar numricamente sus poblaciones. Entre las variables que podran influir en la
dinmica de Bd y su impacto en las poblaciones de anfibios est la densidad de la
poblacin hospedera. Algunas especies de parsitos necesitan que exista una densidad
mnima de individuos susceptibles de infectarse para que puedan transmitirse dentro de la
poblacin hospedera. Por encima de este umbral la prevalencia e intensidad de la
infeccin pueden incrementar con la densidad del hospedero. En los Andes venezolanos
se ha reportado al menos 15 especies de ranas infectadas por Bd, con prevalencia e
intensidades de infeccin muy variables. Entre ellas, Dendropsophus meridensis es una
especie nativa potencialmente vulnerable a Bd que cohabita con Lithobates catesbeianus,
una especie extica reservorio del parsito. Investigamos cmo vara la prevalencia y la
intensidad de infeccin de Bd en D. meridensis y L. catesbeianus en funcin de las
densidades de cada una de estas especie. Adems exploramos si la densidad de L.
catesbeianus puede contribuir a incrementar la prevalencia y la intensidad de infeccin
en D. meridensis. Para ello realizamos 43 muestreos en 12 lagunas ubicadas en la regin
de Jaj-La Carbonera, estado Mrida. En stas estudiamos poblaciones infectadas de
ambas especies de ranas en cuerpos de agua donde una sola especie est presente y en
otros donde ambas co-ocurren. En cada muestreo registramos la presencia y la densidad
de las especies, el estadio de desarrollo de los individuos y tomamos muestras de tejido
de los ejemplares para diagnosticar y cuantificar la infeccin. En D. meridensis, la
prevalencia de infeccin increment significativamente con la densidad de ranas en los
cuerpos de agua, lo que sugiere una transmisin dependiente de la densidad. La
intensidad de la infeccin tambin contribuy a explicar parte de la variabilidad
observada en la prevalencia de D. meridensis, indicando que los individuos con cargas
parasitarias ms altas tienden a ser ms infecciosos. Detectamos una relacin inversa
entre la densidad de D. meridensis y L. catesbeianus; sin embargo, los resultados de este
 64

estudio no permitieron identificar el mecanismo por medio del cual L. catesbeianus est
causando la disminucin de D. meridensis. Tanto la exclusin competitiva como el
incremento en la tasa de trasmisin en D. meridensis a partir de la transmisin por parte
de L. catesbeianus podran generar el mismo patrn de exclusin. Recomendamos
realizar estudios ms detallados sobre el impacto que puede tener L. catesbeianus como
reservorio de Bd sobre las poblaciones de D. meridensis y continuar con los estudios de
monitoreo de la infeccin en D. meridensis.

INTRODUCCIN

La quitridiomicosis cutnea es actualmente considerada una de las enfermedades

infecciosas en vida silvestre de mayor impacto de las ltimas dcadas ya que ha
ocasionado la disminucin drstica de un importante nmero de especies de anfibios en
varias regiones del mundo (Daszak et al. 2003; Stuart et al. 2004; Mendelson III et al.
2006; Kilpatrick et al. 2010). Sin embargo, el agente causal de esta enfermedad,
Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), tambin puede coexistir con algunas especies de
anfibios sin afectar numricamente a sus poblaciones (Beard y O'Neill 2005; Ouellet et
al. 2005; Woodhams y Alford 2005; Kriger y Hero 2006; Lips et al. 2006; Puschendorf
et al. 2006; Kilpatrick et al. 2010).

Entre los factores que podran determinar el comportamiento o la dinmica de Bd

en las poblaciones hospederas est la densidad de stas. Estudios con diversos parsitos
de trasmisin directa han demostrado que la densidad del hospedero puede influir sobre
la tasa de transmisin del parsito; a medida que incrementa la densidad aumenta la
posibilidad de contactos entre individuos sanos e infectados (Barlow 1995, Daley y Gani
1999, McCallum et al. 2001, Greer et al. 2008). As, en parsitos cuya transmisin
depende de la densidad de sus hospederos, la prevalencia de la infeccin aumenta con la
densidad. Parsitos con este tipo de transmisin requieren de densidades mnimas de
 65

individuos susceptibles para poder establecerse y propagarse en la poblacin hospedera

(Kermack y McKendrick 1927; Heesterbeek y Roberts 1995). A esta densidad umbral se
le denomina tamao crtico de la comunidad (Kermack y McKendrick 1927). A medida
que la epidemia progresa y el nmero de individuos infectados aumenta, el nmero de
susceptibles disminuye hasta alcanzar el tamao crtico de la comunidad, por debajo del
cual la transmisin del patgeno disminuye y la epidemia finaliza. Despus de una
epidemia es posible que el patgeno se extinga de la poblacin de hospederos o que
persista en una fase endmica, caracterizada por una baja prevalencia de infeccin y sin
efectos notorios sobre el hospedero (Kermack y McKendrick 1927; Heesterbeek y
Roberts 1995). En otros parsitos la trasmisin depende de la frecuencia de individuos
infectados a los que es inicialmente expuesta una poblacin de hospederos sanos y no de
la densidad de hospederos susceptibles. Para estos parsitos no existe un tamao crtico
de la comunidad (Getz y Pickering 1983; McCallum et al. 2001) y las epidemias pueden
generarse en poblaciones de cualquier tamao. Bajo este escenario, una epidemia podra
progresar hasta ocasionar la extincin de la poblacin hospedera infectada (Getz y
Pickering 1983; McCallum y Dobson 1995).

An no existe claridad sobre si es la densidad de individuos sanos o la frecuencia

de hospederos infectados la que modula la transmisin de Bd. Ensayos de laboratorio con
densidades constantes de individuos susceptibles de Rana muscosa mostraron una
relacin positiva entre la prevalencia de infeccin al final del ensayo y la proporcin de
ranas infectadas a las que fueron expuestas al inicio del mismo (Rachowicz y Briggs
2007). Esta relacin sugiere una transmisin dependiente de la frecuencia de hospederos.
Sin embargo, ensayos de campo con esta misma especie encontraron una relacin entre la
densidad y la prevalencia de infeccin(Rachowicz y Briggs 2007). El incremento en la
densidad de hospederos no slo puede aumentar la tasa de contactos entre individuos
sanos e infectados sino tambin entre individuos infectados permitiendo que los
hospederos tengan mayores posibilidades de acumular cargas del parsito como resultado
de continuas reinfecciones. Briggs et al. (2010) demostraron a travs de un modelo
matemtico en el cual la transmisin del patgeno dependa de la carga parasitaria y los
individuos infectados toleraban una carga mxima de zoosporas por sobre la cual
 66

desarrollan quitridiomicosis, que con tan slo modificar la densidad de hospederos se

podra explicar cmo algunas poblaciones de R. muscosa sufran epidemias mientras que
otras convivan con Bd. El anlisis del modelo permiti determinar que existe una
densidad umbral de hospederos por encima de la cual la tasa de crecimiento de Bd en la
poblacin hospedera es positiva. Estimaciones de zoosporas en individuos moribundos
recolectados en campo durante este mismo estudio y en otras investigaciones
(Vredenburg et al. 2010; Briggs et al. 2010; Kinney et al. 2011) sugieren 104 zoosporas
como la carga mxima, supuesta en el modelo de Brigg et al. (2010). Estos estudios
tambin sugieren que si en una poblacin infectada por Bd la carga promedio de
zoosporas de los individuos es superior a 104 entonces es posible que se desencadene una
epidemia de quitridiomicosis. Es probable, entonces, que la densidad de hospederos
incida no slo en la prevalencia sino tambin sobre la intensidad de infeccin.

Aquellos patgenos que, adems de infectar especies vulnerables, son de vida

libre o se mantienen en reservorios presentan una dinmica de transmisin ms compleja.
Batrachochytrium dendrobatidis puede vivir libremente fuera del hospedero y contagiar
desde el agua a individuos susceptibles (Rachowicz y Briggs 2007). Asimismo, los
reservorios pueden actuar como una fuente de infeccin constante para los hospederos
susceptibles, incluso si los hospederos infectados se han agotado, si la transmisin
interespecfica es relativamente frecuente. Como consecuencia, es posible que una
epidemia progrese en la poblacin de la especie susceptible an cuando las densidades de
esa especie desciendan por debajo del tamao crtico de la comunidad (McCallum y
Dobson 1995). Un ejemplo de ello es la disminucin drstica que ocasion el moquillo
canino en la ltima poblacin silvestre del hurn de patas negras (Mustela nigripes) al
introducir los perros de pradera, una especie reservorio del moquillo (Thorne y Williams
1988). Varios autores concuerdan en que uno de los factores que puede contribuir al
efecto devastador de la quitridiomicosis sobre algunas poblaciones de anfibios es la
posibilidad que los renacuajos acten como reservorios (Kilpatrick et al. 2010). Adems,
se ha identificado varias especies de ranas cuyos adultos tambin podran actuar como
reservorios de Bd (Kilpatrick et al. 2010); por ejemplo, Lithobates catesbeianus (Daszak
et al. 2004; Hanselmann et al. 2004; Snchez et al. 2008), Eleutherodactylus coqui
 67

(Beard y O'Neill 2005) y Xenopus laevis (Weldon et al. 2004). Es decir, aquellas
comunidades de anfibios en donde existan especies reservorios o cuyas especies tengan
renacuajos de desarrollo muy lento podran ser particularmente proclives a que se
produzcan epidemias.

En los Andes venezolanos, Dendropsophus meridensis es una de la especies

nativas con la ms alta prevalencia de infeccin con Bd; 42% de los adultos estn
infectados, aunque el impacto sobre sus poblaciones no es evidente (captulo III). Esta
prevalencia, sugiere que Bd pudiera tener un efecto sobre la sobrevivencia de D.
meridensis la prevalencia en reservorios tiende a ser mucho mayor pero que este
efecto es compensado por el reclutamiento de adultos. Tambin se pueden obtener
prevalencias moderadas si la especie es capaz de eliminar el patgeno. Ensayos recientes
de laboratorio demostraron que la exposicin a Bd puede ser letal para D. meridensis, al
menos en condiciones ideales para el crecimiento de este patgeno (Villarroel 2011).
Durante la ltima dcada, una fraccin del rea de distribucin de D. meridensis ha sido
invadida por L. catesbeianus, una especie que persiste con casi 80% de sus individuos
infectados sin signos clnicos de enfermedad (Hanselmann et al. 2004; Snchez et al.
2008). Se desconoce si la tasa de transmisin de Bd desde este reservorio hacia las
poblaciones de D. meridensis podra jugar un papel importante en la dinmica de la
infeccin de esta especie nativa pero, de ser as, la dispersin de esta rana extica podra
comprometer a las poblaciones de D. meridensis.

Para explorar si las densidades de D. meridensis pueden explicar la variabilidad

observada en su prevalencia e intensidad de infeccin con Bd y evaluar cmo la
presencia de L. catesbeianus puede influir sobre estas variables, investigamos: 1) cmo
vara la prevalencia y la intensidad de la infeccin de Bd con las densidades de D.
meridensis y L. catesbeinaus? y 2) cmo vara la prevalencia e intensidad de la
infeccin de Bd en D. meridensis con la presencia y densidad de L. catesbeianus?
Escogimos poblaciones infectadas de ambas especies de ranas en cuerpos de agua donde
una sola especie est presente y otros en donde ambas cohabitan. De existir una
transmisin densodependiente de Bd la prevalencia e intensidad de la infeccin deberin
 68

incrementar con la densidad de los hospederos. Se supone que esta relacin sea ms
marcada en D. meridensis, porque las poblaciones naturales deben tener mayores
fluctuaciones de sus densidades en comparacin con L. catesbeianus, la cual parece
saturar la capacidad de carga de las lagunas que invade. De existir un aporte importante
de la transmisin interespecfica se espera que las poblaciones de D. meridensis que
cohabitan con L. catesbeianus tengan mayores prevalencias y cargas parasitarias que las
poblaciones sin rana toro.

MATERIALES Y MTODOS

rea de estudio.

Se ubic en el estado Mrida entre las coordenadas 71,50-71,84 norte y 8,30-

8,92 oeste, con una superficie aproximada de 2.600 km2 (Figura 12). La zona de mayor
elevacin alcanz 2.600 m de altitud en la base del Pramo El Tambor, mientras que la
zona ms baja se ubic a 80 m en los alrededores de El Viga. Se visitaron 143
localidades a lo largo de esta rea para delimitar la distribucin de D. meridensis y de L.
catesbeianus (Figura 12). Para estimar la densidad de estas especies se realizaron
muestreos en una zona de aproximadamente 20 km2 (1% del rea total de muestreo),
ubicada entre los Pramos El Tambor y Campanario entre 2.200-2.600 m de altitud
(Figura 12). La seccin a del captulo II muestra mayor detalle del rea de estudio.
 69

Figura 12. Ubicacin de los sitios de muestreo dentro del rea de estudio
 70

Distribucin de D. meridensis y L. catesbeianus.

Verificamos la presencia de L. catesbeianus y D. meridensis en la zona de

estudio, con el fin de determinar la distribucin de ambas especies y estimar el porcentaje
del rea de distribucin de D. meridensis invadida por la rana toro. En cada lugar
registramos el tipo de hbitat, las coordenadas geogrficas y la altitud. Los sitios
muestreados incluyeron reas boscosas, potreros anegados, mrgenes de carreteras, ros,
quebradas y lagunas (Figura 12). El 78% de estos sitios fueron cuerpos de agua
permanentes (28% quebradas y 50% lagunas).

Para la seleccin de las localidades de muestreo nos apoyamos en el uso de mapas

a escala 1:25.000, de imgenes de satlite Ikonos con una resolucin espacial de 1 m2 y
una resolucin espectral de cuatro bandas ortocorregidas (rojo, verde, azul e infrarrojo
cercano). Adems, se consult a los pobladores de los diferentes sectores muestreados
sobre la localizacin de cuerpos de agua y de rana toro. Las coordenadas geogrficas de
cada localidad fueron tomadas con un GPS Garmin 12, usando el Datum La Canoa
(Sudamericano Provisional del 56) y la proyeccin Universal Transversa de Mercator
(UTM).

Para determinar la distribucin de D. meridensis tambin empleamos los registros

histricos de museos nacionales y extranjeros. Los museos nacionales consultados fueron
el Museo de la Estacin Biolgica de Rancho Grande (EBRG), la Coleccin de
Vertebrados de la Universidad de Los Andes (CVULA), Coleccin de Anfibios y
Reptiles de Laboratorio de Biogeografa de la Universidad de Los Andes (ULABG), el
Museo de Historia Natural La Salle (MHNLS), el Museo del Instituto de Zoologa
Agrcola (MIZA) y el Museo de Biologa de la Universidad Central de Venezuela
(MBUCV). Para obtener las localidades de los ejemplares depositados fuera del pas,
consultamos la base de datos de HerpNet (http://www.herpnet.org) en septiembre de
2010, la cual rene informacin de 55 museos extranjeros. Verificamos la presencia de la
especie en cada una de las localidades sealadas en los registros de los museos, excepto
en La Grita porque no fue posible visitar ese sector.
 71

Todas las localidades, geogrficamente referenciadas, fueron incorporadas al

programa de sistema de informacin geogrfica ArcView versin 3.3 (ESRI 1992-2002)
para construir los mapas de distribucin (Figuras 15, 16 y 17). La superficie ocupada por
cada especie se determin a travs de la digitalizacin de un polgono convexo mnimo;
es decir, el polgono de menor superficie que contuvo a todos los lugares de presencia,
pero que ninguno de sus ngulos internos excedi los 180 grados (concepto de la
extensin de la presencia segn la UICN (2001)). Para D. meridensis, cuya distribucin
fue ms extensa, tambin se construy un mapa de distribucin a partir del polgono
delimitado por el intervalo altitudinal ocupado por ella.

Se utiliz el programa ArcView para digitalizar la informacin sobre carreteras,

ros, quebradas, lagunas, centros poblados y curvas de nivel contenidas en las siguientes
cartas 1:25.000: La Carbonera (Hoja 5941-IV-NE), San Eusebio (Hoja 5941-IV-NO),
Lagunillas (Hoja 5941-IV-SO), San Juan (Hoja 5941-IV-SE), sin nombre (Hoja 5942-III-
SO) y sin nombre (Hoja 5942-III-SE). La informacin geogrfica fue complementada y
actualizada a partir de la digitalizacin de algunos elementos de las imgenes Ikonos
anteriormente mencionadas. Adems, se utilizaron las capas digitales de altimetra y el
modelo de elevacin del terreno disponible en la Unidad de Informacin Geogrfica del
Centro de Ecologa del Instituto Venezolano de Investigaciones Cientficas en febrero de
2005.

Estimacin de densidades de D. meridensis y L. catesbeianus.

Se seleccionaron 12 lagunas ubicadas en el valle entre el pramo El Tambor y

Campanario, para evaluar el efecto de la densidad de anfibios sobre la prevalencia y la
carga de zoosporas de Bd (Figura 12 y 13, Anexo 2). Se utilizaron como criterios para la
seleccin de lagunas: 1) que las nicas especies de rana presentes fuesen D. meridensis o
L. catesbeianus 2) que tuviesen individuos infectados de D. meridensis o L.
catesbeianus, 3) que fuesen accesibles en cualquier poca del ao, y 4) que estuviesen
ubicados en un paisaje relativamente homogneo para minimizar la variabilidad de las
condiciones ambientales entre ellas. As, los cuerpos de agua muestreados se ubicaron en
 72

un rea relativamente pequea (< 20 km2) en un intervalo altitudinal que no super los
400 m (2.253 - 2.601 m). La mayora de las lagunas que cumplieron con estos tres
criterios fueron artificiales y, slo unas pocas, fueron naturales pero modificadas para
servir de abrevaderos para el ganado o como fuente de agua para riego.

Tabla V. Ubicacin y rea de muestreo de 12 lagunas de la regin Jaj-La Carbonera,

estado Mrida, Venezuela.
Permetro rea de Altitud UTM Norte UTM Oeste
Laguna 2
promedio (m) transecta (m ) (m s.n.m) (m) (m)
Antes del Sr. Beto 174 696 2349 239469 953018
Canta Rana 137 548 2601 238175 953898
El Roco 159 637 2505 239750 954477
Frente a San Onofre 322 1288 2330 236991 956519
La Esmeralda 232 926 2253 236373 956951
La Granzonera 96 382 2469 239502 954224
Los Camachos 1 126 503 2358 239079 952798
Los Camachos 2 194 777 2343 239150 952765
Mistaj 272 1087 2430 242553 952585
La Cuchilla Alta 135 541 2270 235793 957417
Sr. Beto 118 473 2474 239360 954006
Villa Juanita 396 1586 2388 240638 954161
El rea del muestreo de cada laguna se defini por multiplicar el permetro por un ancho de transecta fijado
en 4 m. Los nombres de las lagunas fueron dados tomando en cuenta el nombre de la finca o sector en las que se
ubicaron.
 73

Figura 13. Ubicacin de 12 lagunas donde se registraron las densidades de Dendropsophus meridensis y Lithobates catesbeianus durante 2006, en
la regin de Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
 74

Se hicieron cuatro salidas de campo durante 2006 (febrero, abril, agosto, octubre)
con una duracin aproximada de 17 das cada una, exceptuando la del mes de febrero que
dur slo ocho das. Durante cada salida, se hizo un muestreo en una laguna por noche
obteniendo un total de 43 muestreos (en febrero se visitaron siete de las 12 lagunas) con
un esfuerzo de muestreo de 516 horas/hombre. Estos consistieron en recorridos a lo largo
de una transecta perimetral para contabilizar los individuos de D. meridensis y L.
catesbeianus. El ancho de cada transecta fue de 4 m (2 m a cada lado de la orilla) y el
largo estuvo definido por el permetro de cada laguna (mtodo adaptado de Thoms et al.
(1997)). Los recorridos se llevaron a cabo durante la noche debido a que es ms fcil
avistar y capturar ambas especies. Dendropsophus meridensis permanece refugiada
durante el da, mientras que en la noche se encuentra activa entre la vegetacin (hbitos
nocturnos). Lithobates catesbeianus es ms activa durante el da, sin embargo, fue ms
sencillo observarla (detectando los candiles) y capturarla durante la noche por tener una
conducta menos huidiza. En cada muestreo recolectamos individuos postmetamorfos de
cada especie a los cuales se les tom una muestra de tejido, midi la longitud hocico-
cloaca (LCH) y determin el sexo (ver captulo II). Luego de la toma de muestras y del
registro de datos, los ejemplares de D. meridensis fueron liberados en los mismos sitios
donde se capturaron, mientras que los de L. catesbeianus, fueron sacrificados (antes de la
toma de la muestra) como se seal en el captulo III (pg. 50). La densidad de
individuos en cada muestreo fue determinada por el cociente entre el nmero de
individuos detectados dentro de la transecta y el rea de sta (Tabla IV).

Para cada muestreo se estim recolectar 27-30 muestras de L. catesbeianus y 33-

35 muestras de D. meridensis, para obtener un error 15% en los estimados de
prevalencia con una confianza del 95%. Estos tamaos de muestra fueron calculados a
^ ^
partir de la formula n 3.84 P(1 P) / T 2 (DiGiacomo y Koepsell 1986) donde n es el
^
tamao de la muestra, P es la proporcin de individuos infectados que se espera
encontrar en la muestra y T 2 es la precisin que se desea obtener del estimado de la
prevalencia. Para calcular n se estableci un T = 0,15 y se emplearon los valores de
prevalencia detectadas para L. catesbeianus y D. meridensis en los muestreos previos
 75

(Snchez et al. 2008). No obstante, debido a que en algunas lagunas no se consiguieron

suficientes ejemplares, ciertas muestras fueron ms pequeas que lo requerido para el
nivel de error de 15%. Incluso, en pocos muestreos hubo ausencia de alguna de las
especies, por lo que hubo muestreos para los cuales no se recolectaron muestras de tejido
para D. meridensis o L. catesbeianus.

Las muestras de tejido se obtuvieron cortando un trozo del dedo V y de

membrana interdigital de cada ejemplar. Tambin se tom un trozo de piel de la regin
inguinal de los adultos de rana toro que se sacrificaron. Para ello se emplearon tijeras y
pinzas de diseccin desinfectadas y se colocaron las muestras en viales esterilizados con
etanol al 70%. Al igual que se hizo para la toma de muestra de las otras especies de
anfibios (captulo III), se sigui un protocolo de bioseguridad para evitar la infeccin de
individuos sanos y la introduccin de B. dendrobatidis en poblaciones de anfibios donde
no estuviese presente (Aguirre y Lampo 2006).

Diagnstico de las muestras.

El diagnstico de Bd se hizo a travs de una reaccin en cadena de la polimerasa

a tiempo real (PCR-tr) siguiendo el protocolo desarrollado por Boyle et al. (2004),
descrito en la seccin de Diagnstico de laboratorio del captulo III. Para los anlisis de
este captulo se usaron los resultados de los diagnsticos de 417 ranas recolectadas
durante los muestreos del 2006 (incluidas en los anlisis del captulo III). De estas, 251
ejemplares fueron de D. meridensis (15% metamorfos, 5% posmetamorfos, 2% juveniles;
78% adultos) y 166 de L. catesbeianus (23% metamorfos, 19% postmetamorfos; 28%
juveniles; 30% adultos).

Con base en los diagnsticos obtenidos, se determin la prevalencia e intensidad

de la infeccin en lagunas donde fue posible capturar al menos diez ejemplares de D.
meridensis y de L. catesbeianus por muestreo. La prevalencia se calcul dividiendo el
nmero de individuos infectados por el nmero total de individuos diagnosticados en
cada muestra, y el intervalo de confianza para cada estimado se hizo siguiendo la formula
 76

planteada por DiGiacomo y Koepsell (1986). La carga de zoospora para cada muestra fue
estimada a partir del nmero promedio de zoosporas detectada en las tres rplicas
multiplicado por un factor igual a las diluciones realizadas entre la extraccin y la
muestra final (x80) (Rachowicz y Briggs 2007; Snchez et al. 2008; Vredenburg et al.
2010)

Anlisis de datos.

La rana toro estuvo presente en casi todos los cuerpos de agua durante todo el
estudio; slo estuvo ausente en un cuerpo de agua, y en otro desapareci durante el
estudio (Tabla VI). Los registros de presencia de D. meridensis, por el contario, fueron
cambiando; slo el 50% de las lagunas mantuvieron el mismo registro a lo largo del
estudio (Tabla VI). En vista de estos cambios en los patrones de presencia, se consider
cada visita como una muestra independiente. As, el nmero de muestras fue equivalente
al nmero total de visitas a todas las lagunas. Se emplearon tablas de contingencia de dos
vas para analizar los registros de presencia y ausencia de D. meridensis y L.
catesbeianus. Se elaboraron dos tablas de 2x2; una para determinar si la proporcin de
presencias fue similar para ambas especies (hiptesis nula: homogeneidad), y la otra,
para determinar si la presencia de una especie ocurre independientemente de la presencia
de la otra especie (hiptesis nula: independencia). Tambin se elaboraron dos tablas 4x2,
una para cada especie, para determinar si la proporcin de cuerpos de agua ocupados fue
homognea entre los meses de muestreo. Se compararon las frecuencias observadas con
las esperadas, bajo cada una de las hiptesis nulas, mediante pruebas de bondad de
ajuste. Cuando ms del 20% de las frecuencias esperadas fueron mayores a cinco y n> 40
se utilizaron pruebas Chi-cuadrado corregidas por continuidad. Si por el contrario, las
frecuencias esperadas fueron menores a cinco, se emplearon pruebas exactas para
calcular el nivel de significacin del estadstico; la de Fisher para tablas 2x2 y la
estimacin de Monte Carlo para tablas 4x2 (Siegel y Castellan 1995; Agresti 1996;
Milton 2001). Para estos anlisis se emple el programa SPSS versin 17 (IBM 2008).
 77

Se hicieron pruebas de Kolmogorov Smirnov de una muestra para probar si las

densidades, de ambas especies, se ajustan a distribuciones normales, empleando el
programa SPSS versin 17 (IBM 2008) Para cada especie se hicieron dos pruebas, en una
se consider la totalidad de los datos y en la otra se excluyeron los valores de densidad
iguales a cero. Quinn y Keough (2002) recomiendan este procedimiento cuando la
distribucin se sesga hacia la derecha por el exceso de muestras con ceros (incluso
aplicando alguna transformacin a los datos). En estos casos convergen dos procesos,
uno que condiciona a que una variable est presente o no, y otro que incide sobre el
comportamiento de la variable, una vez presente (Quinn y Keough 2002). Se ajust la
densidad de las especies y no la abundancia ya que la abundancia mxima de D.
meridensis por laguna se relacion positivamente con el permetro promedio de las
lagunas (tamao de parche) (R 2= 0,7726; F = 30,5753; p< 0,001) (Figura 14). As, el uso
de la densidad permiti corregir el efecto del tamao del cuerpo de agua sobre la
abundancia. Los anlisis de regresin lineal simple se hicieron en Excel versin 11.0
(Microsoft 2003). Debido al carcter continuo de los valores de densidad no fue posible
probar el ajuste a una distribucin Poisson.
 78

Tabla VI. Presencia de Dendropsohus meridensis y Lithobates catesbeianus durante 2006 en 12

lagunas de la regin de Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
D. meridensis L. catesbeianus
Laguna
feb abr ago oct feb abr ago oct
Antes del Sr. Beto p p p p p p p p
Canta Rana a p a a p p p p
El Roco a p a p p p p p
Frente a San Onofre ** p p p ** p a a
La Esmeralda ** p p p ** p p p
La Granzonera a p a a p p p p
Los Camachos 1 p a a a p p p p
Los Camachos 2 p p a p p p p p
Mistaj ** p p p ** a a a
La Cuchilla Alta ** p p p ** a a a
Sr. Beto a p p a p p p p
Villa Juanita ** a a a ** p p p
p: presencia; a: ausencia. ** No se realiz muestreo.
Letras negritas: lagunas donde los registros de presencias cambiaron temporalmente.

250
Abundancia (n de individuos)

200

150

100

50

0
0 50 100 150 200 250 300 350
-50
Permetro (m)

Abundancia Regresin lineal (pronstico de la abundancia)

Figura 14. Abundancia mxima de Dendropsophus meridensis en funcin del permetro

promedio de 12 lagunas muestreadas durante 2006 de la regin de Jaj-La Carbonera, estado
Mrida, Venezuela. La abundancia mxima esta definida como el mayor valor de abundancia registrado
para D. meridensis en cada una de las lagunas donde estuvo. La ecuacin de la recta ajustada fue y =
0,7818x 90,736; R2=0,7726; F = 30,5753; p < 0,001.
 79

Para evaluar si hubo un efecto de la temporalidad sobre las densidades de D.

meridensis y de L. catesbeianus se llev a cabo un anlisis de varianza para un diseo de
medidas repetidas sin replicacin (Quinn y Keough 2002), empleando para ello el
programa SPSS versin 17 (IBM 2008). Los sujetos o unidades experimentales
correspondieron a las 12 lagunas muestreadas en tres oportunidades (medidas repetidas)
y el factor a evaluar fue el tiempo con tres niveles (abril, agosto, octubre). En ambos
anlisis se excluy el muestreo del mes de febrero para poder balancear los casos del
ANOVA. Se cumpli con el supuesto de esfericidad para ambos ANOVA (D.
meridensis: MauchlysW= 0,724, df=2, p=0,198, L. catesbeianus: MauchlysW= 0,684,
df=2, p=0,150) por lo que no fue necesario realizar ajustes o correcciones de F
(empleando Epsilon de Greenhouse-Geisser o Epsilon de Huynh-Feldt). Comparamos la
densidad media de D. meridensis en ausencia de rana toro y en presencia de esta ltima,
empleando una prueba t-student de varianzas conjuntas. Adems, evaluamos qu
porcentaje de la variacin observada en la densidad de D. meridensis es explicada por la
densidad de L. catesbeianus, a travs de una regresin logartmica. Para ello usamos los
valores de densidades provenientes de muestreos donde estuvieron presentes ambas
especies (n = 18), previa transformacin de los datos a una escala logartmica. Este
anlisis fue realizado con el programa Bioestat (Ayres et al. 2000).

La relacin esperada de la densidad de hospederos con la prevalencia, de existir

transmisin densodependiente, se dedujo de modelos parsito-hospedero para
poblaciones de hospederos conformadas por susceptibles e infectados (Anderson y May
1979). Para explorar si la tasa de transmisin de Bd es densodependiente o
frecuentedependiente, determinamos la relacin lineal entre la prevalencia de infeccin
(I/N) y la densidad de ranas observada en los cuerpos de agua (N) (con los datos de los
muestreos sistemticos de 2006), y la comparamos con las relaciones esperadas en ambos
casos:

I/N = 1 a(1/ N); para transmisin densodependiente

I/N = 1 a(1/ ); para transmisin frecuentedependiente

 80

en donde a es la pendiente de la recta y depende de la tasa de mortalidad natural de las

ranas, , de la mortalidad inducida por la infeccin, y de la tasa de recuperacin, (ver
Anexo 3). es la tasa de transmisin de la infeccin.

Ambas relaciones suponen que el modelo que mejor explica la dinmica parsito-
hospedero es el Susceptible-Infectado-Susceptible (SIS) (Anderson y May 1979) y que
las densidades, en cada caso, se aproximan a las de equilibrio. Infecciones
experimentales sugieren que D. meridensis y L. catesbeianus pueden eliminar la
infeccin espontneamente (Villarroel 2011). Es decir, los individuos infectados pueden
curarse y, en teora, volver a ser susceptibles sin desarrollar inmunidad. Otras especies de
anfibios parecen no desarrollar inmunidad sino que sufren reinfecciones (Briggs et al.
2010; Woodhams et al. 2011). Debido a estas caractersticas slo consideraron
individuos susceptibles (S) o infectados (I) en el modelo.

Detectamos una variacin temporal de la prevalencia de D. meridensis (2 = 8,3;

gl = 3; p = 0,040), por lo tanto empleamos slo los datos del mes de abril (mes con
mayor numero de estimados de prevalencia) para evaluar la relacin lineal entre la
prevalencia y la densidad de esta especie. Debido a que la prevalencia de D. meridensis
tambin vara entre los estados de desarrollo (captulo III), recalculamos la prevalencia
considerando slo los individuos adultos y metamorfos (estados con prevalencias
similares) recolectados durante el mes de abril. No hubo un efecto del mes de muestreo
en la prevalencia de L.catesbeianus (2 = 6,307; gl = 3; p exacto = 0,098) y el nmero de
individuos por estado en cada muestreo fue pequeo como para estimar prevalencia
confiables para cada estado. As empleamos todos los estimados de prevalencia sin
discriminar por mes y estadio para realizar la regresin lineal simple entre la prevalencia
y la densidad de L. catesbeianus.

Tambin determinamos la relacin lineal entre la intensidad de la infeccin y la

densidad de ranas observada en los cuerpos de agua (N). Se espera que la abundancia de
parsitos dentro de sus hospederos (sin inmunidad) tienda a aumentar con la densidad de
 81

estos ltimos, debido a que a mayores densidades hay mayores posibilidades de acumular
parsitos por continuas reinfecciones. El anlisis de la varianza de la carga de zoosporas
realizado en el captulo III indic que existen diferencias en la carga de zoosporas entre
los estados de D. meridensis. Las larvas, juveniles y adultos mostraron cargas de
zoosporas similares, mientras que los metamorfos y postmetamorfos se comportaron
como otro subconjunto; aun cuando el tamao de muestra para este subconjunto fue
pequeo. Por lo tanto, el anlisis entre carga de zoosporas y la densidad, para el caso de
D. meridensis, se hizo slo para el subconjunto conformado por juveniles y adultos (no
se recolectaron larvas durante los muestreos de 2006). Para ello los datos de zoosporas
fueron previamente transformados a escala logartmica, lo que permiti su
normalizacin. Para conocer si la intensidad de la infeccin de Bd puede contribuir a
explicar la prevalencia observada en D. meridensis y L. catesbeianus realizamos una
regresin lineal simple para cada especie; previa transformacin de los valores de
zoosporas a escala logartmica.

RESULTADOS

Distribucin de D. meridensis y L. catesbeianus

Un total de 40 localidades, ubicadas principalmente en la vertiente occidental de

la Sierra de la Culata y de la Sierra Nevada en el estado Mrida, tuvieron registros de D.
meridensis (Figura 15, Anexo 4); 26 de stos fueron obtenidos de los muestreos en
campo, 11 de la revisin de las bases de datos de los museos y tres de la bibliografa.
Slo hubo dos ejemplares recolectados en una localidad fuera del estado Mrida, en los
alrededores del poblado de La Grita en el estado Tchira. Este registro ampla la
distribucin geogrfica de D. meridensis conocida hasta ahora (Anexo 5) en unos 27 km
lineales en direccin suroeste (La Marca 2006; Barrio-Amors 2004b). Dendropsophus
meridensis se encontr principalmente en nueve sectores: La Carbonera-Jaj, Pramo de
Mario, La Sabana-La Trampa, El Morro, la ciudad de Mrida, La Culata, La Mucuy, El
Valle y La Grita. Durante este estudio corroboramos la presencia de D. meridensis en
 82

todos estos sectores, excepto en La Mucuy. No obstante, es necesario un mayor esfuerzo

de captura antes de concluir si D. meridensis definitivamente desapareci de esta
localidad.

Los registros de museo de D. meridensis se caracterizaron por poseer escasos

datos sobre los ejemplares. De acuerdo a las fechas de colecta, todos los ejemplares
disponibles en los museos fueron recolectados entre 1952 y 1995, exceptuando tres
ejemplares capturados recientemente en 2010 (Anexo 4: EBRG 6024-6026). Debido a
que slo en cinco de las localidades se reportaron las coordenadas geogrficas, slo fue
posible georeferenciar 64% de los registros existentes en el mapa de distribucin de esta
especie (Figura 15, Anexo 4). Segn el mtodo del polgono convexo mnimo, se estim
que D. meridensis ocupa un rea geogrfica de 2.049 km2, aunque este estimado es un
poco mayor (2.424 km2) si se incluye el efecto de elevacin del terreno. Esta especie se
encontr entre 1.600 m y 2.600 m de altitud, aunque la mayora de los registros se
ubicaron sobre 2.000 m (Figura 15, Anexo 4). En este intervalo altitudinal predomina la
selva nublada, con algunos sectores severamente degradados por actividades agrcolas,
pecuarias y urbanas. Dendropsophus meridensis se detect en lagunas artificiales,
lagunas naturales, potreros anegados y, algunos pocos individuos, en pequeos pozos
dentro de la selva nublada.

Lithobates catesbeianus, por el contrario, slo se detect en el sector de Jaj-

Carbonera y sus alrededores, entre el pramo El Tambor y Campanario. En este sector,
esta especie ocupa un rea aproximada de 45 km2, entre 1.810 m y 2.600 m de altitud,
que abarca parte de la cuenca alta del ro Capazn y de la Quebrada la Sucia, y en una
menor proporcin, la cuenca alta del Ro Las Gonzlez (Figura 16). Su presencia se
corrobor en 33 lagunas permanentes, 16 artificiales y 17 naturales ubicadas en zonas
intervenidas (Anexo 6).

Al sobreponer las distribuciones de ambas especies se determin que el rea

ocupada actualmente por la rana toro slo representa aproximadamente el 3% del rea de
la distribucin de D. meridensis (Figura 17, rea del mapa delimitada en rojo).
 83

Figura 15. Distribucin de Dendropsophus meridensis en la cordillera de los Andes Venezolanos.

 84

Figura 16. Distribucin de Lithobates catesbeianus en la cordillera de los Andes venezolanos.

 85

Figura 17. rea de distribucin de Dendropsophus meridensis invadida por Lithobates catesbeianus.
 86

Patrones de co-ocurrencia de D. meridensis y L. catesbeianus

Lithobates catesbeianus estuvo presente en 35 ocasiones y D. meridensis se

observ en 26 de ellas. Ambas coincidieron en 18 ocasiones (Tabla VI). As, la
proporcin de ocasiones en las cuales se registr L. catesbeianus en los cuerpos de agua
(81,5%) no fue significativamente mayor que la proporcin con presencia de D.
meridensis (60,5%) (2 corregido por continuidad = 3,6091; gl = 1; p = 0,0574) (Figura
18).

n= 43 n= 43
100%

80%
Porcentaje (%)

60% Ausencia

40% Presencia

20%

0%
D. meridensis L. catesbeianus
Especie

Figura 18. Presencia y ausencia de Dendropsophus meridensis y Lithobates catesbeianus en 12

lagunas de la regin de Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.

El anlisis de las frecuencias conjuntas de las presencias y ausencias de D.

meridensis y L. catesbeianus demostr que la presencia de una especie no fue
independiente de la presencia de la otra (Prueba exacta de Fisher bilateral, p = 0,0144).
Cuando una de las especies est presente, la otra tiende a estar ausente (phi = -0,3866; p
= 0,0112). El anlisis de residuales indica que el nmero de muestras observadas con una
sola especie presente exceden a las esperadas bajo la hiptesis de independencia (Ho:
Residual = 0). En consecuencia, el nmero de muestras con ambas especies presentes o
 87

ambas especies ausentes es menor que el esperado (Figura 19). De hecho, no hubo
lagunas sin alguna de las especies presentes.

1
Residuales

-1

-2

-3
n = 43
-4

Figura 19. Residuales de las frecuencias observadas en la aparicin conjunta de Dendropsophus

meridensis y Lithobates catesbeianus en 12 lagunas de la regin de Jaj-La Carbonera, estado
Mrida, Venezuela. Rosado: D. meridensis presente y L. catesbeianus ausente. Amarillo: D. meridensis
ausente y L. catesbeianus presente. Azul: D. meridensis presente y L. catesbeianus presente. Verde: D.
meridensis ausente y L. catesbeianus ausente.

Dendropsophus meridensis y L. catesbeianus fueron observadas durante los

cuatro meses de muestreo, sin que la proporcin de lagunas ocupadas variara
significativamente entre meses para D. meridensis (2 = 4,1057; gl = 3; p exacto =
0,2756) o L. catesbeianus (2 = 2,278; gl = 3; p exacto = 0,584) (Figura 20 y 21).
 88

100% El nmero sobre las

7 12 12 12 barras indica el
nmero de lagunas
80%
muestreadas en el

Porcentaje (%)
mes
60%

D. meridensis ausencia
40%
D. meridensis presencia
20%

0%
Febrero Abril Agosto Octubre

Mes

Figura 20. Proporcin de lagunas con Dendropsophus meridensis durante 2006 en el sector Jaj-
La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.

100%
El nmero sobre las
barras indica el
80%
nmero de lagunas
muestreadas en el
Porcentaje (%)

12 12
60% 12 mes
7
L. catesbeianus ausencia
40%
L. catesbeianus presencia
20%

0%
Febrero Abril Agosto Octubre

Mes

Figura 21. Proporcin de lagunas con Lithobates catesbeianus durante 2006 en el sector Jaj-La
Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
 89

Densidades de D. meridensis y L. catesbeianus

Los valores de las densidades (ind/m2) observados en D. meridensis en los

cuerpos de agua no se ajustaron a una distribucin normal; se encontraron muchos ms
cuerpos de agua sin esta especie que el que se espera si las densidades reflejan un
proceso de invasin aleatorio, cuando se consider la totalidad de los datos (Z de
Kolmogorov-Smirnov = 1,787; p = 0,003). Sin embargo, al excluir los valores iguales a
cero (cuerpos de agua sin ranas), el nmero de cuerpos de agua con densidades bajas,
aunque fue un poco mayor del esperado, la distribucin de densidades no difiri
significativamente de una distribucin normal (Z de Kolmogorov-Smirnov = 0,987; p =
0,284). La distribucin de densidades de L. catesbeianus, por el contrario, no difiri
significativamente de una distribucin normal cuando se incluyeron los valores iguales a
cero (Z de Kolmogorov-Smirnov = 1,153; p = 0,140) o cuando se excluyeron estos
ltimos (Z de Kolmogorov-Smirnov = 0,787; p = 0,565). Es decir, an cuando se
encontr un exceso de cuerpos de agua con muy pocos individuos, al omitir las lagunas
sin D. meridensis y sin rana toro, la distribucin de densidades por lagunas para cada
especie no difiri significativamente de distribuciones normales.

Las densidades promedios de ambas especies fueron similares. La densidad

promedio de D. meridensis en las lagunas obtenida de todos los muestreos fue de 0,0344
ind/m2 (00,1643 ind/m2) (Tabla VIII) y la de L. catesbeianus fue de 0,0253 ind/m2 (0
0,0931 ind/m2) (Tabla IX). No obstante, las densidades de L. catesbeianus se
mantuvieron relativamente constantes durante el estudio (Tabla XI) mientras que las de
D. meridensis variaron significativamente entre los meses de muestreo (Tabla X). En el
mes de abril, la densidad de D. meridensis fue significativamente mayor a la de octubre
(Prueba de Bonferroni, diferencia entre medias: 0,04, p = 0,0359) (Anexo 7).
 90

Tabla VII. Densidades de Dendropsophus meridensis durante 2006 en 12 lagunas del sector Jaj-
La Carbonera, estado Mrida.
Laguna Febrero Abril Agosto Octubre Media
Antes del Sr. Beto 0,1400 0,0805 0,0550 0,0230 0,0746
Canta Rana 0,0000 0,0018 0,0000 0,0000 0,0005
El Roco 0,0000 0,0204 0,0000 0,0016 0,0055
Frente a San Onofre **** 0,1281 0,1568 0,0950 0,1266
La Esmeralda **** 0,1166 0,1325 0,0572 0,1021
La Granzonera 0,0000 0,0365 0,0000 0,0000 0,0091
Los Camachos 1 0,0020 0,0000 0,0000 0,0000 0,0005
Los Camachos 2 0,0013 0,0064 0,0000 0,0013 0,0023
Mistaj **** 0,1643 0,0800 0,0175 0,0873
La Cuchilla Alta **** 0,0813 0,0481 0,0148 0,0481
Sr. Beto 0,0000 0,0148 0,0021 0,0000 0,0042
Villa Juanita **** 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
Media 0,0205 0,0542 0,0395 0,0175 0,0344
Asteriscos (*) indican los muestreos no realizados.

Tabla VIII. Densidades de Lithobates catesbeianus durante 2006 en12 lagunas del sector Jaj-La
Carbonera, estado Mrida.
Laguna Febrero Abril Agosto Octubre Media
Antes del Sr. Beto 0,0029 0,0014 0,0050 0,0014 0,0027
Canta Rana 0,0712 0,0566 0,0931 0,0821 0,0758
El Roco 0,0094 0,0157 0,0236 0,0079 0,0142
Frente a San Onofre **** 0,0008 0,0000 0,0000 0,0003
La Esmeralda **** 0,0022 0,0011 0,0043 0,0025
La Granzonera 0,0026 0,0156 0,0260 0,0156 0,0150
Los Camachos 1 0,0417 0,0815 0,0596 0,0616 0,0611
Los Camachos 2 0,0167 0,0386 0,0489 0,0245 0,0322
Mistaj **** 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
La Cuchilla Alta **** 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
Sr. Beto 0,0233 0,0359 0,0275 0,0359 0,0307
Villa Juanita **** 0,0391 0,0681 0,0549 0,0540
Media 0,0240 0,0240 0,0294 0,0240 0,0253
Asteriscos (*) indican los muestreos no realizados.
 91

Tabla IX. Anlisis de varianza de la densidad de Dendropsophus meridensis durante abril,

agosto y octubre de 2006 en 12 lagunas del sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida.
Origen de las Suma de Grados de Promedio de
variaciones cuadrados libertad los cuadrados F Probabilidad
Laguna 0,0687 11 0,0063
Mes 0,0082 2 0,0041 6,98 0,0045
Error 0,0129 22 0,0006
Total 0,0898 35
El diseo muestreal es de medidas repetidas sin replicacin (Quinn y Keough 2002). Se
excluy el muestreo del mes de febrero para balancear los casos del ANOVA. Se cumpli con el
supuesto de esfericidad (MauchlysW= 0,724, df=2, p=0,198) por lo que no fue necesario realizar
ajustes o correcciones de F (empleando Epsilon de Greenhouse-Geisser o Epsilon de Huynh-Feldt).

Tabla X. Anlisis de varianza de la densidad de Lithobates catesbeianus durante abril, agosto y

octubre de 2006 en 12 lagunas del sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida.
Origen de las Suma de Grados de Promedio de
variaciones cuadrados libertad los cuadrados F Probabilidad
Laguna 0,0258 11 0,0023
Mes 0,0002 2 0,0002 1,49 0,2471
Error 0,0017 22 0,00008
Total 0,0277 35
El diseo muestreal es de medidas repetidas sin replicacin (Quinn y Keough 2002). Se
excluy el muestreo del mes de febrero para balancear los casos del ANOVA. Se cumpli con el
supuesto de esfericidad (L. catesbeianus: MauchlysW= 0,684, df=2, p=0,150) por lo que no fue
necesario realizar ajustes o correcciones de F (empleando Epsilon de Greenhouse-Geisser o Epsilon de
Huynh-Feldt).

Las densidades de D. meridensis tambin variaron con la presencia de la rana

toro. Su densidad promedio fue menor en lagunas donde estuvo presente L. catesbeianus
(0,0235 ind/m2) que en aquellas donde estuvo sola (0,0822 ind/m2) (t = -3,2812; df = 41;
p = 0,0021). Adems, detectamos una relacin inversa entre la densidad de ambas
especies (R 2= 0,6710; F = 32,625; p < 0,00001). La densidad de D. meridensis
disminuy con la densidad de L. catesbeianus de manera logartmica. Es decir, un
incremento en el nmero de ranas toro parece tener un efecto mayor sobre las densidades
de D. meridensis cuando las ranas toro son escasas que cuando son numerosas (Figura
22).
 92

Densidad de D. meridensis (ind./m2)

Dendidad de L. catesbeianus (ind./m2)

Figura 22. Variacin de la densidad de Dendropsophus meridensis en funcin de la densidad de

Lithobates catesbeianus. Se usaron los valores obtenidos en muestreos donde ambas especies estuvieron
presentes (n = 18). La ecuacin de la curva es Y 0,0496 0,012 ln x .

Densidades de D. meridensis y L. catesbeianus y la prevalencia de infeccin y carga

de zoosporas de Bd en estas especies.

La prevalencia y carga promedio de zoosporas obtenidos para cada especie en los

diferentes muestreos se puede observar en el Anexo 10. En D. meridensis, la prevalencia
de infeccin increment significativamente con la densidad de ranas en los cuerpos de
agua (R2= 0,8158; F = 17,72; p= 0,0135), mientras que en L. catesbeianus mostr una
leve tendencia aunque esta relacin no fue significativa (L. catesbeianus: R2= 0,216; F =
1,934; p = 0,207) (Figura 23 y 24). Esto sugiere que no existe una dependencia entre las
tasas de transmisin del patgeno y las densidades del hospedero en L. catesbeianus.
 93

La intensidad de infeccin, por el contrario, si mostr una relacin significativa

con las densidades del hospedero, en al menos una de las especies. El nmero de
zoosporas en las muestras de juveniles y adultos de D. meridensis aument
significativamente con la densidad de ranas en las lagunas (R2= 0,5918; F = 14,4978; p=
0,0034) (Figura 25). En L. catesbeianus, no se encontr relacin alguna entre carga
promedio de zoosporas y la densidad en ninguno de los estados (juvenil-adultos: R2 =
0,0000022; F = 0,00015; p = 0,990, metamorfos-postmetamorfos: R 2= 0,095; F = 0,526;
p= 0,5).

100
90
80
Prevalencia (%)

70
60
50
40
30
20
10
0
0.0000 0.0500 0.1000 0.1500 0.2000
2
Densidad (ind/m )

Prevalencia (%) Regresin lineal (pronstico de prevalencia)

Figura 23. Relacin entre la prevalencia de Batrachochytrium dendrobatidis en Dendropsophus

meridensis y la densidad de esta rana en lagunas del sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida,
Venezuela. La ecuacin de la recta fue y = 356,49 x + 18,713; R2= 0,8158; F = 17,72; p= 0,0135.
 94

120

100

Prevalencia (%)
80

60

40

20

0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
2
Densidad (ind/m )
Prevalencia Regresin lineal (pronstico prevalencia)

Figura 24. Relacin entre la prevalencia de Batrachochytrium dendrobatidis en Lithobates

catesbeianus y la densidad de esta rana en lagunas del sector Jaj-La Carbonera, estado Mrida,
Venezuela. La ecuacin de la recta fue y = 316,61 x + 67,601; R2= 0,2165; F = 1,934; p= 0,207.

4.50
Log zoosporas (1-3mg tejido)

4.00
3.50
3.00
2.50

2.00
1.50
1.00
0.50
0.00
0.0000 0.0200 0.0400 0.0600 0.0800 0.1000 0.1200 0.1400 0.1600 0.1800
2
Densidad (ind/m )

Logzoosporas Regresin lineal (pronstico de Log zoosporas)

Figura 25. Relacin entre la carga promedio de zoosporas de Batrachochytrium dendrobatidis en

Dendropsophus meridensis y la densidad de esta rana en lagunas del sector Jaj-La Carbonera,
estado Mrida, Venezuela. La ecuacin de la recta fue y = 11,689x + 1,1905; R2= 0,5918; F = 14,4978;
p= 0,0034.
 95

La carga de zoosporas de Bd en D. meridensis se relacion positivamente con la

prevalencia. As la intensidad de la infeccin explic significativamente en un 59% a la
prevalencia de infeccin (R2=0,591; F=14,444; p<0,003) (Figura 26), mientras en L.
catesbeianus esta relacin no fue significativa (R2=0,246; F=1,962; p<0,211).

100
90
80
70
Prevalencia (%)

60
50
40
30
20
10
0
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00
Log. N de zoosporas 1-3 mg de tejido

Prevalencia (%) Regresin lineal (pronstico de la prevalencia (%))

Figura 26. Variacin de la carga promedio de zoosporas de Batrachochytrium dendrobatidis en

funcin de su prevalencia en Dendropsophus meridensis. La ecuacin de la recta ajustada fue y =
17.619x - 2.5459; R2= 0,5918; F = 14,4978; p= 0,0034.

DISCUSIN

La transmisin de patgenos entre hospederos ocurre en dos fases sucesivas, la

exposicin del hospedero al patgeno durante el contacto entre hospederos susceptibles e
infectados, y la invasin efectiva del hospedero, una vez expuesto al patgeno. Entender
qu modula cada una de las fases del proceso de transmisin es fundamental para
predecir el potencial impacto de los patgenos sobre sus hospederos.

Dos factores parecen incidir sobre la transmisin de Bd en poblaciones de D.

meridensis: la densidad de hospederos en las lagunas y la intensidad de infeccin en los
 96

hospederos. La estrecha relacin observada entre la prevalencia de infeccin y la

densidad de ranas en cada laguna sugiere que las tasas de transmisin de Bd dependen de
la densidad de hospederos, y no de la frecuencia de hospederos infectados. La densidad
de hospederos puede potencialmente incidir en ambas fases del proceso de transmisin;
puede aumentar la probabilidad de contactos entre susceptibles e infectados, y puede
tambin exacerbar la susceptibilidad del hospedero a infectarse, si el hacinamiento
produce algn tipo de estrs fisiolgico en ste. Sin embargo, ensayos de campo han
sugerido que las ranas expuestas a hacinamiento no tienden a mostrar mayor
susceptibilidad a la infeccin en exposiciones posteriores con el patgeno (Rachowicz y
Briggs 2007). Por lo tanto, es ms probable que los cambios en las densidades de D.
meridensis afecten principalmente a las tasas de contacto entre hospederos susceptibles e
infectados.

La intensidad de infeccin es otro de los factores que incide sobre el proceso de

transmisin de patgenos, especficamente sobre la segunda fase. Si los individuos con
infecciones ms intensas son ms infecciosos, la probabilidad de infeccin al momento
del contacto entre un susceptible y un infectado, ser mayor en la medida que la
intensidad de infeccin sea mayor. Esto es vlido incluso en patgenos como Bd, con
estados infectivos de vida libre, debido a que los individuos ms infecciosos tienden a
liberar ms estados infectivos al ambiente. La estrecha relacin entre el nmero
promedio de zoosporas por rana y la prevalencia de infeccin en las lagunas indica que la
intensidad promedio de infeccin en las poblaciones de D. meridensis incide
significativamente sobre la prevalencia de infeccin. Brigg et al. (2010) lograron explicar
la dinmica de las epidemias en poblaciones de R. muscosa modelando las tasas de
transmisin como funcin de la intensidad promedio de zoosporas por individuo o por
cuerpo de agua. En otras especies de parsitos la intensidad de infeccin en los
hospederos es una variable predictora de la prevalencia de sus poblaciones (Guyatt et al.
1990; Prez y Barea 2000; Poulin y Gugan 2000). No obstante, se desconoce qu
factores influyen sobre las intensidades de infeccin de Bd en los hospederos. Aunque
detectamos una relacin entre la densidad de hospederos y la intensidad de infeccin, no
es claro si a sta subyace una relacin causal. Si bien un incremento en la densidad puede
 97

conducir a una mayor tasa de contacto entre infectados promoviendo la acumulacin de

zoosporas por reinfecciones sucesivas, probablemente este mecanismo contribuya poco a
explicar la intensidad de infeccin en D. meridensis, u otras especies de ranas. Algunos
ensayos muestran que la intensidad de infeccin en adultos de D. meridensis expuestos
experimentalmente a una nica dosis inicial de Bd vara drsticamente entre individuos
infectados, e incluso en un mismo individuo durante el transcurso de la enfermedad
(Villarroel 2011). As, es posible que la relacin detectada entre la densidad y la
intensidad de infeccin se deba a un artificio de la relacin existente entre la prevalencia
y la intensidad de infeccin, y sea la tasa de amplificacin de Bd dentro del hospedero lo
que determine la intensidad de infeccin en D. meridensis. Qu predispone a un
individuo a acumular ms rpidamente zoosporas que a otro sigue siendo motivo de
investigacin. No obstante, la intensidad promedio de infeccin en una poblacin parece
ser un factor determinante en las tasas de transmisin de Bd en poblaciones de ranas.

La existencia de procesos densodependendientes en las tasas de transmisin de Bd

en D. meridensis sugiere que las poblaciones de este hospedero pueden potencialmente
persistir en presencia del patgeno, sin riesgos de extinguirse localmente. Esto es vlido,
sin embargo, slo en ausencia de reservorios. Los reservorios actan como una fuente
alterna de infeccin que permite al patgeno subsistir, an cuando la densidad de
hospederos susceptibles disminuye por debajo del tamao crtico de la comunidad. Es
decir, en presencia de un reservorio como L. catesbeianus, Bd tiene el potencial de
producir extinciones locales en las poblaciones de D. meridensis. Aunque L.
catesbeianus ocupa actualmente 3% de la distribucin de D. meridensis ambas especies
son frecuentes en las reas donde sus distribuciones se sobreponen. No obstante, slo en
pocas lagunas ambas especies coinciden. La tendencia de D. meridensis a estar ausente
en las lagunas en donde L. catesbeianus est presente puede explicarse por, al menos, dos
mecanismos no necesariamente excluyentes. Si la presencia de L. catesbeianus
incrementa las tasas de transmisin de Bd en las poblaciones de D. meridensis debido a la
posibilidad de que ocurra la transmisin del patgeno entre ambas especies, D.
meridensis pudiera ser extirpada localmente de las lagunas invadidas por L. catesbeianus.
Alternativamente, L. catesbeianus podra tambin desplazar competitivamente a D.
 98

meridensis hacia otras lagunas. La posibilidad de que ambos mecanismos ocurran

simultneamente depender de que la interaccin competitiva involucre la cercana
suficiente entre ambas especies para que permita la transmisin intraespecfica de Bd
(Dobson y Hudson 1995). Evaluar la contribucin de cada uno de estos mecanismos al
patrn de segregacin que observamos en L. catesbeianus y D. meridensis no es un
ejercicio simple.

Tanto el desplazamiento competitivo como la extirpacin local debido a un

aumento en las tasas de transmisin de Bd pueden generar un patrn de segregacin de
especies como el observado entre L. catesbeianus y D. meridensis. En otras regiones
donde L. catesbeianus ha sido introducida, se ha observado tambin una relacin inversa
entre la densidad o abundancia de anfibios nativos y la densidad o abundancia de esta
especie extica (Hammerson 1982; Hecnar y MCloskey 1997; Kat y Ferrer 2003; Moyle
1973; Li et al. 2011; Schwalbe y Philip 1988). Este patrn ha sido atribuido a su
capacidad de desplazar competitivamente a otras especies (Daza-Vaca y Castro-Herrera
1999; Kiesecker y Blaustein 1998; Kupferberg 1997; Snow y Withmer 2010), aunque se
ha identificado que L. catesbeianus es tambin un reservorio de Bd en algunas de las
regiones donde ha sido introducida (Daszak et al. 2003; Garner et al. 2005; Ouellet et al.
2005; Peterson et al. 2007; Snow y Withmer 2010). No obstante, el efecto esperado de
cada uno de estos mecanismos sobre la prevalencia de infeccin es diferente. Si D.
meridensis es desplazada competitivamente de las lagunas por L. catesbeianus, la
presencia de L. catesbeianus no alterara las tasas de transmisin de Bd sobre D.
meridensis porque la transmisin interespecfica sera despreciable. En este escenario, se
espera que la presencia de L. catesbeianus no incida sobre la prevalencia de infeccin de
D. meridensis. Si por el contrario D. meridensis es extirpada debido a un aumento en las
tasas de transmisin de Bd en sus poblaciones, entonces se espera que la prevalencia de
infeccin de D. meridensis en las lagunas donde ambas especies cohabitan sea mayor que
en aquellas donde se encuentra sola. Sin embargo, la baja densidad de D. meridensis en
las lagunas donde ambas especies cohabitan limita la capacidad para obtener estimados
confiables de prevalencia de infeccin, parmetro poblacional cuya precisin depende
del nmero de ranas por laguna. Para determinar si la presencia de L. catesbeianus incide
 99

sobre la prevalencia de infeccin de Bd en D. meridensis es necesario monitorizar la

infeccin de Bd y D. meridensis en lagunas colonizadas recientemente por L.
catesbeianus.

A pesar de que L. catesbeianus no est presente en la mayora de los cuerpos de

agua donde D. meridensis habita, la prevalencia de infeccin de esta ltima tiende a ser
alta. Algunas explicaciones posibles son: 1) la transmisin intraespecfica de Bd en D.
meridensis es alta o 2) D. meridensis es capaz de mantener infecciones subclnicas por
largo tiempo. Se ha propuesto que las especies que persisten con infecciones subclnicas
mantienen intensidades de infeccin por debajo de umbrales especficos (i.e <<10,000
zoosporas en Rana mucosa) (Vredenburg et al. 2010; Briggs et al. 2010; Kinney et al.
2011). Las intensidades promedio de infeccin en las poblaciones de D. meridensis
tienden a ser menores que este umbral, y por tanto, a ello podra atribursele la capacidad
que tienen sus poblaciones de persistir con 42% de sus individuos infectados. No
obstante, ensayos experimentales demuestran que D. meridensis puede desarrollar
infecciones letales ante la exposicin experimental con Bd, y no existe una simple
relacin entre la probabilidad de que una rana infectada muera y su intensidad de
infeccin (Villarroel 2011); an cuando la intensidad de infeccin tiende a ser mayor en
ranas que mueren de quitridiomicosis que en aquellas que desarrollan infecciones
aclnicas, algunas ranas mueren con intensidades de infeccin muy baja mientras otras
sobreviven con intensidades altas. An entendemos poco sobre la patognesis de la
quitridiomicosis y qu factores influyen sobre la vulnerabilidad de las especies y de los
individuos.

Tanto la densidad de la poblacin hospedera como el promedio de zoosporas en

poblaciones son atributos poblacionales que contribuyen a explicar cmo ocurre la
transmisin de Bd en D. meridensis. Las relaciones detectadas entre estos parmetros y la
prevalencia de infeccin en poblaciones naturales no slo explican cmo D. meridensis
es capaz de subsistir en presencia de este hongo, sino tambin permiten identificar
parmetros de fcil medicin en el campo que podra utilizarse como indicadores de las
tasas de transmisin del patgeno en poblaciones naturales. La relacin positiva entre la
 100

prevalencia de infeccin en poblaciones de D. meridensis y la carga promedio de

zoosporas de sus individuos indica que ste ltimo parmetro podra utilizarse como
indicador de las tasas de transmisin del patgeno. As, la cuantificacin de la carga
promedio de zoospora en una poblacin permitira identificar aquellas poblaciones donde
ocurre mayor transmisin o detectar cambios en las tasas de transmisin que pudieran
conllevar a mayores mortalidades. Por tanto, estudios de monitoreo en poblaciones
infectadas deberan incluir la cuantificacin de la carga promedio como indicador de las
tasas de transmisin de Bd.
 101

CAPITULO V. FACTORES QUE INFLUYEN EN EL ESTATUS DE INFECCIN

DE INDIVIDUOS DE DENDROPSOPHUS MERIDENSIS INFECTADOS CON
BATRACHOCHYTRIUM DENDROBATIDIS
 102

RESUMEN

Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) es un parsito que infecta varias especies

de anfibios y causa la quitridiomicosis cutnea, una enfermedad que puede ocasionar
diversos efectos en sus especies hospederas, que van desde subletales hasta mortales. Las
poblaciones hospederas de una misma especie pueden enfrentar diferentes riesgos de
infeccin dependiendo de su susceptibilidad y del tiempo de exposicin a Bd. Entre las
especies nativas hospederas de Bd en los Andes venezolanos, Dendropsophus meridensis
es la que posee la ms alta prevalencia de infeccin con 42% de los individuos
infectados. An no se conoce con precisin qu hace a algunos individuos ms propensos
a adquirir la infeccin que a otros. Para aplicar planes de supervisin o de manejo
epidemiolgico que persigan prevenir o mitigar el efecto de una epidemia de
quitridiomicosis sobre D. meridensis es necesario identificar aquellos factores que
inciden sobre su probabilidad de infeccin. Para ello contrastamos, con base en el criterio
de Akaike, seis modelos de regresin logstica con cuatro variables que potencialmente
podran influir sobre la exposicin D. meridensis a Bd: el tiempo, el estado de desarrollo,
el tipo de hbitat y la presencia de L. catesbeianus, un reservorio del patgeno. El
modelo que mejor explic el riesgo relativo de infeccin de D. meridensis incluy slo
dos variables: el mes y la presencia de L. catesbeianus. De acuerdo a este modelo, el
riesgo relativo de infeccin de D. meridensis tiende a aumentar durante el mes de abril,
cuando la tasa de contactos entre individuos sanos e infectados es ms probable que
aumente debido a que las ranas se congregan para reproducirse, pero tiende a disminuir
con la presencia de L. catesbeianus. Una explicacin posible es que la transmisin
interespecfica es baja en comparacin con la intraespecfica, y la presencia de L.
catesbeianus conlleva a una disminucin en las densidades de D. meridensis, y por tanto,
de las tasas de transmisin de Bd. Estos resultados indican que los esfuerzos de
supervisin epidemiolgica en D. meridensis deben intensificarse durante la poca
reproductiva en las poblaciones no invadidas por L. catesbeianus.
 103

INTRODUCCIN

El hongo qutrido Batrachochytrium dendrobatidis, causante de la

quitridiomicosis cutnea, ha ocasionado la disminucin drstica de varias especies de
anfibios en diversas partes del mundo (Lips 1999; Bosch et al. 2001; Bradley et al. 2002;
Bonaccorso et al. 2003; Lips et al. 2004, Lips et al. 2006). Sin embargo, algunas
poblaciones remanentes han tendido, con el tiempo, a coexistir con el patgeno (Retallick
et al. 2004; Murray et al. 2009; Longo y Burrowes 2010) y varias especies hospederas
parecen no ser afectadas por la enfermedad (Hanselmann et al. 2004; Daszak et al.
2003). Este hongo ha sido encontrado en, al menos, 257 especies de anfibios, lo que le da
el carcter de parsito generalista (Olson y Ronnenberg 2008; Aaneses y Fisher 2012).
No obstante, existen diferencias interespecficas e intraespecficas en la susceptibilidad
de los hospederos a la infeccin. Estas diferencias generalmente estn asociadas a
caractersticas inherentes al hospedero (edad, estado nutritivo y otros factores biolgicos)
que determinan cuan susceptible es un individuo de infectarse. Sin embargo, para que un
anfibio susceptible se infecte es necesario que ste tenga un contacto adecuado con las
zoosporas de Bd. Por lo tanto, la prevalencia observada en las poblaciones de anfibios
depende, en parte, de los factores que influyen tanto en la susceptibilidad de los
hospederos, como de aquellos que condicionan la exposicin de stos al patgeno.

Entre las variables ambientales, la temperatura es una de las que ms determina la

presencia, crecimiento y reproduccin de Bd. El intervalo ptimo de temperatura para el
crecimiento y desarrollo de Bd es 19-23C, an cuando ste puede sobrevivir a 4C, y no
muere sino a temperaturas por encima de 29C (Longcore et al. 1999). As, los sitios con
intervalos ptimos de temperaturas muestran mayor nmero de especies infectadas y de
prevalencia que las zonas clidas llamadas refugios trmicos en donde el
crecimiento de Bd est limitado (Puschendorf et al. 2009; Woodhams et al. 2011). Por
otra parte, se ha propuesto que las temperaturas bajas pueden comprometer la capacidad
de respuesta del sistema inmune y, por tanto, exacerbar la susceptibilidad del hospedador
(Rollins-Smith et al. 2002b; Berger et al. 2004; Ribas et al. 2009). Otros factores que
pueden influir en el riesgo de infeccin estn relacionados con las caractersticas de los
 104

hbitats. Se ha propuesto que especies que se reproducen en quebradas son ms

propensas a contraer infeccin debido a que Bd es un patgeno generalmente vinculado a
cuerpos de agua (Berger et al. 1998). Las densidades de las poblaciones hospederas
tambin pueden influir en la probabilidad de que los individuos se infecten. En
poblaciones de algunas especies hospederas, la prevalencia de Bd incrementa con la
densidad del hospedero (captulo IV).

Los factores que determinan la susceptibilidad de las especies a infectarse con Bd

y la exposicin a dicho patgeno pueden ser analizados conjuntamente a travs de
modelos que contribuyen a predecir el riesgo que tienen las especies de infectarse. Un
modelo desarrollado a escala global indica que las especies de anfibios con estados
acuticos que ocupan pequeas reas de distribucin en tierras altas son las ms
susceptibles a infectarse y declinar por Bd (Rdder et al. 2009). Un modelo construido
para predecir la distribucin de Bd en Costa Rica indica que las zonas de temperaturas
ms elevadas y bajas precipitaciones durante los perodos de sequa tienen las menores
probabilidades de ocurrencia de Bd y por lo tanto representan las zonas de ms bajo
riesgo de infeccin (Puschendorf et al. 2009). Modelos ms especficos que permitan
identificar variables predictoras de la probabilidad de infeccin en una determinada
especie son ms escasos.

En las comunidades de anfibios de los Andes venezolanos se han identificado 15

especies hospederas de Bd de 22 diagnosticadas (Lampo et al. 2006b, Lampo et al.
2008b, Snchez et al. 2008). Dendropsophus meridensis, con un promedio de 42% de los
individuos infectados y 4.965 zoosporas en 1-3 mg de tejido, es la especie nativa con la
mayor prevalencia e intensidad de infeccin (captulo III). En esta especie la
susceptibilidad a infectarse es mayor en ciertas etapas de su ciclo de vida y durante
ciertas pocas del ao (captulo III). Adems, la posibilidad de infectarse incrementa con
la densidad de ranas y con la intensidad promedio de infeccin de estas ranas en los
cuerpos de agua (captulo IV). Es posible que la presencia de la especie extica L.
catesbeianus tambin contribuya a incrementar el riesgo de infeccin en esta especie,
debido a un incremento de la transmisin de Bd en D. meridensis desde los individuos de
 105

L. catesbeianus. En el rea donde ambas especies co-ocurren existe una tendencia de D.

meridensis a estar ausente en los sitios donde L. catesbeianus est presente, patrn que
puede atribuirse al simple desplazamiento competitivo de D. meridensis por L.
catesbeianus o, alternativamente, a una mayor mortalidad en D. meridensis debido a un
aumento en la transmisin de Bd.

En este estudio seleccionamos algunas de las variables que podran incidir en la

susceptibilidad de infeccin y el tiempo de exposicin en D. meridensis con el fin de
elaborar un modelo que nos permita predecir el riesgo de infeccin en esta especie. Las
variables consideradas fueron el hbitat y mes de recolecta, el estado de desarrollo y la
presencia de L. catesbeianus. El modelo podra ser de utilidad para predecir cmo y
cundo son ms probables las epidemias en esta especie y as priorizar poblaciones y
variables en planes de supervisin o manejo epidemiolgico que persigan prevenir o
mitigar el efecto de Bd en D. meridensis.

MATERIALES Y MTODOS

Se emplearon parte de los datos recolectados durante 32 salidas de campo

realizadas entre 2003-2007 al centro-norte del estado Mrida, con el fin de determinar
las distribuciones y densidades de D. meridensis y L. catesbeianus, as como identificar
los hospederos de Bd y la prevalencia y cargas parasitarias del patgeno (ver Materiales
y mtodos captulo III y IV). Durante estas salidas se muestrearon 30 lagunas, 19
quebradas y ros, diez lugares a orilla de carretera, un lote de bosque nublado y un
potrero anegado. En cada uno de ellos se verific la presencia de D. meridensis y L.
catesbeianus, se registraron caractersticas inherentes a los cuerpos de agua y a las
especies, y en la mayora de los casos se tomaron muestras de tejido para el diagnstico
de Bd. De estos 32 lugares, 12 lagunas fueron muestreadas de forma sistemtica durante
2006, empleando transectas perimetrales, con el fin de registrar las densidades de D.
meridensis y L. catesbeianus. Los diagnsticos de Bd para estas especies fueron
obtenidos como se indica en las secciones Muestreos de campo y diagnstico de
 106

laboratorio del captulo III. Entre las variables registradas durante los muestreos
referidos y empleadas en este captulo, se incluyen el tipo de hbitat, el mes de colecta, la
presencia de L. catesbeianus y el estado de desarrollo de D. meridensis.

Los ejemplares considerados en esta seccin fueron recolectados en los sectores

La Carbonera-Jaj, Pramo de Mario, La Sabana-La Trampa, El Morro y El Valle
(captulo II). Estas localidades se ubicaron entre los 71,50-71,84 norte y 8,30-8,92
oeste, y a los 1.800-2.600 m de altitud, aunque la mayora de los individuos se ubicaron
sobre 2.000 m. En este intervalo altitudinal predomina la selva nublada, con algunos
sectores severamente degradados por actividades agrcolas, pecuarias y urbanas.

Anlisis estadstico

Se utilizaron modelos de regresin logstica para evaluar el efecto de algunas

caractersticas del hbitat y ciertos atributos individuales sobre la probabilidad de
infeccin de individuos de D. meridensis con Bd. Se utiliz el estatus de infeccin de
cada ejemplar de D. meridensis como variable respuesta y el tipo de hbitat en donde se
encontr, el mes en el cual se recolect, la presencia de L. catesbeianus en su hbitat y su
estado de desarrollo, como variables potencialmente explicativas del estatus de infeccin
(Tabla XI). Se construyeron seis modelos log-lineales; los trminos de segundo o mayor
orden no se consideraron debido a que el nmero de casos en las categoras resultantes de
las interacciones fue muy bajo (Tabla XII). Entre los modelos considerados se incluy
uno con slo el intercepto que nos permitiera evaluar el modelo sin variables
explicativas. Las regresiones logsticas se hicieron utilizando el algoritmo glm
implementado en R (R Core Development Team 1997). Debido a la naturaleza binomial
de la variable dependiente, se utiliz la funcin de enlace logit. Se verific la ausencia de
colinealidaridad entre las variables independientes y que el tamao de la muestra (n =
393) fuera al menos diez veces mayor al nmero de parmetros o categoras a estimar (k
= 13) ms uno (n = 10 (k+1)) (Ortega y Cayuela 2002). Por lo tanto, para cada variable
slo se incluyeron las categoras (valores posibles de la variable) que reunieron al menos
10 casos para obtener estimados confiables (Ortega y Cayuela 2002).
 107

Los valores de los coeficientes de regresin () asociados a cada variable

explicativa se estimaron a travs de mtodos de mxima verosimilitud y se calcul la
probabilidad asociada a cada mediante el estadstico Wald (Tabla XI). Para cada
modelo se estim la desviacin (G2) o la variabilidad no explicada despus de ajustar el
modelo, como una medida de bondad de ajuste.

Para seleccionar el conjunto ptimo de variables que mejor explica la

probabilidad de infeccin de D. meridensis, se contrastaron los cinco modelos con base a
sus valores Akaike. Se utiliz el criterio de parsimonia para seleccionar el mejor modelo;
aquel modelo con menor nmero de parmetros cuyo valor Akaike no exceda en ms de
siete unidades del modelo con menor valor Akaike. Se estimaron los cocientes de
probabilidades relativas para cada uno de los parmetros del modelo seleccionado
[exp(i)], los cuales expresan el riesgo relativo de infeccin que tiene un individuo bajo
la condicin indicada por el parmetro con respecto al parmetro de referencia de cada
variable (Quinn y Keough 2002).

Tabla XI. Parmetros de las variables independientes empleadas en modelos de regresin

logstica para determinar la probabilidad de infeccin de Dendropsophus meridensis con el
hongo Batrachochytrium dendrobatidis.
Parmetros
Mes Hbitat Estado Presencia de Lithobates catesbeianus

Marzo Carretera* Larva Si

Abril* Laguna Metamorfo No*
Julio Potrero anegado Postmetamorfo
Agosto Adulto*
Septiembre
Octubre
*Valor de referencia. Los efectos de las otras categoras son relativos al grupo de referencia.
 108

RESULTADOS

El modelo con todas las variables (saturado) no mostr evidencias de

sobredispersin de los datos. El modelo con la probabilidad de infeccin dependiente del
mes de recoleccin y de la presencia de L. catesbeianus (3) fue el mejor candidato en el
conjunto de modelos considerado; su valor Akaike fue menor, con una diferencia
sustancial (>7 unidades) en relacin a los modelos con nmero menor de parmetros (4,
5 y 6) (Tabla XII). Es decir, la exclusin del mes de recoleccin y la presencia de L.
catesbeianus incide significativamente sobre la probabilidad de infeccin y la exclusin
de cualquiera de estas variables desmejora significativamente el ajuste del modelo a los
datos.

El riesgo relativo de infeccin de D. meridensis fue mayor durante abril, mes

utilizado en el modelo como referencia. Los cocientes de probabilidades relativas del
mejor modelo (3) sugieren que el riesgo relativo de infeccin en D. meridensis fue
significativamente menor en los meses de marzo (16%), julio (31%), agosto (85%),
septiembre (20%) y octubre (48%) con respecto al mes de abril, aunque esta disminucin
no fue significativa en agosto. Contrario a lo esperado, la presencia de rana toro tambin
parece disminuir el riesgo de infeccin de D. meridensis. El cociente de riesgo relativo en
lagunas donde L. catesbeianus estuvo presente fue 48% de valor estimado para las
lagunas en donde estuvo ausente.
 109

Tabla XII. Diagnstico de modelos de Regresin Logstica empleados para evaluar el efecto de
variables biticas y abiticas sobre la probabilidad de infeccin de Dendropsophus meridensis
con el hongo Batrachochytrium dendrobatidis.
Desviacin N Delta
2
Modelo AICc (G ) parmetros QAICc AICc
Y 0 1 (mes) X i 2 ( P _ A _ ranatoro) X i 513,94 499,94 8 383,98 0
Y 0 1 ( mes ) X i 2 (estado ) X i 3 ( P _ A _ ranatoro ) X i 514,10 496,00 10 385,35 0,16
Y 0 1(mes) 2 (hbitat) X i 3 (estado) X i 4 ( P _ A _ ranatoro) X i 516,59 494,60 12 388,49 2,65
Y 0 1 ( mes ) X i 520,20 508,20 7 387,96 6,26
Y 0 1 ( P _ A _ ranatoro ) X i 528,60 524,63 2 391,81 14,66
Y 0 537,31 1 23,37
Y : probabilidad de infeccin de cada individuo dado un valor de las diferentes variables, con respecto a la probabilidad de no estar
infectado.

0 : intercepto que expresa el cociente de probabilidad relativa (odds), en un caso particular de referencia.
1 , 2 , 3 y 4 : son coeficientes de regresin parciales de las variables consideradas en los modelos que expresa en cunto cambian
los chances de infeccin, en relacin al valor de referencia, con un cambio en las variables ecolgicas o atributos individuales .

Tabla XIII. Coeficientes de regresin y cocientes de probabilidades de los parmetros incluidos

en el modelo de regresin logstica seleccionado para determinar la probabilidad de infeccin de
Dendropsophus meridensis con el hongo Batrachochytrium dendrobatidis.
Parmetro Coeficiente de Cociente de riesgo Estadstico z Pr(>|z|)
regresin () relativo (exp[])
Intercepto 0,6052 2,139 0,0324*
Fechaagosto -0,1617 0,8507 -0,510 0,6104
Fechajulio -1,1603 0,3133 -3,639 0,0003***
Fechamarzo -1,8051 0,1644 -2,285 0,0223*
Fechaoctubre -0,7287 0,4825 -2,287 0,0222*
Fechaseptiembre -1,5860 0,2047 -2,162 0,0307*
Ranatoro -0,7181 0,4876 -2,860 0,0042**
*** Significancia a un nivel de 0,001
** Significancia a un nivel de 0,01
* Significancia a un nivel de 0,05
 110

Tabla XIV. Diagnstico del modelo de regresin logstica seleccionado para determinar la
probabilidad de infeccin de Dendropsophus meridensis con el hongo Batrachochytrium
dendrobatidis.
Variable gl Desviacin (G2) LRT Pr (Chi)
Intercepto 499,94
Fecha 5 524,63 24,6842 0,0001***
Presencia L. catesbeianus 1 508,20 8,2575 0,0041**
*** Significancia a un nivel de 0,001
** Significancia a un nivel de 0,01

DISCUSIN

Los resultados sugieren que al menos dos variables, el mes y la presencia de rana
toro, inciden sobre el riesgo de infeccin en D. meridensis en las lagunas de Jaj-La
Carbonera. Los cambios temporales en las probabilidades de infeccin pueden atribuirse
a las variaciones estacionales en algunos de los parmetros climticos que inciden
directamente sobre el patgeno o a los cambios temporales que ocurren en las
poblaciones de hospederos que pudieran incidir sobre la transmisin de ste. Algunos
autores han registrado cambios temporales en las prevalencia como producto de los
cambios en la humedad, la temperatura o en las precipitaciones (Berger et al. 2004;
Retallick et al. 2004). Esto ha sido reportado principalmente para regiones donde la
temperatura y precipitacin promedio cambia notoriamente entre las estaciones
climticas, existiendo estaciones que favorecen ms el crecimiento de Bd que otras. En la
zona de estudio, las condiciones climticas parecen favorecer el crecimiento de Bd
durante todo el ao. La temperatura anual es de 19C en el lmite inferior de la
distribucin de D. meridensis (Estacin Climtica Aeropuerto-Mrida, 1470 m s.n.m.,
83556 y 710925) y de 15C hacia el lmite superior (Estacin Climtica La
Cuchilla, 2280 m s.n.m., 083800 y 712110). Por lo tanto, posiblemente los
cambios observados en las probabilidades de infeccin estn ms asociados a cambios
temporales que ocurren en las poblaciones hospederas. El efecto del mes posiblemente
est asociado a los cambios temporales que ocurren en las densidades de D. meridensis,
los cuales influyen a su vez en el proceso de transmisin de Bd. A medida que la
 111

densidad incrementa tambin aumenta la transmisin del hongo entre individuos

infectados y sanos, y por lo tanto existe un mayor riesgo de contagio. Dendropsophus
meridensis, alcanza su mayor densidad durante el mes de abril, cuando los adultos se
congregan para reproducirse. Es probable, entonces, que este aumento en la densidad
conlleve a un aumento en las tasas de transmisin y, por tanto, en la probabilidad de
infeccin (ver captulo IV). En otras especies, como Rana areolatus, tambin se han
registrado patrones de infeccin temporales asociados a incrementos en las densidades
por eventos reproductivos (Kinney et al. 2011). La mayor prevalencia, la ms alta carga
de zoosporas y la mayor mortalidad en R. areolatus ocurren durante la primavera cuando
las ranas se agregan en las lagunas para reproducirse (Kinney et al. 2011).

La presencia de otras especies hospedadoras, especialmente aquellas que actan

como reservorios, puede tambin incidir sobre la probabilidad de infeccin de algunas
especies si la transmisin intraespecfica es posible. La rana toro ha sido catalogada
como un reservorio de Bd, debido a su capacidad de desarrollar infecciones subclnicas
(Daszak et al. 2003; Hanselmann et al. 2004) y mantener prevalencia altas en
poblaciones silvestres (Hanselmann et al. 2004; Snchez et al. 2008; Peterson et al.
2007). Algunos autores han sugerido que la presencia de L. catesbeianus podra
incrementar la transmisin de Bd en las poblaciones de hospederos nativos (Daszak et al.
2004, Hanselmann et al. 2004, Snchez et al. 2008) aunque hasta donde se conoce,
ningn estudio ha puesto a prueba esta hiptesis. En este estudio, sin embargo,
encontramos, al contrario de lo esperado, que el riesgo de infeccin es menor en
presencia de L. catesbeianus. Esto sugiere que, en las lagunas donde ambas especies co-
ocurren, la transmisin interespecfica de Bd juega un papel menos importante que la
transmisin intraespecfica en D. meridensis. Esto podra estar asociado a las diferencias
en el uso del microhbitat entre ambas especies, lo cual limita el contacto entre ellas y
por tanto la transmisin interespecfica. Dendropsohus meridensis emplea los diversos
estratos de la vegetacin presente en las lagunas mientras que L. catesbeianus slo est
en el suelo y agua (Pearl et al. 2004; Govindarajulu et al. 2006; Wang y Li 2009). La
segregacin temporal en los ritmos de actividad, D. meridensis es principalmente
 112

nocturna mientras que L. catesbeianus es de actividad diurna, de igual forma contribuye

a separar el nicho de estas especies.

La segregacin de nichos, como un mecanismo para evitar la competencia, ha

sido observado en algunas especies nativas cuyos hbitat han sido invadidos por L.
catesbeianus. Por ejemplo, Rana pretiosa tiende a ocupar un menor porcentaje de
cuerpos de agua invadidos por la rana toro que R. aurora, debido a que su nicho tiende a
solaparse ms con rana toro que el de su congnere (Pearl et al. 2004). Aspectos como la
distribucin de los recursos en el hbitat pueden contribuir con la separacin de nichos.
Existen evidencias de que algunas especies, como R. aurora, pueden evitar los
encuentros con L. catesbeianus cuando los recursos alimenticios se distribuyen de forma
agregada en el hbitat. Esta interferencia pasiva por L. catesbeianus condujo a que las
larvas de R. aurora tuvieran una menor supervivencia, menor peso y emplearan un
mayor tiempo para alcanzar la metamorfosis (Kiesecker et al. 2001b). Si D. meridensis
evita los microhbitats en donde L. catesbeiana se encuentra, como un mecanismo para
evitar la competencia, entonces esperaramos tasas de transmisin interespecficas bajas
comparada con las intraespecficas. Como resultado, la probabilidad de infeccin en
lagunas en donde la rana toro est presente es menor.

La estratificacin del riesgo es fundamental para un control eficiente de

enfermedades transmisibles, porque permite focalizar las acciones de manejo en las reas
y los momentos donde el riesgo de infeccin es mayor. Los resultados del modelo de
regresin logstica conllevan a proponer como zonas de mayor riesgo de epidemias para
D. meridensis a los cuerpos de agua donde sus poblaciones alcanzan las mayores
densidades, an cuando son stos los que alojan el menor nmero de adultos de L.
catesbeianus o incluso en donde estn ausentes. En estos cuerpos de agua el riesgo de
infeccin es aproximadamente el doble que en aquellos donde L. catesbeianus est
presente. Asimismo, el mayor riesgo de infeccin parece estar asociado al inicio de
lluvias en abril, cuando los adultos se congregan en las lagunas para reproducirse.
 113

De ocurrir algn cambio en la coexistencia de Bd con D. meridensis, los sitios de

mayor riesgo podran ser los primeros que muestren aumentos bruscos en la prevalencia
de la infeccin. Se recomienda, por lo tanto, continuar con la monitorizacin de la
infeccin en las zonas de mayor riesgo, con el fin de poder detectar de forma temprana el
inicio de una epidemia. Entre las medidas que pueden ejecutarse en caso de una epidemia
est la de disminuir la densidad de esta rana en las lagunas prioritarias a travs de
movilizar animales a otros cuerpo de agua donde las densidades sean menores.
 114

CAPTULO VI. DISCUSIN GENERAL

 115

Las enfermedades infecciosas son la cuarta causa de disminucin de anfibios en

el mundo (Hilton-Taylor et al. 2009). stas son responsables de una gran proporcin de
las disminuciones drsticas que han ocurrido en poblaciones de anfibios ubicadas en
zonas montaosas poco intervenidas (Hilton-Taylor et al. 2009; Hero y Kriger 2008).
Para proponer medidas que permitan prevenir o mitigar el impacto que los parsitos estn
teniendo sobre las poblaciones de anfibios, en especial B. dendrobatidis, se ha
reconocido la importancia de realizar estudios integrales. El enfoque epidemiolgico
dado a este estudio permiti conocer el estatus de la infeccin por Bd en comunidades de
anfibios que habitan en la Serrana de La Culata. El patrn de distribucin de Bd en esta
zona es similar al observado en otras partes del mundo, principalmente al detectado en
las regiones montaosas, donde la prevalencia incrementa con la altitud (Berger et al.
2004; Puschendorf et al. 2006; Carnaval et al. 2006; Snchez et al. 2008). Si bien Bd est
presente en las zonas bajas, al Sur del Lago de Maracaibo, ste es notoriamente ms
prevalente por encima de los 1.600 m en la regin de Jaj-La Carbonera. Los sectores de
El Viga y Guayabones, las zonas ms bajas donde se registr la presencia de Bd, se
caracterizan por tener temperaturas promedios mensuales de 27C con mximas de 34,7,
lo cual representa una limitante para el crecimiento de Bd. Estas zonas de altas
temperaturas funcionan como refugios trmicos para las especies de anfibios que all
habitan (Puschendorf et al. 2009; Woodhams et al. 2011); por lo tanto, en las zonas
bajas, el riesgo de infeccin posiblemente sea menor al que encaran las especies en las
selvas semideciduas y nubladas de est ramal de la Cordillera de Mrida.

En las zonas montaosas, donde las condiciones ambientales son ideales para Bd,
ms de 60% de las especies de anfibios diagnosticadas son hospederas. Sin embargo, la
enorme variacin observada en la prevalencia, desde 3% hasta 85%, sugiere que la
susceptibilidad, la exposicin o la vulnerabilidad no son igual para todas las especies.
Dendropsophus meridensis y L. catesbeianus parecen ser las especies ms susceptibles o
con el mayor riesgo de exposicin al patgeno. Ambas habitan en charcas o lagunas entre
1.600 y 2.600 m de altitud, en donde las condiciones son ideales para el crecimiento de
Bd. Sin embargo difieren en que L. catesbeianus mantiene infecciones aclnicas con muy
altas prevalencias y, por consiguiente acta como un reservorio de Bd, mientras que D.
 116

meridensis muestra prevalencias intermedias que fluctan en el tiempo y espacio, lo cual

sugiere que su vulnerabilidad debe ser mayor a la de L. catesbeianus. Ensayos recientes
de laboratorio demostraron que la infeccin por Bd puede ser letal para D. meridensis
(Villarroel 2011). Al menos en condiciones ideales para el crecimiento de este patgeno,
la tasa de sobrevivencia en individuos infectados es 47% (Villarroel 2011). La
combinacin de una exposicin al patgeno y una vulnerabilidad a desarrollar
infecciones letales hace a D. meridensis una de las especies con mayor riesgo en el rea
de estudio.

En este estudio identificamos al hbitat de las especies, al estado de desarrollo de

los individuos, la carga de zoosporas por individuo infectado y la densidad de las
especies hospederas, adems de la altitud, como factores que contribuyen a explicar la
variacin observada en la prevalencia de las especies nativas, principalmente la
registrada en D. meridensis. Los hbitats lnticos, estados de desarrollo metamrficos y
postmetamrficos, poblaciones con las cargas promedio de zoosporas ms altas, y
poblaciones ms densas ubicadas en las zonas elevadas, son los estados de estas variables
donde son observadas las mayores prevalencias de Bd en D. meridensis.

Si bien la ausencia de eventos de mortandad masiva en poblaciones de anfibios de

la Carbonera, sugiere que este hongo, pese a su amplia distribucin geogrfica y de
especies hospederas de Bd, probablemente se encuentre en niveles endmicos, su
presencia amenaza las comunidades de anfibios, en especial las de D. meridensis. Existe
un consenso entre varios autores sobre la importancia de hacer seguimiento y manejo de
Bd en los sitios donde ste es endmico (Woodhams et al. 2011). En estas zonas el hongo
podra limitar el crecimiento poblacional o la abundancia de anfibios, y cambios en las
condiciones ambientales podran exacerbar la vulnerabilidad de las ranas o la virulencia
del patgeno y, como resultado, perturbar el equilibrio endmico de la interaccin que
pareciera persistir actualmente. Si bien los ensayos de laboratorio indican que Bd puede
ocasionar la muerte de individuos de D. meridensis, desconocemos el impacto que Bd
tiene a escala poblacional por lo que resulta urgente desarrollar investigaciones dirigidas
 117

a evaluar el impacto de las infecciones sobre los tamaos poblacionales y la

supervivencia de esta especie.

La implementacin de un plan de supervisin epidemiolgica en las poblaciones

de D. meridensis permitira detectar de forma temprana incrementos en la prevalencia de
la infeccin en las poblaciones, lo que podra estar indicando el inicio o desarrollo de una
epidemia. El plan debe considerar como prioritarios los sitios donde D. meridensis no co-
ocurre con L. catesbeianus y la poca de reproduccin de esta especie nativa. Entre las
variables a monitorizar proponemos incluir la intensidad de la infeccin y la densidad de
los hospederos, ya que incrementos en estas variables pueden ser indicadores del inicio
de una epidemia (Figura 25 y 26). La deteccin temprana de una epidemia de
quitridiomicosis facilitara la implementacin de estrategias o medidas que reduzcan el
impacto que sta podra tener sobre los tamaos poblacionales de los anfibios.

Algunos autores proponen que el enfoque de estas estrategias debe ser el de

controlar y no el de erradicar al patgeno de una determinada poblacin debido a que
esto resulta poco factible y existe una alta probabilidad de sucesivas reintroducciones de
Bd. Dependiendo del estatus de infeccin de la poblacin que se desea manejar, las
medidas de mitigacin pueden estar enfocadas a 1) prevenir la dispersin de Bd, 2)
establecer cra ex situ libre de Bd, y 3) desarrollar tratamientos profilcticos in situ o
estrategias para minimizar el impacto de la infeccin (Woodhams et al. 2011). Para D.
meridensis se considera que las medidas deben estar dirigidas a mitigar el impacto de Bd,
en caso de presentarse una epidemia de quitridiomicosis. Asimismo es necesario el
desarrollo e implementacin de protocolos de bioseguridad que permitan disminuir el
riesgo de entrada de nuevas cepas ms virulentas al pas. Estos protocolos deberan estar
enfocados en el control de las importaciones de los anfibios que son trados a Venezuela,
incluyendo el descarte de la infeccin por Bd en los ejemplares a importar.

A pesar de la importancia de contar con medidas que permitan reducir el impacto

de las epidemias de quitridiomicosis, son pocas las estrategias que han sido validadas
para el manejo de esta enfermedad. Es, recientemente, que se vienen realizando
 118

investigaciones enfocadas a evaluar la factibilidad de implementar mtodos que se han

usado para el control de otras enfermedades en humanos o en fauna silvestre. Asimismo,
se han desarrollado nuevas lneas de investigacin orientadas a llenar vacos de
informacin necesaria para el diseo de medidas de control; por ejemplo, el control
biolgico de Bd, desarrollo de vacunas, desinfeccin de cuerpos de agua, entre otros. Sin
embargo, existen algunas que podran ejecutarse a corto plazo si se llegara a presentar un
evento epidmico. Una de ellas es la de reducir las densidades de los hospederos
susceptibles para prevenir el brote epidmico o disminuir su impacto si llegara a ocurrir.
En animales de produccin esta disminucin se puede alcanzar por sacrificar algunos de
los individuos, sin embargo, en el caso de especies silvestre en peligro de extincin, es
mejor evaluar la factibilidad de trasladar a los individuos no infectados a zonas donde el
patgeno no est presente o en su defecto donde su prevalencia es menor. En el caso de
D. meridensis esto amerita el marcaje de los individuos a trasladar y mantener
identificados los sitios de bajas, medias y altas prevalencias, en trminos relativos. Otra
medidas a implementar ameritan un estudio ms detallado de factibilidad e investigar
aspectos relacionados con la respuesta de D. meridensis a tratamientos qumicos,
caracterizar detalladamente la respuesta inmune de D. meridensis a Bd, caracterizar los
pptidos antimicrobianos producidos por esta especie as como inventariar los posibles
depredadores de las zoosporas de Bd en los hbitats donde habita D. meridensis
(Woodhams et al. 2011).

Si bien los resultados sugieren que los esfuerzos de monitoreo de la infeccin

deben centrarse en cuerpos de agua donde rana toro est ausente o en muy bajas
densidades, esto no implica que L. catesbeianus deje de ser un factor de inters para la
dinmica de Bd en la regin. Existe la posibilidad de que la rana toro se comporte como
un dispersor del patgeno a medida que sta coloniza nuevos espacios, movilizando las
zoosporas a cuerpos de agua donde Bd no estaba presente o donde se encuentran a muy
bajas cargas. Adems, el patrn de disminucin de D. meridensis en presencia de L.
catesbeianus sugiere que sta ltima pudiera llegar a afectar las poblaciones de D.
meridensis en la regin. Aunque L. catesbeianus actualmente afecta slo 3% de la
distribucin de D. meridensis, de continuar su dispersin, las poblaciones de D.
 119

meridensis podran continuar disminuyendo. Por lo tanto, se recomienda que cualquier

programa de conservacin de la rana endmica D. meridensis, considere de forma
integral a Bd y L. catesbeianus, junto a otros factores, como la reduccin del hbitat y
contaminacin por agrotxicos, que posiblemente pueden estar afectando a las
poblaciones de D. meridensis. Recomendamos, tambin, continuar con estudios de las
relaciones interespecficas entre D. meridensis y L. catesbeianus dirigidos a responder
cules son los mecanismos que explican el efecto que est ltima tiene sobre D.
meridensis. Asimismo, continuar con los proyectos de investigacin dirigidos a evaluar
mtodos de control de L. catesbeianus que contribuyan a reforzar los programas de
control que actualmente se llevan desde el Ministerio del Ambiente con el fin de prevenir
su dispersin y disminuir sus densidades en las lagunas invadidas.
 120

CAPTULO VI. BIBLIOGRAFA

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 146

ANEXOS
 147

Anexo 1. Protocolo para PCR a Tiempo Real empleado por el Laboratorio del
Ecologa y Gentica de Poblaciones, Centro de Ecologa, IVIC, para el diagnstico
de Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) (preparado a partir de Boyle et al. 2004)

Antes de hacer un PCR se debe verificar si se encuentran los buffer y primers a utilizar
en las cantidades requeridas. En caso de que no se encuentre alguno prepararlo antes de
iniciar la PCR.

Limpiar el rea de trabajo con alcohol o cloro, luego colocar una hoja o toallin para
trabajar sobre el mismo y hacer la toma de la muestra para la extraccin de ADN.

Paso 1. Extraccin de ADN de las muestras empleando PrepMan Ultra:

Se recomienda trabajar con alcuotas del PrepMan ultra (Applied Biosystems) para evitar
contaminacin del mismo.

Toma de la muestra:

1. Antes de realizar la toma de la muestra rotular los viales estriles y colocar entre
30-40mg de perlas de Zirconio.
2. Para la toma de la muestra deben emplearse hojilla de bistur, pinzas o tijeras
estriles, para ello deben sumergirse en etanol al 100% y flamear con mechero
entre cada toma. Se coloca un trocito de paraflim en el mesn y sobre este se
cortar el tejito. El paraflim debe ser desechado entre cada corte. Colocar cada
corte en sus respectivos viales con las perlas de Zirconio y agregar 40 l de
PrepMan Ultra.
Incluir un blanco de extraccin (por duplicado) con el fin de verificar si hubo
contaminacin durante la extraccin. Este blanco incluyes slo las perlas de
Zirconio y 40 l de PrepMan Ultra (sin muestra).
3. Homogeneizar cada vial por 45 segundos en el Mini BeadBeater.
4. Se centrifuga inmediatamente por 30 segundos (13.000 rpm)
 148

5. Homogeneizar y centrifugar nuevamente por 30 segundos.

6. Hervir las muestras durante 10 minutos en bao de mara.
7. Centrifugar por 3 minutos a 13.000 rpm.
8. Tomar 30 l del sobrenadante y transferirlo en viales estriles (rotulados) y
almacenar a -80 C.
9. Hacer diluciones 1/10 del ADN extrado para realizar el ensayo de PCR. Si se
desea continuar durante el da con el PCR mantener el ADN a 4C.
Posteriormente almacenar a -80C.

Paso 2. Preparacin de Estndares.

Para ello se hacen diluciones 1/10 a partir de una solucin de concentracin conocida de
zoosporas (2x105 zoosporas/1m):

1. Estndar 100: se colocan 5 l del stock en 45 l de agua (desionizada y

autoclavaza) y se mezcla varias veces.
2. Estndar 10: se colocan 5 l del Estndar 100 en 40 l de agua (desionizada y
autoclavaza) y se mezcla varias veces.
3. Estndar 1: se colocan 5 l del Estndar 10 en 40 l de agua (desionizada y
autoclavaza) y se mezcla varias veces.
4. Estndar 0,1: se colocan 5 l del Estndar 1 en 40 l de agua (desionizada y
autoclavaza) y se mezcla varias veces.
5. Almacenar en fro ( 4C).

Paso 3. Ensayo de PCR

3.1. Preparacin del Coctel (mezcla de reactivos para ensayo de PCR):

Se prepara en la campana libre de ADN empleando un nuevo par de guantes. Los

reactivos deben mantenerse en fro (hielo) durante la preparacin del coctel; el cual esta
compuesto por:
 149

Taq- Man R Master Mix (Applied Biosystems)

Primers: AL5272 y AL5273 (Applied Biosystems) a una concentracin de 0,9 l.

La secuencia de los primers (ADN ribosomal) es:

o Region ITS1: 5`-CCTTGATATAATACAGTGTGCCATATGTC 3`

o Region 5.8S: 5`- AGCCAAGAGATCCGTTGTCAAA 3`

Taq- Man MGB (Applied Biosystems), a una concentracin de 0,25 l.

Agua destilada.

La cantidad a emplear de cada reactivo debe ser calculado en funcin del nmero de
reacciones, el cual esta definido por:

N de Reacciones =N de muestras (por triplicado) +4 estndares (por duplicado) +

Blancos (extraccin y PCR por duplicado)+ Error (adicionar una reaccin por cada 10
reacciones).

En funcin del nmero de reacciones y la concentracin se calcula el volumen de cada

reactivo que se agregara al coctel. Para ello puede usar el siguiente formato:

Concentracin Concentracin Volumen por Volumen

Reactivo original final reaccin (ul) total (ul)
Master Mix 2x 12.50
AL5272 10 0,9 M 2.25
AL5273 10 0,9 M 2.25
MGB 100 0,25 mM 0.06
H2O 2.94
ADN 5.00
Volumen por reaccin 25.00
Nmero de reacciones x
 150

Cada reactivo debe mezclarse bien (en su mismo envase) antes de colocarlo en el vial
para la preparacin del cctel e igualmente cuando se coloca en el vial estril. Mantener
enfro sin congelar.

3.2. Preparacin de la mezcla de reaccin (coctel + ADN)

Preparar dentro de la campana de flujo laminar, siguiendo los siguientes pasos:

1. Colocar en el bloque el rack de los viales especiales para PCR con sus tapas,
evitar tocar las tapas y la boca de los viales.
2. Colocar en cada vial 20 l del cctel y 5 l de ADN del hongo de las muestras,
diluido 1/10 en agua destilada.
3. Incluir los cuatro estndares ((20 l del cctel y 5 l de cada estndar).
4. Se incluir los blancos de extraccin (20 l del cctel y 5 l del blanco).
5. Incluir los blancos de PCR ((20 l del cctel y 5 l de agua destilada).
6. Cerrar los viales al terminar cada lnea.

3.3 Colocar el rack de los viales de PCR en el termociclador por 2 horas y 10

minutos siguiendo el Protocolo Bd.
 151

Anexo 2. Lagunas muestreadas durante 2006 para estimar las densidades de D. meridensis y L.
catesbeianus, en los Municipios Campo Elas y Andrs Bello, Estado Mrida

Antes del Sr. Beto Canta Rana

El Roco Frente a San Onofre

La Esmeralda La Granzonera
 152

Los Camachos 1 Los Camachos2

Mistaj La Cuchilla Alta

Sr. Beto Villa Juanita

 153

Anexo 3. Modelo Susceptible Infectado Susceptible (SIS).

Este modelo considera una poblacin hospedera cuyos individuos pueden

clasificarse en susceptibles e infectados (Figura 1). Nuestro sistema de estudio se
corresponde con esto debido a que existen lagunas donde nicamente est presente una
sola especie y en otras donde estn presentes las dos, pero una de ellas es notoriamente
ms abundante. Este tipo de modelo es usado para representar enfermedades que no
matan a todos los individuos infectados y que permiten que una parte (o todos, segn el
caso) se recupere sin conferir inmunidad; de forma tal que el individuo recuperado es
nuevamente susceptible de infectarse (e.g. meningitis, enfermedades venreas, malaria, y
enfermedad del sueo). Exposiciones experimentales de D. meridensis con Bd indican
que, en condiciones de laboratorio, menos de la mitad de los individuos infectados
sobreviven a la infeccin, pero algunos de stos pueden curarse espontneamente
(Villarroel 2011). Se desconoce la capacidad de D. meridensis para desarrollar
inmunidad a Bd; no obstante, se ha demostrado que otras especies de anfibios pueden
recuperarse y sufrir continuas reinfecciones con este hongo (Briggs et al. 2010;
Woodhams et al. 2011). Lithobates catesbeianus, por el contrario, es capaz de portar la
infeccin sin padecer la enfermedad (Daszak et al. 2004) y al igual que D. meridensis,
puede curarse espontneamente en condiciones de laboratorio (Chatfield y Richards-
Zawacki 2011). Se han descrito varios mecanismos del sistema inmune de L.
catesbeianus que le permiten ser un portador asintomtico de la infeccin, pero se
desconoce si esta especie puede sufrir continuas reinfecciones. El modelo SIS supone,
adems, que la poblacin del hospedero es abierta demogrficamente. Este supuesto se
cumple en nuestro caso, porque Bd ha persistido lo suficiente en las poblaciones de D.
meridensis y L. catesbeianus como para que los eventos de natalidad y mortalidad
ocurran simultneamente. Sin embargo, las soluciones de este tipo de modelo son
similares a aquellas que asumen que la poblacin es cerrada (Hethcote 1976, 1989).

Se muestra el comportamiento de este modelo terico, al cual se ajusta nuestro

sistema, con el fin de mostrar cul es el comportamiento esperado en la poblacin
hospedera y comparar ste con nuestros resultados.
 154

Figura 1. Diagrama de flujo de un

Recuperacin
modelo Susceptible-Infectado-
Susceptible (SIS) (tomado y
adaptado de Anderson y May (1979)).

Nacimientos Los compartimentos ms grandes

representan la densidad de huspedes
b susceptibles e infectados. Los
b
parmetros ubicados en las flechas se
corresponden con las tasas a las
cuales ocurren los procesos
Huspedes Huspedes
susceptibles (S) Infectados (I) involucrados en la dinmica del
sistema: mortalidad no asociada a la
Transmisin
enfermedad (d); mortalidad asociada
d + d
a la enfermedad (a); natalidad (b);
Muertes Muertes transmisin de la infeccin (); y
recuperacin ()

Transmisin densodependiente:

Si la transmisin es densodependiente (SI) y la densidad total de la poblacin

hospedera (N) es una variable dinmica, entonces los cambios en el nmero de
individuos susceptibles e infectados a travs del tiempo estn regidos por las siguientes
ecuaciones diferenciales:

dS/dt = b (S+ I) + I dS SI (1.1)

dI/dt = SI ( + d + ) I (1.2)
donde,
SI: nmero promedio de nuevos infectados por la clase infectada por unidad de rea y
unidad de tiempo (incidencia).
 155

Los trminos positivos de la ecuacin (1.1) incrementan la densidad de individuos

susceptibles debido a los nacimientos [b (S+ I)] y a la recuperacin de individuos
infectados (I). Los trminos negativos constituyen las perdidas por mortalidad natural
(dS) y por transmisin de la enfermedad (SI). En la ecuacin (1.2), el trmino SI
incrementa la densidad de huspedes infectados. Los trminos negativos incluyen las
salidas de infectados de este compartimiento por causa de muertes naturales (dI), muerte
debido a la enfermedad (I) y a la recuperacin de los huspedes infectados (I). A partir
de las ecuaciones (1.1) y (1.2) se puede deducir el cambio total en la densidad
poblacional:

dN/dt = (b - d)N I (1.3)

Para conocer cmo cambia la proporcin de individuos infectados (I/N) en

funcin de la densidad total de hospederos en el equilibrio, comenzamos por igualar la
ecuacin (1.2) a cero (no hay cambio en I a travs del tiempo porque se asume una
condicin de equilibrio, ver ms adelante) y despejar S:

dI/dt = 0
SI = ( + d + ) I
S = ( + d + ) /

Dado que N = S + I,
I=N-S
I = N - [( + d + ) / ]
I/N = 1 - [( + d + ) / N] (1.4)

De la ecuacin (1.4) se concluye que en la medida que la densidad total de

equilibrio de hospederos incrementa la proporcin de individuos infectados (I/N) o la
prevalencia de infeccin (I/N * 100), tiende a uno o a 100% respectivamente.
 156

Transmisin frecuendependiente

Si la transmisin es dependiente de la frecuencia y sustituimos la funcin de

transmisin SI en la ecuacin (1.1) y (1.2) por la forma SI/N obtendremos el modelo
de Getz y Pickering (1983):

dS/dt = b (S+I) + I dS SI/N (1.5)

dI/dt =SI/N ( + d + ) I (1.6)

:
Para conocer cmo cambia la proporcin de individuos infectados (I/N) en
funcin de la densidad total de hospederos:

dI/dt = 0
SI/N = ( + d + ) I
S = [( + d + ) / ] N

Dado que N = S + I,
I= N - S
I = N - [( + d + ) / ] N
I/N = 1 - [( + d + ) / ] (1.7)

De la ecuacin (1.7) se infiere que si la transmisin depende de la frecuencia de

hospederos la proporcin de individuos infectados (I/N) o la prevalencia de infeccin
(I/N * 100) es independiente de la densidad de hospederos.

Condiciones de establecimiento del patgeno y equilibrio del sistema

Transmisin densodependiente

Para determinar cules son las condiciones para el establecimiento del patgeno
 157

en la poblacin del hospedero es necesario definir Ro y St. La tasa bsica de reproduccin

de la enfermedad, Ro, es formalmente definida como el nmero de casos secundarios que
un husped infectado puede producir durante el tiempo que dura siendo infeccioso, si
ste es introducido en una poblacin inicial totalmente susceptible (Awerbuch 1995). Se
ha demostrado que Ro debe ser mayor que uno (Ro > 1) para que el parsito pueda
invadir y propagarse en la poblacin del husped. El tamao crtico de la comunidad, St,
es definida como la cantidad mnima de individuos susceptibles para que un patgeno
pueda invadir y persistir dentro de ella (Kermack y McKendrick 1927; Anderson y May
1979).

Para obtener Ro comenzaremos por dividir la ecuacin (1.2) entre I:

dI/Idt = S ( + d + ) (1.8)

Donde los parmetros , d, , tienen unidades de 1/ t, de forma tal que el

recproco de su suma (1/ ( + d + )) es el tiempo promedio durante el cual un individuo
infectado puede transmitir la enfermedad. El trmino S es el nmero de nuevos casos
que potencialmente pueden producirse a partir de un hospedero infectado por unidad de
tiempo. El cociente de estos dos trminos permite determinar cuntas de estas posibles
infecciones son realizadas durante el tiempo que el individuo es infeccioso (Ro).
Entonces, la tasa bsica de reproduccin de la enfermedad est dada por:

R0 = S / ( + d + ) (1.9)

Si R0 1 el patgeno persiste dentro de la poblacin del hospedero, dado que un

individuo infectado debe transmitir el parsito al menos a un hospedero susceptible para
que la enfermedad se propague. Ntese que Ro incrementa con el valor de S. Si
establecemos que R0 = 1 y despejamos S de la ecuacin (1.9) obtendremos que la
cantidad mnima de huspedes susceptibles que se necesitan para mantener la
enfermedad (St) es:
 158

St = ( + d + ) / (1.10)

Donde la densidad de susceptibles debe superar el valor de St para que ocurra el

establecimiento de la enfermedad (S St). Ahora, podemos deducir que las condiciones
para el establecimiento del patgeno son:

S / ( + d + ) 1 ; S( + d + ) / (1.11)

Para saber si la infeccin, una vez establecida, puede regular la poblacin del
husped es necesario determinar si el patgeno y su husped pueden coexistir. Esto se
logra analizando la dinmica del sistema. Para ello se grafican las isoclinas de N e I en un
diagrama de fases, donde dN/dt = 0 y dI/dt = 0 (Figura 2). Se obtiene que el sistema solo
tiene dos puntos de equilibrio estables, uno trivial donde (N,I) = (0,0) y un punto de
equilibrio interno globalmente estable en el que:

N* = (/ -r) (( + d + ) / ); I* = r/ N* (1.12)

Esto ocurre justo al alcanzar St, por lo cual S* = ( + d + )/, es decir, cuando en
promedio cada caso genera exactamente un nuevo caso. Este equilibrio se corresponde
con la intercepcin de las isoclinas en la Figura 2. Es importante resaltar que no existen
equilibrios de frontera para este sistema, de forma tal que no hay un punto en el cual toda
la poblacin sea completamente infecciosa. Esto se deduce fcilmente de la ecuacin
(1.1) ya que si S = 0 entonces dS/dt > 0, por consiguiente siempre hay individuos
susceptibles. Por otro lado, la poblacin del husped crecera exponencialmente si el
patgeno no estuviera presente, ya que si I = 0 S = N, entonces, dS/dt = (b d) N;
siempre que b > d. De esta forma, el punto de equilibrio N*, I* ocurre justo cuando la
mortalidad inducida por la enfermedad balancea la tasa intrnseca de crecimiento de la
poblacin. En conclusin, tenemos que si un parsito logra establecerse (cumpliendo con
la condicin S > St) la poblacin del husped y parsito tendern a un punto endmico
 159

estable (coexistencia), por lo que la enfermedad puede regular a la poblacin del

husped.

dI/dt = 0
Densidad, I

dN/dt = 0
I=N

Nt = St
Densidad, N

Figura 2. Diagrama de fases de un modelo Susceptible-Infectado-Susceptible con transmisin del

parsito denso-dependiente (tomado y adaptado de Getz y Pickering, 1983). El cruce de las isoclinas
N e I se corresponde con un punto de equilibrio y el punto de corte en el eje x indica la densidad umbral de
huspedes (Nt). Los vectores sealan que durante el establecimiento de la enfermedad existen oscilaciones
convergentes al punto de equilibrio interno que permite la coexistencia de individuos sanos e infectados.

Transmisin frecuendependiente

La tasa bsica reproductiva de la enfermedad, Ro, es ahora proporcional a la

frecuencia de huspedes susceptibles (S/N):

R0 = S / ( + d + ) N (1.13)

Cuando una enfermedad es introducida en una poblacin de huspedes sanos, el

valor inicial de prevalencia es muy bajo, as que S N, es decir, S / N 1, por lo tanto:

R0 / ( + d + ) (1.14)
 160

Si R0 >1 el patgeno pueda invadir y propagarse. Ntese que a diferencia de la

deduccin hecha en (1.9), para (1.14) no es posible despejar un valor umbral de
susceptible. Pero la condicin para el establecimiento puede ser hallada de (1.14). As,
para que dI/dt > 0 luego de introducir el patgeno en una poblacin previamente sana,
debe cumplirse:

> ( + d + ) (1.15)

Si la tasa de transmisin excede la sumatoria de las tasas de prdida de individuos

infectados, el patgeno puede establecerse independientemente de la densidad
poblacional (Lajmanovich y York 1976, Alstad 2001).

La grafica de las isoclinas de N e I (Figura 3) indica que el nico punto en el cual

ellas se cruzan es N = I = 0. Esto significa que no hay equilibrio en el cuadrante positivo
del diagrama de fases, donde 0 < I <N; por lo que el parsito no es capaz de regular la
poblacin de su husped. Si la pendiente de la isoclina N es mayor que la de la isoclina I,
la poblacin del husped crece exponencialmente. En el caso contrario tanto la poblacin
del husped y el parsito declinan hacia la extincin.
 161

dN/dt = 0

Densidad, I
I=N

dI/dt = 0

Densidad, N

Figura 3. Diagrama de fases de un modelo Susceptible-Infectado-Susceptible con

transmisin del parsito dependiente de la frecuencia (tomado y adaptado de Getz y
Pickering (1983). Ntese que a diferencia de la Figura 2, las isoclinas N e I slo se cruzan
cuando N = I = 0. En este caso la pendiente de la isoclina N es mayor que la de la Isoclina I, por
lo tanto N incrementa sin lmites. Si la relacin entre las pendientes es inversa, la enfermedad
puede aproximar a la poblacin del husped hacia la extincin.
 162

Anexo 4. Registros de presencia de Dendropsophus meridensis en la Cordillera de los Andes Venezolanos

UTM UTM
N de Hbitat o dato Altitud Este Norte Procedencia Museo y n de
Localidad Ao individuos** ecolgico Municipio (m) (m) (m) del registro catlogo Fuente
Bosque San Eusebio, La Carbonera 1979- 16 ____ ____ ____ ____ ____ Museo CVULA Revisin de la
1980 coleccin

Carretera hacia el Pramo Mario, en la va hacia la 2006 Registro de Potrero anegado Rivas Dvila 2185 190593 921479 Muestreo de *** En este trabajo
Laguna de Las Palmas canto campo

Carretera hacia el Pramo Mario, Laguna la Sucia 2006 3 Laguna Rivas Dvila 2072 191010 920877 Muestreo de *** En este trabajo
campo

Carretera La Sabana-La Trampa 2006 1 Cuneta con agua Sucre 1883 230296 946429 Muestreo de *** En este trabajo
a orilla de campo
carretera
Carretera La Sabana-La Trampa, propiedad de la Sra. 2007 30 Potrero anegado Sucre 2050 230042 950501 Muestreo de *** En este trabajo
Mara campo

Carretera Las Cruces- Jaj 2005 5 Laguna Campo Elas 2000 243949 948687 Muestreo de *** En este trabajo
campo

Carretera Las Cruces-Miraflores 2006 1 Pozo al lado de la Campo Elas 2037 242575 950547 Muestreo de *** En este trabajo
carretera campo

Carretera Las Cruces-Sector Miraflores 2005- 99 Pozo al lado de la Campo Elas 2214 241242 952501 Muestreo de *** En este trabajo
2006 carretera campo

Carretera va El Morro, en los 2006 1 En vegetacin Libertador 2236 257974 940345 Muestreo de *** En este trabajo
linderos del PN. Sierra Nevada del talud de la campo
carretera
Chama ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ Museo UMMZ 3574, Rivero, 1961
CNHM 3573-4

Chama, cerca de Mrida ____ 1 ____ ____ ____ 263367 949450 Museo USNM 71114 www.herpnet.org;
(Paratipo) Rivero, 1961

La Carbonera, Finca de CREE 1995 1 ____ ____ ____ ____ ____ Museo ULABG 4102 Revisin de la
coleccin

La Culata ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ Museo AMNH 10671-3 Rivero, 1961
 163

La Grita, Tchira* 1970 2 ____ ____ ____ 171204 900250 Museo USNM 291068; www.herpnet.org
291069

La Mucuy, Fila la Loma 1952 7 Encontrada en Santos 1870 273419 954185 Museo MHNLS 625- revisin de la
Bromeliacea Marquina 629;632;633 coleccin

Mrida, Venezuela ____ 1 ____ ____ 1630 263927 951106 Museo MCZ A-2527 www.herpnet.org;
(Holotipo) Rivero, 1961

Pramo Mario ____ 4 ____ ____ ____ ____ ____ Museo CVULA Revisin de la
coleccin

Sector El Valle, Truchicultura La Cueva del Oso 2006- 23 Laguna Libertador 2355 267601 959906 Muestreo de *** En este trabajo
2007 campo

Sector La Cuchilla Alta 2005- 76 Laguna Campo Elas 2270 235793 957417 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo

Sector La Cuchilla, Hacienda La Esmeralda 2003- 120 Laguna Campo Elas 2330 236991 956519 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo

Sector La Cuchilla, Hacienda La Esmeralda 2005- 110 Laguna Campo Elas 2253 236373 956951 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo

Sector la Osa 2004 1 Andrs Bello 2345 228019 961598 Muestreo de *** En este trabajo
campo

Sector Las Cruces, sede del IVIC, va Mrida- Jaj 2010 3 En jardn cerca Campo Elas 1873 245130 946925 Museo EBRG 6024-6026 Revisin de la
de tanque coleccin
Australiano
Sector Miraflores Alto, Finca Dulce Virgen de 2006 1 Laguna Campo Elas 2601 238175 953898 Muestreo de *** En este trabajo
Coromoto campo

Sector Miraflores alto, Finca El Roco 2006 10 Laguna Campo Elas 2505 239750 954477 Muestreo de *** En este trabajo
campo

Sector Miraflores, Casa del Sr. Beto 2006 6 Laguna Campo Elas 2474 239360 954006 Muestreo de *** En este trabajo
campo

Sector Miraflores, en la base del pramo El Tambor 2005- 127 Laguna Campo Elas 2349 239469 953018 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo

Sector Miraflores, Estancia El Paramito 2006 13 Laguna Campo Elas 2469 239502 954224 Muestreo de *** En este trabajo
campo
 164

Sector Miraflores, laguna natural Registro de Laguna Campo Elas 2552 238945 953848 Muestreo de *** En este trabajo
canto campo

Sector Mistaj, alrededores de la finca La Tal, en la 2006 5 Pozo en bosque Campo Elas 2448 243157 953763 Muestreo de *** En este trabajo
base del pramo Campanario campo

Sector Mistaj, alrededores de la finca La Tal, en la 2006 2 Potrero anegado Campo Elas 2463 242916 953585 Muestreo de *** En este trabajo
base del pramo Campanario campo

Sector Mistaj, alrededores de la finca La Tal, en la 2006 6 Potrero-bosque Campo Elas 242889 953618 Muestreo de *** En este trabajo
base del pramo Campanario campo

Sector Mistaj, Floricultura Cooperativa Mistaj 2005- 123 Laguna Campo Elas 2430 242553 952585 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo

Sector Mistaj, Floricultura Cooperativa Mistaj 2005 47 Laguna Campo Elas 2277 241805 952057 Muestreo de *** En este trabajo
campo

Sector Palo Negro, Finca de Los Camachos 2005 2 Laguna Campo Elas 2358 239079 952798 Muestreo de *** En este trabajo
campo

Sector Palo Negro, Finca de Los Camachos 2006 8 Laguna Campo Elas 2343 239150 952765 Muestreo de *** En este trabajo
campo

Valle Grande 1973 3 ____ ____ ____ ____ ____ Museo CVULA Revisin de la
coleccin

Venezuela ____ 2 ____ ____ ____ ____ ____ Museo FMNH 3573, www.herpnet.org
3574

Venezuela ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ Museo AMNH 10666-7, Rivero, 1961
10669

Va el Morro ____ 2 ____ ____ ____ ____ ____ Museo CVULA Revisin de la
coleccin

AMNH: American Museum of Natural History

CNHM: Chicago Natural History Museum
CVULA: Coleccin de Vertebrados de la Universidad de Los Andes
FMNH: Field Museum - FMNH Herpetology Collections
MEBRG: Museo de la Estacin Biolgica de Rancho Grande
MHNLS: Museo de Historia Natural La Salle
MCZ: MCZ-Harvard University Provider - MCZ Herpetology Collection
 165

ULABG: Coleccin de Anfibios y Reptiles del Laboratorio de Biogeografa de la Universidad de Los

Andes
UMMZ: Museum of Zoology of the University of Michigan
USNM: National Museum of Natural History, Smithsonian Institution - NMNH Vertebrate Zoology Herpetology Collections
___Ausencia de la informacin respectiva en el catlogo de Museo
* nico registro para el Estado Tchira, todos los dems provienen del Estado Mrida.
** En el caso de los muestreos de campo el nmero de individuos se corresponde con el nmero total de ejemplares observados durante este trabajo para la respectiva localidad
*** La informacin no aplica
 166

Anexo 5. Distribucin de Dendropsophus meridensis reportada por la UICN 2006

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 167

Anexo 6. Ubicacin de las lagunas invadidas por rana toro en el Estado Mrida, Venezuela
Laguna Tipo Municipio Altitud (m) UTM Norte UTM Oeste
Agropecuaria Agua Viva 1 Artificial Campo Elas 2.406 955036 238973
Agropecuaria Agua Viva 2 Artificial Campo Elas 2.410 955470 239063
Altos de Casa Vieja 1 Natural Campo Elas 2.362 953393 240128
Altos de Casa Vieja 2 Artificial Campo Elas 2.303 952943 240041
Antes Sr. Beto Natural Campo Elas 2.349 953018 239469
Barrancas RM1 Natural Campo Elas 2.196 952372 240871
Barrancas RM2 Natural Campo Elas 2.178 952193 240896
Barrancas RM3 Natural Campo Elas 2.178 952193 240896
Barrancas RM4 Natural Campo Elas 2.227 952400 240965
Canta Rana Artificial Campo Elas 2.601 953898 238175
Finca El Roco Artificial Campo Elas 2.505 954477 239750
Finca La Colina Artificial Campo Elas 2.326 955970 239151
Finca La Pedregosa Natural Sucre 2.360 952261 237784
Finca la Trinidad Artificial Campo Elas 2.439 953717 241929
Finca Los Grisolias Artificial Campo Elas 2.140 957148 240333
Finca MiraSierra Natural Sucre 2.310 952610 239059
Finca Palo Negro Natural Campo Elas 2.440 954478 239944
Frente a la Finca San Onofre Artificial Campo Elas 2.330 956519 236991
Hacienda la Esmeralda 1 Artificial Campo Elas 2.230 957133 236531
Hacienda La Esmeralda 2 Artificial Campo Elas 2.253 956951 236373
La Granzonera 1 Natural Campo Elas 2.394 954224 239328
La Granzonera 2 Artificial Campo Elas 2.469 954224 239502
La Mesa Natural Campo Elas 1.837 949134 245805
Los Camachos 1 Artificial Sucre 2.358 952798 239079
Los Camachos 2 Natural Sucre 2.343 952765 239150
Los Cinaros Artificial Campo Elas 2.289 952715 240241
Laguna Negra del Pramo el
Tambor Natural Sucre 2.600 952582 236870
Sector La Playa Natural Campo Elas 1.810 949100 240710
Sixto Lobo Artificial Campo Elas 2.092 957790 240002
Sixto Lobo 2 Natural Campo Elas 2.248 956814 239388
Sr. Beto Natural Campo Elas 2.474 954006 239360
Sr. Pascual Artificial Campo Elas 2.361 953534 240052
Villa Juanita Natural Campo Elas 2.388 954161 240638

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Anexo 7. Comparaciones entre pares de medias de la densidad mensual de Dendropsophus

meridensis obtenidas con un prueba de comparaciones mltiples de Bonferroni.
Diferencia entre Error Intervalo de Confianza (95%)
a
(I) Mes (J) Mes medias (I-J) estndar Sig. Lmite inferior Lmite superior
Abril agosto 0,0147 0,0084 0,3242 -0,0090 0,0384
octubre 0,04* 0,0122 0,0359a 0,0023 0,0711
Agosto abril -0,0147 0,0084 0,3242 -0,0384 0,0090
octubre 0,0220 0,0086 0,0790 -0,0022 0,0462
Octubre abril -0,04* 0,0122 0,0359a -0,0711 -0,0023
agosto -0,0220 0,0086 0,0790 -0,0462 0,0022
a
Diferencias significativas para un nivel de 0,05

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 169

Anexo 8.a. Prevalencia y carga promedio de zoosporas de Batrachochytrium dendrobatidis para

diferentes estados de Dendropsophus meridensis.
No de Prevalencia (%) Promedio de zoosporas 1-3
Estado N positivos (95% IC) mg de tejido (95% IC)
Larvas 85 22 26 (17-35) 607
Metamorfos 38 18 47 (31-63) 22.954
Posmetamorfos 13 4 31 (6-56) 23.120
Juveniles 6 2 33 (0-71) 24
Adultos 272 127 47 (41-53) 2.677
Metamorfos: ejemplares entre estados 41 y 46 (Gosner 1960; Duellman y Trueb 1994)
Postmetamorfos: ejemplares recin metamorfoseados(cola casi totalmente reabsorbida)
Juveniles: <30 mm
Adultos: 30,6-40,8 mm

Anexo 8.b. Prevalencia y carga promedio de zoosporas de Batrachochytrium dendrobatidis para

en diferentes estados de Lithobates catesbeianus.

No de Prevalencia (%) Promedio de zoosporas 1-3

Estado N positivos (95% IC) mg de tejido (95% IC)
Larvas 119 99 83 (76-90) 2.677
Metamorfos 38 38 100 (100-100) 3.110
Posmetamorfos 32 29 91 (81-100) 2.845
Juveniles 47 40 85 (75-95) 5.408
Adultos 79 62 79 (70-80) 963
Metamorfos: ejemplares entre estados 41 y 46 (Gosner 1960; Duellman y Trueb 1994)
Posmetamorfos: ejemplares recin metamorfoseados(cola casi totalmente reabsorbida)
Juveniles: <90 mm
Adultos: >90 mm (Govindarajulu et al. 2006; Kaefer et al. 2007)

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Anexo 9. Comparaciones entre pares de medias del numero de zoosporas (1-3 mg de tejido) en
estados de desarrollo de Dendropsophus meridensis y Lithobates catesbeianus obtenidas con un
prueba de comparaciones mltiples de Bonferroni.

Intervalo de Confianza
Diferencia
(I) Estado- Error (95%)
(J) Estado-Especie entre P
Especie estndar Limite Limite
medias (I-J)
inferior superior
Dm Larva Dm metamorfo -2,30387 0,318831 0,000000a -3,35056 -1,25718
Dm postmetamorfo -2,33055 0,545285 0,001064a -4,12067 -0,54044
Dm juvenil 0,30623 0,740896 1,000000 -2,12606 2,73853
Dm adulto -0,30487 0,231664 1,000000 -1,06540 0,45566
Lc larva -0,66976 0,236451 0,217552 -1,44601 0,10649
Lc metamorfo -1,28153 0,268751 0,000114a -2,16382 -0,39925
Lc postmetamorfo -1,22988 0,283630 0,000813a -2,16101 -0,29874
Lc juvenil -1,19584 0,266276 0,000410a -2,07000 -0,32168
Lc adulto -0,73090 0,248949 0,157644 -1,54818 0,08637
Dm metamorfo Dm postmetamorfo -0,02668 0,554527 1,000000 -1,84714 1,79378
Dm juvenil 2,61011 0,747725 0,023911a 0,15540 5,06482
Dm adulto 1,99900 0,252653 0,000000a 1,16957 2,82844
Lc larva 1,63411 0,257050 0,000000a 0,79024 2,47798
Lc metamorfo 1,02234 0,287041 0,018433a 0,08001 1,96467
Lc postmetamorfo 1,07400 0,301017 0,018012a 0,08579 2,06221
Lc juvenil 1,10804 0,284725 0,005190a 0,17331 2,04276
Lc adulto 1,57297 0,268591 0,000000a 0,69121 2,45473
Dm Dm juvenil 2,63679 0,868778 0,114776 -0,21533 5,48890
postmetamorfo
Dm adulto 2,02568 0,509427 0,003692a 0,35329 3,69808
Lc larva 1,66080 0,511622 0,056749 -0,01881 3,34040
Lc metamorfo 1,04902 0,527328 1,000000 -0,68215 2,78019
Lc postmetamorfo 1,10068 0,535064 1,000000 -0,65589 2,85724
Lc juvenil 1,13472 0,526071 1,000000 -0,59232 2,86176
Lc adulto 1,59965 0,517516 0,095585 -0,09931 3,29861
Dm juvenil Dm adulto -0,61110 0,714918 1,000000 -2,95811 1,73590
Lc larva -0,97599 0,716483 1,000000 -3,32814 1,37615
Lc metamorfo -1,58777 0,727782 1,000000 -3,97701 0,80147
Lc postmetamorfo -1,53611 0,733407 1,000000 -3,94381 0,87159
Lc juvenil -1,50207 0,726871 1,000000 -3,88832 0,88418
Lc adulto -1,03714 0,720704 1,000000 -3,40314 1,32887
Dm adulto Lc larva -0,36489 0,134497 0,312074 -0,80643 0,07665
Lc metamorfo -0,97666 0,185492 0,000010a -1,58562 -0,36771
Lc postmetamorfo -0,92501 0,206462 0,000430a -1,60280 -0,24721
Lc juvenil -0,89097 0,181888 0,000062a -1,48809 -0,29385
Lc adulto -0,42603 0,155422 0,286966 -0,93627 0,08420
Lc larva Lc metamorfo -0,61177 0,191438 0,067393 -1,24025 0,01670
Lc postmetamorfo -0,56012 0,211820 0,381801 -1,25550 0,13527
Lc juvenil -0,52608 0,187948 0,240980 -1,14309 0,09094
Lc adulto -0,06115 0,162472 1,000000 -0,59452 0,47223
Lc metamorfo Lc postmetamorfo 0,05166 0,247357 1,000000 -0,76039 0,86371
Lc juvenil 0,08569 0,227250 1,000000 -0,66034 0,83173
Lc adulto 0,55063 0,206676 0,360283 -0,12787 1,22913
Lc postmetamorfo Lc juvenil 0,03404 0,244666 1,000000 -0,76918 0,83725
Lc adulto 0,49897 0,225686 1,000000 -0,24193 1,23988
Lc juvenil Lc adulto 0,46493 0,203447 1,000000 -0,20296 1,13283
Dm: Dendropsohus meridensis
Lc: Lithobates catesbeianus
a
Diferencias significativas para un nivel de 0,05

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Anexo 10. Prevalencia e intensidad de infeccin de Batrachochytrium dendrobatidis en

Dendropsophus meridensis y Lithobates catesbeianus para diferentes lagunas muestreadas
durante el 2006, en la regin Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
Febrero Abril Agosto Octubre
P (%) P (%) P (%) P (%)
Laguna P n (95% IC) Z P n (95% IC) Z P n (95% IC) Z P n (95% IC) Z
D. meridensis
1 14 1 3 47 1 2 59 2 35 173
259 746 157
Antes del Sr. Beto 2 4 (0-32) 4 0 (29-65) 6 7 (40-78) 7 0 (14-56) 7
Frente a San 1 3 47 1 2 40 1 2 80 229
965 366
Onofre 6 4 (30-64) 0 5 (21-59) 6 0 (62-98) 74
1 1 86 7357 1 36 43
Mistaj 2 4 (68-104) 4 1 (8-64)
1 30 5038
El Roco 3 0 (2-58) 9

1 67 1493 2 5 27
la Esmeralda 8 2 (40-94) 1 1 1 (4-14)
1 31 11
La Granzonera 4 3 (6-56)

L. catesbeianus
1 82 294
Sr. Beto 9 1 (59-100) 8
1 67 168
Camachos 2 8 2 (40-94) 5
100
708
1 1 (100-
7
Camachos 1 4 4 100)
100
246 196 319
1 2 78 2 2 79 805 3 3 (100- 2 2 93
3 7 4
Canta Rana 8 3 (61-95) 2 8 (64-94) 0 0 100) 6 8 (84-102)
1 90 1 1 100 114
514
Villa Juanita 9 0 (71-100) 0 0 (100-100) 76
P: nmero de diagnsticos positivos
Z: promedio de zoosporas 1-3mg de tejido (95% IC)

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 172

CURRICULUM VITAE
Nombre: Dinora Snchez.
Lugar y fecha de nacimiento: Maracay, 15 de agosto de 1978.
Nacionalidad: Venezolana.

Estudios Realizados
Ingeniera Agronoma (septiembre 1994- enero 2001): Facultad de Agronoma, Universidad
Central de Venezuela, Maracay, Venezuela.

Cargos desempeados
Estudiante Graduado, Doctorado en Ciencias, mecin Ecologa (septiembre 2002- octubre 2012),
Centro de Ecologa, Instituto Venezolano de Investigaciones Cientficas (IVIC). Tutor:
Margarita Lampo.
Profesional universitario I, empleada fija (diciembre 2009-julio de 2012): Oficina Nacional de
Diversidad Biolgica, Ministerio del Poder Popular para el Ambiente.
Asesor experto, contratada (septiembre 2008-junio de 2009): Oficina Nacional de Diversidad
Biolgica, Ministerio del Poder Popular para el Ambiente.
Profesora de Ecologa Agrcola, contratada (enero 2002 a julio 2002): Facultad de Agronoma,
Universidad Central de Venezuela.

Campo en que ha trabajado y/o publicado

Investigacin en Ecologa

Honores y Distinciones
Categora Nivel I del Programa de Promocin del Investigador (2009-2010). Ministerio de
Ciencia y Tecnologa.
Reconocimiento Orden Jos Flix Ribas en su primera clase en la categora de rea Cientfica
y de Investigacin (febrero 2008). Ministerio de Educacin, Venezuela.
Categora Candidato del Programa de Promocin del Investigador (2006-2008). Ministerio de
Ciencia y Tecnologa.
Reconocimiento Orden Jos Flix Ribas en su tercera clase en la categora de Investigacin
(febrero 2005). Ministerio de Salud y Desarrollo Social, Venezuela.
Beca de Excelencia (abril 2004 septiembre 2007). Instituto Venezolano de Investigaciones
Cientficas, Venezuela.

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