Universidad Rural de Guatemala

Ingeniera Agroindustrial
Escuintla Sede: 18
Elmer Arsenio Donis Santos - No. De Carn: 150180304
5to. Semestre 2017
Ing. Filiberto Castillo Monterroso

Microbiologa

Escuintla 20 de mayo de 2017

Microbiologa:
Bsica, ambiental y agrcola
 INDICE

DEFINICION DE LA MICROBIOLOGIA

1. Mundo Microbiano. -Definicin de la Microbiologa.

- Reino Protista.

2. Omnipresencia de Microorganismos

3. Estructura celular:

4. Principales grupos bacterianos:

5. Coloracin para poner de manifiesto la omnipresencia de microorganismos.

GENTICA

1. Gentica Microbiana. .

2. Metabolismo Microbiano

2.1 Principios generales.

2.2. Enzimas

2.3. Catabolismo.

2.4. Vas singulares para la generacin de intermedios claves.

CRECIMIENTO Y MUERTE DE LOS MICROORGANISMO.

1. Crecimiento y muerte de los microorganismos.

2. Resistencia a los agentes antimicrobianos.

MICROBIOLOGIA DEL AMBIENTE

1. Microbiologa del agua.

2. Microbiologa del aire.
3. Microbiologa de alimentos (frutas y vegetales.
4. Microbiologa del suelo.
5. Microbiologa de superficies.
6. Pruebas de esterilidad: autoclave.
7. Nociones de Preparacin de medios de cultivo caractersticas culturales y coloniales.

METODOLOGA PARA EL DESARROLLO DEL CURSO.

1. Momentos presenciales:
1.1. Clases Magistrales.
1.2. Dinmica de grupo por los alumnos.
1.2. Proyeccin de material didctico: acetatos, etc.

2. Autoaprendizaje:
2.1. Lectura dirigidas y discusiones en grupo.

3. Laboratorio y prcticas:
3.1. Hojas de trabajo.
3.2. Elaboracin de un manual de laboratorio.
3.3. Laboratorios.
 Introduccin
La microbiologa es el estudio de los microorganismos, de su biologa, su ecologa y, en
nuestro caso, sus aplicaciones. Esta definicin hace necesaria la de tres conceptos que
se incluyen en ella: microorganismo, biologa y ecologa. Por otra parte, en el caso de
la microbiologa de alimentos la expresin "aplicacin de los microorganismos" tambin
debe ser aclarada.

Por microorganismo entendemos cualquier organismo vivo que no sea visible a simple
vista. Esta definicin operativa queda desbordada cuando se comprueba que
organismos estructuralmente similares a los que slo son observables a simple vista,
pueden tener tamaos macroscpicos. As, los hongos, tanto los inferiores como los
superiores, tienen una estructura similar a la de otros individuos microscpicos y por
ello se estudian, para ciertos aspectos, dentro de la microbiologa. Por otra parte,
organismos pluricelulares pueden ser de tamao tan pequeo que entren dentro de la
definicin anterior sin dejar por ello de ser estructuralmente tan complejos como
cualquier animal superior.

En nuestro curso nos centraremos principalmente en bacterias y haremos una pequea

referencia a virus y a hongos sin tratar ningn aspecto relacionado con
microorganismos animales.

Dentro de la biologa de los microorganismos que estudiaremos haremos especial

hincapi en tres aspectos: su estructura, su metabolismo y su gentica. La estructura
de los microorganismos condiciona de forma muy importante su metabolismo. El
metabolismo es el conjunto de reacciones de utilizacin de los alimentos y de
produccin de energa que permiten a los microorganismos crecer, multiplicarse y,
como consecuencia, alterar el ambiente en el que se encuentran. La gentica nos
permitir conocer el proceso por el que la informacin que permite el desarrollo de un
microorganismo con una morfologa y un metabolismo determinado.
 Objetivos
La Microbiologa es una ciencia bsica que requiere un enfoque eminentemente
aplicado, ya que constituye la base de conocimiento para diferentes actividades, por
ejemplo: caracterizar las enfermedades infecciosas, sus mecanismos de patogenicidad;
entender el fundamento del tratamiento teraputico, de la higiene y tecnologa de los
alimentos, de las aplicaciones industriales y ambientales de los microorganismos, etc.
Por todo ello, teniendo en cuenta la anterior premisa, los objetivos fundamentales son
los siguientes:
- adquirir un concepto claro de los diferentes grupos microbianos.
- conocer la estructura y ultraestructura de los mismos.
- conocer la biologa de los microorganismos: su multiplicacin; fisiologa; mecanismos
genticos; taxonoma; sensibilidad a los agentes fsico-qumicos; poder patgeno
- estudiar sus actividades en la naturaleza con objeto de aplicarlas para su
aprovechamiento y a nivel industrial.

En cuanto a la formacin prctica, sta estar estrechamente relacionada con la

formacin terica, siendo los objetivos imprescindibles:
- familiarizarse con los distintos instrumentos y tcnicas que se utilizan para el
conocimiento de esta ciencia: la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad
prctica; el manejo de los instrumentos y tcnicas ms utilizados en la prctica rutinaria
en Microbiologa; los mtodos de cultivo, aislamiento, identificacin y conservacin de
los microorganismos; las tcnicas aplicables al diagnstico microbiolgico.
 1 Introduccin a la Microbiologa
LaMicrobiologaeslacienciaqueestudiaalosmicroorga-
nismos que constituyen un importante grupo de organis-
mosprimitivosysimples,lamayoraunicelularesmicrosc-
picos y otros macroscpicos filamentosos o cenocticos,
capacesderealizarinnumerablesprocesosbiolgicos,que
han surgido muy temprano en la evolucin, pero que se
han adaptado a las condiciones ambientalesactuales.
El grupo est integrado por las bacterias, algas, hongos,
protozoos (figura 1).
Los virus no se consideran microorganismos en sentido
estricto, ya que no poseen estructura celular, presentan
una sola molcula de cido nucleico, carecen de activi-
dad metablica (excepto la enzima lisozima) y son inca-
Figura 1- Bacterias, hongos, algas y protozoos
paces de reproducirse por s mismos. Se les denomina:
entidades biolgicas.
La Microbiologa estudia:
i) clulas vivas y sufuncionamiento
ii) los microorganismos, importante grupo capaz de
existenciaindependiente
iii) diversidad microbiana yevolucin
iv) funciones en la biosfera, en nuestro organismo, en el
de los vegetales yanimales
Elcuadro1presentalaclsicadivisindeladisciplinaen
Microbiologa General y Microbiologa Aplicada y el cua-
dro2resumealgunosdelosefectosdelosmicroorganis- mos
en las actividadeshumanas.
 Cuadro 1- Aspectos que estudia la Microbiologa
Microbiologa general: herramienta para la compren-
sin de principios metablicos generales, gentica, di-
visin celular.
Estudia: los microorganismos, su estructura, fisiologa,
clasificacin, diversidad, procesos bioqumicos, creci-
miento y su control
Microbiologa aplicada: relacionada a problemas de
la medicina, ambiente, industria, produccin y con-
servacin de alimentos, transformaciones de la ma-
teria orgnica y mineral en ecosistemas naturales,
generacin de energa, proteccin del ambiente, bio-
tecnologa
Los organismos cumplen con los 5 principios caracters-
ticos de las clulas vivas:
1. autoalimentacin o nutricin: las clulas toman las
sustancias qumicas del ambiente, las transforman, libe-
ran energa y productos dedesecho.
2. autoduplicacin o desarrollo: las clulas son capa-
cesdedirigirsupropiasntesis.Alcrecer,sedividendan-
dodosclulascadaunaidnticaalaoriginal.
3. diferenciacin: la mayor parte de las clulas pueden
presentar cambios en su forma o funcin. La diferencia-
cin suele ser parte del ciclo de vida celular: se forman
estructuras especializadas comprometidas con la repro-
duccin sexual, la dispersin, la sobrevivencia en condi-
ciones desfavorables (esporas,cistos,etc).
4. sealamiento qumico: interactan o se comunican
con otras clulas, por sealesqumicas
5. evolucin: es la introduccin de cambios heredita-
rios como resultado de la seleccin natural. Consecuen-
ciadeestoscambios(queocurrenavelocidadbajapero
regular en todas las clulas) es la seleccin de los orga-
nismos mejor capacitados para vivir en determinado
ambiente.
Los estudios con el microscopio electrnico permitieron
reconocer diferencias en la organizacin subcelular de los
Cuadro 2- Impacto de los microorganismos
en la actividad humana
Como agentes causantes de enfermedades
Lamayoradelosmicroorganismosestnbajocontrol.
Sinembargo,enciertascondicioneslasenfermedades
microbianasconstituyencausademorbilidadymuerte
Benficos: productores de antibiticos (100ton/ao)
En la agricultura
Fijacin biolgica del N2 (175 millones toneladas
N/ao)
Transformaciones de elementos: C, N. S, P, K, etc.
Actividades microbianas en el rumen
Enfermedadesdeplantas(hongos,bacterias)ysuCon-
trolBiolgico
Energa y proteccin del ambiente
Biocombustibles: etanol, H2, metano
Polmeros biodegradables: polialcanos (OH-butirato)
Recuperacin de minerales de suelos de minas
Alimentos
Conservacin de alimentos (fermentaciones cidas)
Fermentaciones lctica y alcohlica
Biotecnologa
Organismos genticamente modificados de inters
Produccin de compuestos farmacuticos
Herramientas para la transferencia de genes (seleccio-
nados o creados)
organismos y confirmar la existencia de dos tipos de clu-
las:laeucaritica,unidadestructuraldeanimales,vegeta-
les, protozoos, hongos y algas y la procaritica, caracte-
rsticadelosorganismosmssimples,lasbacterias,inclu-
yendo entre stas a las cianobacterias (figura2).
Apesardelaextraordinariadiversidaddeclulaseucari-
ticas, resultante de la especializacin evolutiva de los dis-
tintos grupos, su arquitectura bsica es comn: comparti-
mentalizacinporsistemasmembranosos(REyGolgi),co-
rrientes citoplasmticas, mitocondrias y cloroplastos. El
ncleo de los eucariotes est rodeado por unamembrana
nuclear, contiene varias molculas de ADN y se divide por
mitosis o por una completa reproduccin sexual, que in-
cluye fusin de clulas, formacin de zigote diploide y se-
gregacin de clulas haploides luego de la meiosis.
citoplasma 0.5m
clula
eucariota
clula
ncleo
procariota
organelos
Figura 2- Relaciones entre las clulas procariotas
y las eucariotas
La clula procariota, por el contrario, no posee membrana
nuclear,poseeunasolamolculadeADNyladivisinasexual es
por biparticin, amittica. La clula no est atravesada por
membranas, no posee organelos, excepto sacos muy
simplesquealberguenalospigmentosfotosintticosyave- ces
vesculas de gas para flotar en elagua.
Losestudiosaniveldefuncionescelularesmostraronque
estasdiferenciasestructuralessonlaexpresindemeca-
nismos diferentesde:
transmisin de la informacingentica
tipos de metabolismobioenergtico
procesos de entrada y salida desustancias
Uno de los hechos ms sorprendentes en la historia de la
evolucindebesersindudalaaparicindelaprimeraclu- la
eucaritica. Se est lejos de comprender las causas de
este gran salto en la evolucin, sobre todo por la escasez
de fsiles, que permitan reconocerintermediarios.
Ya desde la segunda mitad del siglo XIX se vislumbraban
diferencias entre animales y vegetales con los organismos
mssimples,comolasbacterias,hongos,algasyprotozoos.
ElzologoalemnHaeckelpropusoen1886incluiraes- tos
ltimos organismos en un nuevo reino, el de los Pro-
tistas:integradopororganismosmuysimples,lamayora
unicelulares, microscpicos, y otros macroscpicos fila-
mentosos o cenocticos (tubos con paredes rgidas con
citoplasma y ncleos que fluyen libremente), conocidos
vulgarmente comomicroorganismos.
Nosediferencianentejidosnirganos,nipresentanespe-
cializacinfuncional,excepto,talvez,paralareproduccin.
Luegodelaevidenciadelaexistenciadelosdostiposde
clulas, el reino de los protistas se dividien:
Protistasinferiores,conclulaprocariota,queincluyea
lasbacterias,conlascianobacteriasyactinomicetesy
Protistassuperiores,conestructuraeucariota,quecom-
prende a las algas, protozoos yhongos.
Alosviruslesfaltanmuchosdelosatributosdelasclu-
lasentreloscualeselmsimportanteesquenosonsis- temas
abiertos dinmicos. Una partcula viral es una es-
tructura esttica, incapaz de cambiar o reponer sus par-
tes.Carecendeorganizacincelular,decapacidadmeta-
blica y de autoduplicacin, no se los considera microor-
ganismos,sinoentidadesbiolgicasyserntratadosen
elcaptulodegenticadeprocariotas,porelrolqueejer- cen
en la transferencia de materialgentico.
Evolucin y diversidad microbiana
Se calcula que nuestro planeta tiene una antigedad de
4.600 millones de aos y se han descubierto restos fsi-
lesdeclulasbacterianasdeunos3.500a3.800millones
deaos,porloqueseinfierequelavidaprocariotasurgi poco
despus del enfriamientoterrestre.
Se postula a un hongo hemiascomicete como el primer
organismoeucariota,quefueadquiriendolos22caracte- res
universalmente presentes en los eucariotas yausen-
tes en los procariotas, originado a partir de una bacteria
aerobia. Esta hiptesis se contradice con la creencia ge-
neral de que este organismo primitivo fuera una ciano-
bacteria. Estas bacterias y la fotosntesis productora de
oxgenosedesarrollaronprobablementehaceunos2.500 a
3.000 millones de aos. La diversidad microbiana au-
ment en forma notable luego de la aparicin delO2.
Lafigura3muestraunesquemadelaevolucindelmun- do
vivo basado en la estructura del ARN de los riboso-
mas.Desdeelpuntodevistaevolutivolosorganismosse
pueden dividir en tres grupos principales: arqueobacte-
rias, eubacterias yeucariotas.
Plantas
Animales
Arqueobacterias Eucariotas Eubacterias
Ancestro universal
Origen de la vida
Figura 3- Evolucin del mundo vivo basada en la
estructura del ARN de los ribosomas
Aunquelaseubacteriasylasarqueobacteriassonproca-
riotas, desde un punto de vista evolutivo no estn ms
estrechamente relacionadas entre si como lo estn con
loseucariotas.
Las arqueobacterias (Archaeae) comprenden un grupo
muy primitivo que incluye organismos halfitos y termfi-
losextremos.Entreellasseencuentranlasbacteriasme-
tanognicas, anaerobiasestrictas.
Pareceraquelostresgruposbacterianossurgierontem-
prano en la historia de la tierra a partir de un organismo
primitivo comn, el ancestrouniversal.
Debidoaquelasclulasdelosanimalesydelasplantas son
eucariotas, se ha considerado en forma general que han
derivado de algn tipo de microorganismo, en tanto
quelosprocariotasrepresentanunaramaquenuncasu-
per la etapamicrobiana.
LosestudiossobrelassecuenciasdelARNribosomalen
clulas procariotas sugiere una separacin temprana de
estos organismos. La figura 4 (Madigan et al., 2000)pre-
sentaelarreglosegnestoscriteriosbasadosenlaorga-
nizacin gentica. El rbol filogentico se divide en tres
ramas principales: Bacteria, Archaea y Eucarya. Las ar-
queobacterias y las bacterias fueron las primeras en di-
verger y luego se desarrollaron los organismos eucario-
tas.Estostresgruposprimariossedenominandominios o
imperios y se ubican por encima del nivel de los reinos
clsicos.
Losorganismoseucariotaspresentanlpidosconacildis-
teresdelglicerolyARNribosomaleucariotaypertenecen a
Eucarya. El dominio Bacteria (Eubacteria) presenta or-
ganismosconclulasprocariotasconlpidosdemembra- na
con diacil dister de glicerol, mientras que los proca-
riotas cuyas membranas estn compuestas por lpidos
isoprenoidesdeltipoditerdediglicerolotetraterdedi-
glecerol y ARNr arqueobacteriano comprenden el tercer
dominio, Archaea, que incluye a organismos termfilos,
anaerobios yacidfilos.
Parece probable que las clulas eucariotas modernas se
originaronapartirdelasprocariotashaceunos1.400millo-
nesdeaos.Losmecanismosnoestnaundilucidados.
Unadelahiptesiseslaendosimbitica,quepiensaque la
clula eucariota ancestral se pudo formar por la fusin de
antiguas eubacterias y arqueobacterias. Muchos auto- res
consideran que Archaea y Eucarya estn ms relacio-
nadosdelosquepareceyproponenquelalneaeucariota
surgideArchaeayluegoseformelncleo,posiblemen-
teapartirdelaparatodeGolgi.Lasmitocondriasylosclo-
roplastos parecen haber surgido conposterioridad.
El eucariota ancestral fermentador de vida libre con su
ncleoestablecirelacionessimbiticaspermanentescon
bacterias fotosintticas (cianobacterias) que evoluciona-
ron hacia los cloroplastos. Eubacterias con respiracin
aerobia(Agrobacterium,Rhizobium,rickettsias)seranlos
antecesores de lasmipocondrias.
Esta teora endosimbitica ha sido avalada por el hallaz-
go de una cianobacteria endosimbitica en un protozoo
diflagelado y que acta como su cloroplasto.
 Bacteria Archaea Eukarya

Animales
Entamebas Hongos
Bacterias verdes
Euriarqueotas mucosos
no sulfurosas
Hongos
Mitocondria
Crenarqueotas
Bacterias Methano- Methanosarcina Halfilos Plantas
bacterium
Bacterias rojas gram- Thermoproteus extremos
positivas Methano- Ciliados
Cloroplastos Pyrodictium coccus Thermoplasma
Cianobacterias Thermococcus
Flavobacterias Flagelados
Korarqueotas Methanopyrus
Tricomnadas

Thermotoga

Aquifex Microsporidios
Diplomnadas
(Giardia)

Figura 4- Bacteria, Archae y Eukarya

Esposiblequenuevosdatosayudenadilucidarestepro- Como las bacterias presentan aproximadamente un di-

cesoevolutivo. metrode1m,conlosmicroscopiospticosslosepue-
denapreciarlaformageneralylascaractersticasmorfo-
lgicas principales, pero no se aprecian estructuras sub-
Tcnicas de estudio de losmicroorganismos
celulares.
Lamayorlimitacinenelestudiodelosmicroorganismos lo
Se emplean tambin microscopios de contraste de fa-
constituye su pequeo tamao, la falta de fsiles y la
ses y los fluorescentes, que permiten distinguir estruc-
dificultad de muchos de los microorganismos para ser
turas en base al empleo de colorantes fluorescentes,
cultivadosenellaboratorio.Sinembargo,losavancesen los
como el naranja de acridina, diacetato de fluorescena
ltimos 100 aos fueron enormes y el cuadro 3 resu- me
etc. Muchos de ellos se consideran colorantes vitales,
algunos de los eventos msimportantes.
ya que fluorescen en luz ultravioleta luego de ser em-
pleados por enzimas celulares.
Microscopa
El microscopio marc un hito en los estudios, ya que
La estructura interna detallada de los microorganismos
hay que considerar que el ojo desnudo aprecia como
independientes a dos puntos separados por 0,1mm (po- fue visible con el microscopio electrnico, desarrollado a
der separador) y el mejor microscopio ptico presenta partir de la dcada del 30 del siglo XX y que presenta un
poder separador aproximadamente 1000 veces superior
un lmite de resolucin de 0,2 m y un aumento mximo
al del microscopio ptico y puede distinguir puntos sepa-
de 1.500-2000X, que resulta de multiplicar el aumento
radospor0,5nm(aumentoeficaz100.000X).Seemplean
del ocular (10-20X) por el del objetivo (5, 10, 20 aumen-
losmicroscopioselectrnicosdetransmisinydebarrido
tos, los comunes y x 100, el objetivo de inmersin en
aceite). (figura5).

Figura 5- Microscpica electrnica.
Izquierda: Rhizobium observado con microscopio electrnico
de transmisin, se aprecia la membrana y la pared celular , la
regin nuclear y gotas lipdicas (materiales de reserva).
Derecha: micrografa de Lactobacillus spp. con microscopa
electrnica de barrido.
El primero permite visualizar estructuras dentro de la c-
lula, as como caractersticas de la membrana y pared
celular, por la diferencia de densidades al ser atravesa-
das por un flujo acelerado de electrones. El de barrido
muestraelrelievedesuperficiescelularesyaqueloselec-
tronessereflejanluegodechocarconunasuperficieme-
tlica que recubre lospreparados.
Tinciones
Losmicroorganismosvivossepuedenexaminardirectamen-
teconunmicroscopioptico,prcticacorrienteenestudios de
morfologa de hongos, algas y protozoos (figura6).
Enelcasodelasbacterias,dadosupequeotamaoyla falta
de contraste con el medio, esta tcnica de observa- cin
es menosusada.
Sinembargo,esmuyempleadaparaevidenciarlamovili-
dadbacteriana,concultivosjvenesenmediolquido,en el
microscopio ptico, ya que los flagelos son difciles de
observar aun con tinciones especiales. Se coloca una
gota de cultivo entre porta y cubre objeto o en portaobje-
tos especiales excavados, que se observan con baja lu-
minosidad ya que existe poco contraste entre las clulas
y el agua, lo que dificulta laobservacin.
En general los microorganismos son fijados (frotis) y tei-
dos con colorantes cidos o bsicos a los efectos de au-
mentar su visibilidad y/o conservarlos para otros estudios.
Fijacin: se realiza en general secando suavemente el
inculo sobre el portaobjeto a la llama y luego cortando
variasveceslallamaconelpreparado.Elobjetivoescon-
servar las estructuras lo ms intactas posibles antes de
su tincin. La fijacin puede realizarse con sustancias
qumicas,comoeletanol,cidoactico,formaldehdo,que
inactivaneinsolubilizanmolculascomoloslpidosypro-
tenasmicrobianas.
Coloraciones: numerosos colorantes se emplean para
facilitar la visualizacin de los microorganismos ms pe-
queos, como las bacterias (figura 6). Presentan grupos
cromforos,condoblesenlacesqueledanelcolorcarac-
terstico y adems se unen a estructuras celulares por
enlaces inicos, covalentes o hidrofbicos. Los coloran-
tes bsicos, como el azul de metileno, la fucsina bsica,
el cristal violeta, la safranina, verde de malaquita, tienen
gruposcargadospositivamentequeseunenamolculas
cargadas negativamente, como los cidos nucleicos y
muchasprotenas(superficiesbacterianas).Loscoloran-
tes cidos, como la eosina, rosa de Bengala y fucscina
cida son aninicos y se unen a grupos celulares carga-
dospositivamente.
Losmicroorganismossepuedenobservaralmicroscopio
luego de una tincin simple, es decir un solo colorante,
porejemploconazuldemetileno:secubreelfrotisconel
colorante,poruntiempoprudencial,1minuto,selavacon
agua, se seca y se observa. Permiten distinguir tamao,
forma y organizacin debacterias.
Los mtodos de tincin diferencial permiten diferenciar
grupos bacterianos segn sus propiedades de tincin.
Ejemplo de estas es la tincin de Gram, que separa a
bacterias Gram positivas (toman el primer colorante y lo
retienen y se ven violetas) y Gram negativas, que no re-
tienen el colorante violeta luego de lavado con etanol o
acetonaysecoloreanconelcolorantedecontraste,rosa- do,
como lasafranina.
Existen otro grupo de tinciones que permiten visualizar es-
tructurascomoesporas,flagelos,materialesdereserva,etc.
 Figura 6- Observaciones de microorganismos al microcopio ptico. Izquierda: algas al
estado fresco y derecha: bacilos luego de tincin
Otros mtodos de estudio de los microorganismos
Numerosos mtodos son empleados para el estudio de
estructuras subcelulares de los microorganismos y para
distinguir cepas bacterianas. Muchos de ellos son adap-
taciones de tcnicas corrientes en biologa celular: colo-
racionesdiferencialesyobservacionesmicroscpicas(ci-
toqumica), estudios enzimticos, evidencia de vas me-
tablicas y finalmente los mayores avances se realiza-
ron por aplicacin de mtodos de biologa molecular.
Muchos de ellos son descriptos en el captulo 8: Ecolo-
ga microbiana y en el Apndice prctico.
Como resumen, en el cuadro 3 se sealan algunos de
los descubrimientos ms importantes que contribuyeron
a la evolucin de la Microbiologa.
Bibliografa
Madigan, Martinko y Parker. Brock, Biologa de los mi-
croorganismos, 9. Edicin, 2000 Prentice Hall Inter-
national
Prescott,Harley,Klein,Microbiologa,1999McGraw-Hill
Interamericana
Preguntas de repaso
1) Objeto de estudio de laMicrobiologa
2) Disciplinas muy relacionadas a lamicrobiologa
3) Algunasdelasespecialidadesenquesehasubdividi- do
estaciencia
4) Concepto del trmino microorganismo y ejemplos de
ellos
5) Por qu se dice que los microorganismos son muy
buenas herramientas en estudios fisiolgicos, genti-
cos,enzimticos?
6) Porqulasbacteriasestntandistribuidasenlanatu-
raleza? Seale ambientes donde se lasencuentra.
7) Cual fue el gran descubrimiento que permiti separar
a los microorganismos en dos grandes grupos? Con
qu instrumento se logr estehallazgo?
8) Diferenciasentrebacteria,arquebacteriayeucariotas
9) Porquresultaimportantelatincindelosfrotisbac-
terianosantesdesuobservacinmicroscpica?
10) Por qu aun no se tiene certeza definitiva sobre la
evolucin del mundo microbiano? Qu herramientas
resultan muy importantes deaplicar?
 Estructuras y funciones de las clulas
eucariotas y procariotas Los virus
Organizacin de la clula procariota
A pesar de su simplicidad se reconocen ciertas estructu-
ras en la clula procariota. El cuadro 1 las describe y re-
sumesusfuncionesprincipalesylafigura1esunclsico
esquemadeclulasprocariotayeucariota,consuscom-
ponentesprincipales.

Cuadro 1- Estructuras en clulas procariotas

Estructuras permanentes
Paredcelular Daformaalaclulaylaprotegedelalisisosmtica.Carcterantignico,permiteellibre
pasaje de sustancias
Membranacitoplasmtica Barrerapermeableselectiva,lmitedelaclula,transporteactivoypasivo.Alberga las
enzimas de procesos metablicos importantes: respiracin, fotosntesis, seales
quimiotctiles
Citoplasma Solucincoloidal,agua,sales,protenasydemscomponentes,conlamembranaforma
el protoplasto
Espacioperiplasmtico
Entrelaparedylamembrana,contieneenzimashidrolticasyprotenasparalacapt
acin denutrientes
Nucleoide MolculadeADNhiperenrrollada,materialgenticoprincipal
Plsmidos
MolculaspequeasdeADNcirculares,codificaninformacinsecundaria(resistencias)Riboso
mas CorpsculosdeARN-protenasencargadosdelasntesisproteica,mspequeos(70S)
que los eucariotas (80S)
Estructuras accesorias (dependen de la especie)
Cpsulas ycapasmucosas
Polisacridosy/oprotenas,resistenciaalafagocitosis,adhesinasuperficiesFimb
riasypilis Cuerposproteicos,fijacinasuperficies,conjugacinbacteriana

Flagelos Protenas, movimiento, con carctertaxonmico

Endosporas Estructuras de resistencia a altas temperaturas, radiaciones,etc.
Vacuolasdegas Permite la flotacin en clulasacuticas
Inclusionescitoplasmticas Sinmembrana,oconmembrananounitaria,enelcitoplasma,fenoxialcanos(c.poli-OH
butrico, poli-fosfatos, S,etc.)
 membrana membrana
ribosomas pared

retculo

pared
regin nuclear mitocondrias
ncleo
Figura 1- Esquemas de clulas procariotas y eucariotas

Estructuras permanentes En la figura 2 se observan estas diferencias en la pared

(de afuera hacia adentro de la clula)
Pared celular
Constituye la parte ms importante de la clula procariota
ya que salvo algunos micoplasmas y arqueobacterias, pa-
rsitas intracelulares, todas las otras bacterias presentan
esta barrera de proteccin contra el ambiente, sin la cual
lasclulassufriranlisisosmticaenambientesengeneral
hipo o hipertnicos (suelos, agua, organismos). En 1884,
Christian Gram desarroll la tincin que lleva su nombre y
desde entonces, las bacterias se clasifican en dos grupos
importantes: Gram negativas y Grampositivas.
La diferencia estructural entre ambos grupos se puso de
manifiestoconelmicroscopioelectrnicodetransmisin, a
mediados del siglo pasado. El cuadro 2 resume las
diferencias.
de ambos tipos de clulas y en la figura 3 se aprecia la
estructura de esta singular molcula.
La pared de una clula Gram positiva est formada por
una gruesa capa de unos 20 a 80 nm de espesor, enge-
neral formado por una nica molcula de peptidoglicano
o murena, (figura 2), ubicada por fuera de la membrana
celular. Esta molcula que no aparece en las clulas eu-
cariotas,estformadaporunamalladepolmerosdedos
aminoazcares: N-acetil-glucosamina (NAG) y de cido
N-acetilmurmico(NAM)unidasporenlacesglucosdi-
coshidrolizadosporunaenzimaconocidacomolisozima,
contenida en las lgrimas, saliva (mecanismos de defen-
saprimariacontrainfeccionesmicrobianas(cuadro3).
Lamallasefortaleceaunmsconenlacespeptdicos,en
generalencadenasde4aminocidos,tresdeloscuales

Cuadro 2- Superficies celulares en clulas Gram positivas y Gram negativas

Grampositivas:laparedcelularposeegruesacapadepeptidoglicanoqueretieneelcoloranteespecfico(violeta)

Gramnegativas:laparedcelularpresentacapafinadepeptidoglicanoyunamembranaexternaynoretieneelcolorante.Se colorean
con el segundo colorante, derosado

Archeae:nopresentanpeptidoglicanotpico,sutincinesGrampositivaonegativa

Periplasma:espacioentremembranaexternadelaparedcelularylamembranacitoplasmtica,contienenumerosasprotenas
hidrolticas
 Gram+ peptidoglicano Gram-
peptidoglicano

membrana
membrana
perimembrana

lipopolisacrido y protena
Figura 2- Tipos de paredes procariotas
-G-M-G- glucano G-M-G red Gram positiva son los cidos teicoicos (polmeros de
L-ala glicerol y ribitol unidos por grupo fosfato). Aminocidos
pptidos L-ala comolaD-alaninayazcarescomolaglucosasepueden unir
D-glu a los grupos glicerol o ribitol y al peptidoglicano por
puente D-glu-NH2 enlacescovalentesconelOHseisdelcidoN-acetil
DAP D-ala cruzado murmico o a los lpidos de la membrana citoplasmtica
L-lis (se denominan entonces cidos lipoteicoicos) Estncar-
D-ala DAP gli gados negativamente y contribuyen con esas cargas a
D-ala gli estabilizarlaparedGrampositiva.Noestnpresentesen
D-glu gli bacterias Gram negativas y sus funciones no estn aun
gli dilucidadas.
D-ala gli
Cuadro 3- Caractersticas del peptidoglicano
-G-M-G- D-ala
* Cadenas deglicano
a)Escherichiacoli b)Staphylococcus L-lis - polmeroslinearesdeN-acetilglucosamina(NAG)
(G-) aureus(G+) y cido N-acetil murmico(NAM)
D-glu-NH2 - hidrlisis porlisozima
* Entrecruzamiento peptdico
L-ala - unin al cido N-acetilmurmico
- contiene D y L aminocidos, inhibicin por anti-
-G-M-G biticos lactmicos(penicilina)
* Funciones
Figura 3- Esquema de la molcula de peptidoglicano - confiereformaalaclula,previenelalisisosm-
tica
(cidoD-glutmico,D-alaninaycidomeso-diaminopim- - suporosidadpermiteelpasajedenutrientes
lico)noestnpresentesenlasprotenas.Lacadenapep-
tdicade4aminocidosDyLalternadosseconectaaun La pared de una clula Gram negativa (figura 2) es ms
grupo carboxilo del cido N-acetilmurmico (figura4). compleja, con capa de 2 a 7 nm de grosor formada por
peptidoglicano (5-10% del peso total de la pared) y se
Lapenicilinaactainhibiendolaincorporacindelosami- presenta en forma de gel, ms que como una capa com-
nocidosalpeptidoglicano.Otroscomponentesdelapa- pacta.Luegoseencuentralallamadamembranaexterna
Membrana citoplasmtica y citoplasma
Lamembranacitoplasmticaestpresenteenclulaspro-
cariotas y eucariotas, es responsable de su relacin con
elambienteyeslabarreraosmticadelaclula.Sucom-
posicineslipoproteica,similarentodoslossistemasbio-
lgicos por lo que se la denomina membrana universal o
unitaria,presentaunespesordeunas5a10nm.
Lamayoradeloslpidossonasimtricosylasporciones
polaressonhidrfilaseinteractanconelagua,losextre-
mosnopolares,ohidfobossoninsolublesenaguaytien-
denaasociarseentresi,propiedadesquelespermitefor- mar
las bicapas en las membranas. La nica diferencia
encontradaentremembranasdeclulaseuyprocariotas
enquelasltimascarecendeesterolescomoelcoleste- rol,
aunque se detectaron molculas pentacclicas, simi-
laresalesterol,llamadashopanoides,sintetizadosapar- tir
de los mismos precursores que los esteroides. Estos
compuestosestabilizanlamembranabacteriana.
Lamembranadelasarqueobacteriasdifiereencomposi-
cin con las de las eubacterias: los lpidos poseen enla-
cesterenlugardesteresparaunirloscidosgrasosal
glicerolyenlugardeloscidosgrasosposeencompues-
tosderivadosdelhidrocarburoisoprenoloqueleconfiere
propiedadesdiferentesalasdelrestodelosorganismos.
Poseen una monocapa lipdica en lugar de una bicapa y
estn adaptadas a condicionesextremas.
El citoplasma de clulas procariotas est constituido por
lamatrizcitoplasmtica,compuestafundamentalmentepor
agua (70%) y se presenta empaquetado con gran nme-
ro de ribosomas, partculas esfricas formadas por pro-
tenas y ARN y responsables de la sntesis proteica.Son
demenortamaoquelosdeloseucariotas(70Senlugar
de80S).Sinembargo,losorganismoseucariotaspresen-
tanribosomasdeltipobacterianoensusorganelos(mito-
condrias,cloroplastos).
Elcitoplasmabacterianonopresentaorganelosmembra-
nosos complejos como mitocondrias y cloroplastos, se
aprecian a veces estructuras membranosas, como los
mesosomas. Constituyen invaginaciones de la membra-
na plasmtica en forma de tbulos, pliegues, vesculas y
son ms evidentes en bacterias Gram positivas.Algunos
investigadorespiensanquesonartefactosgeneradospor
la fijacin qumica para la observacin en el microscopio
electrnico.Perocomoseapreciantambinconotrastc-
nicas como la criofractura celular, se piensa que partici-
pan en funciones relacionadas a la formacin de pared,
enlareplicacindelcromosomaprocariotaysuposterior
distribucin en clulashijas.
Material gentico
Lagrandiferenciaentreclulasproyeucariotasloconstitu- ye
la organizacin del material gentico. Las procariotas
carecen de ncleo tpico, rodeado por membrana. La ma-
yorpartedelADNdeunabacteriaestconstituidoporuna
solamolculadeADN,dedoblecadena,muyenrollada(fi-
gura4)(Prescottetal.,1999).Elmaterialclaroaloselec-
trones es elADN.
Membrana plasmtica
Ribosomas
Cuerpo de
inclusin
de PHB
Nucleoide
Mesosoma
Pared celular
Figura 4- Microfotografa de clula procariota
Se habla de nucleoide, falso ncleo, o regin nuclear.
Muchas veces se lo menciona como "cromosoma bacte-
riano"conlasalvedaddequesuestructuranoesladeun
cromosomaeucariota.Estamolculacerrada,circular,pue-
de apreciarse a veces unido al mesosoma o a la membra-
nacitoplasmtica.Contieneun60%deADN,algodeARN y
una pequea cantidad de protenas, diferentes a las his-
tonasdelaclulaeucariotayquefacilitansuenrollamiento (en
Escherichia coli, bacilo de 2-6 m de longitud, el ADN
mideaproximadamente1.400m,loquemuestraelgrado
deenrollamientodelamolculaenelcitoplasma).
Enprocariotasdevidalibrecontieneunas1-6X106pares de
bases (pb), con 1000 a 5000 genes. El cromosoma
bacteriano presenta genes esenciales para la vida celu-
lar, sntesis de ribosomas, ARN mensajeros, enzimas
metablicas.
 Nutricin y metabolismo
bioenergtico en microorganismos
Nutricin microbiana
Los microorganismos requieren nutrientes, sustancias
qumicas que estimulan el crecimiento microbiano y que
sonempleadasenlasntesisdesusmaterialescelulares y
que tambin brindan energa, a los efectos de realizar
sus procesos metablicos, dividirse, moverse, esporular.
La sntesis de sus macromolculas, as como la obten-
cindeenergaenlosmicroorganismosquimiosintticos,
deben ser realizadas a partir de losnutrientes.
Lascaractersticasquedebepresentarunnutrienteincluyen:
i) atravesar las barreras de la clula(membranas)
ii) ser utilizado por alguna enzimacelular
iii) brindarlealamismasub-unidadesdesusmacromol-
culas y/oenerga.
Los elementos como nutrientes
Laclulamicrobianaestconstituidaporaguaensumayor
parteydelafraccinmateriasecasedistinguenlosmacro-
elementos: C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg, Fe, que la clula
toma en cantidades relativamente grandes (g/L en el me-
dio de cultivo), mientras que los llamados micronutrientes
serequierenennivelesmuybajos,delordendelosmg/L.
El cuadro 1 presenta los distintos tipos de nutrientes re-
queridos para el desarrollo microbiano.
Los6primerosmacronutrientesintegranimportantesmo-
lculas (hidratos de carbono, lpidos, protenas, cidos o micronutrientes, empleados en los medios en menor
nuclecos), los restantes se encuentran en forma de ca-
tionesypuedenactuarcomocoenzimasdemuchasenzi-
mas(K+).ElCacontribuyealatermoresistenciadelas
Cuadro 1- Nutrientes microbianos
1- Fuentes de energa
(luzfototrofos)
(reaccionesqumicasquimiotrofos)
2. Macronutrientes
C K
H Mg
O 95% Na
N Ca
S Fe
P
2. Micronutrientes (elementos traza)
Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, B, etc.
3- Factores de crecimiento
vitaminas coenzimas
purinas y pirimidinas ADN, ARN
aminocidos esenciales sntesis proteica
endosporas. El Mg forma complejos con el ATP y el Fe
forma parte de citocromos, es cofactor de enzimas y de
protenas transportadoras de electrones.
El cuadro 2 resume los ingredientes fundamentales para
el desarrollo de los organismos vivos y las formas qumi-
cas en que los microorganismos pueden tomarlos en la
naturalezayenlosmediosdecultivo.Elcuadro3presen-
talacomposicinmediadeunaclulabacteriana.
Los microorganismos tambin requieren oligoelementos
concentracin (mg/L), como el Mn, Zn, Co, Mo, Ni, Cu,
etc.).Avecesloscontaminantesdelagua,recipientesdel
laboratorio,alcanzanasatisfacerlasnecesidadesenes
 4 Crecimiento
microbianoysucontrol
El crecimiento en sentido biolgico implica un aumento
ordenado de todos los componentes celulares y no slo
de alguno de ellos. En este sentido el concepto es ms
estrecho que el trmino desarrollo. Una bacteria puede
acumular polisacridos y aumentar su peso, sin que por
ello est creciendo. En poblaciones de organismos uni-
celulares, como son el caso de la mayora de las bacte-
rias, algas unicelulares, protozoos y esporas de hongos,
el crecimiento trae aparejado la divisin celular y el au-
mento del nmero de clulas por unidad de volumen.
La figura 1 presenta los eventos en la divisin binaria de
unaclulaprocariota:duplicacindelADNydetodoslos
componentescelulares,formacindeltabiqueoseptodi-
rigidoporlamembranacelular,conformacindedosc- lulas
hijas idnticas(clon).
1.
2.
3.
4.
Figura 1- Divisin binaria de microorganismos unicelulares
(bacilo)
El crecimiento de los microorganismos en la naturaleza
es mucho ms lento que en el laboratorio bajo condicio-
nesptimasporlacarenciadenutrientesyporlascondi-
cionesambientales,nosiemprefavorablesniconstantes.
En la naturaleza los microorganismos se encuentran li-
bresenlasolucindelsueloyusualmenteexistenenbio-
films:gruposdediferentesmicroorganismosorganizados
en capas e inmovilizados en la superficie de un sustrato,
rodeadosengeneralporunamatrizdepolmerosorgni- cos
de origen microbiano. Se desarrollan prcticamente en
todas las superficies inmersas en ambientes acuosos
naturales,biolgicos,comoenlosvegetales,comoabiti-
cos,comoplsticos,piedras,partculasdelsuelo.All,las
interacciones son numerosas tanto sinrgicas como an-
tagnicas (captulo 14).
En el laboratorio, los organismos son estudiados como
cultivos puros, en medios y condiciones de cultivo ade-
cuadas. Analizaremos la cintica del crecimiento en el
laboratorio (in-vitro).
Crecimiento exponencial
Es aquel en que todas las clulas se dividen al mismo
tiempo, en forma sincrnica, duplicando la poblacin en
cadaunidaddetiempoconocidocomotiempodegenera-
cin. Se postula que en esta fase todas las clulas son
viables y que la poblacin noenvejece.
Algunos conceptos:
Velocidad de crecimiento: Es el nmero de generacio-
nes (divisiones) que ocurren por unidad de tiempo y se
expresa en generaciones por hora.
Vc= n/ t
Tiempodegeneracin:Eseltiemporequeridoparaque a Vemos que la diferencia entre los logaritmos en base 2
partir de una clula se formen dos, o sea el tiempo re- delNdeclulas/mLesigualalnmerodegeneraciones
queridoparaduplicarelnmerodeclulasdeunapobla- transcurridaseneltiempoanalizado(ecuacinycuadro1).
cin. Se expresa en horas/generacin y en E. coli puede
se de 20 minutos (3generaciones/h). Como usamos ms los logaritmos en base 10, en lugar
de los de base 2 tenemos:
tg=1/vc log10 Nf - log10 N0
n= log 2 = 0,301
Analizaremoselcasohipotticodeunorganismounicelu- 10
lar, bacteria, protozoo, alga, que comience a dividirse en
La velocidad de crecimiento expresa la eficiencia en la
formaexponencialenunmediodecultivolquidoadecua-
utilizacindelossustratosyelefectodelosfactoresam-
do.Calcularemoselnmerodegeneraciones,elnmero
bientales.
final de clulas/mL a medida que transcurre el tiempo
(cuadro1). Elcrecimientodeclulasviables(capacesdereproducir- se
en un medio adecuado) se expresa en escala semilo-
Cuadro 1- Crecimiento exponencial (logartmico)
gartmica(nmerodeclulas/mLenlogaritmoyeltiempo en
en una bacteria
escala aritmtica) ya que resulta imposible graficar el
N de Tiempo N log Ncel/mL log Ncel/mL
crecimientodeorganismosunicelularesenescalaaritm-
clulas/mL (h) generaciones
2 10
tica (al cabo de unas horas pueden alcanzar densidades
1 0 0 0 0,000 muy elevadas: 108-1010clulas/mL).
2 0,5 1 1 0,301
4 1 2 2 0,602
8 1,5 3 3 0.903 NOTA: i) Para verificar este hecho calcule el peso de c-
16 2 4 4 1,204 lulasbacterianasluegode24horasdecrecimientoexpo-
32 2,5 5 5 1,505
nencial,partiendodeunaclulacuyopesoesunpicogra- mo
Nf (nmero t n n = log Ncl./mL log Ncel./mL
2
n = 10 (10-12g) y cuyo tiempo de generacin es de 1hora.
0,301 ii) Por qu el crecimiento se detiene en la naturaleza y
su representacin sigue una curva sigmoide?
log N clulas/mL 1- fase de latencia olag
2- fase logartmica oexponencial
3- faseestacionaria La figura 2 muestra los eventos que pueden darse cuan-
4- fase demuerte do un microorganismo unicelular se introduce en un me-
3 dio lquido adecuado a su crecimiento. Se aprecian 4 fa-
4 ses, desde el inicio del cultivo (inoculacin, tiempo cero)
2 hasta la muerte de la mayora de las clulas (esteriliza-
1 cin del cultivo).
tiempo Las caractersticas de las distintas fases son:
Figura 2- Crecimiento de un microorganismo en medio lquido
de volumen fijo (batch) Fase de latencia o fase lag no hay divisin celular, las
clulas se adaptan al medio, aumenta el nivel de coenzi-
Analizandoloseventosenladivisincelulardelcuadro1, masnecesariasparaelfuncionamientodeenzimas.Esta
podemos deducir que la ecuacin que representa el n- fase debe acortarse en el laboratorio y en la industria,
merofinaldeclulasporunidaddevolumenes: porque implica gasto de energa y tiempo. Esto se logra
Nf= No.2n repicandoelcultivoaunmediodelamismacomposicin
N=nmeroinicialdeclulas/mLN=nmerofinaldeclulas/mL queeldeorigen,introduciendouninculogrande(enge-
o
n=nmerodegeneraciones f
n=logNf-logNo neral un 10% del volumen final del nuevo medio) ysem-
2 2 brando con cultivosjvenes.
Laedaddelinculoeseltiempotranscurridoentrelasiem- bra
en el medio de origen y el repique (ejemplo de 6, 12
horas).
Medio fresco

Faseexponencialologartmica(log),enestaetapaselo- gra
el mayor crecimiento, la velocidad de crecimiento es
mxima y el tiempo de generacin mnimo. Se postula que Vlvula de control
en esta etapa cada clula es capaz de dividirse, por lo que
todaslasclulasestnviables.Enlaindustriainteresatraba-
Suministro
jarenestafaseyporelloserealizancultivoscontinuos(figu- ra 3) de aire
(Prescott et al., 1999) donde la concentracin de una
Filtro
sustancia limitante del crecimiento, por ejemplo una vitami- de aire
na,esincorporadaalmediodemododelograrunavelocidad de
crecimiento constante y mxima por muchotiempo. Recipiente
de cultivo

Los cultivos continuos se caracterizan por:

i) Suministrarigualcantidaddemediofrescoqueelre-
movido delsistema
ii) Laconcentracindenutrienteslimitantescontrolala
densidadcelular
iii) Latasadedilucincontrolalatasadecrecimiento
iv) Sielcultivoescuidadosamentecontroladopuedeser
mantenidoindefinidamente
Faseestacionariapordiversosmotivoselcrecimientoen la
naturaleza se detiene, en general por falta de nutrien-
tes y/o por acumulacin de sustancias inhibidoras o txi-
casproductosdelpropiometabolismocelular.Elcasoms
tpico es la detencin del crecimiento de bacterias lcti-
casdebidoalaproduccindecidolcticoenlafermen-
tacin,queinhibealasclulas,quesonneutrfilas.
En esta etapa pueden darse dos situaciones:
Que las clulas dejan de dividirse en su conjunto, vc=0,
puede ser el caso de la acumulacin de productos
txicos.
Quelavc=vm,osea,lavelocidadresultanteesestadsti-
camente cero, pero hay clulas que se dividen aun, pero
muerelamismacantidad,enelmismoperiododetiempo
Fasedemuerte,dominalavelocidaddemuerte(negati-
va)sobreladecrecimiento.Elcultivopuedellegaraeste-
rilizarse,obienpuedeesporularyconservarseenestado
criptobitico.
Colector
Figura 3- Cultivo continuo (quimiostato)
Evaluacin de crecimiento
Analizaremos los distintos procedimientos para medir el
crecimiento (cuadro 2).
Recuentos microbianos
Recuento de microorganismos totales en cma-
ras
Fundamentodelmtodo:unamuestradecultivobacte-
rianodiluidosecolocaenunacmaradevolumenpeque-
oyconocido,comoporejemploladePetroff-Hauseque
encierra2,5x10-7mLysecuentanalmicroscopiolasclu- las
contenidas en numerosos cuadrados de la cmara
(figura 4) (Prescott et al.,1999).
Se calcula el promedio de clulas contenidas en dicho
volumenyseexpresaelNclulas/mLdelamuestra.La
desventajaesquenosepuedendistinguirclulasviables
denoviablesyelerrorexperimentalesalto.Perosepue- den
efectuar numerosas determinaciones en poco tiem- po,
con solo lavar la cmara y volverla acargar.
 Cuadro 2- Evaluacin del crecimiento Cubreobjetos

1- Determinacin del nmero demicroorganis- Cmara que contiene

mos: recuentos (a) bacterias
Mtodos directos: recuento total
Recuentomicroscpicodirecto(cmarasdere-
cuento)
Conteoelectrnico(cadaclulaoriginaunaco-
rrienteelctrica)
Mtodos indirectos: recuentos de viables (b)
Recuentosenplaca(cadaclulaoriginaunaco-
lonia)
Filtracin por membrana e incubacin del filtro
en caja de Petri
2- Determinacin de la masa celular
Mtodosdirectos
Medida de la masa
(c)
Medida del volumen
Mtodos indirectos Figura 4- Cmara de recuento de Petroff-Hause
Determinacin del contenido de N, C, P, etc.
Turbidimetra(determinacindeladensidadp-
tica de loscultivos) Ventajas:eselnicoprocedimientocorrecto,yaquecada
3- Determinacin de la actividad celular unidadformadoradecolonia(clula,trozodemicelio,es-
Actividad enzimtica (deshidrogenasas, fosfa- pora) da origen a unacolonia.
tasas, etc.)
Concentracin de un metabolito (C, N, S, etc.) Desventajas: es ms lento, no existe un medio de culti-
Medida de la respiracin (evolucin del CO o vo para desarrollar a todos los microorganismos presen-
consumo de O )
2 tes en una muestra. Resulta muy til en la evaluacin de
2 grupos fisiolgicos: microorganismos que pueden no
estar relacionados taxonmicamente, pero que realizan
Estetipoderecuentoesmuyempleadocuandosedesea una funcin metablica comn. Por ejemplo: fijadores
aerobiosdenitrgeno,celulolticosanaerobios,nitrifican-
conocerelniveldecrecimientodecultivosconocidos,en
tes,etc.
ellaboratoriooenlaindustriaqueseencuentrenenfase
logartmica, en formarpida. 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml

Mtodo indirecto- Recuento de viables en placa

El fundamento del mtodo es permitir el crecimiento de 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
una sola clula en la superficie de un medio de cultivo Muestra de 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml
E. coli 0 1ml 0 1ml 0 1ml
slido apropiado. Se postula que cada colonia proviene
de una sola clula y teniendo en cuenta el volumen de
10-5 10-6 10-7
inculo empleado y la suspensin-dilucin sembrada (fi-
gura5)secalculaelNdeunidadesformadorasdecolo- nias
(ufc)/mL) o por gramo en caso de muestras slidas Figura 5- Preparacin de suspensiones-diluciones de un
(suelo, alimentos,etc.). cultivo bacteriano
 Gentica de microorganismos
procariotas

Elementos genticos en bacterias

Los elementos genticos presentes en clulas bacteria-

nas son:
a) cromosomabacteriano
b) plsmidos
c) cidos nucleicos devirus
d) elementostransponibles Figura 2- Esquema de una clula bacteriana con su
cromosoma y tres copias de unplsmido
Cromosoma bacteriano
El genoma bacteriano es haploide, est constituido por monocopia, oligocopia o multicopia. Sus principales fun-
unamolculadeADNautorreplicativa(replicn),de1.000 a cionesnoestnrelacionadasametabolismosfundamen-
6.000Kb (4.700Kb en E. coli) y alberga la mayor infor- talesparalaviabilidaddelaclula,sinoquealbergange- nes
macin gentica esencial de la clula (figura1). que codifican para funciones accesorias como ser
resistencias a antibiticos, fungicidas, metales pesados,
etc.Sonempleadoscomovectoresdeinformacingen- tica
y la clula al dividirse por fisin binaria asegura pre-
viamente la duplicacin de sus plsmidos, ya que stos
contienen un replicn bsico que hace posible que se
dupliquen las copias plasmdicas antes de la divisin ce-
lular (figura3).
Bases

Replicacin Particin
Azcar

Figura 1- Genoma bacteriano

Los plsmidos estn formados por ADN circular, dedo-

blehlice,sonreplicones,sunmerodecopiasescarc-
terstico y vara de una clula a otra. El tamao de un
plsmido y su nmero por clula se usan como carcter
taxonmico (figura 2).Una clula puede tenerplsmidos Figura 3- Mantenimiento de plsmidos
La figura 4 presenta un plsmido muy estudiado el R1 de 5ACTG CAGT 3
3TGAC GTCA 5
E.coli,delcualseconocenporclonacin,zonascomola tmp
regin tra, que asegura su transferencia conjugativa, la
regin determinante de resistencia (antibiticos, metales
pesados)R-detylareginpar,queaseguraquelasco- pias
del plsmido se repartan a las clulas hijas (parti- cin).
copBcopA ori replicn bsico
repA
(replicacin)

KmR (kanamicina) Figura 5- Transposones

ApR (ampicilina)

RTF R-det SmR (estreptomicina) En resumen: las bacterias presentan la informacin ge-
regin tra Resistance Resistance
(transferencia Transfer determinants ntica esencial en el nucleoide, falso ncleo tambin lla-
conjugativa Factor SuR (sulfonamida) mado cromosoma bacteriano y pueden contener infor-
CmR (cloranfenicol) macingenticaadicional,nofundamental,enplsmidos,
profagos y transposones. Estos ltimos, al no ser esen-
ciales, pueden variar mucho en nmero y contenido de
parA parB regin par (particin ADN y son responsables de la mayor parte de los cam-
bios genticos enbacterias.
Figura 4- El plsmido R
1
Las variaciones genticas en procariotas se pueden ge-
nerar por dos mecanismos:
Los bacterifagos Transferenciahorizontaldegenes,entrebacteriasprxi-
Sonvirusqueatacanabacterias(captulo2)ysumultipli- mas,porejemploporpasajedeunplsmidodeunaclu- la
cacinestaseguradaporunciclolticoyotrolisognico. dadora a una receptora (evento intercelular)
Intervienenporlotantoenlalisiscelular(cicloltico)oen la Recombinacin gentica: reaccin de corte, intercam-
incorporacin de material gentico a clulas bacteria- bio y unin de ADN, por ejemplo la incorporacin de un
nas (ciclolisognico). plsmido al cromosoma (eventointracelular)

Los elementos transponibles

Son segmentos de ADN de cientos o miles de pares de
bases,conextremosrepetidosinvertidos,(figura5),nun-
caindependientesyquepuedensaltarenlacluladeun lugar
a otro del ADN con muy baja frecuencia. El sitio lo
eligenalazarydanmotivoamutaciones.Nosonreplico- nes,
por lo que deben insertarse enuno.
Los ms conocidos son los:
IS- secuencias de insercin, son los ms simples, slo
saltan.
Tn-transposones propiamente dichos, son ms comple-
jos y adems de saltar, llevan genes adicionales, por
ejemplo de resistencia a antibiticos, metales pesa-
dos, etc.
Ciclo celular bacteriano
Comnmente las clulas bacterianas se dividen por
fisin binaria o biparticin: la membrana celular jue-
ga un importante rol separando las dos molculas de
ADN y sintetizando a su paso la nueva pared. El septo
o tabique formado separa finalmente a las dos clulas
hijas(figura6).Nohaymitosis:seladesignatambin
comoamittica
transferencia horizontal de genes: existen mecanis-
mos de intercambio gentico entre procariotas que es
muy diferente al de los eucariotas: el proceso es frag-
mentario, no intervienen los complementos cromos-
micos completos de ambas clulas y el ADN setrans-
 fiere en una sola direccin, del donador al recipiente
(se habla de formacin de diploides parciales).
Los mecanismos son especializados. Puede haber o no
recombinacindematerialesgenticos(incorporacindel
segmentotransferidoalmaterialpreexistente)(cuadro1y
figura 7) (Madigan et al.,2000).
Crecimiento Duplicacin delADN
Divisin celular
Figura 6- Ciclo celular en una clula procariota
Cuadro 1- Transferencia horizontal de genes
en bacterias
tambin llamadasexualidad
sedaencualquiermomentodelciclodevidade
labacteria
con mayor frecuencia entre bacterias relaciona-
das,perogenesdeunabacteriapuedenintegrar el
genoma de otra bacteria muy alejada genti-
camente
por lo que el concepto de especie no se aplica
claramente enbacterias
Un dispositivo muy sencillo permite determinar el meca-
nismoporelculseformaronrecombinantescuandodos
cultivos se ponen en contacto: en un tubo doblado en U
se siembran los cultivos, uno en cada rama, separados
porunfiltrobacteriolgico,quedejapasarlosbacterifa- gos,
pero no a lasclulas.
Si los cultivos se tratan previamente con ADNasa,
entonces el proceso no fue por transformacin ya
que el ADN libre est expuesto a la accin de la
enzima.Siigualocurrerecombinacin,debeserpor
alguno de los otros mecanismos de transferencia
horizontal.
SinADNasa,larecombinacindebeocurrirportrans-
duccinoportransformacin,yaqueelfiltrodeja
pasarvirusperonobacterias.Sinoocurreesquese requiere
contacto clula-clula(conjugacin).
En resumen: la variabilidad gentica en bacterias
se logra por:
Recombinacin (transferencia horizontal de genes por
transformacin, transduccin, conjugacin)
Mutaciones (transferencia vertical de genes)
Transformacin
donador ADN libre receptor
Transduccin
ADN en virus
Conjugacin
transferencia de transferencia de
cromosoma plasmidios
Figura 7- Mecanismos de transferencia horizontal
de genes en bacterias
Recombinacin
Involucra intercambio fsico de material gentico entre
elementos genticos. Se generan nuevas combinacio-
nes: se une lo que antes estaba separado y se separa
lo que antes estaba unido. Es un evento intracelular.
Sereconocen:
a) Recombinacin homloga o general: el intercambio se
realizaensegmentosextensosdesecuenciashomlo-
gas o muyparecidas
b) Recombinacin especfica de sitio: el intercambio se
operaensegmentosmuycortosdesecuenciasespec-
ficas(ejemplointegracindelgenomafgicoalcromo-
somabacteriano).
c) Recombinacin ilegtima: es la transposicin: el inter-
cambioseoperaporsaltoacualquiersecuencia,alazar.
Transferencia horizontal degenes en
bacterias
Ocurre por tres mecanismos (figura 7):
1. conjugacin:latransferenciaesresultadodeuncon-
tacto clula-clula (se parece al proceso sexual en eu-
cariotas).ElsegmentodeADNtransferidodependedel
tiempo de contacto y se realiza a travs de un pelo
sexual.
2. transduccin,dondelatransferenciaestmediadapor
partculasvirales.
3. transformacin, donde participa el ADN libre en pe-
queostrozosquepenetranporlamembrana.Laclu-
ladadoraengeneralselisayelADNquedaenlanatu-
raleza expuesto a la biodegradacin, accin de la
ADNasa,etc.Peroenambientesmuycolonizados,como la
rizosfera (zona del suelo en contacto con las races)
puedellegaraclulasreceptorasqueloingresanensu
interior.
Las bacterias son escasamente transformadas por pls-
midos, ya que stos deben permanecer con doble hlice
y circulares para replicarse. La figura 8 muestra la trans-
formacin de una bacteria sensible a la ampicilina (Aps)
queseconvierteenresistente(ApR)porlaadquisicinde un
plsmido con esaresistencia.
Muchos ensayos se han realizado a los efectos de au-
mentarlacompetenciadeciertasbacteriasdeinterspara
transformar,comoporejemplotratarlasconaltasconcen-
traciones de ionescalcio.
ApR
ApR
Transformacin

Cuando en la transferencia de genes se involucran as-

pectos nutritivos, de resistencias a antibiticos, etc. es
posible detectar los recombinantes por siembra en me-
diosselectivosdondenocrecelaclulareceptoraperosi la Seleccin Ap
recombinante. Por ejemplo, si la clula receptora no
sintetiza triptofano (Trp-), no se desarrollar al sembrarla
en caja de Petri con medio sin ese aminocido, pero al Medio de cultivo con Ap
recibir ADN de clulas Trp+, las recombinantes formarn
colonias en el medio sin elaminocido.

Transformacin

ElADNlibre(lisiscelular)linealsedebeuniralasuperficie Slo crecen clones transformados

delabacteriamedianteunaprotenadeunin,luegodelo cual que llevan el plsmido

entran o bien las dos hebras o previamente una nu-

Figura 8- Transformacin por un plsmido
cleasa degradaunadeellasylaotraentraenlaclula.El
trozodeADNseasociaaunaprotenaespecficaqueevita el
ataque por nucleasas hasta su integracin con el ADN Transduccin
conayudadeunaprotenallamadaRecA,medianteunpro-
ceso de recombinacin. En la replicacin de este ADN se ElADNquesetransfiereprovienedeunvirusyelproceso
forma una clula igual a la parental y otrarecombinante. puede ocurrir en dosformas:
Transduccin generalizada (figura 9) (Madigan et al.,
2000), en donde una porcin del ADN de una clula es
parte del genoma de un virus, reemplazando al genoma
delmismo(errordecopia),setrataahoradeunvirusde-
fectivo. Cuando la poblacin de una bacteria sensible es
infectada por un fago, pueden iniciarse los eventos del
ciclo ltico. Durante este proceso, las enzimas responsa-
bles del empaquetamiento del ADN viral en la cpside,
pueden fallar y se encierra ADN del husped en algunos
deestosvirus.Estaspartculasseliberanjuntoalosvirio- nes
normales, de modo que el lisado contiene una mez-
cladevirionesnormalesypartculastransductoras.
Transduccin especializada: en este proceso se gene-
ran partculas transductoras de un solo tipo, por que to-
das ellas contienen un mismo fragmento de ADN de la
bacteria.Seformanporlaescisinimprecisadelgenoma
fgicoquellevaunsegmentodeADNdelabacteriaadya-
cente al sitio donde estabaintegrado.
Clula bacteriana
Ciclo ltico
Clula transducida
Fago
Fago
Partcula
transductora
Partcula
transductora
Recombinacin
Clula bacteriana Transduccin
Figura 9- Transduccin generalizada
Conjugacin
Es un proceso de transferencia gentica que involucra
contactoclulaaclula.Esunmecanismocodificadopor
plsmidos. Un plsmido conjugativo emplea este meca-
nismo para transferir una copia del mismo a una nueva
clula.Laevidenciasugierequeunadelashebrasdel
ADNderivadeldonanteylaotraesrecientementesinteti-
zadaenlaclulareceptoraduranteelprocesodetransfe-
rencia. El proceso requiere contacto clula-clula para
permitir el pasaje de una hebra del ADN de un plsmido
(se requiere una enzima quecorte).
Una molcula complementaria de ADN se sintetiza en-
tonces en la clula receptora. El factor F es un plsmido
conjugativo muy conocido que presenta alta eficiencia
en la transferencia. Las clulas que portan el plsmido F
se denominan F+ y las cepas sin el plsmido F, o sea
recipientes para ste, se denominan F. Cuando una
clula F+ transfiere el plsmido F a una receptora, sta
ltima se convierte en F+, o sea dadora en una conjuga-
cin (figura10).
F (femenino) F+(masculino)
tubo de
conjugacin
Clulas conjugando
(transferencia de una
copia del factor F)
Transformacin de
clulas F en F+
Sntesis de ADN
Separacin de
clulas F+
- +
Figura 10- Transformacin de clulas F en F
gentica
Lafigura11(Madiganetal.,2000),muestraunamicrofo-
tografaelectrnicadedosclulasbacterianasunidaspor el
pelo sexual o pili, que facilita la transferencia de mate-
rial gentico porconjugacin.
Por este mecanismo ocurre la transferencia de resisten-
cia a biocidas, como los antibiticos, ocasionando serios
problemas en la salud humana.
Formacin de cepas Hfr (alta frecuencia de recombina-
cin y movilizacin del cromosoma) (figura 12).
 En resumen: la conjugacin es un mecanismo de trans-
ferencia de ADN en procariotas que requiere contacto
clulaaclulayestcontroladaporgenescontenidosen
ciertosplsmidos,comoelllamadoFeinvolucralatrans-
ferencia del plsmido de una clula dadora a una recep-
tora.Pero,adems,otroselementosgenticos,incluyen- do
el cromosoma de la clula dadora, puede, en ocasio-
nes,sermovilizadoytransferido.Latransferenciadelcro-
mosomadelhuspednoesgeneralmentecompletapero
estemecanismoresultmuytilenlaconstruccindelos
mapas genticos de las bacterias, asociando los genes
Figura 11- Conjugacin entre dos bacterias, transferidos a diferentes perodos decontacto.
va el pelo sexual o pili

El plsmido F de E.coli es conjugativo (es un episoma, o
sea se puede integrar al cromosoma) y tambin puede
movilizarelcromosomaduranteelcontactoclula-clula. La
conjugacin permitir la transferencia de grandes zo-
nasdecromosomadeldonantealaclulareceptora.Las
clulasqueposeenelplsmidoFintegradoporrecombi-
nacin a su cromosoma se denominanHfr.
La presencia de un plsmido F altera propiedades de la
clula:capacidadparasintetizarelpilillamadoF,facilitan- do
lamovilizacin.
Mutaciones
Una mutacin es un cambio gentico heredable en la se-
cuenciadebasesdeloscidosnucleicosdedoblehlicedel
genomadeunorganismo.Elmutantedifieredelaclulapa-
rental en su genotipo, es decir, en los genes que el organis-
mo posee. Pero adems, puede alterarse sufenotipo.
Unabacteriaaisladadelanaturalezaserefierecomotipo
salvaje. Una mutante puede obtenerse a partir de estas
cepas o de otras derivadas de ella, es decir de otra mu-
tante. Se nombran porel:

Genotipo:ej:hisCindicaunodelosgenesdeE.colique
E. coli F

E. coli F codificanparalasntesisdehistidina,mutacioneseneste
(femenino) cromosomas (masculino) gen se refieren como hisC1, hisC2,etc.
bacterianos
Fenotipo: E.coli His+, significa que esta cepa puede sin-
tubo de F (factor de tetizar histidina, mientras que E. coli His-, no.
conjugacin fertilidad)
clulas de
conjugacin
Aislamiento de cepas mutantes
(copia de factorF) Algunasresultanfcilmentedetectables,poraparicinde
transferida a clula F pigmentos, prdidas de vesculas de gas, de flagelos,ya
Hfr masculino F+ masculino quelascoloniascambiandeaspecto.Otras,comolasque
factor F
incorporacin doble hebra adquieren cierta resistencia, como a un antibitico, son
del factor F
cromosoma fcilmenteaisladasencajasdePetri,enunmedioconel
doble hebra antibitico en cuestin. Los mtodos de seleccin de ce-
pas mutantes se han desarrollado mucho y permiten su
Figura 12- Formacin de clulas Hfr (alta frecuencia aislamiento a partir de una poblacin con millones de or-
de recombinacin) ganismos parentales.
 6 Taxonoma bacteriana yfilogenia
La necesidad de agrupar y clasificar a los microorganis-
mossurgimuytempranoenlosestudiosdelamicrobio-
loga.Loscriteriosempleadosparaagrupar,sobretodocon
lasbacteriasincluyeroncategorasnutricionales(auttro-
fas, hetertrofas), caractersticas tintoriales (Gram nega-
tivasyGrampositivas),respuestasaloxgeno(aerobias,
anaerobias)rangodetemperaturadelcrecimiento,etc.
La taxonoma (cuadro 1) clasifica a los organismos en
grupos(taxones)enbaseasimilitudes,leasignanom-
bres a los mismos e identifica organismos desconocidos
(losubicaenalgunosdelostaxonesdefinidos).Laexpe-
rienciageneradaconlaclasificacindeotrosseresvivos,
como los animales y los vegetales ayud a construir una
aproximacin para el caso de los microorganismos y en
especial para las bacterias. La taxonoma es una ciencia
querequiereladeterminacindenumerososcaracteresy
luego una interpretacin rigurosa de losmismos.
Se debe distinguir entre taxonoma e identificacin de
las bacterias. La primera conduce a una caracterizacin
exhaustiva, con aplicacin de la teora y los mtodos de
clasificacin, la formacin de grupos o taxones y su no-
menclatura. La identificacin constituye el lado prctico
de la taxonoma, tiende a caracterizar a un aislamiento
porunnmerolimitadodeanlisis,seleccionadosenge-
neralparaelproblemaencuestin,efectacomparacin
conespeciesconocidasyasignaelaislamientoaunaes-
pecie conocida o aconseja un estudio taxonmico ms
profundo.
Especie:eslaunidadtaxonmicabsicaysedefinecomo
elgrupodeorganismosquetieneunaltogradodesimili-
tudensuspropiedadesfenotpicasyquedifierendeotros
grupos de organismos o cepas en el caso de las bacte-
rias, en muchas caractersticas fenotpicas independien-
tes. En general presentan: % de hibridacin de sus ci-
dosnucleicossuperioral70%yelhbridodebepresentar una
estabilidad trmica de menos de 5C (cuadro1).
Cuadro 1- Conceptos generales en
taxonoma microbiana
Taxonoma o sistemtica:
clasificaorganismosengrupos(taxones)enbase a
susimilitud
asigna nombres a lostaxones
identificaorganismosdesconocidos(determinasi
un organismo pertenece a alguno de los taxones
definidosantes).
Especie:
unidad taxonmicabsica
grupo de cepas que tiene un alto grado de simili-
tudensuspropiedadesyquedifierendeotrosgru-
pos de cepas en muchas caractersticas fenotpi-
casindependientes
definicinmetodolgica:
- % de hibridacin ADN -ADN > 70%
1 2
- Tm < 5C (estabilidad trmica del hbrido ADN -
ADN )
1 2
En las bacterias se habla ms de taxones que de espe-
cies, por la continua evolucin de caracteres morfolgi-
cosygenticos.Lasunidadesdeclasificacindelasbac-
teriasotaxonespresentanlasiguientejerarqua:

Dominio: Bacteria: ejemplo Eubacteria
Reino: Proteobacteria
Seccin: Proteobacterias
Clase: Zymobacteria
Orden: Enterobacteriales
Famila:Enterobacteriaceae
Gnero: Shigella
Especie: S. flexneri
Cepa: poblacin que
desciendedeuncultivopuro,puedendiferenciarse
unas de otras de variasmaneras.
Biovariedad: varian-
tesdecepascaracterizadaspordiferenciasbioqu-
micas y fisiolgicas. Las morfovariedades se dife-
renciandelpuntodevistamorfolgicoylasserova-
riedades, por sus caracteresantignicos.
Una cepa de una especie se designa como cepa tipo.
Suele tratarse de uno de los primeros aislamientos y es-
tar muy bien caracterizada.
Ungneroesungrupobiendefinidodeunaomsespe-
ciesqueestclaramenteseparadodeotrosgneros.
Lataxonomatomaencuentanumerososcaracteresque se
resumen en el cuadro2.
Loscaracteressonevaluadosenclavedicotmicaylas
familias,gneros,especies,sub-especies,biovariedades,
sondescriptasenelBergeysManualofSystematicBac-
teriology(ltimaedicin2001)yenotrasaproximaciones
taxonmicas.
El cuadro 3 (Prescott et al., 1999) muestra los niveles o
rangos empleados con mayor frecuencia: especies, g-
neros, familias, rdenes, clases y reinos. Los nombres
de los grupos microbianos de cada nivel o rango tienen
terminaciones (sufijos) caractersticos: ales para rde-
nes,eaeparafamilias.Obsrvesequelasseccionesson
categoras informales empleadas para dividir el Manual
en partes manejables (30 o ms secciones con ttulos
formales como: metangenicos, Bacillus, Lactobacillus,
Halobacterias, Espiroquetas.
Cuadro 2- Caracteres empleados en estudios
taxonmicos
Fenotpicos
caracteres culturales en:
i) medio lquido (velo, turbidez uniforme, sedi-
mento)
i) en medio slido (tamao, forma, bordes, de la
colonia)
caracteres morfolgicos
tamao, forma, forma de agruparse de las
clulas en medio lquido
caracteres tintoriales
coloraciones simples, diferenciales (Gram),
especficas (esporas, flagelos, etc.)
Fisiolgicos y metablicos
Empleo de fuentes de C, N, S, etc., formas de ob-
tencin de energa, produccin de sustancias biti-
cas (vitaminas) y abiticas (antibiticos)
Serolgicos
Reconocimiento por reacciones antgeno (somti-
cos o flagelares de la bacteria) y anticuerpos espe-
cficosproducidoscontraesasmolculasnopresen-
tes en animales de sangre caliente: conejos, coba-
yos,caballo
Ecolgicos, patolgicos y/o simbiticos
Asociaciones con animales, plantas, etc., efecto de
factores del ambiente
Genticos
Anlisis del nmero y tamao de los plsmidos, in-
tercambio de genes mediante los procesos de re-
combinacin
Moleculares
Estudiodeprotenasycidosnucleicos,muydesa-
rrolladosenlaactualidad,proporcionavaliosainfor-
macin sobre relaciones entremicroorganismos
 Cuadro 3- Jerarquas en taxonoma. En este caso simplificado se cita el ejemplo de los miembros del gnero
Shigella y sus rangos taxonmicos superiores.

Evidentemente,staconstituyeunaclasificacinartificial microbiana desde hace mucho tiempo. Resultan tiles e

que no permite inferir relaciones filogenticos o evoluti-
vasentremicroorganismosnideterminarevolucindefun-
ciones(respiracin,fotosntesis,etc.).Tampocodicenada
deorganismosnocultivablesyporlotantoaunnoaislados en
cultivo puro, que se sabe constituyen una importante
fraccin del germoplasma microbiano en lanaturaleza.
Caracteres clsicos
Los caracteres morfolgicos, fisiolgicos, bioqumicos,
ecolgicosygenticoshansidoempleadosentaxonoma
la identificacin microbiana y pueden brindar tambin in-
formacin filogentica.
Caracteres morfolgicos
Sonmuyempleadosentaxonomayaqueresultanfciles
deestudiar,sonbastanteestablesporserlaexpresinde
numerososgenes,suelenserestablesdelpuntodevista
gentico y en general, sobretodo en los eucariotas, no
varanmuchoconelambiente.Elcuadro4presentaalgu-
nosdeloscaracteresmorfolgicosempleados.

Cuadro 4- Algunos caracteres morfolgicos empleados en la clasificacin e identificacin microbiana

Carcter Gruposmicrobianos
Forma celular ytamaocelular Muyempleadosentodoslosgruposmicrobianos
Morfologa delascolonias Todos los gruposprincipales
Estructurassubcelulares Todos los gruposprincipales
Tinciones Bacterias, algunoshongos
Ciliasyflagelos Todos los gruposprincipales
Movilidad Bacterias deslizantes,espiroquetas
Forma y ubicacin delasendosporas Bacterias formadorasdeendosporas
Morfologa y localizacin de conidios yesporaseucariotas Algas, hongos
Inclusionescelulares Todos los gruposprincipales
Color Todos los gruposprincipales
El aporte de estos caracteres se ha incrementado luego
del empleo del microscopio electrnico de transmisin o
de barrido, cuyo poder de resolucin (1nm) supera am-
pliamente a los pticos (0,2 micras).
La coloracin de Gram contina siendo una importante
herramienta en la taxonoma bacteriana ya que permite
separargrupossegncomposicinyestructuradelapa- red
celularprocariota.
Caracteres fisiolgicos y metablicos
Estosconstituyenunaimportantecontribucinenlataxo-
noma ya que estn directamente relacionados con las
enzimasmicrobianasylasprotenasdetransporte.Como
las protenas son resultado de sntesis gnica, estos es-
tudios metablicos permiten una comparacin indirecta
delosgenomasmicrobianos.Enelcuadro5semuestran
algunas de determinaciones msempleadas.
Cuadro 5- Caracteres fisiolgicos y metablicos
usadas en la clasificacin microbiana
Fuentes de carbono, nitrgeno, azufre, de energa, etc.
Componentes de la pared celular
Tipos de fermentacin y productos finales
Clasificacin nutricional
Efectos de factores del ambiente: temperatura, pH,
gases, solutos, etc. Valores ptimos y rangos
Produccin de luz (luciferasa)
Metabolismos bioenergticos
Pigmentos fotosintticos
Necesidades y tolerancia a la sal
Metabolitos secundarios: antibiticos, toxinas,
pigmentos
Sensibilidadainhibidoresmetablicosyantibiticos
Inclusiones citoplasmticas: fosfatos, azufre,
fenoxialcanos
Los estudios llevan en general tiempo ya que el microor-
ganismoenestadopurosecultivaenmediosconsustra- tos
especficos. Se evala el empleo de algunos de ellos
(azcares,nitratos,etc.)porladesaparicindelmismoy/ o
por la aparicin de productos finales delmetabolismo.
Losperfilesmetablicosdepoblacionesdeinterssepue-
denevaluarensistemascomercialescomoelBiolog,don- de
se siembra el aislamiento en una placa con numero-
sosorificios,cadaunoconunafuentedecarbonodiferen- te.
Luego de la incubacin la placa se lee en un lector
electrnico(aparececolordondehubocrecimientoyutili-
zacin delsustrato).
Caracteres ecolgicos
Son propiedades que afectan la relacin de los microor-
ganismos con el ambiente, como las relaciones simbiti-
cas, la produccin de enfermedades en un husped es-
pecfico, las preferencias de habitat, las necesidades de
ciertosrangosdetemperatura,pH,O2,concentracinos-
mtica. Algunas caractersticas de crecimiento se consi-
deran tambin caracteresfisiolgicos.
Caracteres genticos
Resultan de indudable aplicacin en la taxonoma de eu-
cariotes, donde la especie se define en trminos de re-
produccin sexual. En procariotas, el fenmeno es frag-
mentario,perodetodasformasserealizangrandesavan-
ces en el estudio de intercambio de genes mediante la
recombinacin (transformacin, transduccin, conjuga-
cin)(captulo5).Laprimeraocurreprincipalmenteentre
especies bacterianas diferentes, pero raramente entre
gneros.Sehanrealizadoestudiosdetransformacincon
variosgneros:Bacillus,Micrococcus,Rhizobiumyotros.
Pero, puede suceder que no ocurra transformacin por
motivosdiferentesalahomologadelADN.
Laconjugacinsehaempleadomuchoenestudiostaxo-
nmicos. As entre las bacterias entricas, Escherichia
puede conjugar con los gneros Salmonella y Shigella,
pero no con Proteus ni Enterobacter, lo que concuerda
conotrosdatosquemuestranquelostresprimerosgne- ros
estn ms estrechamente relacionados entre si que con
los otros dosrestantes.
El nmero y tipo de plsmido presente en clulas bacte-
rianastambinseempleaconfinestaxonmicos,yaque
muchas veces codifican para un carcter de importancia
comolasensibilidadaantibiticos,metalespesados,etc.
Engeneral,convieneemplearenlaclasificacinungrupo
grandesdecaracteres(vertaxonomanumrica).
Caractersticas moleculares
Los abordajes ms modernos en la taxonoma se basan
en los anlisis de protenas y cidos nucleicos, que brin-
danimportanteinformacinsobrerelacionesentremicro-
organismos.
Comparacin de protenas
Lassecuenciasdeaminocidosenlasprotenassonrefle-
jodelassecuenciasdeARNmyporlotantoestnrelacio-
nadosconlosgenesquelascodifican.Sedeterminalase-
cuenciadeaminocidosdeprotenasconlamismafuncin
(si stas son similares, es muy probable que los organis-
mos que las poseen estn estrechamente relacionados).
Comoestosestudiossonlargosycaros,sehanemplea-
dotcnicasindirectasdecomparacindeprotenas,como
lamovilidadelectroforticadelasmismas,oelempleode
anticuerposespecficosquepermitendistinguirprotenas
muysimilares.
Composicin de cidos nucleicos
Losgenesmicrobianossepuedencomparardirectamen-
teporanlisisdesugenoma.Enelcuadro6seresumen las
tcnicas empleadas que incluyen determinacin del
contenido de bases guanina y citosina (G+C) e hibrida-
cin de sus cidosnucleicos.
Composicin de bases del ADN, constituye una de las
primeras tcnicas empleadas en el anlisis del genoma
microbiano. Las 4 bases pricas y pirimdicas que inte-
gran los cidos nucleicos son: adenina (A), guanina (G),
citosina (C) y timina (T), A se aparea con T y C con G.
ElporcentajedeG+CdelADNreflejalasecuenciade
bases y se determina por anlisis cromatogrfico de las
bases luego de hidrlisis o en forma ms sencilla por la
temperatura de fusin (Tm) del ADN.
En el ADN bicatenario tres puentes de H unen los pares
GCydoslosAT.Demodoquecuantomayoreslapropor-
cindeGCqueseencuentreenelADN,suscadenasse
separarn a mayor temperatura. La fusin se puede se-
guir en espectrometra ya que la absorbancia a 260nm
(UV) del ADN aumenta durante la separacin de las ca-
denas (figura 1). Al calentar una muestra de ADN latem-
peraturasubedurantelaseparacindelashebras,ame-
didaquesevanrompiendolospuentesdeH.Sealcanza
unamesetacuandotodoelADNseconvierteenmonoca-
tenario.Elpuntomediodelacurvaproporcionalatempe-
raturadefusin,medidadirectadelcontenidodeGC.
TambinseobtieneestedatocentrifugandoelADNenun
gradientedeCsCl(ladensidaddelADNaumentapropor-
cionalmente con el contenido deGC).
Cuadro 6- Anlisis clsicos de ADN
Composicin de bases
% C+C = G+ C x100
G+C+T+A
* gradiente deCsCl
* desnaturalizacintrmica
criterio de exclusin: % GC > 3 dos especies
diferentes
% GC > 10 dos gneros
diferentes
Hibridacin ADN-ADN
- depende de lasecuencia
- determinacinpor:
* % hibridacin de ADN1 marcado conADN 2
* < T del hbrido y del cultivopuro
m
- es el criterio actual de definicin deespecie:
- > 70% dehibridizacin
- Tm < 5C
El cuadro 7 presenta algunos de los valores de GC en
diversos organismos.
 7 Los protistassuperiores
Este grupo comprende a un conjunto muy diverso de or-
ganismoscuyoestudiohasidoabordadopordistintasdis-
ciplinas:Ficologa,MicologayProtozoologa.Estadiver-
sificacin se explica por el hecho de que los botnicos
reconocieron a las algas y a los hongos como plantas y
loszologosalosprotozooscomoanimales.Lacaracte-
rsticacomneslapresenciadeclulaeucariota,sonpor lo
tanto microorganismoseucariotas.
Actualmentesereconocencomomicroorganismos,orga-
nismosmuysimples,quehanpermanecidoatravsdela
evolucin adaptndose a las condiciones modernas. Los
representantesmsespecializados,comounalgademar,
un ciliado, un moho, pueden ser asignados rpidamente
a las algas, protozoos y a los hongos, respectivamente.
Sin embargo, existen numerosos protistas superiores in-
cluidos arbitrariamente en algn grupo, como el caso del
gneroEuglena,ubicadoentrelasalgasylosprotozoos.
En trminos generales:
Las algas pueden definirse como organismos con foto-
sntesisoxignicayqueposeencloroplastos.Puedenser
unicelulares,filamentosasocenocticas,algunasposeen
aspectodeplantadebidoalextensivodesarrollomultice-
lular, pero no se diferencian en tejidos ni rganos; por lo
general la especializacin celular se da en el caso de la
reproduccin. No deben confundirse con las cianobacte-
rias,quetambinrealizanfotosntesisoxignica,peroque
son bacterias y evolucionaron comoellas.
Los protozoos y los hongos son organismos no fotosin-
tticosyladiferenciaentreellosesdecarcterestructural; los
protozoos son predominantemente unicelulares ylos
hongos, sobre todo cenocticos, se desarrollan dando ori-
gen a una estructura filamentosa y ramificada, el micelio.
Elcloroplastoeselorganeloclaveenlasrelacionesen- tre
los tres grupos. Se puede perder irreversiblemente,
dando origen a las algas incoloras o leucocitos, que se
desarrollanconnutrientesmineralessimples,alaluz.As, a
partir de algas unicelulares, es fcil distinguir formas que
dependen de procesos fermentativos o respiratorios
para su nutricin, como losprotozoos.
Laseparacinesmuymarcadaentrealgasyprotozoosen
estructura celular y fisiologa, pero a los evolucionistas les
resulta ms difcil vincular a los protozoos con los hongos:
los primeros son uniformemente unicelulares y mviles y
los hongos predominantemente cenocticos e inmviles, y
su hbitat fundamental es el suelo. No obstante, es nece-
sario recordar que las formas primitivas son acuticas y
poseen esporas flageladas (zoosporas). Para los hongos
delsuelo,elvientoeslaprincipalformadepropagacin.
Las algas
Elsuelonoesunhbitatptimoparalasalgas(figura1), que
prefieren los ambientes acuticos. Sin embargo, la
ficofloraterrestreestintegradapornumerosasespecies
unicelulares y filamentosas, cuya distribucin est ligada
a tipos pedolgicos y a la cubierta vegetal. En condicio-
nes extremas, estos productores primarios (PP) de
materia orgnica pueden desempear un rol fundamen-
tal. La taxonoma que se emplea es la de los botnicos
(Talofitas) y se basa en propiedadescelulares:

naturalezaqumicadelapared,siestpresente
los materiales orgnicos dereserva
lanaturalezadelospigmentosfotosintticos
lanaturalezayposicindelosflagelos,enelcaso
de algasmviles
estructurasreproductoras
El cuadro 1 muestra las divisiones de las algas.
Las divisiones no son equivalentes en lo relacionado al
rangodeestructuradesusintegrantes.Porejemplo,Eugle-
nophyta consiste enteramente en organismos unicelula-
res organizados en colonias simples, mientras que las
Phaeophyta(algaspardas)sonenteramenteorganismos
Figura 1- Algas unicelulares y filamentosas
multicelulares, de aspecto de planta. El mayor y ms va-
riado grupo es el de las algas verdes (Chlorophyta), de
loscualesseoriginaronprobablementelasplantas,inclu- ye
organismos unicelulares y hasta multicelulares con
aspecto devegetal.
Cuadro 1- Principales grupos de algas
Grupo Caractersticas de los pigmentos, pared celular,materiales
de reserva, n y tipos de flagelos, organizacin celular
Chlorophyta
algasverdes clorofilaayb,celulosa,almidn,2flagelos,unicelulares
filamentosas, de grantamao
Euglenophyta
euglenoides ayb,sinpared,paramilnygrasas,1,2,3flagelospor
fotosintticos clula,unicelulares
Phyrrophyta
dinoflagelados aycycarotenoidesespeciales,celulosa,almidnyaceites,
2flagelosdiferentesenformayposicin,lamayora
unicelulares, pocasfilamentosas
Chrysophyta
Algas amarillo- a+/-c y carotenoides especiales, 2 mitades superpuestas
verdosas, de slice, otras sin pared, aceites, 2 flagelos por clula,
diatomeas unicelulares, filamentosas, cenocticas
Phaeophyta
algas pardas, ayc,carotenoidesespeciales,celulosayalgina,grasasy
dinoflagelados luminarina,2flagelosdedistintalongitud,pluricelulares
Rhodophyta
algas rojas a,ficobilinas,celulosa,almidn,s/flagelos,unicelulares,
(Plantae) pluricelularesconformadeplanta
Es muy extensa la laguna biolgica que existe entre las
cianobacterias y las algas. En cambio, las plantas supe-
riorespresentanrelacinconlasalgasverdes:ladisposi-
cin especfica de los pigmentos en el cloroplasto, las
paredescelularesconcelulosaylacapacidaddealmace-
naralmidn.
La mayora de las algas multicelulares son inmviles en
estadomaduro.Sinembargoensureproduccin,frecuen-
temente se forman esporas mviles, ya sea asexuales
(zoosporas) o gametos, lo que revela su relacin con al-
gngrupoparticulardeflageladosunicelulares.
Variasdivisionesdealgasposeenmiembrosunicelulares
inmvilesoquesedesplazanpormecanismosdiferentes a
los flagelos. Los desmidios, miembros de las Chloro-
phyta, presentan clulas grandes, aplanadas, consimetra
bilateral. Las diatomeas (Chrysophyta) poseen paredes
orgnicasimpregnadasconslice,dearquitecturamuycom-
pleja, con dos valvas superpuestas como las de una caja
dePetri.Ladivisineslongitudinal,cadaclulahijaretiene la
mitad de la vieja pared y sintetiza unanueva mitad.
Apesardecarecerdeflagelos,estosorganismospueden
moverselentamentesobresustratosslidos.Elmecanis-
mo en los desmidios no se conoce y en las diatomeas la
locomocin se realiza por modificacin del movimiento
ameboide.Poseenunorificioenlapared,elrafe,atravs
delcualelprotoplasmaseadhierealsustrato,empujando a
la clula. Grandes depsitos de paredes de diatomeas
sehanacumuladoyseusancomoabrasivosyenfiltros.
Distribucin de las algas
La mayora son organismos acuticos, en donde habitan
envidalibreoasociadassimbiticamenteconinvertebra-
dos,comoesponjas,corales,larvas,encuyasclulascre-
cen.Enelsuelo,sunmeroesinferioraldelasbacterias,
actinomicetes u hongos. Es precisamente su bajo nme-
ro, su nutricin autotrfica y su dependencia frente a la
luz,humedadynutrientesminerales,quehicieronpensar
alosmicrobilogosquesurolenlosecosistemasagrco- las
no era muysignificativo.
Su desarrollo es visible a simple vista en la superficie de
suelos vrgenes o cultivados y su aislamiento es sencillo
en medio lquido, con sales minerales, a la luz. El enri-
quecimiento se puede seguir por el color de los pigmen-
tos. Los recuentos en suelos superficiales pueden variar
desdealgunosmilesamillones/gramo(biomasaentre20- 40
kg/ha). Valores ms altos se encuentran porperodos
breves, luego de unalluvia.
Nutricin
fototrfas,lafotosntesiseselmecanismoprincipalde las algas en el suelo son: la humedad, los nutrientes
obtencindeenerga.Algunasespeciesrequierenvita-
minas y en la naturaleza son las bacterias las que pro-
veen estos factores de crecimiento. Muchas algas tie-
nen un tipo mixto de metabolismo, pudiendo emplear
fuentes orgnicas. Aun en la luz, ciertas algas no pue-
den emplear CO2 como su principal fuente decarbono
y dependen de acetato u otras formas orgnicas. Este
hechoescausadoporundefectoenlamaquinariafoto-
sinttica; si bien pueden obtener energa de su activi-
dad fotosinttica, no pueden obtener el poder reductor
para convertir el CO2 en materiales celulares.
osmotrfas, muchas algas que realizan fotosntesisnor-
mal en la luz, pueden crecer en la oscuridad a expensas
de variedad de compuestos orgnicos, derivando su me-
tabolismo hacia la respiracin. Las algas completamente
encerradasenparedcelulardependenexclusivamentede
sustratos orgnicos disueltos en laoscuridad
fagotrfas, aquellas clulas desprovistas de pared o
que no estn completamente encerradas en ella, pue-
den predar bacterias u otrosmicroorganismos.
Noescorrecto,entonces,describiralasalgascomogru- po
exclusivamente fotosinttico, ya que muchos de sus
miembrosunicelularesposeenlascaractersticasnutricio-
nales de los protozoos y de los hongos. Los leucofitos
que se forman por la prdida irreversible del cloroplasto,
sonorganismosnopigmentadosderivadosdegruposfla-
gelados,dediatomeasydeformasinmvilesdelasalgas
verdesunicelulares.Nopuedenfotosintetizar.
En el laboratorio, esta transicin pudo ser demostrada
experimentalmente, en ciertas cepas de Euglena, al ser
tratadas con estreptomicina o cuando son expuestas a
pequeasdosisdeluzultravioletaoaaltastemperaturas. La
clasificacin de los leucofitos es un problema difcil: por
su estructura pueden ser asignados a una divisin
particular de algas, como representantes no fotosintti-
cos.Perocomosoneucariotasunicelularesnofotosintti-
cos,puedensermiradoscomoprotozoos,ysonincluidos
entreellosporloszologos.Constituyenungrupodetran-
sicin entre las algas y losprotozoos.
Ecologa
Los principales factores que inciden en la distribucin de
minerales, el CO2 y la luz. El CO2 y los elementos nutriti-
vos no son limitantes. La luz determina la distribucin de
los organismos fototrofos: las algas son ms numerosas
enlos5-10cmdelperfilydisminuyenmarcadamentecon la
profundidad. Se pueden encontrar en horizontes ms
profundos (103/g) llevadas por las prcticas culturales
(arrastre mecnico), por la fauna o el agua (nutricin he-
tertrofa o permanecen en estadolatente).
Enambientesconinsolacinmuyintensa,lasalgastien-
denaconcentrarsealgunoscentmetrosdebajodelasu-
perficie.Allseprotegendebajodemineralestranslcidos
como cuarzo o dolomita, de las radiaciones solares y de
la desecacin (sobre todo la ficoflora de los desiertos) y
contra el fro intenso en las regiones polares. Las radia-
cionesultravioletanosonperjudiciales,demodoqueson
empleadasensuaislamiento,eliminandoloscontaminan-
tes bacterianos.
Lahumedad:lasalgasverdessonmuyexigentesenagua
yamedidaqueaumentalaaridez,elnmerodeespecies y su
densidad disminuyen. Otras algas, por el contrario,
soportanmallainundacin.Elptimosesita,comopara
otros grupos de microorganismos, alrededor del 40-60%
delacapacidaddecampo.Enlasuperficiedesuelosagr-
colasdelazonatemplada,ladisponibilidaddeaguapara las
algas suele ser limitante. Las clulas se recubren de
capamuscilaginosamuyhigroscpicaquepuederetener
10-15 veces su volumen en agua, la que es perdida muy
lentamente.
Elefectodelaestacindelaoesmarcado,enprimave-
rasunmeroesbajo;elcongelamientolasperjudicayen
invierno la poblacindeclina.
ElefectodelpHvaraconeltipodesuelo;engenerallas algas
son poco sensibles a las variaciones de pH. Los
valoresprximosalaneutralidadoligeramentealcalinos,
sonmsfavorables.Ensueloscidosdominanlasclorof-
ceas,quesepuedenencontrarapH5,0yaun4,0(elpti-
moparasudesarrollosesitaentrepH6,8y8,5),aunque se
encuentran en pH 9,3-10 y toleran hasta pH13.
Antagonismos:muchasespeciessonsusceptiblesalata-
que por bacterias, hongos, estreptomices, que con enzi-
masespecficasdestruyenlaparedcelular.Otrosantago-
nismos ocurren con nemtodos,termites.
Funciones
Aportedemateriaorgnica,yaquesonproductores
primarios muy importantes en suelos desnudos, po-
bres,erosionados,quemados,salinosodesrticos.Los
lquenes (asociacin alga-hongo) constituyen el esta-
do inicial de vegetacin sobre rocas o suelos minera-
les.Elcomponentefotosintticopuedesertambinuna
cianobacteria,inclusofijadoradenitrgeno,conlocual
estos lquenes pueden ser fijadores deN2.
Meteorizacin de rocas: una fina capa de clulasde
algasrecubrelasrocas,yalamuertedelasalgas,esta
materia orgnica posibilita el desarrollo de bacterias y
ocasionalmente de hongos (los colonizadores secun-
darios). La meteorizacin parece ser favorecida por la
formacindebicarbonatos(delCO2delarespiracin)o
por metabolitos de los microorganismos hetertrofos y
de los lquenes.
Fijacindelsuelo:ensuelosmineralessinestructura,
lascostrasdelquenesyalgas,fijanelsuelo,retardan-
dolaerosinymodificandoelrgimenhdrico.Seredu- ce
la evaporacin y los musclagos contribuyen a au-
mentar la estabilidadestructural.
Liberacin de oxgeno: por su fotosntesis oxignica
aumentan la aireacin en suelos inundados de arroza-
les y en suelos pesados. Por el consumo del CO2 y la
liberacin de sustancias alcalinas, tienden a elevar el
pH combatiendo la acidez. Liberan vitaminas, auxinas,
quefavorecenaloscultivosascomosustanciasinhibi-
dorassobrepartedelamicrofloradelsuelo.
Toxicidad:sonconocidaslasfloracionesdealgastxi-
cas que matan peces y contaminan aguas. Se debe a
un desarrollo explosivo de dinoflagelados que liberan
una poderosa neurotoxina, llamada saxitoxina. Los
moluscosquesealimentandeestosdinoflageladosno
puedeningerirse.
Los protozoarios
Constituyenungrupomuyheterogneodeeucariotas,uni-
celulares y mviles, cuyo tamao vara entre algunas mi-
cras hasta algunos centmetros (figura 2) (Madigan et
al, 2000) y (figura 3). Los habitantes del suelo son de
tallamspequeayaplanados,yaquedebenmoverseen el
film de agua que llena los poros. Presentan semejanzas
con varias divisiones de algas de las cuales derivan. Los
varios tipos de leucofitos proveen de pruebas sobre el ori-
genevolucionariodemuchosgruposdeprotozoos.Lapr-
dida de la capacidad fotosinttica reduce abruptamente la
potenciabilidadnutricionalyesseguidadeunaseriedeeven-
tosanivelcelularqueposibilitanalorganismoeldesarrollo
denuevosmecanismosdenutricinosmotrficoofagotr-
fico. Estos cambios pueden impedir el reconocimiento del
origen algal de estos microorganismos, los que se ubican
entonces, entre los protozoos.
El ciclo de vida de estos organismos consiste en una
fase activa y una fase de reposo o cstica, en la que el
organismo segrega una espesa capa protectora, pudien-
do resistir por muchos aos en ambientes adversos. La
reproduccinesusualmenteporfisinlongitudinalotrans-
versal.Unaspocasespeciesposeenreproduccinsexual.
La clasificacin de los protozoarios ha variado mucho en
losltimosaosyenlosesquemasmolecularesdeclasi-
ficacin reciente no existen los protozoos como taxn in-
dependiente y se encuentran eucariotas anlogos a pro-
tozoos en todos los nivelesevolutivos.
Los protozoarios de la clase Mastigophora poseen 1 a 4
flagelos.Enelsueloposeenpequeatalla(5-20micras)y son
los ms abundantes (3.000 a 200.000/g de suelo) y los
gneros ms comunes son: Allation, Bodo, Cercobo-
do,Cercomonas,Entosiphon,Heteromita,Monasyloscon
clorofila Euglena yChlamydomonas.
LosSarcodinaoRhizopodaemitenseudpodosquefaci-
litan su desplazamiento y por lo tanto la clula cambia
constantementedeforma.Algunosposeenunaenvoltura
rgida pero con orificio para emisin de los seudpodos.
Losgnerosmscomunesenelsueloson:Amaeba,Bio-
myxa,Englypha,Hartmanella,Lecytium,Naegleria,Trine-
ma,Nuclearia.
Losciliadossemuevenpornumerososapndices(cilias).
Las especies terrestres son tambin menores que las
acuticas (10 a 80 micras) y los gneros ms comunes
son: Balantiophorus, Colpidium, Colpoda, Enchelys, Hal-
teria, Pleurotricha, Tetrahymena,Vorticella.

Nutricin
Figura 2- Protozoo ciliado Se distinguen tres formas de nutricin:

Cuadro 2- Caractersticas de los principales grupos del subreino Protozoa

Grupo taxonmico caractersticas ejemplos

Mastigophora (flagelados)
Euglenoides
(grupo tambin considerado
con las algas)
Sarcodina (amebas)
Ciliophora (ciliados)
Uno o ms flagelos, divisin por fisin binaria Trypanosoma, Giarda,
longitudinal, reproduccin sexual en algunos. Trichomonas
Formas ameboides
Flagelados fototrficos Euglena
Seudpodos, son frecuentes los caparazones, Amoeba, Entamoeba
flagelos, en la etapa reproductiva
Cilias simples o compuestas. Dos tipos de Tetrahymena, Paramecium,
ncleos, vacuola contrctil, fisin binaria trans- Vorticella, Didinium
versal, sexualidad por conjugacin. De vida
libre, muchos comensales, algunos parsitos

Apicomplexa (parsitos) Esporas en su ciclo sexual, con cistos, Plasmodium, Toxoplasma

sin cilias, se llaman a menudo esporozoos
 Ecologa microbiana y mtodos
de estudio
Procesos microbianos en los ciclos biogeoqumicos

Laecologamicrobianaestudialaspropiedadesyelcom- Cuadro 2- Temas de inters en ecologa

portamiento de los microorganismos en su ambiente na-
tural,seaelsuelo,aguas,alimentos,animales(cuadro1)
ysuestudiointeresaalosinvestigadorespormuchosas-
pectos de dominio pblico (cuadro2).
Cuadro 1- Estudios en ecologa microbiana
amplio rango de organismos tanto macro como
microorganismos
tipos encontrados en distintas situaciones, as
como su nmero ydiversidad
lasactividadesrealizadasporlosorganismosen el
suelo y sus efectos en la fertilidad en el creci-
mientovegetal
lasinterrelacionesentreorganismos,conlasplan-
tas y los animales y con elambiente.
microbiana
Polucin ambiental
Detergentes biodegradables, contaminacin
de canales, cauces de agua, derrames depetrleo
Polucinpornitratosenaguassubterrneas,abo-
nos orgnicos, zonas de agotamientos deO2
Liberacin de microorganismos alterados por
ingeniera gentica
Daos por el congelamiento, biorremediacin,
fijacin delnitrgeno
Metano a partir deresiduos
Resistencia a losantibiticos
Vida microbiana en ambientesinusuales
Calentamiento global y susconsecuencias

El trmino ambiente se refiere a todo lo que rodea a un
organismo:losfactoresfsicos,qumicosybiolgicos.Los
microorganismosdesempeanrolesmsimportantesde
loquepodrainferirseporsupequeotamao.Desdeuna
perspectiva ecolgica los microorganismos son parte de
lascomunidadesdelosllamadosecosistemas.Cadaor-
ganismoenunecosistemainteractaconsuentornomo-
dificando marcadamente en algunos casos las caracte-
rsticas delecosistema.
Sinecologa: que analiza las interacciones en un
determinado lugar, considerando las especies, los
factores biticos y abiticos en ese lugar (suelo, mar,
estanque).
Autoecologa: en contraste con la anterior, comprende
el estudio de una especie y el efecto que sobre ella en
particular ejerce el ambiente (ejemplo: estudio de una
cepa de Rhizobium, de patgenos vegetales, etc.)

Laecologamicrobianaestudialasinterrelacionesentre Nociones de jerarqua ecolgica

los microorganismos y el ambiente y determina las leyes Ecosistema:eselsistemalimitadoenelespacioconsti-
generales que gobiernan estas interacciones. Se puede tuidoporelconjuntodecondicionesenergticas,fsicas,
dividir en dosaspectos: qumicasybiolgicasquerodeanaestosorganismos
(ambiente). La energa penetra a los ecosistemas sobre-
todoenformadeluzsolarylosorganismosfototrfosla
empleanparasintetizarnuevamateriaorgnica.Estacon-
tienetodosloselementos(C,N,S,P,Fe,etc.)ycuandoel
organismomuereseliberalaenergadesusconstituyen- tes
qumicos que queda disponible para el ecosistema
permitiendo el desarrollo de nuevos organismos. Estos
realizanimportantesprocesosdesntesisydegradacin,
losauttrofosgeneranmateriaorgnicaapartirdeCO2y
los otros son organtrofos y participan en la biodegrada-
cin y reciclado de la materia orgnica e inorgnica.
Se define para los elementos un ciclo biogeoqumico,
enelcualelelementoexperimentacambiosensuestado
fsicoydedeoxido-reduccinamedidaquesemueveen
elecosistema.
El trmino ecosistema puede aplicarse a conjuntos de
extensin variable:
microecosistema, como un cultivo microbiano, agrega-
do de unsuelo
macroecosistemacomplejo,porejemplo,unocano
mesoecosistema, como el estudio de un suelo, un es-
tanque y suvegetacin
Comunidadobiocenosis:estconstituidaportodoslos
organismos que habitan elecosistema.
Poblacin: est formada por las especies u organismos
detipodistinguible,porejemplolapoblacindebacterias,
deesporulados.
Individuo: componentes nicos de la poblacin: clulas,
hifa, cuerpo de reposo de hongo, espora microbiana.
Resumiendo, un ecosistema est integrado por:
comunidadobiocenosis-poblaciones-individuos
factoresabiticos
Losmicroorganismosseencuentranenambientesextre-
mos, la diversidad es enorme y especies de bacterias,
algas,hongos,protozoos,seaslanentodoslostiposde
suelos, en alimentos, aguas, restos orgnicos, animales.
Sus funciones son variables, algunas se resumen en el
cuadro3.
Laproporcinrelativadelasdistintasespeciesestafec-
tadaenciertogradoporelambiente:loshongosdominan en
medios cidos de bosques, las bacterias predominan
ensuelosinundados,losactinomicetesenambientesse-
cos, las algas son las primeras colonizadoras en suelos
quemados,erosionados,cuandostesehumedece.
Cuadro 3- Actividades de los microorganismos
del suelo
reciclan nutrientes unidos inicialmente a la frac-
cin orgnica delsuelo
cambian el estado de disponibilidad de elemen-
tos especficos para lasplantas
compiten con las plantas y entre ellos por los nu-
trientes esenciales para elcrecimiento
pueden realizar simbiosis con plantas, incremen-
tan la capacidad de stas para adquirir N oP
son importantes agentes de biorremediacin en
ambientescontaminados
puedenactuarcomoagentesdebiocontroldefito-
patgenos
A pesar de su gran ubicuidad (los microorganismos son
fcilmentetransportadosydispersados,sutiempodege-
neracin es generalmente corto y existen todos los tipos
metablicos),lascomunidadesdeunecosistemasonca-
ractersticas: el investigador, cuando busca un determi-
nado microorganismo, no analiza todos los ecosistemas,
sinoquetieneideaaproximadasobredondehallarlo.Esto se
debe a que el ambiente regula la composicin de la
comunidad bajo la presin de los factores fsicos, qumi-
cos ybiolgicos.
Elambienteinteractaconelmicroorganismoysellegaa un
equilibrio dinmico, ya sea naturalmente, por cam-
biodeestaciones,porejemplo,oartificialmente,porprc-
ticasagrcolascomoarado,aplicacindepesticidas,abo-
nos,etc.
El ambiente selecciona a las especies que se adaptan a
las condiciones propias del ecosistema.
Delpuntodevistaecolgico,loshabitantesdeunacomu-
nidad se pueden agrupar en: indgenas o autctonos e
invasores o alctonos. Estos ltimos, llamados zim-
genosporWinogradsky(1924),crecenrpidamentecuan-
do estn disponibles sustratos ricos en energa (pajas,
abonos), los autctonos son los microorganismos que
colonizan los materiales ms recalcitrantes que quedan
luego de un ataqueprimario.
Criterio de autoctona: posibilidad de aislamiento repe-
tido de la especie en distintas muestras de un mismo
ecosistema, habilidad para usar los nutrientes comunes
del medio y para soportar variaciones del ambiente, alta
densidad del organismo, que ser mayor en lugares con
abundantes nutrientes y condiciones favorables como
en el suelo en la vecindad de races (aspecto cuantitati-
vo).
Otra aproximacin de clasificacin basada en caracte-
rsticas de crecimiento es la de la escuela japonesa que
distingue:
oligotrofos, que crecen mejor a bajas concentracio-
nes de sustrato que en altas. Estos microorganismos
se distinguen de los que crecen usualmente en me-
dios de cultivo con altas concentraciones de nutrien-
tes, que sellaman,
copiotrofos,queengeneralcoincidenconloszimge-
nos.
Una comunidad puede ser poli o monopoblacional. Por
ejemplopolipoblacional,enelsuelo,enunalaguna,enel
desierto,encambio,unacomunidadintegradaporunpa-
tgenovegetalesmonopoblacional;estascualidadesre-
flejanelaspectocualitativodelacomunidad.
Especiedominante:eslaqueexhibeunaaltapoblacin o
abundancia de filamentos. En general, la comunidad
puedeposeerdosomsespeciescodominantes.
Habitat:Esunreaqueposeeciertogradodeuniformi-
dadycuyascaractersticassesuponequesondesignifi-
cado ecolgico: superficie de una hoja, plantas o anima-
les, el mar, una parcela de suelo frtil, porcin de arena
dedesierto,etc.Sutamaovara.Denotaunconjuntode
condicionesfavorablesodesfavorablesparalavida,yes
ms especfico que el trminoambiente.
Las superficies son de importancia considerable como
habitats microbianos, los nutrientes se pueden concen-
trar sobre ellas y estimular el desarrollo de numerosas
especies.Seempleanportaobjetossolosoconalgnadi-
tivo nutritivo, enterradas en el suelo o sumergidas en
aguas.Luegodealgntiemposeapreciaenelmicrosco- pio
la formacin de microcolonias, que se adhieren a la
pelcula,muysemejantesalasqueseformanensuperfi- cies
naturales(biofilms).
Nichoecolgico:Interesaconocerlasactividadesdelos
microorganismos. El que un organismo est presente en
unecosistemanoquieredecirqueestactivo.As,unatrans-
formacin bioqumica especfica es una buena prueba de
queelgrupoexisteyestactivo.Seaplicaeltrminonicho a
las funciones que el organismo realiza. El ambiente es
como la direccin y el nicho la funcin delorganismo.
Los microorganismos en la naturaleza
Los microorganismos se encuentran en todos ambientes
naturales. En muchos de ellos, donde los organismos supe-
rioresestnausentes,debidoaextremosfsicosoqumicos,
gran variedad de microorganismos existen y se desarrollan
como en los casos de acidez extrema, desecacin, salini-
dad. Los factores del ambiente afectan a los microorganis-
mos en la naturaleza tanto como lo hacen en el laboratorio.
Enambientesnaturales,engeneral,eselnivelylanaturale-
zadelosnutrientesdisponibles,quiendeterminarlosnive- les
de crecimiento bacteriano. Como estos niveles son en
generalmuchomenoresqueenellaboratorio,laproduccin de
clulas en la mayor parte de los ambientes naturales es
menor que en los cultivos delaboratorio.
Enlanaturalezalosmicroorganismossufrenperodosde
abundancia (restos de cultivos, animales muertos), se-
guido de perodos de limitacin, en los cuales aprove-
chandelospolmerosintracelularesdereserva(cidopoli
-OH-butrico, polifosfatos, etc.). Son escasos los pero-
dos de crecimiento exponencial.
Porejemplo,eltiempodegeneracindeEscherichiacoli
enelintestinoesdeunas12horas(dosduplicacionespor
da), mientras que en el laboratorio puede ser de slo20
minutos.Seestimaqueciertasbacteriasdelsuelosede- vegetales
sarrollan a menos del 1% de la tasa que muestran en 3
2
medios de laboratorio, como reflejode: 4 microorganismo microorganismo

bajo suministro denutrientes

1
ladistribucindelosmismosnoesuniforme
suelo (condiciones fsicas y qumicas)
los microorganismos no crecen solos, salvo excepcio-
nes,enlosambientesnaturalesysufrenactivacompe- Figura 2- Interacciones en el ecosistema suelo-planta
tencia de otrosmicroorganismos
Los eclogos sostienen que un ecosistema estable tiene
diversidadgenticaaltademododepodertolerarfluctua-
Sucesiones microbianas
cionesdelambiente.Muchosestudiosestndedicadosa
determinarsiloscambiosenlacomposicindelaspobla-
Unprincipiofundamentaldeldesarrollodeunecosistema
ciones microbianas y la cuantificacin de la diversidad
eslasucesin,osealoscambiosenlaspoblacionesque
genticapuedenserempleadoscomoindicadoressensi-
permiten el establecimiento de las llamadas comunida-
bles del deterioro en propiedades de los suelos debido a
des climax. En lugar de competir por el mismo sustrato,
prcticas de manejo, labranza, rotaciones,etc.
algunos microorganismos cooperan para realizar una
transformacin particular, que no realizaran si actuaran
solos. Se establece una progresin de cambios en las
Ambientes microbianos
poblaciones microbianas a medida que el sustrato es
metabolizadoylascondicionesdelambiente(O2,pH,po-
Acuticos
tencial redox) cambian.
Losentornostpicossonlosocanos,estuarios,pantanos,
lagos, ros y manantiales. Difieren mucho entre s en pro-
Lafigura1ubicaalosorganismosproductores,consumi-
piedades fsicas y qumicas y en las especies microbianas
dores y degradadores en el ecosistema suelo-planta y
activas. Los organismos fotosintticos predominantes son
lafigura2presentaunesquemadelasinteraccionesen-
cianobacterias y algas en las zonas aerbicas y bacterias
trelosintegrantesdelacomunidad.Lasdeltipo1ocurren
fotosintticas en las anaerobias. Las algas que flotan reci-
entre la comunidad microbiana y los componentes del
ben el nombre de fitoplancton y las de los lechos son al-
suelo, las del tipo 2 entre los microorganismos entre si,
gasbentnicas.Sonlosproductoresprimariosdeestos
lasdeltipo3entrelascomunidadesvegetalesymicrobia- nas
ambientes. Los ocanos abiertos son muy bajos en pro-
y finalmente las interacciones del tipo 4, que involu- cran
ductividadprimaria,mientrasquelasreasenlosocanos
al suelo y la vegetacin, interesan slo accesoria-
interiores son altas, siendo los lagos y manantiales los de
mentealbilogodelsueloysondominiodelafisiologay
mayor productividad, donde la concentracin de nutrientes
patologavegetal.
mineralesrequeridosporlasalgasesabundanteyfacilitan el
energa solar desarrollo de peces ymariscos.
herbvoros
productores primarios consumidores primarios
vegetales Las relaciones del oxgeno en un ro son de inters, so-
bacterias fotosintticas
y quimioauttrofas
restos vegetales
bretodo cuando stos reciben mucha materia orgnica
algas
cianobacterias materia orgnica consumidores
como aguas servidas y desechos de la industria. Puede
del suelo secundarios ocurrirunmarcadodficitdeO2,comoseveenlafigura3
(Madigan et al., 2000), consecuencia del incremento en
sustancias solubles microorganismos
degradadores
hombre
consumidor
bacteriashetertrofas.Sihaymuchoamonio,steesoxi-
terciario dadoanitratosporlasbacteriasnitrificantes.Elincremento
enalgasycianobacteriasesunarespuestaprimariaalos
Figura 1- Organismos en el ecosistema suelo-planta nutrientesinorgnicos,sobretodoelfosfato.
 culados a la degradacin de la materia orgnica, las
cantidad
relativa
bacterias y C orgnico
transformaciones de los elementos minerales muy im-
de clulas,
concentracin O2 algas y
portantesparalanutricindelasplantas,comoelN,P, S,
de nutrientes
+ -3
cianobacterias Fe, Mn,etc.
NH4 ,PO4
O2

NO3
-
general,elsuelosedescribecomounorganismovivo, ya
que nace por la pedognesis de la roca madre, se
ingreso distancia corrienteabajo desarrollapormltiplesprocesosdedegradacinysn-
Figura 3 - Efecto de la llegada de aguas con materia tesis,almacenareservasypuedellegaramorirpormi-
orgnica a un ro neralizacin gradual si no se conserva su reserva de
materia orgnica: elhumus.
A medida que el agua se aleja de la entrada del drenaje,
Lasactividadesdelosmicroorganismosenesteambien-
lamateriaorgnicaseconsumegradualmenteyelconte-
tealtamenteheterogneo,difierendrsticamentedelcom-
nidodeO2regresaalanormalidad.Ladisminucindel
portamientomanifestadoenmediosclsicosdelaborato-
oxgeno es indeseable ya que la mayora de los organis-
rio.Losmicroorganismosnoactansolos;otrosmicroor-
mos superiores requieren este gas y mueren en anaero-
ganismos,lamicroymesofauna,lavegetacinylaspro-
biosis. Se forman adems compuestos de mal olor (ami-
piedadesfsicasyqumicasdelsueloylaaccindelclima y el
nas, amidas, mercaptanes, H2S) por bacterias anaerbi-
hombre, contribuirn a exaltar o a inhibir un determi-
cas, algunas de las cuales son tambin txicas para ani-
nado procesobiolgico.
males y plantas.
Descripcin general del suelo
El suelo est compuesto de cinco componentes princi-
Terrestres
pales: la fraccin mineral, la orgnica, agua, aire y orga-
nismos vivos. El esquema siguiente resume las propor-
Elcomportamientodeunapoblacinmicrobianaysusefec-
ciones de cada uno, aunque los valores varan con los
tos sobre el suelo estn gobernados en gran parte por las
suelos y con la profundidad. De la fraccin inanimada, la
caractersticasfsicasyqumicasdeste.Elconceptosue- lo
cantidad de materia orgnica y mineral es relativamente
se puede abordar desde distintos puntos devista:
constante en un sitio dado, mientras que el aire y agua
fluctan (representan aproximadamente la mitad del
edafolgico,elsueloeslacapamsexternadelasu-
volumen del suelo y constituyen el espacio poroso)
perficiedelatierra,diferentealarocamadredelacual tom
origen, por la accin combinada de factores muy (figura 4).
diversoscomoelclima,rocamadre,vegetacin,micro-
flora,eneltranscursodeltiempopedolgico
gases
agrcola,elsueloeslaregindelatierraquepermitela vida minerales
de las plantas, del cual obtienen el soporte mec- nico
lquidos
y los nutrientesnecesarios

microbiolgico,elsueloconstituyeunmedionico,ya
que contiene gran poblacin de bacterias, actinomice- materia orgnica
tes,algas,hongos,protozoos,virus,esunodelosluga- res
en donde las interacciones biolgicas son msin- biomasa microbiana (2-5% de C-total)
tensas y donde ocurren los procesosbioqumicosvin- Figura 4- Principales componentes delsuelo
 Ciclo biolgico del nitrgeno
De los nutrientes fundamentales para el desarrollo vege-
tal, el nitrgeno constituye uno de los elementos sobre
cuyastransformacionesenelsuelosehanrealizadoms
investigacionesenlosltimosaos.Sepresentafrecuen-
tementecomolimitantedelcrecimientovegetalyaquees
removidoencantidadessuperioresalrestodelosnutrien-
tesyademssunivelenlossuelosesgeneralmentebajo. Se
emplea en la sntesis proteica, de cidos nucleicos,
aminoazcaresydeotrasmolculasdeimportanciaenla
clula. Favorece el crecimiento vegetativo, el tamao de
los granos y su porcentaje de protenas; aumenta la ab-
sorcin del fsforo ypotasio.
La importancia del nitrgeno se reconoce en:
la agricultura, incrementando los rendimientos, modifi-
candolacomposicinqumicaycalidaddelosvegetales
el ambiente: los problemas ambientales asociados a
excesosdecompuestosnitrogenadossonmuyconoci-
dos.Lasprincipalesfuentesdecontaminacindeaguas y
suelos son las prcticas agrcolas y las provenientes
de la atmsfera. La industria vierte aguas con elevada
concentracindexidosdeNoamonacoquecontami-
naloscursosdeagua.Sepuedellegaralaeutrificacin
(altaconcentracindesales,incluidaslasnitrogenadas)
delasmismasyalacontaminacindefuentesdeagua
potable con nitratos, muytxicos.
Las transformaciones del nitrgeno en la naturaleza se
aprecian en la figura 1 y en el cuadro 1 se presentan las
reservas de nitrgeno en el planeta.
Formas de nitrgeno en el suelo
Enlacapaarableseencuentranvaloresentre0,02a0,4%,
ymsde2%ensuelosmuyorgnicos.Ensuelosminera-
lesenclimatempladocon2-3%demateriaorgnicaenel
horizonte0-20cmy0,12-0,15%denitrgeno,losvalores de
2000-3000 kgN/ha aseguran las necesidades de los
vegetales por muchosaos.
Sin embargo el agregado de 100 kgNO3 /ha, que corres-
ponde a menos del 1% del N de la capa arable, puede
favorecer el desarrollo vegetal. Este fenmeno se atribu-
yealhechodequelamayorpartedelnitrgenonopuede ser
asimilado directamente por los vegetales. Gran pro-
porcin del humus es resistente al ataque microbiano y
solamente una pequea fraccin del N orgnico (1-3%)
se mineraliza cadaao.
La estabilidad del nitrgeno del suelo se explica por la
formacin de compuestos con constituyentes org-
nicos (taninos, fenoles, lignina) o por adsorcin a
arcillas.
Lamayorproporcindelnitrgenodelsueloesorgnica
(98%deltotal)ymenosdel2%sonformasminerales,N2,
N2O,NO,amonio,nitritosynitratos,demuchasdelas
cuales depende la nutricin vegetal. Esta pequea frac-
cin resulta muy importante porque es empleada como
nutriente,intermediariosmetablicos,donadoresoacep-
tores de electrones o son productos finales de muchas
transformaciones de esteelemento.
La fraccin orgnica
20-40% se reconoce comoaminocidos
5-10% comoaminoazcares
lasbasespricasypirimdicasnoexcedenal1%
170

cheletal,1998)muestraloscambiosenelestadodeoxi- do-
vegetales animales
reduccindeesteelemento,quepasade-3enelamo-
fijacin
atmsfera
nacoyenlamateriaorgnica,0enelN2hasta+5enlos
N2, N2O nitratos (cambio neto de 8 electrones). Como se aprecia
desnitrificacin volatilizacin el amonio puede ser convertido en un gran nmero de
nitrificacin productos.
+

NO3 NO2 NH4
Cuadro 1- Reservas de nitrgeno en
amonificacin
el ecosistema terrestre
inmovilizacin

15
biomasa
rocas primarias 40-190 x 10 ton N2 (97,8%)
materia orgnicafresca 15
humus atmsfera 3,9 x 10 ton N2 (2%)
14
rocas sedimentarias 0,8-4 x 10 ton N2 (0,2%)
Figura 1- Ciclo biolgico del nitrgeno
12
mar 22 x 10 tonN 2
11
Lanaturalezadelrestodelnitrgenoesdifcildedetermi- nar, 5,4 x 10 ton N en
2
sedimentos
11
integra los heterociclos de las molculas hmicas, 6,5 x 10 ton N-NO3
lentamentedegradables.EsprobablequeelN-aminoci- suelo 5,5 x 10tonNenrestosvegetales
dosprovengadepeptidoglicanosycidosteicoicos,cons- yanimales
tituyentes de paredes bacterianas y slo se detectan tra- 9

zasenlossuelos,puessonrpidamentebiodegradados. En 11 x 10 ton de N en vegetales

9
la fraccin de los cidos hmicos, un 20-50% del N 1x10tondeNinorgnicosoluble
estconstituidoporaminocidos,un3-10%deaminoaz-
caresyunapequeacantidaddebasesderivadasdeADN y
ARN bacteriano, sobre todo. En la fraccin flvica, un Cuadro 2- Procesos biolgicos y abiolgicos
20-30% es N-aminocido y 8-10% sonaminoazcares. que involucran al N

Lafuenteprimariadenitrgenoparaelsuelolaconstitu- Naturaleza Denominacin Estimacin cuantitativa

yelaatmsfera,endondeelN2representaun79%.Enel del proceso
cuadro1seobservaquelamayorreservadenitrgenola 6
biolgico fijacin del N 175 x 10 ton N/ao
constituyen las rocas primarias (98% de todo el N2), le 2 2
asimilacin
siguelaatmsfera,luegolasrocassedimentarias,losse- inmovilizacin
dimentos marinos y el reservorio ms pequeo lo consti- mineralizacin
tuyeelsuelo(sobrecadahectreadesueloseacumulan desnitrificacin
80.000 ton de N ), de la litsfera (37 kg/cm2) y de las ro-
2
6
cas sedimentarias (872 kg/cm2). fsico-qumico fijacin industrial 30-35x10 ton N/ao
6
lavado 15x10 ton N/ao
6
Como se observa, existe una gran masa de nitrgeno atra- sedimentacin 15 x10 ton N/ao
6
pado en las rocas como N no directamente aprovecha- solubilizacin 5 x 10 ton N/ao
2 6
bleporlosvegetales.El cuadro 2 cuantifica procesos que volatilizacin 5 x 10 ton N/ao
6
precipitacin 60x10 ton N-NO/ao
involucran a compuestos con nitrgeno y la figura 2 (Fen- 3
 Reduccin
N org.
NH+ NHOH N NO NO
4 2 2 2
Oxidacin
-3 -1 0 +1 +2
Figura 2- Ciclo del nitrgeno: procesos deoxidacin
y reduccin. Las lneas punteadas indican que N
puede producirse por otras reacciones adems
de la clsica desnitrificacin
Entradas de N a los ecosistemas
1.Denaturalezabiolgica:constituyelafijacinbiolgi- ca
del nitrgeno (FBN), realizada por protistas inferiores
dotadosdeuncomplejoequipoenzimtico,lanitrogena-
sa,capazdereducirlostriplesenlacesdelamolculadel
N2 a amonio, el que luego es incorporado encetocidos
para formar aminocidos y luego protenas.
La ecuacin global no refleja los mecanismos involucra-
dosylosintermediariosentreelNylasformasorgnicas
2
en las clulas: losaminocidos, uredos, etc.
Fijacin biolgica del nitrgeno (FBN)
8e- 8H+
N 2 NH + +H
2 4
aminocidos
N2asa
Los requisitos para que el proceso ocurra se resumen:
nitrogenasa: enzima responsable de lareduccin
energa:enformadeATPqueelorganismodebegene- rar
a partir de molculas orgnicas (hetertrofos) o de
laluz(fototrofos).Enasociacionessimbiticaselhospe-
dante fotosinttico brinda la energa y demsrequisitos
minerales: la enzima posee Mo, Fe, se requiere tam-
bin Mg para el complejoMg-ATP
poderreductor:loselectronesquesalendelsustratoy
pasan por los distintos componentes de la N asa para
2
reducireltripleenlacedelN2 por pasos de2 electrones
porvez
esqueletos carbonados: requeridos para fijar el
NH3quenosedetectlibreyaquerpidamentepasaaami-
nocidosouredos.Tambinbrindanlaenergaypoder
reductor.
NO
NO
El proceso es patrimonio de algunas bacterias, que fijan
2 3
en vida libre o se asocian con races, tallos, hojas, en com-
binaciones simbiticas o en asociaciones rizosfricas y
filosfricas.
+3 +5
2.Denaturalezanobiolgica:lasaguasdelluviaapor-
tannitrgenocombinadocomoamonio,nitrito,sustancias
albuminoides,queprovienendelsuelooaguas,delacon-
2
taminacinenzonasindustrialesodelafijacinnobiol- gica
por radiaciones o reaccionesfotoqumicas.
El hombre ha logrado la reduccin del N2 (proceso
Haber-Bosch)
Fijacin industrial del nitrgeno (FI)
N2+3H2 2NH
3
catlisis inorgnica, 200-300 atm, 1000C
Este proceso se realiza a altas temperaturas y presiones
en plantas industriales muy sofisticadas que pueden pro-
ducir unas 1000 toneladas de N por da. Pero resulta un
proceso oneroso para los pases sin reservas petroleras
o de gas. El H2 proviene de reservas de gas natural, del
petrleo o del metano, que se agotan rpidamente.
2
Salidas de N del ecosistema
La desnitrificacin es una de las causas ms importan-
tes de prdida de nitrgeno por va biolgica y consiste
en una respiracin anaerobia de sustratos orgnicos o
inorgnicos,connitratocomoaceptordeelectronesenla
cadenarespiratoria.Elproductofinalgaseoso,N2,N2O,
se pierde a la atmsfera. El amonio tambin se puede
volatilizar en condiciones de pH y temperaturas altas.
Enresumen:esteelementosufrenumerosastransforma-
cionesdeorigenbiolgico:mineralizacin-inmovilizacin,
xido-reduccin,fijacin-volatilizacin.Noseencuentran
las etapas de solubilizacin-precipitacin ya que la mayo-
ra de los compuestos nitrogenados minerales son solu-
bles en agua. El hombre incide en estas transformacio-
nes por el manejo que realiza de los ecosistemas, por la
tecnologa de depuracin de efluentes altamente conta-
minadosyenelcasodesuelos,porlaaplicacindeferti-
lizantes y sustancias biocidas, la inoculacin de microor-
ganismos fijadores deN2.
Mineralizacin-inmovilizacin
Lasformasinorgnicasmineralesamonio,nitritoynitrato se
producen continuamente en el suelo por procesos de
mineralizacinysonlafuentesdenutrientesparalosve-
getales amonio y nitratos, los nitritos resultan txicos.
La mayor parte es soluble en agua y son desplazados
con sta a horizontes no alcanzados por las races. La
fraccin ms retenida es el amonio que puede estar ad-
sorbido en forma intercambiable en el complejo arcilla-
humusofijadodentrodelashojuelasdelasarcillasypuede
representarunaimportantefraccinenhorizontesinferio-
res y hasta 3,5-8% del N total en la capaarable.
La determinacin de estos iones posee un valor relativo
ya que son mltiples las vas que pueden seguir en el
suelo:
volatilizacin delNH3
desnitrificacin de losnitratos
asimilacin porvegetales
inmovilizacin en clulasmicrobianas
fijacin a coloides(amonio)
lavado, erosin,quemado
Slo las mediciones peridicas pueden proveer informa-
cinsobreladinmicadelasformasdelnitrgenoeneco-
sistemasnaturales.
La mineralizacin del nitrgeno orgnico comprende
dos etapas:
amonificacinqueliberaNH3apartirdemolculasor-
gnicas
nitrificacin, proceso por el cual se liberan nitritos o
nitratos,ionessolublesenaguaapartirdecombinacio- nes
minerales uorgnicas.
Laamonificacinesrealizadaporungrannmerodemi-
croorganismoshetertrofosyanimalesdelsueloqueata-
candistintasmolculasorgnicas:urea,aminocidos,pro-
tenas, aminoazcares, cidos nuclecos, sustancias h-
micas. La nitrificacin es la produccin biolgica de nitri-
tos o nitratos a partir de amonio o de combinaciones
orgnicas.
La inmovilizacin es el proceso simultneo e inverso a
la mineralizacin, por la cual las formas minerales: amo-
nio, nitrito o nitrato entran a formar parte de combinacio-
nes orgnicas en el citoplasma microbiano (ciclo interno
de los elementos).
Amonificacin
Sustrato: es muy variado, cualquier tipo de molcula or-
gnica nitrogenada.
Microflora:estintegradaporinnumerablesespeciesde
bacterias, incluidos los actinomicetes, hongos, protozo-
os,algas,queposeennumerosasenzimastantoextrace-
lulares como: proteinasas, peptidasas, quitinasas, lisozi-
ma, ARNasa, etc. o intracelulares (asparaginasa, gluta-
minasa, aminocidodeshidrogenasas).
Ambiente: como consecuencia de la falta de especifici-
dad en los sustratos, la amonificacin es uno de los pro-
cesos menos sensibles a los cambios del ambiente y se
realizatantoenaerobiosiscomoenanaerobiosis,bajoun
rangodepHcompatibleconactividadbiolgica,enregio- nes
fras, como en el rangotermfilo.
Cmineralizado/Nmineralizado:enecosistemasenequi-
librio, la relacin C-CO2/Nmineral es aproximadamente
10/1.Conaportesdesustanciasorgnicas,estarelacin
sealteradeacuerdoalarelacinC/Ndelasmismas:una
relacin alta provocar ms liberacin de CO2, si el N%
delosrestosvegetalesesalto,laproporcindeamonioy
nitrato ser mayor.
Amonio: se considera un producto de desecho celular.
Una vez satisfecha la demanda microbiolgica por el
nitrgeno, el resto metabolizado es eliminado como NH3.
Energa:ladesaminacinnoproveedeenergaalmicro-
organismo,perolamismapuedeobtenersedelcatabolis-
mo del esqueleto carbonado de la molcula: protena,
cidos hmicos,etc.
Evaluacin:Laevolucindelamonioensuelosyaguas,
enriquecidosonoconsustanciasorgnicasnitrogenadas,
se determina en el campo o en el laboratorio. Como el
amoniopuedeseguirdistintasvasenlanaturalezaloque
evaluamoseslaamonificacinneta,osealadiferencia
entreelamonioproducidoyelquesiguiotrasvasenel
suelo. El empleo de compuestos con N15 permite evaluar
amonificacinreal.
Amonificacin de aminocidos y protenas
Lasprotenasconstituyenunbuensustratoparalamicro-
flora,alaquebrindanlamayoradeloselementosparala
sntesisdemacromolculas:C,H,O,N,S.Sonatacadas
porenzimasextracelularessegnelsiguienteesquema.
aerobiosis:
NH3, CO2, agua,
SO4 =
protenapeptona pptidoaminocido
anaerobiosis: NH3,
CO2, aminas, cidos
orgnicos, indol
Los aminocidos son degradados rpidamente en sue-
losyaguas.Seencuentranlibresenpequeaproporcin,
productodelaactividadmicrobianasobreprotenas,oson
excretados por las races. La actividad es mayor en ca-
passuperficiales,enlasmsprofundaslaadsorcina
coloides puede ser importante y la nitrificacin menor.
Amonificacin de cidos nuclicos
Numerosos microorganismos del suelo poseen enzimas
extracelulares capaces de degradar cidos nucleicos,
ADNasa y ARNasa, provenientes de clulas vegetales,
animalesymicrobianasconliberacindelosmononucle-
tidos,quesonfcilmenteatacadasporlamicroflora.
Pi
ARN, ADNmononucletido azcarNH3, aa
purinas urea
pirimidinas
Se liberan fosfatos por accin de fosfatasas vegetales o
microbianas. Las bases pricas o pirimdicas y el azcar
resultantesonempleadosporunavariadamicrofloraapa-
reciendo en el medio amonio, aminocidos, cidos org-
nicos, urea, dependiendo de las condiciones y de los or-
ganismosdominantes.Acidosorgnicosyalcoholesacom-
paan a aminas, amidas, CO2 y agua, enanaerobiosis.
Otrossustratos:urea,cianamidayfertilizantesde
amonificacinprogresiva
Laureaseencuentrafrecuentementeenlosecosistemas
naturales (fertilizantes, excreciones de animales o de la
hidrlisisdeloscidosnucleicos).Sudegradacinesmuy
rpida y la microflora ureoltica es muy numerosa: com-
prende aerobios y anaerobios facultativos, cocos y baci-
losquesoportanpHelevadosresultantesdelaliberacin
deamonaco:
NH2 NH2
C= O + H2O COO 2NH3 + CO2
NH2 NH4
Lacianamidaclcicaesotrofertilizanteempleadocomn-
mente.Porhidrlisisnobiolgicaseformaurea,laquees
mineralizada por la poblacinureoltica:
CaCN2 + 2H2O H2CN2 + Ca(OH)2
+ ureasa
H2O CO(NH2)2 2NH3 + CO2
A los efectos de retardar esta hidrlisis y permitir que los
cultivos dispongan del nitrgeno a medida que lo requie-
ren, se emplean complejos a base de urea; la urea-
formaldehido es uno de ellos, la oxamida, otro:
(HC = N - C - N = CH-)n H2N - C - C-
NH2O OO
urea-formaldehido oxamida
La aplicacin de estos fertilizantes, as como el empleo
de inhibidores de la nitrificacin, posibilitan la toma gra-
dualdeamonioporloscultivos,evitandosurpidaoxida-
 Ciclos biolgicos del azufre, fsforo, hierro
Ciclo biolgico del azufre
El azufre es un elemento esencial para todos los orga-
nismos, es uno de los 10 bioelementos requeridos en
relativamente alta concentracin, e integra la composi-
cin de:
protenas, en los aminocidos metionina (21% de S) y
cistina (27% de S), formando adems puentes de azu-
fre. Los enlaces disulfuro estabilizan la estructura ter-
ciaria deprotenas
factores de crecimiento, como la biotina y tiamina, hor-
monas, coenzimaA
fuente de energa para muchos microorganismos: la
oxidacin de formas reducidas del azufre, importantes
en ambientes a altas temperaturas, permite la fijacin
del carbono y el desarrollomicrobiano
Los vegetales contienen aproximadamente la misma
cantidad de S y de P (0,2-0,5%) de su peso seco y
como sus funciones estn relacionadas con activida-
des enzimticas, como la ferredoxina, una protena Fe-
S, que participa en la fotosntesis y tambin en la fija-
cin del N2, las plantas deficientes en S muestran sn-
tomas caractersticos de deficiencias: retardo en el cre-
cimiento, amarillamiento de hojas, sobretodo en las le-
guminosas.
Los principales reservas de azufre se encuentran en la
litsfera (rocas sedimentarias, gneas y metamrficas de
la corteza terrestre), con 24 x 10 18 kg y en la hidrsfera,
1,3 x 1018 kg. En el suelo se encuentran cantidades mo-
deradas (2,6 x 1014kg), menos en la atmsfera (4,8 x
109kg) y en vegetales (7,6 x 1012kg) (Stevenson y Cole,
1999). El cuadro 1 muestra flujos de azufre entre los
componentes ms importantes en suelos agrcolas tpi-
cos.
Cuadro 1- Flujos de azufre en suelos agrcolas
(kg/ha/ao)
Tomaporvegetales 10-50
Remocinporcosechas 5-20
Remocin enproductosanimales 0-5
Entradas delaatmsfera 2-20
Lavado 0-50
Meteorizacindeminerales 0-5
Emisionesvoltiles desconocidas
El contenido de S en los suelos vara mucho, los rangos
ms frecuentes en suelos agrcolas de regiones hme-
dasysemi-hmedasesde100a500mg/kgo0,01a0,05%
(224-1.120kg/haenlacapaarable),losvegetalesconsu-
men una cantidad variable de este elemento, en general
secitandatosentre10-30kg/ha.Lamayorreservadeeste
elementoenelsueloesorgnicayenmuchoscasoscons-
tituyeunfactorlimitantealdesarrollovegetal,quepresen- tan
claros sntomas de deficiencia. La respuesta a fertili-
zantesazufradosesrpidaenesoscasos.Losfertilizan-
tes fosfatados contienen CaSO4 que elevan el nivel de S
del suelo. Los vegetales se nutren de preferencia de sul-
fatos, pero pueden asimilar tambin ciertos aminocidos
y formas voltiles de azufre por las hojas.
Laatmsferapuedecontenercompuestosconazufre:SO2,
SH2,provenientesdelaactividadindustrial,delapolucin
enlasgrandesciudadesytambindeunaactividadbiol-
gica intensa. La figura 1 presenta las transformaciones reduccin
biolgicas que sufren los compuestos con azufre que in- S-org
cluyen procesos de:

mineralizacin-inmovilizacin Azufre elemental Tiosulfato Sulfito

=
So S2O3 = SO3 = SO4
SH2
xido-reduccin sulfato

volatilizacin, de menor importancia, excepto las pr-

didasdeH2Soanhidrdosdeazufre,debidoaactivida- des FeS oxidacin
Sulfuro
delhombre. de hierro
-2 0 +2 +4 +8

Vegetales Animales Figura 2 Cambios en estados de oxido-reduccin en

compuestos con azufre

SO4= , SO3= , S3O6 = , S2 O3 =

S0 Comoseobservalastransformacionesquesufre
esteelementoenelsuelotienenmuchasimilitud
SO2
atmosfrico
con las delnitrgeno
S=
Mineralizacin Inmovilizacin la reserva en el suelo es orgnica (75-90% delS-total)

Mineralizacin la nutricin vegetal depende de la actividad minerali-

Materia orgnica, fresca,
zante de la microflora delsuelo
humificada,
microorganismos lasulfooxidacinesunprocesosimilaralanitrificacin en
el plano bioqumico yecolgico
Figura 1- Transformaciones biolgicas del azufre
lasulfhidrizacin,omineralizacindecompuestosazu-
fradosorgnicoshastasulfurosoH2S,esmuysimilara
No son importantes las reacciones de precipitacin-solu- laamonificacin
bilizacin de compuestos azufrados. lasulfatorreduccinesunarespiracinanaerobia,como la
desnitrificacin, con las mismas consecuencias ne-
El azufre existe en varios estados de oxidoreduccin, gativasenlanutricinvegetalperoimportanteparaeli-
desde -2 en los sulfuros voltiles o precipitados (H2S,
minar a la atmsfera sulfatos enaguas.
FeS), hasta +6 en los sulfatos (figura 2) (Frenchel et al,
1998).
Sin embargo, ambos ciclos presentan algunas
diferencias
Numerosas son la formas inorgnicas en el ambiente:
sulfuros (-2), S (0), tiosulfatos (-2, +6), sulfitos (+4),
la fuente primaria de nitrgeno disponible para la ac-
sulfatos (+6). Los estados de oxidacin ms comunes
tividad biolgica lo constituye la atmsfera y en el
en suelos y materiales orgnicos son: -2 en sulfuros y
casodelazufreeslarocamadre.Laprincipalfuente
en la mayora de compuestos orgnicos y +6 en los sul- en el suelo es la pirita (FeS ) de las rocas gneas,
fatos y molculas que los contienen. Los procesos de 2

oxidacin y reduccin ocurren fcilmente encondicio- que sufre oxidaciones liberando sulfato durante la me-
teorizacin y la formacin del suelo. Esta es la forma
nes adecuadas.
 del S asimilado por los vegetales y microorganismos y
tambin lavado. Muchos suelos lo retienen como
minerales sulfatados insolubles (sulfatos de calcio y
magnesio).
el del azufre es considerado un ciclo ms complejo;
muchas de las transformaciones, sobre todo la sul-
fooxidacin de innumerables compuestos con grado
de oxidacin intermedio entre sulfuros y sulfatos, no
estn bien dilucidadas. El ciclo de este elemento in-
cluye la mineralizacin de residuos vegetales, ani-
males, fertilizantes, aportes por la lluvia y ciertos
gases, como SO2, H2S que llegan al suelo en canti-
dades importantes en zonas fabriles, del orden de 100
kg/ha/ao en regiones industrializadas de Euro-
pa y Estados Unidos.
Mineralizacin-inmovilizacin
Los vegetales requieren sulfatos como fuente de azufre,
el que deben reducir a forma sulfhidrilo (-SH) en sus
clulas. La mineralizacin de las formas orgnicas de
este elemento es un importante proceso microbiolgico
que asegura la provisin de sulfatos en la zona radical.
Formas orgnicas como protenas, aminocidos, anti-
biticos como la penicilina, compuestos hmicos, ste-
res sulfricos, etc. son transformados en compuestos
cada vez ms simples por una micropoblacin muy va-
riada, en condiciones muy amplias de aireacin, tempe-
ratura, pH, liberando finalmente compuestos inorgni-
cos, sulfatos y/o sulfuros.
La inmovilizacin incorpora estos iones a las clulas
microbianas que compiten por ellos con los vegetales.
La biomasa microbiana del suelo regula las transfor-
maciones del azufre y la actividad microbiana regula
tanto los flujos de azufre entre las diferentes reservas
(sulfatos solubles, S-orgnico lbil y S-orgnico resis-
tente) y es responsable de la conversin de fracciones
pasivas a otras muy activas, como los aminocidos con
cistena.
Como en el caso del nitrgeno, las combinaciones del
azufre en el humus, conducen a una estabilizacin. Los
productosfinalesestnenpartegobernadosporlascon-
diciones delmedio:
en aerobiosis el producto final es el sulfato, acompa-
ado de nitratos, CO2, H2O, fosfatos,etc.
en anaerobiosis, como ocurre en el caso de la putre-
faccin de protenas, se acumula H2S y productos de
malolorcomolosmercaptanes:metilmercaptn(CH3-
SH), metil-etil-mercaptn (CH3-S-C2H5), txicos para los
vegetales, junto a aminas, amidas, NH3, fosfatos, sales
ferrosas, CO2, CH4, cidos orgnicos, alcoholes.
Los aminocidos son rpidamente degradados en sue-
los bien aereados, con liberacin de sulfatos. Los micro-
organismos hetertrofos pueden tambin liberar sulfatos
de compuestos de estructura R-SH. La cistena desulfhi-
drasa es responsable de la liberacin de sulfuros a partir
de cistina:
HSCH2CHNH2COOH + H2O CH3COCOOH + H2S + NH3
Enelcasodelametioninapuedeaparecersulfatoluego
desuincorporacinalsuelo,obienladegradacinpuede
ocurrirconformacindeproductosfinalesvoltiles,metil-
mercaptn(CH3-SH)ydimetildisulfuro(CH3SSCH3),reali-
zado por bacterias y hongos.
Lassulfatasas(sulfohidrolasas)comolaarilsulfatasa,son
enzimasquehidrolizansteressulfricos,conenlacestipo
R-O-S:
R-O-SO - + H O R-OH + SO = + H+
3 2 4
La mineralizacin de compuestos azufrados y la libera-
cin de formas minerales, reducidas u oxidadas (mine-
ralizacin neta) depende, como en el caso del nitrge-
no, del contenido de S%, de la relacin C/S y a veces de
la N/S.
La relacin crtica C/S debajo de la cual el azufre excede
lasnecesidadesdelamicroflorayseliberaalmedio,vara
comoenelcasoyaconsideradodelnitrgeno,conlosma-
teriales orgnicos que llegan al suelo, pero se puede esta-
blecer valores entre 100 a 150/1. En general, lasrelacio-
 los electrones en los organismos quimioauttrofos con
excepcin de las bacterias del hidrgeno, entran en la
CTE por los citocromos con la intervencin de piridn
nucletidos. La oxidacin de la mayora de los com-
puestos orgnicos es va NADH, que podra estar im-
pedida en estos organismos. La cadena transporta-
dora de electrones de los microorganismos auttro-
fos es pococonocida.
1. Las bacterias filamentosas deslizantes del grupo
Beggiatoa-Thiotrixsoncaractersticasdemediosambien-
tes acuticos ricos en sulfuros o suelos hidromrficos.
Contienen frecuentemente inclusiones de azufre en sus
clulas que pueden oxidar asulfato.
2. Lasbacteriasfotosintticassulfurosaspurpreasde
lafamiliaChromotiaceaeylassulfurosasverdesdelafa-
milia Chlorobiaceae emplean sulfuros y acumulan S en
lasclulasquepuedeserluegooxidadoasulfatos.Domi-
nanenbarrosyenanaerobiosisdondeseacumulansul-
furos (captulo3).
3. Microorganismoshetertrofos:numerosasespecies
de bacterias aerobias, hongos y levaduras pueden oxi-
dar formas reducidas de azufre, aunque la energa libe-
rada slo representa una pequea porcin de la que la
clulanecesita.Numerososhongospuedenliberarsul-
fatos de molculas orgnicas como protena-tiourea,con
rendimiento energtico menor que los thiobacilos.Se
discute el rol de los microorganismos hetertrofos en la
oxidacin de compuestos azufrados pues si bien su ren-
dimiento es bajo, ste puede ser compensado por su
alta densidad en algunos ambientes.
Ecologa de la sulfooxidacin
En suelos inundados son las bacterias fotosintticas y
lasBeggiatoaceaelosprincipalesorganismosenlaoxi-
dacin delazufre
En aireacin estos grupos no son los dominantes y los
thiobacilos y los organismos hetertrofos son los res-
ponsables delproceso.
La humedad debe favorecer los intercambios gaseosos
yaquelamicrofloraesaerobia,exceptoelT.denitrificans que
debe encontrar alto nivel de nitratos y anaerobiosis para
reducir sulfuros y otros compuestos reducidos.
El encalado de suelos cidos favorece la accin de la
poblacinsulfooxidante.EngeneralelpHnodesciende
demasiado en los suelos pues la vegetacin se encar-
ga de asimilar los sulfatos a medida que stos se van
produciendo. Existen situaciones en las cuales la acu-
mulacinpuedeserimportanteyentonceselpHpuede
descenderalgunasunidadesconelconsiguienteincon-
veniente en el desarrollovegetal.
El suelo puede recibir grandes cantidades de azufre en
polvo cuando se desea corregir suelos alcalinos o en la
lucha contra actinomicetes patgenos de papa o batata,
comoelStreptomycesscabies.Enamboscasoslaactivi-
daddelosthiobacilosasegurarpidaformacindecido
sulfricoquebajaelpHanivelesnosoportadosporestas
especies.
Ciertosambientesanegados,ricosenmateriaorgnicay
sulfurosdepirita(FeS2),cuandosondrenadosyexpues- tos
al aire liberan sulfatos, el pH cae debajo de 4,0 ylos
vegetales pueden perjudicarse.
3FeS2 + 11O2 + 2H2O 3Fe+++ + 4H+ + 6SO= 4
Laaplicacindeinoculantesgranuladosconazufreele-
mental y fosfato de roca inoculado con thiobacilos
permiten aportar a las pasturas sulfatos y fosfatos ms
rpidamente en el trpico hmedo que en regiones tem-
pladas y ridas. El cido sulfrico formado ayuda en la
solubilizacinde:
fosfatostriclcicos,llevndolosafosfatodiymonoclci-
co, asimilables por lasplantas
compuestosdemanganeso(apartirdeMn ),K,Ca,Al,
+4
Mg.Serequierehumedad(lluvias)yesmsefectivoen
suelos cidos. Estos inoculantes son usados cuando
fertilizantes como el superfosfato no estn disponibles
y se cuentan con depsitos de fosfato deroca.
 13 La rizosfera
Los microorganismos interactan con las plantas a nivel
delfollajeylashojas,enlasuperficiedelsuelo,alrededor de
las races y semillas, donde encuentran abundantes
materialescarbonadosyunambienteparticularconcon-
diciones fsico-qumicas diferentes que las del suelo sin
cultivar. Las plantas, por su parte, reciben numerosos
metabolitosdelamicropoblacinedfica,muchosdeellos
promotores decrecimiento.
La figura 1 muestra las principales zonas de interaccin
biolgica, conocidas como:
filosfera (ambiente sobre las hojas)(F)
rizosfera (zona del suelo afectada por las races)(R)
restos vegetales o mantillo (ramas, hojas, etc. sobre
el suelo)(M)
espermatosfera (zona del suelo afectada por los exu-
dados y descamaciones de las semillas)(E)
F mico (inmovilizacin), control biolgico de
M demineralizacin-inmovilizacin,precipitacin
R rando la estructura, el rgimen hdrico, el pH,
E
Figura 1- Zonas de interaccin entre microorganismos y
vegetales
El cuadro 1 resume los efectos recprocos entre vege-
tales y microorganismos y el cuadro 2 seala la impor-
tancia de las sustancias liberadas por los vegetales al
suelo.
Cuadro 1- Interacciones entre los
microorganismos y las plantas
Efecto de las plantas sobre los microorganismos
Directos
aportedesustanciasenergticas,estimulanteso
inhibidoras, comomolculas:
orgnicas,vitaminas,fitohormonas,sustancias
queproducenagregados.Exudados,secrecio-
nes, restos de tejidos que actan como fuen-
tesdeenerga,C,N,S,etc.ocomosustancias
txicas
modificacin del medio fsico (estructura) o qu-
microorganismosfitopatgenos
Indirectos
modificacindelmedioqumicoporlosprocesos
solubilizacin, oxido-reduccin de materiales
orgnicosominerales,elambientefsicoalte-
la composicin de la atmsfera del suelo y el
ambiente biolgico, estimulando las interac-
ciones microbianas a esenivel
Efecto de los microorganismos sobre losve- aumento de la disponibilidad y toma de nutrientes mi-
getales nerales

Directos: por los compuestos liberados, minerales, fito- provisindesustanciaspromotorasdelcrecimiento

hormonas
Indirectos: actuando como microorganismos deletreos supresindemicroorganismosdeletreosypatgenos
o fitopatgenos en larizosfera.

Los efectos de los microorganismos rizosfricos sobre
a las plantas pueden catalogarse (figura 2) (Kennedy,
1998)como:
Neutros: no afectan el crecimiento
Deletreos: que pueden afectar negativamente el creci-
mientovegetal,sinnecesariamenteparasitaraltejido(al-
teraciones en el aporte de agua, iones y sustancias pro-
motoras del crecimiento vegetal, cambiando las funcio-
nes y/o limitando el crecimiento deraces).

Benficos:existecrecienteevidenciadequelamicroflo- ra Patgenos:disminuyenelrendimientoporproduccinde
saprofita de la rizosfera incluye componentes benfi- enfermedades:numerosasbacterias,actinomicetes,hon-
cos que pueden incrementar el crecimiento vegetal y los gos, producen enfermedades que provocan importantes
rendimientos significativamentepor: prdidas en loscultivos.

Benficos

Promocin Fijacin N2
crecimiento Biocontrol

Estabilizacin
suelo Antibiosis

Toma
deagu Simbiosis
a

Flujo
Enfermedad
nutrientes

Liberacin Fitotoxicidad
enzimas
Competencia
Adhesin
Alelopata

Figura 2- Efectos neutros, benficos, perjudiciales y variables de la comunidad microbiana rizosfrica sobre le crecimiento vegetal
Conceptos generales
Desde comienzos del siglo pasado se reconoci que la
zona del suelo vecina a las races induca, en general,
unamayoractividaddelosmicroorganismosyseintrodu- jo
el trmino rizosfera, para definir a esta regin. Desde
entonces,sonnumerososlosestudiossobrelasactivida-
desmicrobianasenestazona,quesedefinecomoelvo-
lumen de interaccin entre el sistema radical de los
vegetales y su inmediato medio suelo. Su validez en
trminos de gradientes microbiolgico y qumico ha sido
demostradaporvariosautores,conunmximodeefecto
enlazonadecontactoconlasraces,hastadistancias
variablesquepodranllegaraalgunosmilmetros.Luego el
efecto es despreciable. El cuadro 2 muestra la impor-
tancia de la masa radical y los aportes en forma de exu-
dados,lisados,secreciones,queresultanimportantesin-
sumos para losmicroorganismos.
La microflora es afectada por los exudados radicales y
por los aportes de restos de tejidos y clulas.
Losmicroorganismosestimuladosactansobrelaplanta,
poniendo a su disposicin molculas orgnicas que son
absorbidas por las races, como aminocidos, vitaminas,
antibiticos,fitohormonasycontribuyenasunutricinmi-
neralporlosprocesosdemineralizacinysolubilizacin, de
ciertoselementos.
Las interacciones biolgicas son muy intensas en esta
regin y los fenmenos de sinergismo o de antagonismo
son exaltados.
La rizosfera, en sentido amplio, se define como la fina
capa de suelo que se adhiere firmemente a las races,
pero que se puede separar por lavado y agitacin mode-
rada en agua. Se puede dividir en rizosfera prxima
y alejada, segn el tiempo y la intensidad de agitacin.
Eslazonadelsueloconinfluenciadelasraces,conmxi- mo
efecto desde la superficie de la raz hasta 1-3 mm
(pudiendo llegar a 5 mm). Constituye un microecosiste-
mamuyespecializadoquepropiciaelcrecimientodeuna
poblacin microbianadiversificada.
Elrizoplanoloconstituyeelsueloencontactontimocon
lasuperficiedelasracesyseextraeporagitacinvigoro-
sa de las mismas luego del tratamiento anterior. Si nose
indicaexpresamente,alhablarderizosfera,seincluyeen
general a la rizosfera y alrizoplano.
Muchos microorganismos colonizan la raz por heridas o
por accin enzimtica. Se habl un tiempo de endorri-
zosfera, pero se comprende que esta definicin no es
correcta ya no est involucrado el suelo. Se habla de mi-
croorganismos endofticos: simbiticos, saprofitas o pa-
rsitos.
Cuadro 2- Importancia de las races en el suelo
Planta de centeno de 16 semanas
13.000.000 de races axiales y laterales
50 km de largo total, ms de 200 m2 de superficie
Materiales depositados en la rizosfera: exudados- se-
creciones- muclagos- lisados
importantes fuentes de carbono, nitrgeno,ener-
ga
varan en funcin de la especie vegetal y del eco-
sistema
puedenalcanzarmsde500mg/gderazseca
(normal, entre 10 y 100 mg/g)
Mtodos de estudio
Las investigaciones en esta regin no son sencillas, es
necesario trabajar con plantas vivas, en medios artifi-
ciales: soluciones hidropnicas, cultivos sobre agar, ver-
miculita u otros soportes, o en el suelo mismo, en ma-
cetas en invernculo o en el campo. Los datos obteni-
dos son puntuales y brindan informacin sobre las re-
laciones microflora-vegetal en un momento dado. Las
condiciones en este hbitat son muy dinmicas y los
productos liberados por |os vegetales son simultnea-
mente biodegradados o adsorbidos fuertemente a los
coloides del suelo.
Porestemotivo,losestudiossobreexudacinserealizan en
medios estriles y el nivel de produccin no pueden
extrapolarseacondicionesnaturalesyademslosdatos
sonpuntuales:lassustanciassonproducidasybiode-
gradadas en formasimultnea.
Algunas de las tcnicas empleadas (resumen en cua-
dro 4) (captulo 8 y Anexo prctico):
seguimiento de microorganismos en este habitat:
se emplean mutantes marcadas por resistencia a an-
tibiticos o con caractersticas fisiolgicas que permi-
ten reconocerlas fcilmente en aislamientos, en estu-
dios de recuentos (NMP). Se obtienen con transpo-
sones (Tn5), hibridizacin del ADN, empleo de son-
das,etc.
recuentosdegruposfisiolgicosyclculodelarelacin
R/S=densidaddealgngrupoporgramodesuelorizosfrico
densidad por gramo de suelo sin cultivo
Permiten determinar efectos estimulantes o inhibidores
deciertoscultivossobreprocesosmicrobianosdeinte-
rs, como celulolisis, fijacin del N2, nitrificacin, etc.
Resulta difcil comparar resultados de distintos autores
sinosehanempleadotcnicas,sistemasradicalesy
medios y condiciones de cultivo semejantes.
colonizacin de la raz (microscopa de luz, fluores-
cente,electrnica)muytilparaconocerladistribucin de
los microorganismos y su grado de colonizacin. El
microscopiopticopermitimostrarquesloentreun 5
a 10% de la superficie de la raz est cubierta de mi-
croorganismos, hecho que desmiente la creencia muy
extendida de que las races estaban cubiertas por un
espesomantomicrobiano.Estaideasesustentenlos
altos recuentos, al expresarlos por gramo deraz.
La microscopa fluorescente, con anticuerpos marca-
dosconsustanciasquefluorescenenluzultravioleta,per-
mite determinar la colonizacin de distintas porciones de
larazporcepasdeintersagrcola,comolosrhizobios,y
brindan invalorable informacin sobre la distribucin de
bacterias en el sistemaradical.
El microscopio electrnico de transmisin y de barrido
permitigrandesavancesenelconocimientodeladistri-
bucinespacialdeloscomponentesdelainterfasesuelo-
raz,laformadeagrupacindelaspoblaciones,lapre-
senciaycolonizacindelmucigel,susrelacionesconlas
arcillas, la lisis de ciertasbacterias.
determinacionesdebiomasamicrobiana:porrecuen-
tos o por la tcnica de fumigacin son muy empleadas
paradeterminarlosefectosestimulantesoinhibidoresde
distintasrizosferas.
Elcuadro3(Frioni,1990)muestralafraccindeCorgni-
copresenteenlabiomasadelsuelorizosfricodecuatro
gramneas cultivadas en la zona de Ro Cuarto (Argenti-
na),evaluadaenelestadodegranolechoso,enrelacin a la
del suelo sincultivar.
Cuadro 3 - Carbono orgnico en la biomasa (%),
en la rizosfera de gramneas (*)
maz sorgo mijo mijo suelo
perla comn solo
(C- biomasa/
C-orgnico 6,19a 5,99 5,35ab 5,64a 4,52b
total) %
(*) Dos o ms tratamientos sealados por la misma letra
no difieren significativamente por Tuckey al 1 %
empleo de elementos radioactivos, C,N,S, etc. per-
miten un estudio ms detallado de procesos microbia-
nos en este ambiente
modelizacin, diseos experimentales y matemticos
son muy empleados y permiten predecir los efectos de
variaciones en: el contenido de agua del suelo, la den-
sidad de las races, los niveles de exudacin, el agre-
gado de distintos sustratos, el efecto rizosfrico a dis-
tancias variables de las superficies radicales. Estos
modelos sealaron marcada reduccin del efecto a
medida que la distancia de la superficie de la raz au-
menta, como se observa en microscopa electrnica y
constituyen una herramienta invalorable en la predic-
cindecambiosenlaspoblacionesmicrobianasenres-
puestaamodificacionesdelainterfasesuelo-raz.
 Cuadro 4- Mtodos de estudio en la rizosfera
mutantesmarcadasporresistenciasaantibiticos,
biocidas,oporcaractersticasfisiolgicas
recuentosdegruposfisiolgicosyrelacinR/S(den-
sidadesensuelorizosfrico/densidadesensue- lo
sin efectoradical)
colonizacindelaraz:microscopadeluz,fluores-
cente,electrnica
determinaciones de biomasa microbiana, por re-
cuentosomuertedepropgulosysumineraliza-
cin(CO2)
empleo de elementos radioactivos: C, N, S,etc.
modelizacin:diseosexperimentalesquepredicen
los efectos de cambios en exudados, agua, etc.
sobre la poblacinmicrobiana
Origen y naturaleza de
los materiales orgnicos
Se reconocen varias categoras de compuestos orgni-
cos en la vecindad de las races (figura 3 y cuadro 5).Es
necesario establecer si la sustancia en cuestin es pro-
ducida por el microorganismo en cultivo puro y se en-
cuentra a concentracin fisiolgicamente activa en la ri-
zosfera.
1. Exudados: compuestos de bajo peso molecular en
general solubles en agua que liberan las clulas hacia
espacios intercelulares y luego al suelo. Su liberacin no
est mediatizada por un metabolismo. Son azcares,
aminocidos, cidos orgnicos, hormonas, vitaminas. La
exudacin radical se puso de manifiesto luego de aplica-
cionesfoliaresdesustanciasconelementosradioactivos
(P32, 14CO 2, N15,etc.)
2. Secreciones,compuestosdebajooaltopesomolecu- lar
liberados como resultado de procesos metablicos
mediados por el aparato de Golgi (hidratos de carbono
polimerizados,enzimas)
3. Muclagos vegetales, son originados en el pice de
la raz y segregados por el Golgi, o hidrolizados de po-
lisacridos de la pared primaria y de clulas del extre-
mo de la raz, segregados por pelos capilares o produ-
cidos por degradacin bacteriana de clulas epidrmi-
casmuertas.
4. Mucigel, se restringe este trmino al material gelati-
noso de la superficie de las races creciendo en suelos
normales, no estriles. Incluye muclagos vegetales,
clulas bacterianas y sus productos metablicos (cp-
sulas, capas mucosas, gliocalix) as como coloides mi-
nerales y materia orgnica del suelo. El mucigel es una
zona muy importante que mantiene a las races y al sue-
lo en contacto y es un reservorio de nutrientes y agua de
importancia para el vegetal en pocas de sequa. Se
encuentra presente siempre en las clulas de pice de
la raz, pero su extensin a lo largo del sistema radical
esvariable.
5. Lisados son los compuestos liberados por autli-
sis de las clulas epidrmicas. Las paredes de estas
clulas son digeridas por los microorganismos que li-
beran a la rizosfera los productos de su actividad mi-
crobiana.
Raz Suelo Tipo de material
clulas epidrmicas y lisiados (5)
corticales lisadas e
invadidas por bacterias micilagos de clulas
epidrmicas degradadas por
bacterias
2mm exudados(1)
m.o. miclagos
vegetales y micigel (4)
microbianos exudados y secreciones (1-2)
muclago secretado por
clulas epidrmicas
decamacin de clulas
muclago (hidrolizado de
pice de la raz polisacrido de clulas
epidrmicas
Figura 3 - Materiales orgnicos en la rizosfera
 Cuadro 5- Rizodeposicin
Exudados (solubles en agua): azcares, aminocidos,
cidos orgnicos, hormonas, vitaminas
Secreciones HdeC,enzimas
Lisados autolisis de clulas de paredesvegetales,
de races, fauna, microorganismos
Gases C2H2, CO2, H2
27% del total de la fotosntesis
Medidasenhidroponia: 700m3/ha/ao entrigo
300m3/ha/ao en cebada
1.250m3/ha/ao en maz
Enestudiosenhidroponiadecultivosestrilessehacal-
culadolacantidaddematerialesliberadosporlasraces,
losqueextrapoladosacampodanvaloresmuyaltos.Es-
tascifraspuedenrepresentarunpesodeentre7,3y12,5
toneladasmtricasdemateriaorgnica,excediendoalos
mejores rendimientos en grano. Para algunos autores
puedenrepresentarun27%delamasatotaldelaplanta
(cuadro5).Enelsuelo,subiodegradacinylaadsorcin
aloscoloides,disminuyenlaproduccinneta.
Lafigura4resumelosconceptossobrelastransferencias
delcarbonoysuutilizacinenlarizosfera.ElCO2asimila-
doesllevadodelaparteareaalasracesparalasnte-
sis de nuevas estructuras y puede tambin ser liberado
comoexudados:solubles,quedifunden,obiennodifusi-
bles, que permanecen en el mucigel. La degradacin de
estoscompuestosmsresistentesexplicaraunsegundo
picoenlaliberacindelCO2.Unposibletercerpicoenel
flujo de CO2 sera resultante de la degradacin de restos
de clulas y tejidos y de la penetracin demicroorganis-
mos en clulas corticales.
CO2
CO2 microorganismo
races exudados libres compuestos simples
mucigel tiempomicroorganismos
descamacintiempo microorganismos
tejidos
ompuestossimples
Figura 4 - Flujos de carbono en la rizosfera
Las sustancias orgnicas liberadas por los vegetales se
resumen en el cuadro 6.
Cuadro 6- Compuestos encontrados en la
rizosfera de vegetales en condiciones axnicas
Aminocidos: todos los naturales
cidos orgnicos: actico, butrico, ctrico, fumri-
co,gliclico,lctico,oxlico,propinico,succnico,
tartrico,valrico
Hidratosdecarbono:arabinosa,desoxiribosa,fruc-
tosa, galactosa, glucosa, maltosa, manosa, oligo-
sacridos, rafinosa, ramnosa, ribosa, sacarosa, xi-
losa.
Derivados de cidos nuclicos: adenina, guanina,
citosina, timina
Factores de crecimiento: biotina, tiamina, inositol,
piridoxina, cido p-amino benzoico, cido nicotni-
co
Enzimas: amilasa, invertasa, fosfatasa,
proteasa,proteasa
Antiboticos
Bacterias: Agrobacterium tumefaciens enfermedad
(agalla de corona)
Agrobacterium rhizogenes, Agrocina (antibotico)
Pseudomonasfluorescens:Fenazina,controlaenfer-
medad en trigo (phz- (Tn5): mutante noactiva)
Hongos Trichoderma spp muchos metabolitos acti-
vos, Gliocadium spp producen varios antibiticos
(patulina, pioluteorina)
Otros compuestos: auxinas, glicsidos, cido cian-
hdrico, pptidos, saponinas, CO2, alcoholes, sus-
tancias quelantes, etc.
Losefectosdelasmismassobrelosvegetalessepueden
resumir:
Reguladores de crecimiento vegetal: etileno, cido
giberlico(AG),cidofusrico,cidoindolactico(AIA),
CO2
cido abcsico, citoquininas, que se suman a las produ-
cidas por las plantas
CO2c
Fitotoxinas: como cido para-amino-benzoico, cido
cumrico, actico, butrico, HCN, H2S, cidobenzico,
etc. Los cidos alifticos se acumulan en ambientes
 anaerobios (fermentacin de pajas) y difunden a la ri-
zosfera.Susefectosdependendelalongituddelaraz
expuesta al txico. Por otro lado la acidez protegera a
laplantademicroorganismosperjudiciales.Loscidos
aromticos son mstxicos
Antibiticos:numerosasmolculasconcarcterbios-
tticoybiocidasonliberadosporbacterias,actinomice-
tes, hongos (patulina, gliovirina,etc). Algunos microor-
ganismos como Pseudomonas fluorescens, Trichoder-
ma viride se emplean a nivel experimental como pro-
motores del crecimiento vegetal y en el control biolgi-
co de microorganismos fitopatgenos. (captulo17)
Aglutininas y agentes de agregacin del suelo: las
lectinas son glicoprotenas que actan como recepto-
resreconociendositiosdeadhesinenlasuperficiede la
pared de races y de bacterias (rhizobios, azospiri-
los).Losmicroorganismosliberansustanciascomogo-
mas,exopolisacridos,capasmucosas,polmerosque
contribuyen a formar agregados entre partculas mine-
rales y elhumus.
Enzimas: ms de 50 enzimas han sido detectadas en
larizosfera:hidrolasas,pectinasas,ADNasas,oxidorre-
ductasas, que regulan los procesos biolgicos en este
habitat
Efecto rizosfrico sobre grupos microbianos
Los requerimientos nutricionales de las bacterias del
rizoplanoydelarizosferadifierendelasquehabitansue- los
sinvegetacin.
Menos estudios se han realizado sobre los actinomi-
cetes, a pesar de que son muy abundantes y activosen
la superficie de las races. La mayora de los traba- jos
estn vinculados a la deteccin de antagonistas que
producen antibiticos contra patgenos vegetales. Enla
rizosfera predominan especies de Streptomyces y
Nocardia.
Hongos
Las tcnicas de recuento muestran en general un efecto
rizosfrico positivo sobre este grupo (cuadro 7), aunque
menos marcado que para las bacterias. Muchos autores
sostienen que si el efecto se expresa en funcin de la
biomasadeambosgruposynoenfuncindelnmerode
individuos,losresultadosseinvertiran.Enlosltimosaos
sehabrindadogranatencinaloshongosquecolonizan la
superficie de lasraces.
La colonizacin inicial sera realizada por una varie- dad
de especies fngicas, habitantes del suelo, que a los
pocos das sera desplazada por una micoflora ms
especfica, formas tpicas de la superficie de las ra-
ces, que persisten hasta la senescencia. Para la de-
teccin de estos hongos es necesario lavar las races
vigorosamente, para eliminar las formas esporgenas,
dominantes.

Bacterias
Numerosas revisiones ilustran sobre efectos rizosfricos Cuadro 7- Efecto rizosfrico de trigo sobre grupos
-1
positivos.Engeneralseadmite,quesonlasbacteriasno microbianos (ufc g suelo)
esporuladas,Gramnegativas,lasmsfavorecidas.La
predominanciadeespeciesdePseudomonasenlarizos- Organismo Rizosfrico No rizosfrico R/S
fera se explica por su alta tasa de crecimiento, latencia
bacterias 120 x 107 5,3 x 107 24/1
reducida, por la aptitud a producir sustancias inhibidoras
hongos 12 x 105 1 x 105 12/1
enelcursodelmetabolismodehidratosdecarbonoypor la
actinomicetes 49 x 106 7 x 106 7/1
sntesis de pigmentos flurorescentes, frecuentemente
protozoos 24 x 102 10 x 102 2,4/1
inhibidores de otrasespecies. amonificantes 500 x 106 4 x 106 125/1
desnitrificantes 1,3 x 108 1 x 108 1.260/1
Las formas filamentosas ramificadas son muy abundan-
tesenlasuperficiedelasraces,comoCorynebacterium,
Mycobacterium. ufc= unidades formadoras de colonias
Algas
Este grupo ha sido poco estudiado, ya que por su carc-
ter auttrofo no es afectado directamente por los exuda-
dosradicales.Sinembargo,numerosostrabajossealan
estimulacindealgunasrizosferassobrelasalgas;fen-
meno que se ha tratado de explicar por la liberacin de
factoresdecrecimiento,elcontenidodeantibiticosenla
rizosfera o por cambios en las propiedades fsicas del
medio.
Las interacciones entre microorganismos tanto sinr-
gicascomoantagnicassonmuyafectadasaniveldeeste
ambienteparticular,yaquelaspoblacionesenaltasden-
sidadesseafectanintensamentecompitiendoporlosnu-
trientes, elespacio.
La figura 5 (Lynch, 1990) muestra la posible distribucin
de diferentes tipos de microorganismos rizosfricos.
Rizoplano
Tejido radical
B ces, pero resistentes a productos o actividades de los
C
A rro, etc.)
Nde microorganismos
Interior delaraz
Figura 5 - Distribucin de diferentes tipos de
microorganismos en las races
Se aprecia que el:
tipo A: crece en espacios intercelulares dentro de la
razysuconcentracincaeabruptamenteanivelesdel
suelosincultivo,inmediatamentefueradelaraz
tipoB:creceenelrizoplanoysudensidadcaeanive-
basales a muy corta distancia de la superficieradi-
cal y a cero a muy corta distancia dentro de la raz (no
es endofito).
tipo C: organismo fsicamente excludo del rizoplano
por el tipo B), pero que emplea materiales orgnicos
originadosenlarazoproducidosporelorganismoB),
oambos.
tipo D: organismo fsica o qumicamente excludo por
los tipos B) y C), pero que emplea productos del C) o
materialescomplejosdelarazperonousadosporB)o
C) por su incapacidad de metabolizarlos o por repre-
sin catablica en esos organismos por molculas or-
gnicas ms simples, de las plantas.
tipoE:utilizaproductossecundariosdeorganismosri-
zosfricos,peroendesventajacompetitivaconrespec-
toalostiposB,CyDyporlotantoesincapazdecom- petir
por molculas originadas en lasraces
Lmite
Rizosfera tipoF:microorganismostpicosdelsuelo,excluidosf-
sicamente de los ambientes sobre o cerca de las ra-
D organismosrizosfricos(antibiticos,quelantesdelhie-
Suelo sin reces
tipo G: microorganismos generales del suelo exclui-
E
dos de la rizosfera por actividades o productos de los
otros tipos.
F
Esteesquematrataderepresentarelcomportamientode los
G
microorganismos en los alrededores y dentro de las
Distancia desde laraz races,peroesevidentequealgunaespeciepuedemos- trar
combinaciones de dos o ms tipos de modelos de
distribucin.
Factores que afectan el efecto rizosfrico
Losefectossobrelapoblacindelsuelovaranconlaes-
pecieolavariedaddelvegetal.Silaslneasdeunaespe-
cievaranenunsologen,suscaractersticasrizosfricas
puedencambiar.Laedaddelaplanta,suestadosanitario
les yvigor,eltipoyposicindelaraz,yporsupuesto,eltipo de
suelo y el ambiente afectan al efectorizosfrico.
Especie vegetal: algunas especies pueden estimular o tuye el nico ambiente en donde los microorganismos
suprimiradeterminadogrupomicrobiano,aunquelosca- pueden desarrollarse y las relaciones R/S son all muy
sosdeinhibicinsonmenosfrecuentes.Lasleguminosas importantes.
presentan, en general, mayor efecto rizosfrico que los
cereales,peropocosestudioshanrelacionadoesteefec- to
con la naturaleza de los exudados radicales. Las dife- Cuadro8 - Efecto rizosfrico sobre bacterias y
6
rencias pueden ser muy marcadas segn la zona de la actinomicetes (x10 )
raz que se estudie. Los organismos que requieren ami-
nocidos son ms numerosos en la zona apical, por tra- Cultivo Estado fenolgico S R R/S
tarse de una regin que loslibera. vegetativo (4 hojas) 5,2 5,3 1,0
Trbol vegetativo (6-8 hojas) 6,1 8,1 1,3
Estadofenolgico:elefectorizosfricocomienzaama-
floracin 5,6 318,0 56,8
nifestarsedesdelagerminacindelassemillas,porapor-
tedelosmicroorganismosdelaespermatsfera,loscom- germinacin 5,2 6,8 1,3
ponentesdelasenvolturasdelgranoyporsusexudados. Trigo vegetativo 6,1 50,3 8,2
Para algunos autores la colonizacin se realizar princi- grano en formacin 5,6 52,0 9,3
palmente a partir de los microorganismos del suelo, ms
que por los de lasemilla. vegetativo (6 hojas) 5,2 14,5 2,8
Colza floracin 6,1 310,5 50,9
Losmximosdeestimulacinseencontraronenlaflora- fructificacin 5,6 491,0 87,7
ciny/ofructificacin,paraluegodeclinarabruptamen-
te cuando comienza la senescencia de las races. La com-
posicin de la microflora vara, proliferando los microor- Laincorporacinderestosvegetalesoanimales,lafertili-
ganismosqueparticipanenladescomposicindelosteji- zacin,causanmenosefectosenlarizsfera,laquema-
dos muertos. La poblacin no se distingue ya de la natu- nifiestacapacidadparamantenersuequilibriobiolgico.
ral del suelo y poco efecto residual se mantiene para el
aoprximo:elnuevocultivodeterminarlacomposicin de
su poblacinrizosfrica.
La espermatsfera
El efecto de edad de la planta puede enmascararse por
interacciones con el ambiente. As, variaciones en la in- Lassemillasengerminacinnorealizanfotosntesispero
tensidad luminosa afectan la exudacin y por lo tanto la ejercen efecto en el suelo vecino al movilizar sus reser-
proliferacindehongos,porinhibicindelgrupomssen- vas. Se considera que la espermatsfera es el origen de
sible, lasbacterias. iniciacin del efecto rizosfrico de las races en desarro-
llo.Asunivelocurrenmltiplesinteraccionesentrelaplan- ta,
Elcuadro8muestraelefectodetrescultivos,endistintos las poblaciones microbianas y el ambiente. Los pro-
estadosfenolgicos,sobreelconjuntodebacteriasyac- ductos liberados por |os granos son de naturaleza varia-
tinomicetes.Seobservaefectoestimulanteenlosltimos ble, segn la edad, la especie y las caractersticas del
estados del desarrollovegetal. medio (fuentes de C, N, sustancias biolgicamente acti-
Enelcasodeltrbol,elefectorizosfricofuemarcadoen vas, como vitaminas, aminocidos, otras inhibidoras). La
lafloracin,eneltrigomenossignificativoysimilarenlos liberacin de exudados por las semillas es responsable
estadosvegetativoydeformacindelgrano,mientrasque delaaltamortalidaddelasmismasacausadelasulfato-
enlacolzafuemuypronunciadodesdelafloracin. rreduccin, cuando cultivos, como el de maz, germinan
en suelos ricos en sulfatos, compactados y saturados en
Suelo y ambiente: el efecto rizosfrico es ms pronun- agua.Otrasactividadesbiolgicassonestimuladas,como la
ciadoensueloslivianos,arenosos.Ensuelosdesrticos, la solubilizacin de fosfatos, amonificacin, celulolisis, y
rizosfera de la escasa vegetacin colonizadoraconsti- ciertas actividadesenzimticas.
La filsfera
As como las races estn rodeadas de una verdadera
vaina de microorganismos rizosfricos, las hojas de las
plantas presentan en su superficie poblaciones muchas
veces importantes, de bacterias, levaduras, hongos fila-
mentosos, y, en regiones tropicales hmedas, algas, l-
quenes y hepticas. Este hbitat est sometido a hume-
dadesfluctuantes,ligadasalasprecipitaciones.Latrans-
piracindelashojaspuedemantenerunmicroclimaalgo
ms hmedo que el delaire.
Eldesarrollodeorganismosesmuyabundanteenlashojas
delaszonastropicaleshmedas,dondeformanunapel-
cula mucilaginosa de varias micras de espesor. Lainten-
sidadluminosa,latemperaturaylanaturalezadelosexu-
dadosvaranconelclimaylanaturalezadelaplanta.
Las poblaciones bacterianas de la filosfera son ricas en
especies pigmentadas: Flavobacterium, Xanthomonas,
Pseudomonas.
Levaduras, como la Rhodotorula, Sporobolomyces, po-
seenpigmentosrosadosysonmuynumerosaslasespe-
ciesdehongos.Entrelasfuncionesmicrobianasmses-
timuladasenestehbitatsecitanlaamonificacin,lafija-
cin del N2 y la lipolisis. La produccin de antibiticos es
frecuente en las poblaciones epifitas.
Los fenmenos que se desarrollan a nivel de la filosfera
interesan mucho al fitopatlogo y al agrnomo, quienes
tienen una puerta abierta a experiencias de inoculacin
con fijadores de N2 o con microorganismos antagnicos
de patgenos que protegen a la planta de las infeccio-
nes.
Efecto de los restos vegetales
(efecto mantillo)
Contrariamentealasformacionesvegetalesanualesque
ejercensobrelamicrofloradelsuelounainfluencialimita- da
en el espacio y el tiempo, las formaciones vegetales
perennes(bosques,praderaspermanentes)afectanmar-
cadamentealamicrofloradelsuelodondesedesarrollan.
Estaaccinseejerceaniveldelosexudados,comoya
hemosanalizado,porelaportealsueloderesiduosvege- tales
subterrneos (races) o areos (hojas, ramas) ode
productos diversos arrastrados por el agua a travs del
follaje. Estos ltimos aportes contienen elementos mine-
rales (K, Na, etc.) y orgnicos: hidratos de carbono, ami-
nocidos.
Resulta difcil separar el efecto rizosfrico del efecto de
los restos sobre el suelo, puede observarse que, en el
caso de bosques, los mantillos juegan un rol preponde-
rante.Estacapaconstituyeparalamicrofloradelsuelola
principal fuentede:
energa y de elementos nutritivos que en kg C/ha/
ao varan de 0,5 a 2 toneladas en bosques de zonas
templadas y fras, para alcanzar 2 a 8 toneladas en bos-
ques tropicales hmedos. Los mantillos en zona tropical
son ms ricos, adems, en elementos minerales y en ni-
trgeno que los de las regionestempladas.
de sustancias estimulantes o inhibidoras: como vi-
taminas y sustancias diversas an no bien determina-
das, que llegan al suelo. Inversamente, ciertos mantillos
liberan productos txicos frente a especies bacterianas
muysensibles:bacteriasnitrificantesauttrofas,fijado-
res del N2, y otros organismos, como los celulolticos. La
toxicidad frente a los nitrificantes se manifiesta en for-
maciones forestales de la zona tropical hmeda o regio-
nes templadas (bosques de pino silvestre, cedro, con-
feras). Lo mismo puede ocurrir en ciertas praderas y
bosques de conferas, de la zona templada. Las sustan-
cias responsables seran esencialmente fenoles o com-
puestos con radicales fenlicos: cido glico, floro-
glucinol.
otros efectos: modificacin del pH del suelo: la ve-
getacinpuedeelevarelpHdeloshorizontessuperficia- les,
por concentracin de sustancias bsicas. Pero ms
frecuentemente, la vegetacin acidifica el suelo, caso de
bosquesdeconferas.Sistanoesexcesiva,lamicroflo- ra
fngica, que en conjunto es indiferente al pH, puede
indirectamente ser estimulada, por reduccin de la com-
petenciadeotrosorganismos.Sisebajanunaodosuni-
dades de pH, se puede observar efecto depresivo en la
actividadbiolgica,msmarcadosiseacompaadesus-
tancias txicashidrosolubles
Enresumen:larizsfera,laespermatsferaylafilsfera
sonreasdondeseliberanmaterialesorgnicosquepue-
den alterar la diversidad microbiana e incrementar el n-
mero de microorganismos, la actividad microbiana y las
interaccionesentrelosmicroorganismosconlassemillas,
lasracesyelsueloadyacente.Lacomunidadmicrobiana
enlarizsferapuedeafectarelcrecimientovegetalenfor- ma
benfica, neutra o perjudicial, afectando la salud, vi- gor
y productividad vegetal. Los desafos implican com-
prenderelfuncionamientodelainterfasesuelo-raz,sue- lo-
semillas, superficie de hojas, a los efectos de lograr
dominarelfuncionamientodelosmicroorganismos,incre-
mentareldesarrollovegetalyreducirlosimpactosdelos
sistemasdemanejodelsueloenelambiente.
Serequierenavancesen:laidentificacindelosfactores
quecontrolanlacolonizacinradical,unamayorcompren-
sin de la ecologa microbiana en estos ambientes, para
lo cual las tcnicas de la llamada Ecologa Gentica, re-
sultan muy tiles, en la identificacin y seguimiento de
microorganismos enparticular.
Las prcticas de inoculacin con numerosos microorga-
nismos que han logrado instalarse y actuar en la rizsfe-
ra, espermatsfera y en la superficie de las hojas, como
losfijadoresdenitrgenolibresysimbiticos,bacteriasy
hongos controladores de plagas vegetales, solubilizado-
resdefsforo,hongosmicorrcicos,etc.demuestranque
esposibledirigirestacolonizacinconxito.
Bibliografa
Bazin,M.J.,P.MarkhamyE.M.ScottPopulationdyna-
micsandrhizosphereinteractions,entherhizosphe-
re.1990,J.M.Lynch(ed),WileyInterscience,NewYork:
99-127
Dommergues,Y.y F. Mangenot,Larhizosphre,en:Eco-
logie microbinne du sol, 1970, Dommergues, Man-
genot (eds.), Masson et Cie., Pars:549-594.
Frioni, L. Ecologa microbiana del suelo, 1990, Depto.
de Publicaciones de la Universidad de la Repblica,
Montevideo, 517 pp.
Kennedy, A. C. The rhizosphere and spermosphere. en:
Principles and Applications of Soil Microbiology,
1998,Sylvia,Fuhrmann,HartelyZuberer(eds),Prenti- ce
Hall,Londres
Lynch, J. M., The rizosphere, 1990, Wiley & Sons, En-
gland.
Martens, R, Apparatus to study thequantitativerelations-
hips between root exudates and microbialpopulationsin
the rhizoshpere. 1982, Soil Biol. Biochem.,14:315-317
Rovira,A.D.;R.C.FosteryJ.K.Martin,Origin,natureandnom
enclatureoforganicmaterialsintherizhosphe-
re,en:Thesoil-rootinterface,1979,Harley,J.L.yR.
Scott Russell (eds.), Academic Press, Londres: 1-4
Shippers, B.; A. W. Bakker y P. A. H. Bakker, Interactions
of deleterious and beneficial rhizosphere micoorganis-
msandtheeffectofcroppingpractices.1987,Ann.Rev.
Phytopathol, 25:339-358
Preguntas de repaso
1) Sealedosejemplosdeefectos:i)benficosyii)perju-
diciales, de los microorganismos sobre las plantas y
cmo los pondra enevidencia
2) Idem,peroefectosdelosvegetalessobrelosmicroor-
ganismos
3) Porqueslarizosferaunaregindelsueloconactivi- dad
microbianaincrementada?
4) Porquresultalaespermatsferaotraimportanterea
deestudio?
5) Rol de las distintas sustancias orgnicas liberadas en
larizosfera.
6) Cmo podemos distinguir la rizosfera, el rizoplano y
la superficie de lasraces?
7) Mediantecualesmecanismoslaspoblacionesmicro-
bianas pueden tener carcter benfico, neutro o per-
judicial?
8) Qu factores afectan la colonizacinradical?
9) Seale dos tcnicas para evaluar el efecto del cultivo
de cierta variedad de tomate sobre los microorganis-
mos delsuelo.
 22 Degradacin dexenobiticos
Un nuevo enfoque del ciclo del carbono en los suelos y
aguas ha sido introducido como consecuencia del incre-
mento en el uso de sustancias orgnicas sintticas para
el control de plagas.
Generalmente estas sustancias se denominan xenobi-
ticas (xeno= extrao, bitico= vida).
Son compuestos orgnicos o minerales sintticos, con
estructura y comportamiento en el ambiente diferentes a
las de la mayora de las sustancias orgnicas naturales.
Sonintroducidosenelambienteporactividadesdelhom-
breaconcentracionesqueprovocanefectosindeseables.
Estos compuestos pueden ser degradados por reaccio-
nes abiticas y biticas. Estas ltimas, las microbianas,
sonmssignificativasenelambienteyaquelossistemas
enzimticos aceleran el proceso de degradacin y pue-
den conducir a una completa degradacin o mineraliza-
cin del agentepolucionante.
Algunos de estos compuestos son liberados al ambiente
por el hombre con el objeto de controlar plagas, caso de
lospesticidas,oagrotxicos,cuyapersistenciaytrans-
formacionesreflejansueficaciacomoproductoysupeli-
gropotencialparalamicrofloraylacalidaddelambiente. Ms
de 1.000 de estos compuestos estn registrados, desde
molculas simples como el bromuro demetilo
(CH3Br) hasta molculas muy complejas como el aldrn.
Cerca del 97% son herbicidas, insecticidas y fungicidas
que representan 65, 25 y 7% respectivamente. Los res-
tantes 3% corresponden nematicidas, acaricidas, etc.
Otros son los aditivos en los plsticos (ftalatos), coloran-
tes usados en teidos de prendas de vestir y alimentos,
impurezas en formulaciones de pesticidas (dioxinas clo-
radas) y solventes halogenados.
Otros xenobiticos provienen de la industria manufactu-
rera, efluentes de industrias, aguas residuales, actividad
de minas, de las industrias petrolera, del papel, agrcola.
Loscompuestosorgnicos:sintticoseintroducidoscon-
tinuamente o los naturales, formados en la biosfera, se
pueden dividir en dos categoras segn su persistencia
en elsuelo:
Los biodegradables y aquellos que son resistentes a la
biodegradacin y se conocen como recalcitrantes o re-
frctiles que se degradan muy lentamente o no la hacen.
La separacin entre ambos grupos es muchas veces arbi-
traria, ya que ciertas molculas orgnicas pueden ser bio-
degradablesbajociertascondicionesdelsuelo,peronoen
otras.Muchoscompuestossintticosderivadosdealcanos
osimplescompuestosaromticossonmslentamentede-
gradados en sedimentos de suelos inundados o bajo con-
dicionesanaerobias,enrelacinasuelosbienaereados,lo
que se explica por la necesidad del O2 en las reacciones
enzimticas responsables de su degradacin.
Sereconocencategorasenlassustanciasrecalcitrantes: 1-
compuestos muyrecalcitrantes
2- los que son slo lentamentebiodegradables
3- compuestosquepuedenserutilizadosrpidamentepor
cultivos microbianos en el laboratorio, pero que no se
sabe si lo pueden hacer en lanaturaleza
4- compuestos aptos para microorganismos en cultivos
axnicosyenunoomshabitatsmicrobiano,peroque son
persistentes en ciertasocasiones.
Muchos polmeros sintticos se encontraran en la ca- propiedades quimiodinmicas delproducto
tegora 1.
propiedades fsico-qumicas delsuelo
Laligninaesunejemplodelasegundacategorayaque
su transferencia en las interfases suelo-agua y suelo-
essustratoparaalgunoshongosaunquenoesdesasimi-
aire y a travs de membranasbiolgicas
lada rpidamente. Ciertos hidrocarburos clorados con
carcterinsecticidasonejemplosdelaterceracategora, ya En la mayora de los casos las sustancias orgnicas bio-
que muchos son metabolizados en medios de cultivo, degradables sufren los mismos tipos de reacciones de
perosumineralizacinaCO2,H2OyCl2nohasidode- rupturaysimplificacinquelassintticas,asaber:decar-
mostradoinsitu.Enlaltimacategorasepuedenubicar boxilacin,desaminacin,hidroxilacin,-oxidacinehi-
algunoshidrocarburosderivadosdelpetrleoycons- drlisis de enlaces ster. Procesos biticos y abiticos
tituyentesvegetales. pueden transformar a los productos alterando su estado
qumico y consecuentemente su toxicidad y reactividad.
En los ltimos 50 aos, se han producido en la industria Idealmente se espera su conversina:
ms de 600.00 toneladas de sustancias orgnicas y se
estimaqueun15%hanentradoalambiente(Stevensony CO2, H2O,minerales
Cole, 1999).
sustancias menostxicas
Entrminosdecantidad,losxenobiticosorgnicosson
Perosepuedenformarproductosintermediariosquese
los ms numerosos: 114 compuestos han sido designa-
convierten en polucionantestxicos.
dos por la Agencia de Proteccin Ambiental de los Esta-
dos Unidos como polucionantes, en 1982. Los ms peli-
Las propiedades fsicas y qumicas de la molcula del
grosossonloshalogenados,especialmentelosaromti-
polucionante afectan su biodegradacin (cuadro 2). La
cos por sus efectos sobre la biocenosis y su carcter re-
mayora de los compuestos orgnicos poseen grupos hi-
calcitrante en el ambiente. Consecuentemente persisten
droxilosycarboxilos(OHyCOOH)quesonrpidamente
enelsueloporquenosonsusceptiblesdetransformacio- nes
oxidados.
biolgicas a rangosnormales.

El cuadro 1 muestra algunos ejemplos de compuestos

Cuadro 1 Ejemplo de importantes xenobiticos
orgnicosdetectadosensuelosyquerepresentanpoten-
orgnicos
cialpeligroparaelecosistemasuelo-planta-hombre,mu-
chossereconocenosospechancomocancerognicoso
Tipo Ejemplos
mutagnicos. Los halogenados aromticos ejercen efec-
tos negativos en la microflora y son reconocidos recalci- Alifticos(halogenados) tricloroetano, triclorometano,
trantes.Fueronintroducidosporelhombre,demodoque se cloruro de metilo, tetracloetano
consideran verdaderosxenobiticos. Alifticos(nohalogenados) acilonitrilo, tolueno,benceno,
nitrobenceno,fenol cresol
Aromticos(halogenados) pentaclorofenol,clorobenceno
Como el suelo es el reservorio ltimo de la mayora de
hexaclorofenol, diclorobenceno
ellos,susefectossobrepoblacionesmicrobianasylaac- cin
Policclicos(nohalogenados) naftaleno,benzopireno,
de stas sobre estas molculas resulta de gran im- antraceno, bifenil, fenantraceno
portanciaenladeterminacindesusconsecuencias.
Policclicos(halogenados) bifenilos policlorados(PCBs)
Una vez liberadas al ambiente la distribucin de estas Pesticidas lindano, toxafeno, DDT,2,3-D
sustancias depende de: dieldrin, heptaclorobenceno
 Cuadro 2- Propiedades que alteran la los clorados), plsticos y polmeros sintticos relaciona-
biodegradacin de compuestos orgnicos dos y un conjunto de derivados de la industria.
contaminantes

1 Carencia de oxgeno en su molcula(hidrocarburos)

ConvencindeEstocolmosobrecontaminan-
tes orgnicos persistentes (COP)
2 Enlaces saturados (hidrocarburos alifticos no satura
dosylosaromticostiendenasermsrpidamenteata- ElConveniodeEstocolmosurgiluegodelargosaosde
cados que los nosaturados) negociaciones que permitieron alcanzar un compromiso
3 Longitud de la cadena, los hidrocarburos alifticos con de los pases para eliminar a los llamados COP. Comen-
cadenas laterales cortas son ms rpidamente degra- zaregiren2004ylaprimeraConferenciadelospases
dadosqueloshidrocarburosdemsaltopesomolecular miembros,quetuvolugarenPuntadelEste,Uruguay,en
4 Lapolimerizacindelamolculalimitasubiodegrada- mayode2005definienunprincipiolos12losproductos
cin consideradossucios(cuadro3)ysobrelosquesepien- sa
5 Suescasasolubilidadenagua(molculashidrofbicas) que deben tomarse medidas urgentes para erradicar-
6 Laestructuraynmerodeanillosaromticos los del planeta en un plazo que los expertos no pueden
precisar. La lista de estos productos genera desechos al-
7 Elincrementodelaramificacindelamolculadisminu- ye
tamente peligrosos para la salud humana y pueden pro-
labiodegradacin vocarsumuerteogenerarenfermedadesymalformacio-
8 Elnmeroylaposicindegruposhalgenos,nitro,ami- nestantoenelhombrecomoenotrasespeciesanimales.
no,sulfonato
9 Elentrecruzamientoconotrasmolculasimpidellegara las
Cuadro 3- Contaminantes orgnicos persistentes
enzimas (complejoligno-celulsico)
(COP)
10 Volatilizacin
11 Solubilidad en agua Aldrin Plaguicida usado
envarioscultivosBifenilospoliclorados Compuestos usados
12 Molculasorgnicasunidasaarcillasonmsresisten- tes
a la degradacin (1g de la arcilla montmorillinolita como aditivosen
presenta 600 m2 de reasuperficial) productosdelaindustriagrfica,entre
otras
13 El complejo arcilla/humus puede inactivar exoenzimas
(celulasa) o adsorber alsustrato Clordano Deusoagrcola
DDT Uno de los
14 Ambientes extremos: temperatura, sequedad, pH,altas
msconocidosinsecticidas,con
concentraciones desal
numerosasaplicaciones
15 Restricciones fisiolgicas: carencia de las enzimas re-
Dieldrin Insecticida, contratermitas
queridas.Transportedelasustanciaenelsuelo,limita- cin
de nutrientes esenciales (N, S, P.etc.) Dioxinas Generadas por combustin enlafabri-
cacin de plaguicidas, entreotros
Endrin Insecticidaempleadoenalgunoscultivosy
Unconceptomuypopularenelpasado,antesdeladca- da contraroedores
del 60, sostena que esencialmente toda sustancia Furanos Compuestos
orgnicaintroducidaenlabiosferadeberasermeta- producidospordiversasemisionescom
bolizada por los microorganismos en un perodo de oincineradoresyauto- mviles
tiempo razonablemente corto. Este concepto actual- Heptaclorobenceno Insecticida
mentenoesdeltodocorrectoyaquevimosquehaysus- Hexaclorobenceno Herbicida, contramalezas
tanciassintticasrecalcitrantesyquepersistenenelsue- lo Mirex Insecticida y usado tambinenproduc-
en ciertas condiciones por largos perodos, comoson tosplsticos
Toxafeno Insecticida usado en
ciertoscultivosdecereales yhortalizas
los bifenilos policlorados, ciertos pesticidas(sobretodo
 23 Biorremediacin
En este captulo se analizarn algunas de las estrategias
biolgicas para restaurar suelos y aguas contaminadas y
llevarlos a un estado no txico, llamado tambin estado
saludable.Unambientesanoesesencialnosoloparasos-
tener la produccin de alimentos para los habitantes del
planeta, sino tambin para brindar una buena calidad de
vida. A travs del anlisis de algunos casos, se ilustrar
sobre los mecanismos de biodepuracinaplicados.
Labiorremediacin,trminonotraducidoalespaol,con-
siste en la aplicacin de un conjunto de tcnicas que per-
mitenaumentarlabiomasamicrobianadelsueloylasacti-
vidades de los microorganismos y vegetales con el objeto
delograrlarecuperacindeambientespolucionadosocon-
taminados. En particular se estimula la biodegradacin de
productos con carcter xenobitico, originados por activi-
dades del hombre y que contaminan elambiente.
Bajoestadenominacinseagrupanunavariedaddepro-
cesos de biotratamiento que varan en sus mecanismos
de accin:
mineralizacin
transformacinparcialdemolculastxicasaotrassin
toxicidad
humificacin
alteracin del potencialredox
compostaje
Algunos de los problemas de polucin ambiental pueden
resolverseporestosmecanismos:cercade300compues-
tospolucionantesdelsueloseconsideranfactiblesdebio-
degradacin microbiana, por lo que la bioremediacin se
aplica en ambientes contaminadospor:
derramamiento de petrleo bruto e hidrocarburos deri-
vados(benceno,xileno,tolueno,policclicos,etc.)
solventes diversos (clorados, como el tricloroetileno,
acetona,butanol,etilenglicol,clorurodemetilo)
otros:pentaclorofenol,TNT,halgenos,pesticidas
metales, como mercurio, plomo,cadmio
radiactivos, como el radio,plutonio
pesticidas, como 2,4-D, atrazina,malation
bifenilos policlorados como elaraclor
Estos contaminantes son introducidos a ambientes natu-
rales por las actividades del hombre. Algunos entran in-
tencionalmente al suelo, como los pesticidas, o acciden-
talmente, como los hidrocarburos, por prdidas de tan-
ques, fugas en los sistemas de transporte.
Sibienennuestropas,estenoesunproblemamuygra- ve,
han ocurrido accidentes en relacin a derrames de
petrleo en el Ro de la Plata, contaminacin por plomo
en suelos y fugas de tanques de hidrocarburos en esta-
ciones deservicio.
EnUSA,elserviciodeproteccinambiental(EPA)estima
quelostanquesdegasolinapierdenunos40millonesde
litrosporao,ademsdesaliralmercadounos1.000pro-
ductos qumicos nuevos al ao. Dado estos volmenes
se comprende la necesidad de accin de verdaderas in-
dustriasparaladepuracindesuelosyaguasylaprotec- cin
delambiente
Para lograr una efectiva biodegradacin es necesaria la
presencia de microorganismos o de asociaciones apro-
piadasdeellosydecondicionesambientalesadecuadas
paralaactividadbiolgica.Serequierenadems,conoci-
mientos de ecologa microbiana y de bioingeniera a los
efectos de disear condiciones favorables para el desa-
rrolloyactividadmicrobianaparadescontaminarambien-
tesnaturales.
Los procesos se realizan:
in situ, el suelo se emplea como un gran reactor, los
residuosseincorporanencamadasdeaproximadamen-
te50cm,enelsuelooenpilasenelcompostaje,donde
sufrirnelataquemicrobiano,seagreganlosnutrientes
necesarios y se ajusta la humedad para estimular a la
biomasamicrobiana
en reactores, especialmente diseados, que pueden
tratargranvolumendesustanciasenperodosmscor- tos
detiempo.
Muchasvecesresultanecesarioincrementarlapoblacin
de microorganismos responsables de las transformacio-
nes. As, la inoculacin del ambiente contaminado con
organismos seleccionados es una prctica muy emplea-
da en laactualidad.
El incremento de los microorganismos activos se puede
lograr de varias maneras:
estimulacin de la poblacin existente por alteraciones
del ambiente o agregado denutrientes
aislamiento y seleccin de organismos competentes y
posteriorinoculacin
uso de microorganismos construidos por ingeniera
gentica, con propiedades deseables que pueden
albergarse en plsmidos o en el cromosoma micro-
biano.
Loscuadros1y2resumenlosconceptosfundamentales en
estetema.
Cuadro 1- Conceptos en la biorremediacin
Biorremediacin:Empleodemicroorganismos,plantasoenzi-
masparaladepuracindepolucionantesendistintosam-
bientes
Biodegradacin: Transformacin parcial de polucionantes por
agentes biolgicos como los microorganismos
Mineralizacin: Conversin completa de un contaminante orgni-
co a formas inorgnicas
Cuadro 2- Requisitos para lograr xito en la
biorremediacin
Loscontaminantesdebenestarbiodisponibles,esdecirnoad-
sorbido en un residuo inaccesible (arcillas,humus)
Losmicroorganismosdegradadoresapropiadosdebenestarpre-
sentesenelsuelo,agua,odisponiblesparalainoculacin
Los compuestos recalcitrantes: no son degradados a velocidad
razonable:ejemplodecompuestosnaturalesrecalcitrantes:hu-
mus, artificiales (pesticidas,plsticos)
Losorganismosdebendegradarelcontaminanteavelocidadtal
quepermitallevarsuconcentracinaestandaresregulares
Deben reunirse condiciones ambientales favorables para el de-
sarrollomicrobiano:temperaturadelsuelo,pH,aireacin,hume-
dad
Puederequerirsefertilizacin(N,P,K,etc.)paraestimularpro-
cesosdegradativos
Elcostodeltratamientodebesermenorqueeldelasotrastec-
nologasdisponibles
Lafallaenalgunadeestascondicionespuedeconduciral
fracaso de un proceso de biorremediacin, como ocurre
en caso de suelos muy secos, o de pH inadecuado para
la actividadbiolgica.
Elcuadro3resumelasestrategiasenlabioremediacin.
Cuadro 3- Estategias para la biorremediacin
Pasivaointrnsica:natural,deunlugarcontaminadoporor-
ganismosindgenas.
Bioestimulacin:adicindenutrientes,N,P,S,etc.paraincre-
mentar a los microorganismos delsuelo
Bioventilacin:dondeseagreganestimulantesgaseososal
suelo,comoO2,CH4,pasivamenteoenformaforzada,paraes-
timular la actividadmicrobiana
Bioaumentacin:inoculacindemicroorganismosaunsitiocon-
taminado.Elinoculantepuedetenerunmicroorganismonatural
omodificadogenticamente(solosoenconsorcio),selecciona-
dos por su capacidaddegradativa
Rellenos sanitarios: landfarming enterrar contaminantes en
suelosnocontaminados,concapaimpermeableinferiorpara
evitarprdidas.Secombinaconlosanteriores.
Compostaje: microorganismos aerobios, termfilos, en pilas o
reactores,humedecidos.Luegodeatacarmaterialesrpidamente
degradables,atacanalassustanciasxenobiticas
Fitorremediacin: empleo de plantas para sacar o transformar
contaminantes(plantashiperacumuladorasoqueestimulanmi-
croorganismos rizosfricosdegradadores)
Labiorremediacinpasivaointrnsecaeslaqueocurre
naturalmenteporaccindelosmicroorganismosnativos.
Esta es la ms frecuente estrategia de degradacin de
contaminantes,apesardequeelprocesopuedesermuy
lentosilascondicionesnosonlasadecuadas.
La biestimulacin, que incorpora nutrientes, como
fuentes de nitrgeno y fsforo, con el objeto de estimu-
lar a la microflora nativa, es corrientemente empleada.
Los nutrientes pueden incorporarse con agua de riego,
en caso de suelos contaminados, o en preparados so-
lubles en hidrocarburos, en el caso de derrames de
petrleo en el mar.
Labioventilacin,queempleagasesestimulantes,como
O,CH,enformapasivaoforzadaenlossuelosalos
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efectos de incrementar la actividad degradadora de la
poblacinnativa,requieredispositivosespeciales,detipo
industrial, por lo cual los suelos contaminados se trans-
portanydepositanenestructurasdeltipodelosbiodiges-
tores, con las instalaciones adecuadas para la entrada
pasiva o forzada degases.
La bioaumentacin, es la inoculacin del sitio contami-
nadoconmicroorganismosseleccionadosparaestimular la
degradacin. Los inoculantes pueden estar formados
por microorganismos nativos seleccionados para el pro-
ceso en cuestin o bien se pueden usar aquellos genti-
camente modificados, a los cuales por ingeniera genti-
ca se les incorporaron genes activos en la biodegrada-
cin. Puede tratarse de una sola especie o de varias es-
pecies (consorciomicrobiano).
Los mismos se seleccionan en el laboratorio, inoculan-
do con suelo o aguas, medios de cultivo con dosis cre-
cientes de la sustancia txica en estudio, por ejemplo,
hidrocarburos, como nica fuente de C y energa. Las
colonias que se desarrollan en estos medios, se van se-
leccionando por su capacidad degradadora sobre el xe-
nobitico.
Rellenos sanitarios, consisten en la aplicacin e incor-
poracindesueloscontaminadosenlasuperficiedesue- los
no contaminados. Son en general excavaciones de
suelos muy pobres, con un fondo de arcillas o algn ma-
terial impermeable, para evitar la contaminacin de las
napasfreticas.Elsuelocontaminadoesaradoysemez-
clabien,pudindoseincorporarnutrientes,inculomicro-
biano y gases, para acelerar elproceso.
Compostaje, es el uso de procesos microbianos aero-
bios y termfilos en pilas o reactores, para degradar el
polucionante.Losdispositivossemezclanperidicamen-
teysehumedecenalosefectosdelograrlamximaacti-
vidadbiolgica.Losmicroorganismosactivosseencuen-
tran en el suelo y son incrementados por el proceso de
compostaje.
Fitorremediacin, es el empleo de vegetales para ab-
sorber, remover o transformar contaminantes. Son muy
empleadas en el caso de remocin de metales pesados,
queseacumulanenlamaderaenelcasoderbolesoen
lafitomasaenherbcea,quedebetratarseluegoeninci-
neradores.