Biotecnologa enzimtica

Introduccin

EIB-410 Biotecnologa de procesos

Valparaso, Octubre 2014

Introduccin
 Que son las enzimas?
Un poquito de historia

El termino enzima significa literalmente dentro de una

levadura y fue acuado a finales del siglo XIX por Khne.
 Que son las enzimas
En ese entonces, una de las mayores
controversias, era si los procesos de
fermentacin desarrollados por las
levaduras eran separables de una
clula viva. Es decir, si podan ser
llevados a cabo sin la necesidad de
una fuerza vital. En 1896, Bucher
demostr que es posible llevar a cabo
la fermentacin alcohlica empleando
un extracto de levaduras. Los
compuestos celulares responsables de
la transformacin de las azcares en
alcohol fueron denominados enzimas.
 Que son las enzimas?

Las enzimas son catalizadores biolgicos, que permiten que

las reacciones qumicas del metabolismo ocurran a una
velocidad significativa en condiciones ambientales suaves
compatibles con la viabilidad celular.

Sin las enzimas los procesos

biolgicos seran tan lentos que
las clulas no podran existir.
Ejemplo: ciclo de krebs
 Que son las enzimas?

Las enzimas son catalizadores de naturaleza proteca y,

aunque muchas contienen otro tipo de molculas en su
estructura, su funcionalidad radica siempre en la porcin
proteca.

Es importante destacar, que las enzimas pueden actuar

tanto dentro de la clula como fuera de sta. Ello, constituye
una de las bases de biotecnologa de las enzimas.
 Antes de continuar:
Qu es un catalizador?

Un catalizador acelera la velocidad de una reaccin, sin

embargo no altera su rendimiento ni equilibrio. Es decir, un
catalizador no hace posible una reaccin y ni cambia su
resultado slo la acelera.

Sin catalizador

A Con catalizador
B
Como funciona un
catalizador?
 Descomposicin del
agua oxigenada
La catalasa fue una de las primeras enzimas en ser estudiadas y
es la responsable de la descomposicin del agua oxigenada
(H2O2) generada en algunos procesos celulares. El H2O2 es
altamente txico, por lo que debe ser degradada rpidamente.

Reaccin Catalizador Temperatura Energa de

(C) activacin
(Kcal/mol)
Descomposicin Ninguno 20 18
de H2O2 Fe2+ 22 10
Catalasa 22 1.7
 Como funcionan las
Enzimas?
Las enzimas se unen a los reactivos
(sustratos) reduciendo la energa de
activacin

Cada enzima tiene una forma nica

con un sitio o centro activo en el que
se une al sustrato

Despus de la reaccin, enzimas y

productos se separan.

Las molculas enzimticas no han

cambiado despus de participar en la
reaccin.
 Enzimas v/s catalizadores qumicos
En general, la enzimas con respecto de los catalizadores
qumicos poseen las siguientes ventajas y desventajas:

Ventajas Desventajas

Alta especificidad Alta complejidad molecular

Alta actividad en cond. moderadas Altos costos de produccin

Alto nmero de recambio Fragilidad intrnseca

Generalmente considerado como natural Baja afinidad por sustratos
no naturales
Biodegradables Requerimiento de cofactores
Ventajas regulatorias
Enzimas en procesos industriales

Innovacin y desarrollo

El uso de enzimas con propsitos tecnolgicos presupone

hacer de estos catalizadores fisiolgicos catalizadores de
proceso. Es as, que para superar sus desventajas existen
diversas estrategias que veremos durante este modulo.
Mercado y aplicaciones de las
enzimas
 Mercado de las enzimas
El mercado de las enzimas se estim en 1900 MMUSD en 2012, lo
cual representa un 7% de crecimiento respecto 2011. Los
principales sectores productivos en los que participan las
enzimas son los siguientes:

Fuente: Novozymes, 2012

 Mercado de las enzimas

El mercado de las enzimas de uso domestico creci en un 14 %

el ao pasado, principalmente impulsado por las enzimas de uso
en detergentes.

El mercado de las enzimas de uso en alimentos creci en un 5 %

el ao pasado, principalmente impulsado por las enzimas de uso
en alimentos saludables. El mercado de asociado al almidn y
panadera se mantuvo, mientras que el de las bebidas
alcohlicas decay ligeramente.

Fuente: Novozymes, 2012

 Mercado de las enzimas
El mercado de las enzimas de uso en bioenerga, decay un 2%
debido al descenso en la produccin de Bioetanol en Estados
Unidos.

El mercado de las enzimas de uso en alimentacin animal

creci un 7%, principalmente en LA, Asia y Europa donde
aumento el uso de fitasas, hemicelulasas y pectinasas (estas
enzimas mejoran la absorcin de nutrientes en animales y
disminuyen los desechos generados en los criaderos). El
mercado de las enzimas tcnicas, incluyendo la industria textil,
disminuy ligeramente.

Conclusin: las enzimas participan

en una gran variedad de sectores
productivos.
Fuente: Novozymes, 2012
Mercado de las enzimas

Conclusin: las enzimas participan

en una gran variedad de sectores
productivos.
Fuente: Novozymes, 2012 1DKK= 0.18 USD
Aplicacin Industrial

Fuente: Kirk et al., 2002. Current Opinion in Biotechnology. 13:345351

Aplicacin Industrial

Fuente: Kirk et al., 2002. Current Opinion in Biotechnology. 13:345351

 Principales productores
de enzimas
Novozymes, Dinamarca

Enzyme Development
Corporation (EDC), Estados Unidos

Amano Enzyme Inc, Japn

DuPont ( Estados Unidos)

DSM (Paises bajos)

Estructura y funcionalidad de las
enzimas
Enzimas Cadenas de
Protena aminocidos

Biocatalizador

Aumenta la velocidad de una reaccin

qumica
 Estructuras de las protenas
Las unidades estructurales de las protenas son los aminocidos.

Grupo Grupo
amino carboxlico

Grupo
carboxlico

Por hidrlisis de protenas se han identificado 20 aminocidos,

an cuando se conocen ms de 80. Estos 20 aminocidos suelen
denominarse naturales.
Aminocidos naturales.
 Estructuras de las protenas
Las protenas poseen distintos
niveles estructurales. El
resultado inmediato de la
sntesis proteica, es lo que se Extremo amino
denomina estructura primaria,
es decir, la secuencia lineal y
ordenada de aminocidos
(aa).
aminocidos

Los aminoacdos se unen va

enlace peptdico.
 Estructuras de las protenas

Las caractersticas fsico-

qumicas de los grupos laterales
de los aminocidos que forman la
estructura primaria, propician
que stos adopten mltiples
conformaciones tridimensionales.
El plegamiento local entre
residuos aminoacdicos cercanos
da como resultado la estructura
secundaria.

-helice hoja -plegada

 Estructuras de las protenas

El modo en que la cadena

polipeptdica se pliega en el
espacio se denomina
estructura terciaria.
Estructuras de las protenas

Muchas protenas consisten de una

sola cadena polipeptdica, debido a
esto se les denomina
protenas monomricas. Sin embargo,
otras protenas estn formadas por dos
o ms cadenas polipeptdicas. La
asociacin u oligomerizacin de
difirentes monmeros rinde la estructura
cuaternaria.
 Sntesis de protenas
Los polipptidos se sintetizan en los organelos
citoplasmticos llamados ribosomas.
 Sntesis de protenas
La seleccin de cul aminocido se integra en un punto dado
de la cadena, est determinada por el mensaje gentico
transportado desde los cromosomas por medio de los cidos
ribonucleicos (ARN).

Una vez terminada la cadena, el polipptido se libera al

citoplasma donde adquiere su estructura tridimensional propia.
Propiedades de las Enzimas
Las propiedades funcionales de una enzima dependen de su
estructura terciaria y/o cuaternaria. Estas les confieren su:

Capacidad Cataltica de las enzimas.

Especificidad de la enzima por el sustrato.
Estabilidad operacional

Son caractersticas propias de cada enzima

 Capacidad Cataltica de las enzimas
La capacidad cataltica de una enzima se caracteriza por la
formacin de uno o ms complejos enzima-sustrato de
transicin, los que permiten reducir la energa de activacin de
la reaccin con respecto a la va no catalizada.
 Capacidad Cataltica de las enzimas

La funcin cataltica de las enzimas

puede ser explicada mediante dos
mecanismos bsicos.
 El sitio activo
La capacidad cataltica de una enzima reside en su sitio
activo el cual esta formado por un pequeo nmero de
aminocidos. El sitio activo es donde el sustrato se une y es
qumicamente transformado
 Especificidad
La mayor parte de las enzima es muy especifica tanto por el
tipo de reaccin catalizada (especificidad de accin) como
por los compuestos que emplean como reactantes
(especificidad por sustrato). Esto puede ser explicado por las
caractersticas del sitio activo que permiten:

Complementariedad geomtrica y de cargas

inicas e interacciones hidrofbicas.
Ambientacin y orientacin de los sustratos
Exclusin de agua
Transferencia de grupos
 Cofactores y Coenzimas

Algunas enzimas necesitan la participacin activa de otras

molculas no proteicas, denominadas cofactores o
coenzimas, para cumplir su funcin. Casi un tercio de las
enzimas conocidas requieren algn cofactores o coenzima.

Los cofactores son iones inorgnicos como el Fe++, Mg++,

Mn++, Zn++, etc; mientras que las coenzima son molculas
orgnicas (NAD, FAD, etc.).
 Cofactores y Coenzimas
Las coenzimas suelen estar asociados libremente a la enzima,
adquiriendo durante el proceso cataltico un rol
estequimetrico en relacin al sustrato transformado.

Por su parte, los cofactores suelen fuertemente ligados a la

estructura de la enzima, adquiriendo un rol cataltico al igual
que ella.

Cuando los cofactores y las coenzimas

se encuentran unidos covalentemente
a la enzima se llaman grupos
prostticos.
1. Sin requerimientos de
cofactores

2. Requerimiento de
cofactor ligado.

3. Requerimiento
estequiomtricos de
coenzima.
Selectividad

Algunas veces las condiciones de reaccin propician la aparicin

de reacciones paralelas, con lo cual se generan dos o ms productos
durante la reaccin. Sin embargo, suele suceder que slo uno de los
productos es el de inters. Dado que, las enzimas poseen una elevada
selectividad, stas permiten la obtencin preferente de uno de los
productos.
Selectividad
Estabilidad de las enzimas

La configuracin terciaria o cuaternaria nativa de una enzima es

la resultante de muchas fuerzas de interaccin. Los cambios
ambientales, incluso aquellos suaves, pueden alterar estas
interacciones, modificando la estructura tridimensional de la
enzima, provocando la perdida total o parcial de su
funcionalidad biolgica.
La desnaturalizacin es la perdida de la estructura tridimensional
de la enzima
Clasificacin de las enzimas
Actualmente, miles de enzimas han sido aisladas y
clasificadas de acuerdo con la reaccin especfica que
catalizan.

En funcin de su accin cataltica especfica, las enzimas

se clasifican en 6 grandes grupos o clases:

Clase 1: Oxidorreductasas
Clase 2: Transferasas
Clase 3: Hidrolasas
Clase 4: Liasas
Clase 5: Isomerasas
Clase 6: Ligasas
Clasificacin enzimas
Clasificacin de las enzimas

Hidrolasas
3%
Oxidoreductasas
17%
Isomerasas 6% 44%

Liasas
30%
Isomerasas
Fuentes de enzimas
Las enzimas segn su fuente pueden clasificarse en:

Enzimas de origen animal (8%)

Enzimas de origen vegetal (4%)

Enzimas de origen microbiano

( 50% hongos y levaduras, 33 % bacterias)
Microorganismos como fuentes
de enzimas
Crecimiento exponencial
Independencia de las condiciones ambientales
Nutricin sencilla y econmica
Bajo requerimiento de terreno
Alto grado de control sobre el proceso
Mayor flexibilidad gentica, etc.

Produccin a gran escala y bajo costo.

Produccin de enzimas

Comercialmente una enzima es un preparado

que, adems de la enzima de inters contiene
cantidades variables de materia proteica y
no proteica, excipientes y persevantes.

Purificar es costoso, por lo tanto slo se remueve

contaminantes que interfieren con el uso del
preparado enzimtico.
Produccin de enzimas
 Produccin de enzimas
Fermentacin

rganos animales Plantas Microorganismos

Molienda Enzima intracelular Enzima extracelular

Extraccin Disrupcin

Filtracin
Concentracin

Purificacin

Acabado

Secado

Producto final
Procesos enzimticos
industriales
Hidrlisis de la lactosa
El inters en este proceso se debe a que una parte significativa
de la poblacin mundial sufre de malestares asociados al
consumo de lactosa. Ello es debido, a que no poseen a nivel
intestinal la enzima necesaria para degradarla (hidrolizarla).
Por esto, se han diseados productos lcteos a los cuales se
les ha adicionado -galactosidas (lactsasas) para hidrolizar la
lactosa presente en ellos.

La lactosa (azcar de la leche) es un

disacrido formado por una molcula de
glucosa y galactosa.
 Sntesis de Antibiticos -
lactamicos

Los antibiticos son sustancias qumicas producida por un ser

vivo o derivadas por va sinttica capaces de inhibir los
procesos vitales de otro microorganismo.

Los antibiticos betalactmicos son

aquellos que contienen un anillo -
lactmico en su estructura molecular.
Estos incluyen la penicilina, ampicilina,
cefalosporinas, entre otros.
Sntesis de Antibiticos -
lactamicos
Produccin de Biodiesel
Produccin de Biodiesel

Aceite + Alcohol Glicerol Biodiesel

Produccin de bioetanol