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TESIS
PRESENTA
DIRECTOR EXTERNO:
DIRECTOR INTERNO:
Xalapa-Enrquez.,Ver. ENERO/2014
AGRADECIMIENTOS:
En primer lugar a Dios por haberme acompaado a lo largo de mi carrera, por ser mi fortaleza en los
momentos de debilidad y por brindarme una vida llena de aprendizajes, experiencias y sobre todo
felicidad.
Quiero expresar mi ms profundo agradecimiento al Dr. Luis Morales de la Vega y al Q.F.B. Jorge
Antonio Campos Campos mis asesores de tesis por su entrega de conocimientos y preocupacin
otorgadas desinteresadamente, adems del tiempo, apoyo, gua y comprensin.
A los integrantes del Comit de Tesis: Q.F.B. Izmit Camacho de la Cerda, Q.F.B. Mauro Villanueva
Lendechy, M.F. Magda Olivia Prez Vzquez, Q.F.B. Guadalupe Magaa Prez por su paciencia y
comprensin.
Al Director de Planta Q.F.B Jorge Rico y al Gerente de Control de Calidad Q.F.B. Rosa Martha
Santamara Uribe por las facilidades prestadas en la realizacin de este trabajo en el Laboratorio de
Control Fisicoqumico del rea de Control de Calidad, Planta Farma Orizaba de Bayer de Mxico S.A.
de C.V.
A mis hermanos: Ana Lilia, Mara Elena, Miguel Antonio, Jorge Luis, Jos Juvenal que son parte
primordial en mi vida por todo su apoyo, cario y comprensin, a mis sobrinos Arantxa e Irving Yair
por impulsarme a realizar cosas nuevas y ser mejor cada da.
A los grandes amigos con los que tuve la oportunidad de compartir toda esta aventura: Alejandro,
Aracely, Rosario, Michelle, Amada Guadalupe, Csar, Juan Carlos, Carlos Snchez, Oswaldo, Sixto,
Irma, Francisco, Carlos Hernndez, Patricia, Catalina, Berenice, Abigail por todo el apoyo
incondicional y a todos mis dems compaeros de la carrera sin ellos el camino no hubiese sido
divertido.
ii
DEDICATORIA:
A los dos pilares y grandes seres humanos que me han dado lo ms hermoso que tengo la
vida y una gran familia.
MI MADRE Y MI PADRE
iii
INDICE
Pg.
INDICE. iv
LISTADETABLAS...... v
LISTADEFIGURAS. vi
RESUMEN. 1
ANTECEDENTES... 2
1.INTRODUCCIN. 4
1.1VALIDACION. 4
1.1.1CRITERIOSDEVALIDACIONAESTUDIARENFUNCIONDELTIPOMETODO. 5
1.2CALIFICACIONDELINSTRUMENTAL. 8
1.2.1ETAPASDEUNACALIFICACION.. 8
1.3DISOLUCION. 10
1.4LEVONORGESTREL 15
1.4.1PROPIEDADESFARMACOLOGICAS.. 18
2.JUSTIFICACION 19
3.PLANTEAMIENTODELPROBLEMA 20
4.OBJETIVOS. 21
DIAGRAMADETRABAJO 22
5.PARTEEXPERIMENTAL.. 23
5.1CALIBRACIONMECANICADELDISOLUTORSOTAXYHANSON 23
5.2CALIBRACIONANALITICADELDISOLUTORSOTAXYHANSON. 29
5.3METODOLOGIADISOLUCIONDELEVONORGESTREL(HPLC). 32
5.3.1PROCEDIMIENTODEDISOLUCION.. 34
5.3.2EVALUACIONDELASCONDICIONESDEDISOLUCIONDELPRINCIPIOACTIVO. 38
5.3.3VALIDACIONDELMETODOANALITICOPORHPLC 39
6.RESULTADOS 42
7.DISCUSIN. 57
8.CONCLUSIONES. 58
9.REFERENCIASBIBLIOGRAFICAS.. 59
ANEXOIMATERIALYEQUIPOUTILIZADOENLACALIBRACIONMECANICADELDISOLUTOR
SOTAXYJANSON.. 63
ANEXOIIVALORESDELADISTRIBUCIONtDEDUNNET 65
ANEXOIIICERTIFICADOSDELOSMATERIALESYEQUIPOSUTILIZADOS 66
iv
LISTA DE TABLAS
Pg.
Tabla 1 Parmetros de desempeo analticos en funcin del mtodo analtico aplicado 6
Tabla 2 Parmetros a evaluar en un sistema HPLC... 10
Tabla 3 Especificacin mecnicas disolutor Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus. 23
Tabla 4 Especificaciones de dimensiones disolutor Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus 23
Tabla 5 Lmites de porcentaje disuelto de tabletas USP Tipo No Desintegrantes de cido saliclico 29
Tabla 6 Lmites de porcentaje disuelto de tabletas USP Tipo Desintegrantes de Prednisona 29
Tabla 7 Condiciones de ensayo del mtodo de disolucin de levonorgestrel grageas. 34
Tabla 8 Verificacin de temperatura del medio de disolucin lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N 42
Tabla 9 Bamboleo de las varillas y paletas agitadoras disolutor Sotax AT7... 43
Tabla 10 Bamboleo de las varillas con canastillas disolutor Sotax AT7. 43
Tabla 11 Velocidad de giro de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7 .. 43
Tabla 12 Velocidad de giro de las varillas con canastas disolutor Sotax AT7 ..... 44
Tabla 13 Criterios de aceptacin de las dimensiones de las paletas del disolutor Sotax AT7. 44
Tabla 14 Resultado de dimensiones de las paletas disolutor Sotax AT7 .... 44
Tabla 15 Resultados de disolucin de tabletas de Prednisona... 45
Tabla 16 Resultados de disolucin de tabletas de cido saliclico. 45
Tabla 17 Resultados de temperatura del bao y velocidad de agitacin...... 46
Tabla 18 Resultados de vibracin, altura, dimetro interno de los vasos y temperatura del medio de
disolucin.. 46
Tabla 19 Dimensiones de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7 .... 46
Tabla 20 Resultados de disolucin tabletas de prednisona. 47
Tabla 21 Resultados de disolucin tabletas de cido saliclico... 47
Tabla 22 Perfil de disolucin de levonorgestrel grageas 1.5 mg .... 48
Tabla 23 Selectividad de los componentes relevantes, respuestas en tiempo de retencin.. 49
Tabla 24 Evaluacin respuesta en unidades de rea del estndar de levonorgestrel 52
Tabla 25 Porcentaje de recuperacin.. 53
Tabla 26 Linearidad del sistema... 53
Tabla 27 Estabilidad de la muestra tiempo 0 y 24 h de almacenamiento.. 55
Tabla 28 Intervalo de confianza 56
Tabla 29 Comparacin de resultados de disolucin Sotax (Equipo 1)/Hanson (Equipo 2). 56
LISTA DE FIGURAS
Pg.
Figura 1 Instrumento de verificacin de distancia de la paleta agitadora del disolutor. 25
Figura 2 Ajuste de laminillas del cople de la paleta agitadora .. 25
Figura 3 Instrumento de verificacin de bamboleo de la paleta agitadora..... 26
Figura 4 Medicin de la velocidad de giro de las paletas agitadoras... 26
Figura 5 Medicin del bamboleo a la altura de la varilla con canasta.. 27
Figura 6 Medicin del bamboleo a la altura de la canasta. 27
Figura 7 Medicin de la velocidad de giro de las varillas con canastas. 28
Figura 8 Esquema de trabajo de la vlvula de 6 vas en el HPLC 37
Figura 9 Verificacin de la distancia de las varilla paletas agitadoras. 42
Figura 10 Grfica del perfil de disolucin de levonorgestrel disuelto en intervalos de 15 a 45
minutos 48
Figura 11 Cromatograma de la solucin blanco. 50
Figura 12 Cromatograma de la solucin placebo.. 50
Figura 13 Cromatograma de la solucin estndar. 51
Figura 14 Cromatograma de la solucin muestra.. 51
Figura 15 Grfica de regresin lineal de Levonorgestrel.. 54
vi
RESUMEN
ANTECEDENTES
La validacin garantiza la calidad del medicamento, puesto que le confiere fiabilidad a los
resultados obtenidos en el anlisis, asegurando as, que el medicamento cumpla los parmetros de
calidad establecidos.
Por otra parte los mtodos analticos deben validarse para cumplir con las exigencias
contempladas en la Comisin Federal para la Proteccin contra Riesgos Sanitarios (COFEPRIS) de
acuerdo a las Buenas Prcticas de Fabricacin (NOM-059-SSA1-2006).
Por lo que fue necesario realizar la validacin del mtodo de anlisis por cromatografa lquida
de alta resolucin (HPLC) para levonorgestrel 1.5 mg grageas, el cual garantizar que los resultados
que se obtendrn son confiables. Esta validacin ha sido realizada en el Laboratorio de Control
Fisicoqumico del rea de Control de Calidad, Planta Farma Orizaba de Bayer de Mxico S.A. de C.V.
Las propiedades generales y comportamiento de los agentes tensoactivos se deben al
carcter dual de sus molculas (grupo hidrfilo y lipfilo); es as como el antagonismo entre estas dos
secciones de su molcula y el equilibrio entre ellas es la que da al compuesto sus propiedades
activas de superficie. El grupo hidrfilo ejerce un efecto solubilizante y tiende a llevar a la molcula a
disolucin completa. El grupo hidrfobo, en cambio, debido a su insolubilidad tiende a contrarrestar la
tendencia del otro.
Un laboratorio de anlisis debe tener como uno de sus propsitos principales la produccin de
datos analticos de alta calidad por medio del uso de mediciones analticas que sean precisas,
confiables y adecuadas para tal fin. Este propsito puede alcanzarse de una manera eficaz si se
cuenta con un sistema planificado y documentado de la calidad de las actividades.
La industria farmacutica, al igual que en otras industrias, est sometida a las reglas del
mercado, que impone una exigencia de calidad, sin las cuales un determinado producto no sera
utilizado por los consumidores.
Por todo esto es muy importante el llevar a cabo la validacin de los mtodos analticos ya que
Validar es comprobar y certificar, con evidencia convenientemente documentada, que un mtodo,
sistema o proceso, cumple y se desarrolla tal y como estaba previsto, dentro de intervalos definidos.
1. INTRODUCCION
La validacin del mtodo ayuda a confirmar la calidad del medicamento, puesto que le confiere
fiabilidad a los resultados obtenidos en el anlisis.
Para el cumplimiento de las buenas prcticas de laboratorio (NOM-059) de la validacin (62) (66)
es un requisito imprescindible que est establecido por agencias regulatorias (59) (60) y por comisiones
de Farmacopeas para el registro de los medicamentos. (4)
1.1 VALIDACION
Un laboratorio de anlisis debe tener como uno de sus propsitos principales la produccin de
datos analticos de alta calidad por medio del uso de mediciones analticas que sean precisas,
confiables y adecuadas para tal fin. Este propsito puede alcanzarse de una manera eficaz si se
cuenta con un sistema planificado y documentado de la calidad de las actividades. El laboratorio
necesitar operar bajo un sistema de garanta de calidad que incluya una extensa documentacin de
sus actividades (34) siguiendo las Buenas Prcticas de Laboratorio y las Buenas Prcticas de
documentacin. La industria farmacutica, al igual que en otras industrias, est sometida a las reglas
del mercado, que impone una exigencia de calidad, sin las cuales un determinado producto no sera
utilizado por los consumidores.
Cualquier deficiencia puede originar problemas sanitarios, en ocasiones graves, que puedan
provocar la inmediata retirada del producto incluso el cierre del laboratorio fabricante. (34)
La Validacin de un mtodo analtico que garantiza la calidad del medicamento, as mismo es
necesaria porque:
TIPO I
TIPO II
Pueden ser pruebas cuantitativas o una prueba cualitativa para determinar si la impureza est
presente en la muestra por encima o por debajo de un valor lmite especificado. Cualquiera de los
dos pretende reflejar las caractersticas de pureza de la muestra.
TIPO III
TIPO IV
En la tabla 1 se observa que los ensayos para cada categora requieren diferentes tipos de
anlisis:
EXACTITUD SI SI * * NO
PRESICION SI SI NO SI NO
SELECTIVIDAD SI SI SI * SI
LIMITE DE DETECCION NO NO SI * NO
LIMITE DE CUANTIFICACIN NO SI NO * NO
LINEALIDAD SI SI NO * NO
RANGO SI SI * * NO
A continuacin de describen los parmetros de una validacin analtica:
Exactitud
La exactitud de un mtodo analtico es la cercana de los resultados de la prueba obtenidos por
dicho mtodo al valor aceptado como verdadero. La exactitud debe establecerse a lo largo del
intervalo especificado del procedimiento analtico, se evala utilizando un mnimo de 9
determinaciones en un mnimo de 3 niveles de concentracin que cubran el intervalo especificado
(por ejemplo, 3 rplicas en cada una de tres concentraciones del procedimiento analtico total).
La exactitud debe ser reportada como porcentaje de recuperacin de una cantidad conocida de
analito aadida a la muestra o como la diferencia entre la media y un valor aceptado como real en
conjunto con los intervalos de confianza.
Precisin
Expresa el grado de concordancia entre resultados individuales cuando el mtodo se aplica
repetidamente a mltiples muestras de una mezcla homognea. La precisin de un mtodo analtico
es generalmente expresada como la desviacin estndar, da idea de errores aleatorios y puede ser
considerada en tres niveles: repetibilidad, precisin intermedia y reproducibilidad.
Selectividad
Es la capacidad de un mtodo analtico para medir exacta y especficamente el analito sin
interferencias de impurezas, productos de degradacin o excipientes que pueden estar presentes en
la muestra. Se expresa como el grado de inexactitud del mtodo. Este parmetro es muy importante
en el caso de los mtodos analticos diseados para la cuantificacin del analito en formulaciones y
estudios de estabilidad. (46)
Lmite de deteccin
El lmite de deteccin es una caracterstica de las pruebas de lmite. Es la cantidad ms baja de
analito que puede detectarse, pero no necesariamente cuantificarse, bajo las condiciones
experimentales establecidas. De esta manera, las pruebas de lmite solamente fundamentan que
cantidad del analito est por encima o por debajo de un nivel de seguridad.
Lmite de cuantificacin
El lmite de cuantificacin es una caracterstica de las valoraciones cuantitativas de compuestos
que se encuentran en baja concentracin en la matriz de una muestra, como por ejemplo impurezas
en materias primas y productos de degradacin en productos farmacuticos terminados. Es la
cantidad menor de analito que puede determinarse con precisin y exactitud aceptable en una
muestra, bajo las condiciones experimentales establecidas.
Repetibilidad
Expresa la precisin bajo las mismas condiciones de operacin en un corto periodo de tiempo,
utilizando el mismo analista, con el mismo equipo. Es tambin llamada precisin intra-anlisis. Debe
evaluarse utilizando: un mnimo de 9 determinaciones que cubran el intervalo especificado para el
procedimiento (por ejemplo, 3 rplicas de cada una de 3 concentraciones) o, un mnimo de 6
determinaciones en el 100% de la concentracin de la prueba.
Linealidad
Rango
El rango de un mtodo analtico, es el intervalo entre los niveles superior e inferior (incluyendo
estos valores), en el que se ha demostrado un nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad del
mtodo tal cual est escrito.
Precisin intermedia
Expresa la variacin dentro del laboratorio, en diferentes das, o con diferentes analistas o
equipo dentro del mismo laboratorio. La evaluacin de la precisin intermedia depende de las
circunstancias bajo las cuales se usar el procedimiento. El analista debe establecer los efectos de
eventos aleatorios (variaciones como das, analistas, equipo, etc.) en la precisin del procedimiento
analtico.
Robustez
La robustez de un mtodo analtico es el grado de reproducibilidad de los resultados obtenidos
del anlisis de las mismas muestras bajo diversas condiciones tales como diferentes laboratorios,
analistas, instrumentos, lotes de reactivos, temperaturas, das, etc.
Un mtodo analtico es robusto cuando proporciona resultados con precisin y exactitud
aceptables en condiciones de trabajo ambientales y/o analticas diferentes. Manifiesta la influencia
que tienen pequeas alteraciones en el mtodo de anlisis sobre los resultados.
Es determinada por el anlisis de alcuotas de lotes homogneos en diferentes laboratorios, por
diferentes analistas, en condiciones ambientales y operacionales que pueden diferir pero dentro de
los parmetros especificados en el ensayo. La evaluacin de la robustez debe considerarse durante
la fase de desarrollo y depende del tipo de procedimiento en estudio.
La calificacin del equipo HPLC es en esencia la verificacin del rendimiento del instrumento
elegido para una tcnica analtica en particular, as como el software y el hardware que lo controla. (47)
CALIFICACION DEL HPLC
Es la verificacin de que los equipos funcionan en forma esperada y son capaces de operar
satisfactoriamente, sobre todo en el rango de los parmetros operacionales para los que han sido
diseados. Demuestra que funciona segn lo previsto. En esta etapa se someten a prueba todos los
controles de operacin bajo condiciones normales y bajo condiciones extremas como por ejemplo el
reinicio de un equipo despus de un corte de luz, todos los puntos de alarma, interruptores,
dispositivos visualizadores y cualquier otra indicacin de operacin y funcin. Es realizado por el
tcnico calificado.
Mdulo Parmetro Importante para:
1.3 DISOLUCION
La absorcin de un frmaco, tras la administracin oral desde una forma de dosificacin slida
depende de la liberacin principio activo del producto y de su disolucin o solubilizacin del frmaco
bajo condiciones fisiolgicas y la permeabilidad por el sistema gastrointestinal. Debido a la naturaleza
de estos factores, la evaluacin de la velocidad de disolucin in vitro puede ser una prediccin del
comportamiento in vivo (27), por ello se utilizan las pruebas de disolucin in vitro para las formas de
dosificacin oral slidas, como comprimidos y cpsulas, para: 1) evaluar la calidad de un producto
medicinal lote a lote; 2) guiar el desarrollo de nuevas formulaciones; y 3) asegurar la calidad y el
rendimiento continuo del producto, despus de ciertos cambios, tales como cambios en la
formulacin, el proceso de fabricacin, el sitio de fabricacin y el aumento en escala del proceso de
fabricacin. (27)
Existen diversos factores que afectan la velocidad de disolucin como los relacionados con las
propiedades fisicoqumicas del principio activo: tamao de partcula, estado cristalino, polimorfismo,
10
etc.; la influencia de los excipientes durante el proceso de elaboracin de los preparados slidos;
adems de considerar los efectos de la fuerza de compresin sobre la velocidad de disolucin.
La prueba de disolucin es una prueba fsico qumica que determina el porcentaje de frmaco
que se disuelve por unidad de tiempo bajo condiciones estandarizadas de la interfase lquida/slida,
la temperatura y la composicin del solvente; es bsico e imprescindible para la liberacin de cada
lote de las formas farmacuticas slidas fabricadas. Por otra parte es un ensayo empleado desde el
comienzo del desarrollo de la formulacin y utilizado en fases posteriores a ste, porque permite el
estudio de los mecanismos de liberacin del principio activo en las formulaciones de liberacin
controlada y no controlada y permite la obtencin de un perfil de disolucin predeterminado y
reproducible. As como tambin la comparacin y estudio de calidad intralotes e interlotes, es un
11
indicador de estabilidad del preparado farmacutico y predice la biodisponibilidad y bioequivalencia in
vitro de productos farmacuticos slidos orales.
Verificacin de la bioequivalencia.
Los objetivos de disolucin son que la forma farmacutica libere la mxima cantidad de frmaco
vehiculizado, lo ms cerca del 100% o del porcentaje especificado en cada caso y que la velocidad de
liberacin del lote sea uniforme para que todos sean clnicamente efectivos.
Durante el desarrollo de una forma farmacutica slida, la FDA recomienda que la disolucin se
evale en condiciones fisiolgicas, si es posible. Esto permitir relacionar los resultados de disolucin
con el comportamiento del producto in vivo. (42)
La FDA recomienda que se utilicen medios acuosos dentro del rango de pH de 1.2 a 6.8,
generalmente se prueban:
Sin embargo, el estricto cumplimiento al medio ambiente gastrointestinal no tiene que ser
utilizado en las pruebas disolucin de rutina. Las condiciones de la prueba deben basarse en las
caractersticas fisicoqumicas del medicamento y las condiciones ambientales de la forma de
dosificacin pueden estar expuestas tras la administracin oral. (42)
El uso de agua como medio de disolucin no se recomienda porque las condiciones de prueba
como el pH y la tensin superficial pueden cambiar dependiendo de dnde se obtuvo el agua, y
tambin pueden cambiar durante la prueba debido a la influencia de los ingredientes activos e
inactivos. Para el agua o productos farmacuticos ligeramente insolubles en agua, el uso de un
surfactante como lauril sulfato de sodio, se recomienda para mejorar la solubilidad. La necesidad y la
cantidad de tensioactivo se justifica. El uso de solventes orgnicos no se recomienda. (42)
Este hecho hace que la ley de Noyes-Whitney en la que se basan los ensayos de
biodisponibilidad de frmacos, quede explicada en base a la Cs de la siguiente manera:
dQ = -K (Cs - C) dQ = -KCs
dt dt
13
En estas ecuaciones, dC/dt representa la velocidad de disolucin, K la constante de
proporcionalidad del proceso (constante de disolucin), Cs la concentracin de una disolucin
saturada y C la concentracin de la disolucin a un tiempo determinado.
Cuando una substancia se disuelve en un medio lquido cualquiera las molculas disueltas
provocan una disminucin del gradiente de concentracin y, por consiguiente, la velocidad de
disolucin va disminuyendo con el tiempo. Los denominados mtodos "sink" comprenden todas
aquellas tcnicas que, de una u otra manera procuran la eliminacin de la substancia disuelta desde
el medio de disolucin a medida que sta se va disolviendo, con el fin de mantener la concentracin
constante y a un nivel muy bajo. Los mtodos "sink" parecen ser bastante adecuados, sobre todo si
se imagina que "in vivo", la disolucin de frmacos se realiza conforme a un modelo semejante ya
que generalmente, y segn las condiciones fisicoqumicas imperantes en el tracto gastrointestinal, el
medicamento va siendo absorbido a medida que se disuelve desde el lquido de disolucin. (43)
La finalidad es determinar la velocidad con la que el medicamento se disuelve; esto es, se trata
de establecer una velocidad de liberacin a partir de liberacin de las formas slidas que, en la
mayora de los casos no son enteramente solubles y que esta velocidad no solo est condicionada
por la solubilidad de principio activo y forma farmacutica sino por naturaleza fsica de la parte no
soluble (humectacin, porosidad, etc.), y de las uniones entre el soluto y algunos constituyentes
insolubles en el disolvente (intercambio de iones, adyuvantes lipdicos, derivados de la celulosa, etc.),
y es necesario que en cada instante la solucin sometida a prueba sea de tal concentracin que
refleje la cantidad de soluto realmente disuelto.
Los resultados del anlisis pueden ser afectados debido a una serie de factores a tener en
cuenta que son: volumen dispensado incorrecto, mala desgasificacin, evaporacin del medio, pH,
temperatura incorrecta, sistemas filtrantes no idneos, excentricidad de los agitadores, verticalidad de
los vstagos, centrado de los vasos, vibraciones, velocidad de agitacin incorrecta, vasos en mal
estado, formas farmacuticas que flotan, tomas de muestra incorrectas, fotosensibilidad del producto
que se est analizando, reposicin de medios (puede hacerse continuamente o de forma intermitente,
en cuyo ltimo caso deben reponerse las alcuotas del volumen tomado).
14
Perfil: Caso particular del ensayo de disolucin que consiste en tomar muestras intermedias
durante toda la duracin del mismo, con el fin de obtener una curva de disolucin del principio activo.
Se puede realizar un clculo logartmico para efectuar estudios comparativos entre curvas.
Generalmente se utilizan los perfiles de disolucin para productos de liberacin prolongada que
requieren por lo menos 3 puntos de muestreo cubriendo el perfil de disolucin. Los perfiles de
disolucin tambin se utilizan para aceptar la similitud de dos o ms productos despus de cambios
basados en SUPAC (Scale Up and Post-Approval Changes). (15)
Equipos calificados
Instrumentos calibrados
Mtodos Analticos validados
Personal formado
Procedimientos estandarizados
Interconexin con medios de servicios requeridos
1.4 LEVONORGESTREL
15
mnimo de efectos secundarios. Estos a la larga seran los gestgenos de los primeros
anticonceptivos orales utilizados. Por la misma poca la Worcester Foundation for Experimental
Biology patrocina los trabajos de John Rock en Harvard, Gregory Pincus y M.C. Chang en Worcester.
(50)
La ciencia mdica ha avanzado a pasos agigantados, entregando a la mujer beneficios que van
ms all de la sola anticoncepcin. La anticoncepcin de emergencia se refiere a mtodos que las
mujeres pueden usar como respaldo y en caso de emergencia, dentro de los primeros das
posteriores a una relacin sexual sin proteccin, con el objetivo de prevenir un embarazo no deseado.
El levonorgestrel fue la base de los primeros anticonceptivos orales combinados que incluan
30 g de Etinilestradiol, siendo el Microgynon el primer microdosis introducido, en 1973. (51) Para la
misma poca se observ que algunos gestgenos, especialmente los 17--hidroxi derivados, al
combinarlos con estrgenos tambin predisponan a enfermedad cardio-vascular. (52) Para disminuir
estos efectos metablicos adversos se sintetizaron nuevos gestgenos (53) y se disminuy
considerablemente su concentracin. El levonorgestrel hizo parte de los primeros anticonceptivos
orales trifsicos, introducidos en Alemania en 1979 y en los E.E.U.U. en 1985. (51) Con un diseo que
imitaba el ciclo menstrual normal, rgimen 6, 5,10, se consegua administrar una menor
concentracin total de gestgenos. (54)Durante la dcada de los ochenta se introdujeron el Gestodeno,
Norgestimato y Desorgestrel, tambin el grupo de los Gonano, que tienen al parecer un impacto
metablico favorable mucho mayor que sus predecesores. La combinacin de uno de estos, con el
Etinilestradiol, conforman los anticonceptivos de ltima generacin, los de gran uso y de amplia
evaluacin actual, donde el sinergismo es evidente. En 1998 son introducidos en Colombia los
anticonceptivos orales combinados, microdosis que asocian 20 g de Etinilestradiol y 75 g de
Gestodeno. Las pequeas cantidades de estrgeno y gestgeno, en combinacin, inhiben mejor la
ovulacin que grandes cantidades de estrgeno o gestgeno solos. (52) A los preparados monofsicos
se han sumado las presentaciones trifsicas, las cuales tienen una gran aceptacin por las usuarias y
se encuentran disponibles en el mundo entero. (55)
ANTICONCEPCION DE EMERGENCIA
16
El levonorgestrel representa la generacin ms reciente en anticoncepcin de emergencia. En
Hong-Kong el primer estudio comparativo patrocinado por la OMS en 834 mujeres, sugiri que el
levonorgestrel slo, usado dentro de 48 horas despus de un coito sin proteccin anticonceptiva, era
tan eficaz como el mtodo de Yuzpe y causaba menos efectos secundarios. El estudio multicntrico
siguiente realizado por la OMS en 21 centros de 24 pases que involucr a 1988 mujeres confirm
estos resultados. Este estudio mostr que el rgimen levonorgestrel (en dosis de 0.75 mg repetida
12 horas ms tarde) era al menos tan eficaz como el rgimen Yuzpe dentro de las 72 horas
siguientes y era mucho mejor tolerado. El estudio de la OMS demostr que cuanto antes se tome el
mtodo anticonceptivo de emergencia despus de un coito sin proteccin, ms eficaz es su accin.
(57)
17
Formula estructural (IUPAC):
Su afinidad de ligandos relativos in vitro en los receptores para la hormona esteroides son:
100% de progesterona sobre su receptor de progesterona, 58% de la testosterona sobre su receptor
andrognico (AR), 17% de la aldosterona sobre el receptor mineralocorticoide, 7.5% del cortisol sobre
el receptor glucocorticoide, y <0.02% del estradiol sobre el receptor del estrgeno (48). En dosis bajas,
el levonorgestrel se usa como un anticonceptivo oral en formulaciones monofsicas y trifsicas de
grageas combinadas. Las dosis monofsicas varan entre 100 y 250 g y las dosis trifsicas entre
50 g, 75 g y 125 g. Es usado como pldora anticonceptiva de emergencia a dosis nica elevada
de 1500 g, (49) o dos dosis de 750 g cada una (separadas por 12 horas), y deben ser tomadas
antes de que transcurran tres das del sexo no protegido.
18
2. JUSTIFICACION
Calidad para la medicin del desempeo de un medicamento, y de ayuda para el desarrollo de una
formulacin. El mtodo analtico que se utilice para cuantificar el frmaco debe estar debidamente
selectividad y rango. Se debe utilizar una curva de calibracin apropiada, construida con el estndar
de referencia del principio activo, para interpolar las concentraciones del frmaco disuelto. La
Validacin ayuda a confirmar la calidad del medicamento, puesto que le confiere confiabilidad a los
resultados obtenidos en el anlisis, asegurando as, que el producto farmacutico sea seguro, estable
y eficaz. As como tambin deben ser validadas todas las variables involucradas en el sistema, tanto
las de la metodologa analtica como las del aparato de disolucin. En estas circunstancias, la
de Mxico S.A. de C.V. implica el uso de un mtodo analtico que permita a travs de esta prueba in
vitro la completa liberacin del activo en el tiempo establecido para estar biodisponible, a travs de la
evaluacin de su disolucin; debido a que dicho mtodo fue desarrollado en casa matriz para su
registro ante las autoridades sanitarias de nuestro pas es necesario llevar a cabo la validacin del
mtodo analtico para comprobar que este es reproducible, ya que no se trata de un mtodo
farmacopeico.
19
3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La contracepcin postcoital tiene como objetivo prevenir el embarazo en aquellas mujeres que
han tenido un coito sin proteccin anticonceptiva, por lo que la fabricacin, prescripcin y
dispensacin de un medicamento tienen como objetivo comn obtener eficacia adecuada para el
paciente, ya que el riesgo de embarazo tras un coito no protegido oscila en torno a un 8% por trmino
medio, y administrando levonorgestrel se reduce la contracepcin postcoital hormonal hasta un 2%.
Se ha estimado que el levonorgestrel evita un 85% de los embarazos esperados, esta proteccin es
menor cuanto mayor es el tiempo transcurrido de administracin de medicamento tras el coito (95%
dentro de las primeras 24 horas; 85% entre las siguientes 24-48 horas; y 58% si se emplea entre las
48 y 72 horas). Por lo que es importante asegurar travs control fsico, qumico y biolgico que el
medicamento sea liberado oportunamente para tener eficacia en la prevencin de embarazos no
deseados.
El motivo de la validacin del mtodo analtico para disolucin se debe a la alta concentracin
del principio activo (Levonorgestrel) y a su baja solubilidad en agua surge la necesidad de cambiar las
condiciones del medio de disolucin y la velocidad de agitacin (rpm) del mtodo de disolucin
general transferido en el reporte interno Lab to Lab de fecha 06.06.07 y reporte interno de validacin
No. A33108 de Bayer Schering Pharma AG. Las condiciones a utilizar son las recomendadas en la
norma de anlisis interna No. D-0359/1 de Postinor 1, tableta SH No. T03551C (Levonorgestrel
1.5 mg) de fecha 27.05.06 (Mtodo de disolucin P2-LN-HP).
20
4. OBJETIVOS
Calificar mecnicamente los disolutores SOTAX AT7 y HANSON SR18 Plus y que estos
cumplan con los criterios de aceptacin establecidos para cada disolutor.
Revisar que la calificacin del Sistema HPLC Waters No. 1 se encuentra debidamente
documentada y se cumplen con todos los criterios de aceptacin establecidos para cada
mdulo del sistema.
Verificar que los materiales a utilizar durante la validacin sean adecuados para este efecto y
los Instrumentos se deben encontrar calibrados y el estndar a utilizar durante la validacin
debe contar con su respectivo certificado de anlisis.
Demostrar el uso indistinto del disolutor Sotax AT7 y Hanson RS8 Plus.
21
DIAGRAMA DE TRABAJO
Parte experimental
22
5. PARTE EXPERIMENTAL
5.1 CALIBRACION MECANICA DISOLUTOR SOTAX Y HANSON
Criterios de aceptacin:
Tabla 3. Especificaciones mecnicas disolutor Sotax y Hanson
23
REVISIN GENERAL.
1. Con la funcin de continuidad del multmetro digital verificar la integridad del fusible y visualmente
verificar que la capacidad de ste sea de 10 A.
2. Inspeccionar el sistema mecnico del equipo, verificar rotores y mandriles deben de estar
completos sin presentar juego, el sistema de transmisin no debe presentar desgaste, los
disolutores deben de funcionar y estar libres de vibraciones excesivas, y el sistema de control de
velocidad, debe responder a 50, 100 y 150 rpm.
1. Encender el sistema en el orden siguiente: regulador de voltaje (en caso de contar con alguno) y
disolutor.
2. Programar en el disolutor: una temperatura de 35.0, 37.0 y 40.0C y dejar que se estabilice el
tiempo necesario.
3. Verificar la temperatura del bao con un termmetro calibrado y certificado.
4. Los resultados debern cumplir con los parmetros establecidos en la tabla de especificaciones
mecnicas.
5. Reportar en la hoja de resultados.
Llenar el bao del disolutor con 18 l de agua purificada y los vasos del disolutor con 900 ml de
agua purificada cada uno. Cerrar la barra de alimentador de muestras. Encender el disolutor y
programar el control de temperatura del bao a 37C; cuando el indicador de control de temperatura
del disolutor muestre 37C esperar 1 hora para que la temperatura del medio en los vasos (agua
purificada) se estabilice. Al trmino de 1 h, introducir en el vaso No. 1 el RTD a travs de la abertura
para pipeta. Esperar 5 minutos a que se estabilice el RTD y realizar la primera lectura registrando el
valor de la temperatura del medio en los vasos del disolutor, sacar el termmetro del vaso y esperar 2
minutos para volverlo a introducir, realizar un total de tres lecturas, repetir el procedimiento anterior
para cada uno de los vasos restantes. Al trmino de la prueba, vaciar el agua purificada del bao de
los vasos.
Aparato No. 2
VERIFICACION DE LA DISTANCIA DE LA ORILLA INFERIOR DE LA PALETA AGITADORA AL
FONDO DEL VASO
Levantar la cubierta del disolutor y desmontar la paleta agitadora del vaso No. 1. Introducir en la
paleta agitadora el indicador de distancia, montar la paleta agitadora y cerrar la cubierta del disolutor.
Verificar que la orilla inferior de la paleta agitadora est dentro de las marcas del indicador. Realizar el
procedimiento anterior para cada uno de los vasos restantes.
24
Figura 1. Instrumento de Verificacin de distancia
de la paleta agitadora del disolutor
Levantar la cubierta del disolutor, quitar los vasos y el bao. Introducir el calibrador de
acoplamiento con su abertura ms grande en el cople de la paleta agitadora para ajustar sus
laminillas, sacar el calibrador de acoplamiento e introducirlo nuevamente en el cople de la paleta
agitadora pero ahora con su abertura ms pequea.
Atornillar el soporte del medidor de bamboleo a la brida. Colocar en el borde de sellado para el
vaso No. 1, la brida y cerrar su broche. Montar la paleta agitadora e introducir el medidor de
bamboleo en el orificio superior del soporte (para medir el bamboleo a la altura de la varilla de la
paleta agitadora), deslizar el medidor hasta que toque la varilla cuidando que la aguja indicadora del
medidor permanezca en el cero, apretar el tornillo del soporte para fijar el medidor. Programar el
control de velocidad del disolutor para una velocidad de 50 rpm y encenderlo. Verificar que la aguja
indicadora del medidor de bamboleo se mueva en forma uniforme con cada bamboleo de la varilla,
iniciar el cronmetro y durante 30 s realizar la lectura del bamboleo, registrando el valor ms alto;
despus de los 30 s, apagar el control de velocidad, programarlo para una velocidad de 100 rpm,
encenderlo nuevamente y durante 30 s realizar la lectura del bamboleo, registrando el valor ms
alto. Despus de haber realizado el procedimiento anterior, quitar el medidor de bamboleo e
introducirlo en el orificio central del soporte (para medir el bamboleo a la altura de la paleta agitadora),
25
deslizar el medidor hasta que toque la parte superior de la paleta cuidando que la aguja indicadora
del medidor permanezca en el cero, apretar el tornillo del soporte para fijar el medidor. Realizar las
mediciones para velocidades de 50 y 100 rpm, guindose de las instrucciones dadas anteriormente
para las pruebas a la varilla. Repetir los procedimientos anteriores para cada una de las paletas
agitadoras restantes y anotar los resultados.
Levantar la cubierta del disolutor, quitar los vasos y el bao. En la paleta agitadora del vaso
No. 1, colocar una etiqueta reflejante en una de las aletas y en la parte trasera de la misma, colocar
un pedazo de papel (para evitar doble lectura en el tacmetro). Montar la paleta y programar el
control de velocidad del disolutor para una velocidad de 50 rpm y encenderlo. Colocar el tacmetro
ptico a una distancia de 15 cm y con un grado de inclinacin de 20 de la etiqueta reflejante.
Presionar el botn de encendido del tacmetro y cuando las lecturas sean estables, iniciar el
cronmetro. Realizar lecturas durante 30 s, registrando el valor ms alto y el valor ms bajo de
velocidad. Repetir el procedimiento anterior a una velocidad de 100 rpm registrando los valores.
Repetir el procedimiento anterior para cada una de las paletas agitadoras restantes.
El disolutor Hanson se programa a una velocidad de 50, 100, 150 y 200 rpm.
26
Aparato No. 1
VERIFICACION DE LA DISTANCIA DE LA ORILLA INFERIOR DE LA CANASTA AL FONDO DEL
VASO
Levantar la cubierta del disolutor y desmontar la paleta agitadora del vaso No. 1. Introducir en la
varilla con canasta el indicador de distancia, montar la varilla con canasta y cerrar la cubierta del
disolutor. Verificar que la orilla inferior de la canasta est dentro de las marcas del indicador. Realizar
el procedimiento anterior para cada uno de las varillas restantes.
Levantar la cubierta del disolutor, quitar los vasos y el bao. Introducir el calibrador de
acoplamiento con su abertura ms grande en el cople de la varilla con canasta para ajustar sus
laminillas, sacar el calibrador de acoplamiento e introducirlo nuevamente en el cople de la varilla con
canasta pero ahora con su abertura ms pequea, como se ajustaron en el bamboleo de las paletas
agitadoras (ver figura 3). Realizar el mismo procedimiento indicado para la determinacin de
bamboleo en las paletas agitadoras despus de ajustar las laminillas y registrar los resultados.
Levantar la cubierta del disolutor, quitar los vasos y el bao. En la paleta agitadora No. 1,
colocar una etiqueta reflejante en una de las varillas con canasta y montar la varilla con canasta.
Realizar el mismo procedimiento de la determinacin de velocidad en las paletas agitadoras y anotar
los resultados.
27
Figura 7. Medicin de la velocidad de giro de las varillas con canastas
Encender el sistema en el orden siguiente: regulador de voltaje (en caso de contar con alguno)
y disolutor. Programarlo a una velocidad de 25 rpm. Utilizando un medidor de desplazamiento
calibrado y certificado, determinar el desplazamiento existente en el centro de cada vaso con
respecto al eje de rotacin de los aparatos 1 y 2 de disolucin que les correspondan. Los resultados
debern cumplir con los parmetros establecidos en la tabla de especificaciones mecnicas. Anotar
los resultados.
DIMENSIONES
28
5.2 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR SOTAX Y HANSON
Criterios de aceptacin:
Tabla 5. Lmites del porcentaje disuelto de las tabletas USP Tipo No Desintegrantes de cido
Saliclico de 300 mg Lote: Q0D200
% DISUELTO
APARATO EN 30 MINUTOS A 100
RPM
Canastillas
23 - 30
(USP No. 1)
Paletas
17 - 25
(USP No. 2)
Tabla 6. Lmites del porcentaje disuelto de las tabletas USP Tipo Desintegrantes de Prednisona
de 10 mg Lote: P0E203
% DISUELTO
APARATO EN 30 MINUTOS A 100
RPM
Canastillas
47 - 82
(USP No. 1)
Paletas
30 - 57
(USP No. 2)
Introducir en cada uno de los 6 vasos de vidrio una tableta de Prednisona 10 mg USP con base
de lactosa y agitar durante 30 minutos. Tomar con la jeringa y el dispositivo para toma de muestras
20 ml de cada una de las muestras y filtrar con membrana Durapore HV 0.45 m, desechar los
primeros 5 ml de filtrado, el resto depositarlo en una vaso de precipitado. Tomar 10 ml de filtrado e
introducir en un matraz aforado de 50 ml, aforar con agua grado inyectable.
29
PREPARACIN DE LA SOLUCIN ESTNDAR (DISOLUTOR SOTAX AT7)
Donde:
Abs1 = Extincin de la solucin problema
Abs2 = Extincin de la solucin estndar
W std = Peso real del estndar
30
Calibracin con las tabletas tipo no desintegrante
REACTIVOS
Introducir en cada uno de los 6 vasos de vidrio una tableta de cido saliclico de 300 mg USP y
agitar durante 30 minutos. Tomar con la jeringa y el dispositivo para toma de muestras 20 ml de cada
una de las muestras y filtrar con membrana durapore HV 0.45 m, desechar los primeros 5 ml del
filtrado, el resto depositarlo en un vaso de precipitado. Tomar 10 ml de filtrado e introducir en un
matraz de 50 ml, aforar con solucin Buffer- Fosfato 0.05M.
CLCULOS (DISOLUTOR SOTAX AT7)
Donde:
Abs1 = Extincin de la solucin problema
Abs2 = Extincin de la solucin estndar
W std = Peso real del estndar
Equipos:
Los equipos utilizados en la presente validacin han sido calibrados, calificados y verificados, y
se detallan a continuacin:
32
Disolutor Sotax AT7
Disolutor Hanson SR8 Plus
Software Empower 2
Termmetro Indicador de temperatura con RTD Marca: Kaye/Burs Engr Modelo: FTM-
100/604406
Tacmetro No: TAC-001 Marca: Jaquet, Modelo: DHO 907
Vernier Electrodigital: VER-009 Marca: Mitutoyo, Modelo: 9699
Material de vidrio en la cantidad necesaria para los ensayos (pipetas volumtricas, matraces
aforados, con certificado clase A), tulipanes para pesaje, etc.
Criterios de aceptacin:
5.3.1 Procedimiento de disolucin
La disolucin del principio activo se realiza segn la F. Eur 2.9.3., USP <711>, y JP 6.10. La
determinacin posterior de los principios activos disueltos se realiza por HPLC en una columna de
fase inversa con conmutacin de columnas (F. Euro. 2.2.29, USP <621>, JP).
Realizar el anlisis de las muestras inmediatamente despus de la disolucin.
Condiciones de ensayo:
Solucin de referencia R1
Lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin)
Ejemplo:
Pesar exactamente y disolver 3.333 mg (3.000 a 3.666 mg) de patrn de trabajo de
levonorgestrel en metanol grado cromatografico en un matraz aforado de 50 ml y aforar = Solucin A.
34
Introducir 2.50 ml de la solucin A en un matraz aforado de 100 ml, se adicionan 38.0 ml de
metanol grado cromatografico, aforar con R1 (medio de disolucin) = solucin CR.
35
Diagrama de flujo de la vlvula de 6 vas y tiempos de conmutacin de columnas
Bomba1
(Fasemvil
Ciclo 1:
Lavado
Auto
muestreador
Vlvula
automticade6
vas
Columna
(Fasemvil1)
Columna
analtica
Bomba1
(Fasemvil1)
Ciclo 2:
Auto
muestreador
Lavado
Vlvulade6vas
automtica
Columna
(Fasemvil1)
Columna
analtica
Bomba2
(Fasemvil2)
Lavado Sistemadedatos
BDetector
36
Ciclo 2: La vlvula se conmuta, la muestra se transfiere con la fase mvil 2 desde la columna de
enriquecimiento hasta la columna analtica y se separa.
Ciclo 3: La vlvula se pone en la posicin de partida, la fase mvil 1 fluye a travs de columna
de enriquecimiento y la fase mvil 2 fluye a travs de la columna analtica.
37
Clculos y resultados:
Al ingresar las variables de clculo al mtodo, se obtienen los resultados directamente por
generacin del Software Empower 2.
AS x C1 x FV x 100 x cR AS x C1 x FV x cR
= ------------------------------------ = ------------------------------
AR x C2 x 100 AR x C2
Previo a la validacin del mtodo analtico se realiza un ensayo de adecuabilidad del sistema, el
cual se realiz inyectando sucesivamente 6 veces la solucin estndar. Mediante la determinacin de
los siguientes parmetros cromatogrficos:
5.3.3 Validacin del mtodo analtico por HPLC
1. Selectividad
Soluciones de anlisis: Solucin blanco (medio de disolucin)
Solucin placebo
Solucin de referencia
Solucin muestra
Preparacin de la muestra:
Introducir 1 gragea en cada uno de los seis recipientes de vidrio que contienen 900 ml de medio
de disolucin preparado. Agitar hasta el tiempo de muestreo segn la especificacin. En el tiempo
indicado se toman 10 ml de solucin de cada recipiente del aparato de anlisis.
Filtrar separadamente alcuotas de 10 ml de cada solucin problema a travs de un filtro de
membrana de celulosa regenerada Spartan 30/0.45 RC Whatman de dimetro de poro 0.45 m
usando una jeringa de 10 ml, desechar los primeros 6 ml.
39
Estndar al 100%:
Pesar exactamente y disolver 3.333 mg (3.000 a 3.666 mg) de patrn de trabajo de
levonorgestrel en metanol para cromatografa en un matraz aforado de 50 ml y aforar.
Introducir 2.50 ml de la solucin anterior en un matraz aforado de 100 ml, adicionar 38.0 ml de
metanol para cromatografa, aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N.
Solucin Patrn:
En un matraz aforado de 100 ml se disuelven 3.400 mg de Levonorgestrel con metanol y
aforar. De esta solucin hacer diluciones por duplicado de acuerdo a lo siguiente:
Estndar al 70%:
Medir 3.5 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 100 ml, adicionar 38.0 ml de
metanol y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1 N (medio de disolucin). Concentracin:
0.00119 mg/ml.
Estndar al 80%:
Medir 1.0 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 25 ml, adicionar 9.5 ml de metanol
y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin). Concentracin:
0.00136 mg/ml.
Estndar al 100%:
Medir 1.0 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 20 ml, adicionar 7.6 ml de metanol
y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin). Concentracin:
0.00170 mg/ml.
Estndar al 120%:
Medir 3.0 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 50 ml, adicionar 19.0 ml de metanol
y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin). Concentracin: 0.00204
mg/ml.
Estndar al 130%:
Medir 6.5 ml de la solucin patrn en un matraz aforado de 100 ml, adicionar 38.0 ml de
metanol y aforar con lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N (medio de disolucin). Concentracin:
0.00221 mg/ml.
40
Reportar el coeficiente de correlacin (r), el coeficiente de determinacin (r2) y el coeficiente de
variacin (CV) del factor de respuesta, con las reas obtenidas.
5. Estabilidad de la muestra
Soluciones de anlisis: preparar la solucin problema, por sextuplicado y analizar a la longitud
de onda indicada en la norma de anlisis. Reanalizar a las 24 horas de almacenamiento a
temperatura ambiente, usando el mismo estndar de referencia para muestras dependientes y/o
utilizando un estndar de referencia fresco para la realizacin del ensayo para muestras
independientes.
Nota: El anlisis y reanlisis debern ser llevados a cabo por el mismo analista en cada tiempo
de anlisis (0 y 24 horas).
Reportar el intervalo de confianza IC y la media del factor I.
6. Tolerancia
Preparar seis muestras de acuerdo a la norma de anlisis. Analizar las muestras usando
diferentes aparatos de disolucin: 1) Sotax, 2) Hanson. Analizar a las condiciones establecidas en la
norma de anlisis. Llevar a cabo la cuantificacin usando mtodo de calibracin externo.
Calcular el promedio de los seis valores obtenidos con cada disolutor.
41
6. RESULTADOS
REVISION GENERAL
Sistema mecnico todos los rotores y mandriles estn completos, el sistema de transmisin no
presenta desgaste, el disolutor funciona correctamente y se encuentra libre de vibraciones excesivas,
el sistema de control de velocidad corresponde a 50, 100 y 150 rpm.
Tabla 8. Verificacin de temperatura del medio de disolucin lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N
Temperatura C en los vasos (37 C 5C)
No. de vaso 1 2 3 4 5 6 7
36.9 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9
37.0 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9 37.0
36.9 36.9 36.9 37.0 36.9 36.9 36.9
Cumple
Resultado: Cumple
42
VERIFICACIN DEL BAMBOLEO DE LAS VARILLAS Y PALETAS AGITADORAS
Tabla 10. Bamboleo de las varillas con canastillas disolutor Sotax AT7
Bamboleo rpm 1 2 3 4 5 6 7 Especificacin
Varilla sin 50 0.08 0.17 0.15 0.30 0.20 0.15 0.14
canastilla
100 0.11 0.20 0.27 0.36 0.26 0.18 0.16
Varilla 1 mm
50 0.18 0.46 0.13 0.28 0.12 0.11 0.13
con
canastilla 100 0.27 0.49 0.18 0.33 0.19 0.18 0.21
Cumple
Tabla 11. Velocidad de giro de las paletas agitadoras disolutor Sotax AT7
Paletas agitadoras
1 2 3 4 5 6 7 Limites
RPM
Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max
50 49.67 50.51 49.59 50.38 49.83 50.34 49.52 50.23 49.62 50.67 49.71 50.24 49.49 50.47 2 rpm
100 99.68 100.8 99.66 100.4 99.76 100.7 99.65 100.7 99.73 100.4 99.61 100.9 99.23 100.7 4 rpm
Cumple
43
VERIFICACIN DE LA VELOCIDAD DE GIRO DE LAS VARILLAS CON CANASTAS
Tabla 12. Velocidad de giro de las varillas con canastas disolutor Sotax AT7
Varillas con Canastas
1 2 3 4 5 6 7 Limites
RPM
Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max Min Max
50 49.42 50.44 49.85 50.23 49.66 50.39 49.81 50.41 49.6 50.56 49.69 50.65 49.72 50.35 2 rpm
100 99.38 100.6 99.7 100.8 99.74 100.9 99.35 100.6 99.64 100.8 99.77 100.9 99.65 100.8 4 rpm
Cumple
Dimetrodeleje 9.410.1
Espesordelahlice 3.05.0
Alturadelahlice 18.519.5
Cuerdamayor 74.075.0
Cuerdamenor 41.043.0
Tabla 14. Resultado de dimensiones de las Paletas del disolutor Sotax AT7
Paleta
Dimensiones 1 2 3 4 5 6 7
Dimetro del eje 9.9 9.91 9.89 9.91 9.93 9.9 9.96
Espesordelahlice 3.96 3.98 3.99 3.99 4.01 3.97 3.97
Alturadelahlice 19.03 18.97 19.01 19.04 18.97 18.96 19.03
Cuerdamayor 74.43 74.38 74.47 74.34 74.44 74.4 74.44
Cuerdamenor 41.96 41.94 41.73 41.92 42.05 42.03 41.98
Cumple
44
6.2 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR SOTAX AT7
Condiciones:
Medio de disolucin: Agua grado inyectable
Volumen del medio: 500 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin: 50 rpm
Tiempo: 30 minutos
No. de Vaso
1 2 3 4 5 6 Lmites
Aparato 1 58 69 62 55 65 62 47 82%
Aparato 2 39 44 39 40 38 40 37 70%
Cumple
Condiciones:
Medio de disolucin: Solucin Buffer de fosfato pH 7.4 0.5
Volumen del medio: 900 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin: 100 rpm
Tiempo: 30 minutos
No. de Vaso
1 2 3 4 5 6 Lmites
Aparato 1 25 25 26 25 27 25 23 30%
Aparato 2 19 18 19 20 18 20 17 25%
Cumple
45
6.3 CALIFICACION MECANICA DISOLUTOR HANSON:
Tabla 18. Resultados de vibracin, altura, dimetro interno de los vasos y temperatura del medio de
disolucin
POSICION LMITES 1 2 3 4 5 6
VASOS Identificacin V1 V2 V3 V4 V5 V6
Vibracin No ms de 0.1 mils 0.012 0.008 0.010 0.010 0.010 0.018
Altura 160.0 210.0 mm 165.09 166.69 167.12 165.95 165.50 164.18
Dimetro interno 98.0 106.0 mm 104.38 103.65 103.03 104.54 103.41 103.63
Temperatura 37C 0.5C 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9 36.9
PALETAS LMITES P1 P2 P3 P4 P5 P6
Excentricidad No ms de 2.0 mm 1.0 1.5 1.0 1.0 0.5 1.5
Bamboleo No ms de 1.0 mm 0.13 0.20 0.05 0.08 0.33 0.41
No ms de 1.0 mm
Altura con respecto al 23.0 27.0 mm 26.0 25.5 25.5 25.5 26.5 26.0
fondo del vaso
Dimetro del eje 9.4 10.1 mm 9.52 9.51 9.52 9.52 9.52 9.52
9.4 10.1 mm
Espesor de la hlice 3.0 5.0 mm 4.83 4.84 4.87 4.81 4.83 4.84
Altura de la hlice 18.5 19.5 mm 19.02 19.04 19.07 19.06 19.03 19.00
Cuerda menor 41.0 43.0 mm 42.25 42.43 42.42 41.89 42.42 42.36
Cuerda mayor 74.0 75.0 mm 74.53 74.53 74.54 74.54 74.51 74.54
46
6.4 CALIBRACION ANALITICA DEL DISOLUTOR HANSON SR8
Condiciones:
Medio de disolucin: Agua grado inyectable
Volumen del medio: 500 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin: 50 rpm
Tiempo: 30 minutos
1 2 3 4 5 6 Lmites
Aparato 2 41.9 39.1 37.6 38.3 37.9 37.2 30 57%
Cumple
Condiciones:
Medio de disolucin: Solucin Buffer de fosfato pH 7.4 0.5
Volumen del medio: 900 ml
Temperatura: 37C
Velocidad de agitacin: 100 rpm
Tiempo: 30 minutos
1 2 3 4 5 6 Lmites
Aparato 2 21.0 18.0 20.0 19.00 22.00 22.0 17 25%
Cumple
47
Para esto se desarroll un perfil de disolucin en lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1 N con
intervalos adecuados de muestreo (15, 30 y 45 minutos), la evaluacin se realiz a la velocidad de
agitacin de 100 rpm. Los resultados se presentan en la tabla siguiente:
48
Puede observarse una liberacin inmediata de levonorgestrel a los 15 minutos, sta puede
explicarse por la composicin del producto como gragea, la capa tiene que disolverse antes de que
ocurra la disolucin del principio activo. De conformidad con los resultados obtenidos el medio de
disolucin y la velocidad de agitacin son los adecuados para la disgregacin de los comprimidos
recubiertos. En el perfil de disolucin el volumen tomado del recipiente de disolucin no se sustituy,
la cantidad de principio activo disuelto se corrigi por clculo.
Selectividad
La selectividad fue evaluada con una solucin blanco (lauril sulfato de sodio 0.1% en HCl 0.1N,
una solucin placebo (Placebo gragea Lote: 1464), una solucin de referencia (estndar de
levonorgestrel al 100%) y una solucin muestra de levonorgestrel gragea Lote: 1004 (S), preparadas
de acuerdo a la norma de anlisis; se inyectaron separadamente y conforme a las condiciones
cromatogrficas indicadas en la norma de anlisis No. S MX 029 S11.
49
SOLUCIN BLANCO (R1-MEDIO DE DISOLUCIN)
50
La precisin del sistema fue evaluada con 6 inyecciones de 100 l de solucin estndar al
100% (solucin de referencia). Se evaluaron las reas estadsticamente.
Repetibilidad al 100%
52
Tabla 25. Porcentaje de recuperacin de levonorgestrel
Concentracin Concentracin % de
Adicionada Recuperada recobro
(mg/gragea) (mg/gragea)
1.500 1.512 101
1.500 1.503 100
1.500 1.513 101
1.500 1.516 101
1.500 1.503 100
1.500 1.518 101
n 6
media 100.7
s 0.5
CV < 3.0% 0.5%
La linealidad del sistema fue evaluada con 5 niveles de concentracin diferentes, utilizando
solucin estndar de Levonorgestrel en un rango de 70% a 130%. La preparacin de las soluciones
de prueba fue realizada por duplicado, considerando que la concentracin al 100% equivale a 0.0017
mg/ml, segn mtodo analtico. Las soluciones de prueba se prepararon por duplicado a cada nivel
de concentracin.
53
La regresin lineal (concentracin en % / rea) fue calculada conforme al mtodo de mnimos
cuadrados usando las reas y concentraciones para cada inyeccin como rplica independiente.
LINEALIDADDELSISTEMA
CorridaA
RespuestaenUnidadesdeArea
R2=0.9986
y=4139.36x+ 7380.7
ConcentracinPorcentualTerica
Datos estadsticos
Frmula de calibracin lineal y = a + bx
Ordenada al origen a = 7380.7
Pendiente b = 4139.36
Coeficiente de variacin = 0.930479
Coeficiente de determinacin = 0.998622
Coeficiente de correlacin = 0.999311
Los clculos estadisticos se realizaron con el software para anlisis estadistico de Validacin de
Mtodos Analticos (SAEVMA W-2.0).
54
Las estabilidad de la muestra analitica fue evaluada con un lote de levonorgestrel grageas. Se
preparar una solucin estndar y seis soluciones problema, las cuales fueron evaluadas
inmediatamente despus de su preparacin (tiempo cero), alicuotas de las soluciones se
almacenaron en matraces aforados de vidrio incoloro y transparente. Los matraces se conservaron a
aproximadamente 20C 2C (temperatura ambiente) con luz de da y fueron analizadas despus de
24 horas de almacenamiento bajo las mismas condiciones de operacin por el mismo analista.
Formulas
2S02 + 2S02
Varianza ponderada: sp2n = ----------------- ;
2(c + 1)
Resultados:
El valor resultante del ensayo inicial se utiliz para comparar el valor del ensayo a las 24 horas de
almacenamiento.
55
Tabla 28. Intervalo de confianza
I1 102.9
I2 101.0
I3 101.0
I0= Factor I0 I4 100.0
I5 100.0
I6 99.0
= Media del factor I 1= 100.7%
El intervalo de confianza (IC) 4.8585 a -3.5251 incluye el valor de cero y el Factor I1 = 100.7
no excede el 3%.
Los resultados obtenidos cumplen con lo establecido en los criterios de aceptacin, lo cual
demuestra la estabilidad de la solucin estndar y la solucin problema durante 24 horas de
almacenamiento, aproximadamente 20 2C (temperatura ambiente) con luz diurna.
Tolerancia
Resultados:
Equipo 1 Equipo 2
103% 103%
98% 98%
99% 99%
98% 100%
98% 101%
98% 102%
Media: 99.0% 100.5%
El resultado obtenido cumple con lo establecido en el criterio de aceptacin 1.5 < 3.0%. La
diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor del 3.0%.
56
7. DISCUSION
Los resultados obtenidos en la calibracin mecnica de los disolutores Sotax y Hanson cumplen
con los parmetros de temperatura, vibracin, altura de los aparatos 1 y 2 con respecto al fondo del
vaso, bamboleo, velocidad de giro, dimensiones (de vaso, eje, seguro de retencin, canastillas y
paletas) establecidos; as como tambin la calibracin analtica de las tabletas de cido saliclico (no
desintegrantes) y tabletas de prednisona (desintegrantes) cumplen con los lmites establecidos en los
certificados de dichas tabletas.
Se tienen registros de todos los pasos realizados durante el proceso de calibracin y los
certificados de los instrumentos y materiales utilizados.
Selectividad.
El mtodo analtico es selectivo, porque los excipientes de la formulacin no interfieren en la
determinacin del principio activo ya que no se detecta ninguna respuesta significativa en el
cromatograma, obtenindose un tiempo de retencin a los 7.713 y 7.647 minutos de la solucin
muestra y de la solucin de referencia, mientras que la solucin blanco y placebo no muestran
ninguna respuesta en el tiempo indicado.
As mismo los tiempos de retencin son similares tanto para el estndar como para la muestra
(7.713 y 7.647 min).
Precisin.
El estudio de precisin del sistema mostr una buena repetibilidad de los resultados,
obtenindose una desviacin estndar relativa (RSD) de 0.4%, siendo el valor mximo de 2.0%.
El estudio de precisin del mtodo mostr una buena reproducibilidad de los resultados,
obtenindose una desviacin estndar relativa CV de 0.5%, siendo el valor mximo < 3.0%.
Tolerancia.
Se calcul el valor promedio de los seis porcentajes resultantes de cada equipo siendo el valor
1.5%, la diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor del 3.0%.
Todos los resultados obtenidos en la validacin del mtodo analtico permiten asegurar que el mtodo
analtico es confiable. De esta manera se comprob experimentalmente la utilidad del procedimiento
establecido para la validacin del mtodo analtico.
57
8. CONCLUSION
Los resultados obtenidos de la calibracin mecnica de los disolutores Sotax AT7 y Hanson
SR8 Plus cumplen con los parmetros establecidos as como tambin los resultados obtenidos de la
calibracin analtica cumplen con los lmites establecidos de % disuelto de las tabletas de cido
saliclico (no desintegrantes) y prednisona (desintegrantes).
Se tienen registrados todos los pasos realizados durante el proceso de calibracin, y de los
certificados de los instrumentos y materiales utilizados en el Informe de Calibracin de los disolutores
Sotax AT7 y Hanson SR8 Plus.
Por lo tanto con base en toda la documentacin, registros obtenidos y resultados podemos
concluir que los disolutor SOTAX AT7 y el disolutor Hanson SR8 plus cumplen con los criterios de
aceptacin establecidos en la calificacin inicial y se encuentran aptos para realizar anlisis y
validaciones.
La metodologa aprob los ensayos de precisin del sistema y del mtodo al ser el C.V. menor
al 2% y aprob el ensayo de reproducibilidad al ser el C.V. menor al 3%, con lo que se concluye que
la metodologa es precisa.
Se demostr que para el anlisis pueden utilizarse los equipos de disolucin SOTAX AT7 y
Hanson SR8 Plus ya que la prueba de tolerancia arrojo valores similares entre ambos, siendo la
diferencia de los valores promedio entre ambos equipos es menor de 3.0%.
Por todos los resultados obtenidos queda demostrado que la metodologa cumple con los
parmetros mnimos descritos en la norma de anlisis No. S MX 029 S11 para la categora tipo III.
58
9. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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19. PNO para Operacin del inyector automtico Waters 717 No. S.PLM00700. (2007)
20. PNO para Empleo de sustancias estndares en Control de Calidad. No. S.PLM00781. (2008)
21. PNO para Uso del software SAEVMA-W2.0 utilizado para clculos estadsticos
No. S.PLM00854. (2008)
22. PNO para Operacin del detector de absorbancia variable UV/Vis Waters 486
No. S.PLM00883. (2007)
23. PNO para Operacin del disolutor Hanson SR8 Plus No. S.PLM02093. (2007)
24. PNO para Uso del Software cromatogrfico Empower 2 No. S.PLM00670 (2007)
25. PNO para Uso de los espectrofotmetros UV/Vis Cary 100 conc. y Cary 300 conc.
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62
ANEXO I
Material:
Equipo:
Material:
63
MATERIAL UTILIZADO EN LA METODOLOGIA DISOLUCION DE LEVONORGESTREL (HPLC)
Material:
64
ANEXO II
COMPARACIONES
1 2 3 4 5 6 7 8 9
5.00 2.57 3.03 3.29 3.48 3.62 3.73 3.82 3.90 3.97
6.00 2.45 2.86 3.10 3.26 3.39 3.49 3.57 3.64 3.71
G 7.00 2.36 2.75 2.97 3.12 3.24 3.33 3.41 3.47 3.53
R 8.00 2.31 2.67 2.88 3.02 3.13 3.22 3.29 3.35 3.41
A 9.00 2.26 2.61 2.81 2.95 3.05 3.14 3.20 3.26 3.32
D
O 10.00 2.23 2.57 2.76 2.89 2.99 3.07 3.14 3.19 3.24
S 11.00 2.20 2.53 2.72 2.84 2.94 3.02 3.08 3.14 3.19
12.00 2.18 2.50 2.68 2.81 2.90 2.98 3.04 3.09 3.14
D 13.00 2.16 2.48 2.65 2.78 2.87 2.94 3.00 3.06 3.10
E 14.00 2.14 2.46 2.63 2.75 2.84 2.91 2.97 3.02 3.07
L 15.00 2.13 2.44 2.61 2.73 2.82 2.89 2.95 3.00 3.04
I 16.00 2.12 2.42 2.59 2.71 2.80 2.87 2.92 2.97 3.02
B 17.00 2.11 2.41 2.58 2.69 2.78 2.85 2.90 2.95 3.00
E 18.00 2.10 2.40 2.56 2.68 2.76 2.83 2.89 2.94 2.98
R 19.00 2.09 2.39 2.55 2.66 2.75 2.81 2.87 2.92 2.96
T
A 20.00 2.09 2.39 2.54 2.65 2.73 2.80 2.86 2.90 2.95
D 24.00 2.06 2.38 2.51 2.61 2.70 2.76 2.81 2.86 2.90
30.00 2.04 2.32 2.47 2.58 2.66 2.72 2.77 2.82 2.86
40.00 2.02 2.29 2.44 2.54 2.62 2.68 2.73 2.77 2.81
60.00 2.00 2.27 2.41 2.51 2.58 2.64 2.69 2.73 2.77
120.00 1.98 2.24 2.38 2.47 2.55 2.60 2.65 2.69 2.73
1.96 2.21 2.35 2.44 2.51 2.57 2.61 2.65 2.69
65
ANEXO III
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92