UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS- ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURA

CARRERA DE INGENIERA AGROPECUARIA IASA-1

Tema: Evaluacin in vitro de Micorriza sp. sobre Botrytis

cinerea.

Autores: LORENA LOAIZA (MICROBIOLOGIA 3-B)

JAIME CEDEO (MICROBIOLOGIA 3-B)

SEMESTRE ABRIL - AGOSTO 2017

 INDICE

1. Captulo I
Introduccin
1.1. Introduccin.2
1.2. Formulacin del problema...3
1.3. Justificacin.4
1.4. Objetivos..5
1.4.1. Objetivo general...5
1.4.2. Objetivos especficos...5
1.5. Fundamento terico .6
1.6. Hiptesis9
2. Captulo II
Material y mtodos
2.1. Ubicacin de la investigacin. ..10
2.2. Materiales...10
2.3. Mtodos.....10
2.4. Caracterizacin Macroscpica y microscpica .....................12
3. Capitulo III
Resultados
3.1 Resultados ..15
4. Captulo IV
Discusin
4.1 Discusin.....16

Captulo V
Conclusiones

5.1 Conclusiones...17

Captulo VI
Recomendaciones

6.1 Recomendaciones....18

Bibliografa

Bibliografa......19

Anexos

Anexos.20

-1-
 Captulo I
1.1. Introduccin
La cebolla es de las hortalizas ms cultivadas en el Ecuador, cuya produccin est
valorada en ms de 1 000 millones de dlares anuales. En trminos de produccin y
consumo nacional, o como producto de exportacin, Allium sepa es un producto
importante (Yumbay, 2011).
El cultivo de cebolla es afectado por algunas plagas y enfermedades que comprometen la
calidad del bulbo, afectando su comercializacin; una de ella es la pudricin caf o botritis
producida por el hongo fitopatgeno Botrytis cinerea, el mismo que produce una
disminucin en la productividad de un 5 a 10%. A este mismo se lo controla eficazmente
con fungicidas qumicos (Quinche, 2009).
La aplicacin de microrganismos para controlar plagas llega con la necesidad de producir
alimentos libres de elementos qumicos o txicos para la salud. De esta manera el gnero
de microrganismos Micorrizas sp. Tiene resultados favorables en control biolgico de
ciertos patgenos como Fusarium, Phytophthora etc. igualmente en nematodos y
bacterias (Carreon et al., 2008).
Sin embargo, la mayora de estos estudios han sido realizados bajo condiciones ex vitro,
en invernadero o campo. Hasta el momento no se han realizado estudios de la respuesta
de la cebolla (Allium cepa) al control biolgico de fitopatgenos in vitro (Quinche, 2009).

-2-
 1.2.Formulacin del problema
La cebolla (Allium cepa) es un cultivo que se presenta dentro de las operaciones agrcolas
de pequea y gran escala en tiempo real, pues hay gran nmero de variedades con distinta
adaptacin a los diferentes medios en donde son producidas. La superficie total plantada
de cebolla en el mundo asciende a ms de 2 millones de hectreas, producindose 32.5
millones de toneladas anuales. Es por esto que a la cebolla se le da un extenso cuidado
durante su desarrollo ya que esta es vulnerable a varias enfermedades, entre ellas est la
ms comn que es la Botrytis o pudricin caf producida por el hongo llamado Botrytis
cinerea (Herbario virtual, 2013).

Las enfermedades causadas por Botrytis cinerea quiz sean las ms comunes y ms
ampliamente distribuidas de hortalizas, plantas ornamentales, frutales, etc. Las cuales
aparecen principalmente en forma de tizones de inflorescencias y pudriciones del fruto,
pero tambin como pudriciones del tubrculo, como el bulbo y races. Esta enfermedad,
es uno de los problemas ms graves de los cultivos que aqueja a pequeos, medianos y
grandes productores hoy en da. (Museo Nacional de Historia Natural, 2015)
Los productores cada ao invierten mucho dinero para controlar y evitar la enfermedad
con productos qumicos que pueden contaminar al planeta y ser perjudiciales en la salud
del hombre. Para ello se platea nuevas alternativas de control biolgico como el empleo
de micorrizas ya que estas pueden inhibir en el desarrollo de la Botrytis cinerea,
generando as un tratamiento amigable con el bolsillo y el medio ambiente (Museo
Nacional de Historia Natural, 2015).

-3-
 1.3.Justificacin
El presente proyecto de investigacin pretende evitar el uso de agroqumicos y fungicidas
ya que estos suelen filtrase mediante el suelo o el aire, y crean una cierta contaminacin
en medio ambiente mientras se estn aplicando, tienen alta toxicidad para los seres
humanos as perjudican la salud a largo plazo, por este motivo lo remplazaremos por el
mtodo de control biolgico in vitro siendo este sustentable para el ecosistema y as
producir alimentos libres de qumicos y sin agotar los recursos naturales. (Perez , 2011)

La ubicacin geogrfica del pas es una ventaja para la produccin de cebolla. Por lo
general, esta hortaliza est presente en todas las comidas diarias de los ecuatorianos, y
por ese motivo es que un buen nmero de ecuatorianos estamos expuestos a los residuos
de los agroqumicos utilizados para, ya sea tratamiento o prevencin de plagas y
enfermedades, y con ello vienen problemas de salud para el consumidor. Por tal motivo
se busca nuevos mtodos de control de plagas como el planteado en este proyecto, ya que
en l se investigar un mtodo, poco aplicado a nivel regional, de tratamiento para una de
las enfermedades ms comunes que afecta este popular alimento, la cual es el botritis,
utilizando el control biolgico de esta por medio de micorrizas para as generar un
tratamiento ms amigable con el medio ambiente y con la salud del consumidor. (Vera,
2009)

-4-
1.4.Objetivos

1.4.1. Objetivo general

Evaluacin in vitro de Micorriza sp. sobre Botrytis cinrea en cultivo de cebollas

1.4.2. Objetivos especficos

Obtener cepas puras de Micorriza sp. y de Botrytis cinrea.

Realizar un control biolgico de Botrytis cinrea con cepas de Micorriza sp. como
agente inhibidor.

-5-
 1.5. Fundamento Terico

I) Botrytis cinrea
El moho gris (Botrytis cinerea) y sus cepas causan la necrosis de las flores, las hojas, las
yemas, los brotes, las plntulas y las frutas de las plantas. Tanto las plantas herbceas
como las leosas son susceptibles a esta enfermedad. Esta enfermedad no tiene
hospederos especficos. El moho gris puede infectar a cientos o miles de plantas. La
infeccin ocurre en condiciones de humedad. Cuanto ms hmeda est la planta, ms
riesgo correr de infectarse de moho gris. La cantidad de zonas infectadas ha aumentado
como as tambin la cantidad de plantas atacadas y el grado de gravedad de las infecciones
(desarrollo ms rpido de la enfermedad y necrosis del tejido). (Enriquez , 2012)
El botritis a veces se confunde con los daos que se manifiestan cuando las plantas
envejecen o con el dao que causan los trips. Revise los ptalos atentamente para
diferenciar la marchitez causada por el envejecimiento de la que causa la enfermedad. La
marchitez causada por el envejecimiento debe ocurrir primero en los ptalos externos y
en los bordes o en la punta. Cuando los ptalos internos o el centro de los ptalos
desarrollan lesiones marrones primero, la causa probablemente sea el moho gris. En las
hojas delgadas como las del rbol de Judea, las lesiones son irregulares de color marrn
claro a marrn. En las hojas ms carnosas como las del rododendro se ven anillos
concntricos de distintos tonos del marrn. (Enriquez , 2012)
Los sntomas varan segn el tipo de planta atacada, la parte de la planta atacada y las
condiciones de crecimiento. Cuando hay mucha humedad se puede ver un entretejido fino
gris (micelio). Generalmente, en ese tejido se forma una estructura denominada
conidiforo que contiene esporas. Las plantas infectadas liberan las esporas de la
enfermedad en forma de nubes cuando por alguna razn se mueven. La humedad tambin
acelera la liberacin de las esporas. La mala circulacin de aire tambin contribuye a la
supervivencia y al desarrollo de la enfermedad. Cuando la temperatura oscila entre los 68
y 76 F y la humedad es elevada, la enfermedad demora aproximadamente 20 horas para
comenzar a infectar. El clima clido a muy caluroso y seco contribuye a reducir o detener
el desarrollo y la diseminacin de la enfermedad. (Gonzlez, 2006)

Imagen1: Micrografa electrnica de una cepa de Botrytis cinrea. Imagen obtenida de Google imgenes

-6-
 II) Micorrizas
La palabra micorriza, de origen griego, define la simbiosis entre un hongo (mycos) y
las races (rhizos) de una planta. Como en muchas relaciones simbiticas, ambos
participantes obtienen beneficios. En este caso la planta recibe del hongo principalmente
nutrientes minerales y agua, y el hongo obtiene de la planta hidratos de carbono
y vitaminas que l por s mismo es incapaz de sintetizar mientras que ella lo puede hacer
gracias a la fotosntesis y otras reacciones internas. Se estima que entre el 90 y el 95% de
las plantas terrestres presentan micorrizas de forma habitual. (Carren, Gmez, &
Martnez, 2008)
La asociacin simbitica se establece entre las races de plantas leosas de las
familias Pinaceae, Fagaceae, Nothofagaceae, Myrtaceae y Dipterocarpaceae, las hifas de
hongos de los filos Glomeromycota, Basidiomycota y Ascomycota. Al inicio de la
colonizacin el hongo forma un manto constituido de hifas fngicas que rodean el pice
de la raz; luego otras hifas penetran el espacio intercelular entre las clulas radiculares,
formando lo que se conoce como la red de Hartig. Es aqu en la red de Hartig donde se
lleva a cabo el intercambio de nutrientes, minerales y agua: el hongo absorbe agua y
minerales que luego transloca hacia la planta y en retorno la planta le provee azcares y
otros productos de la fotosntesis al hongo. Dentro de varios de los efectos positivos que
le brindan los hongos ectomicorrcicos a su hospedero, el ms importante se le atribuye
al micelio extra radical que aumenta la cantidad de toma de minerales disueltos. (Herbario
virtual, 2013)
La movilizacin de nutrientes se puede dar por una va enzimtica que le permite al hongo
utilizar nitrgeno orgnico y fsforo, o por la liberacin de cidos orgnicos
movilizando calcio, magnesio y potasio, entre otros. Las hifas excretan
principalmente cido oxlico que ayuda a desgastar las superficies rocosas; adems el
dimetro que presenta el pice de una hifa comparado con el pice de una raz le confiere
una gran ventaja a la planta pues le permite explorar sustratos a los cuales no podra
alcanzar sin la asociacin con su hongo ectomicorrcico. (Perez , 2011)
Es posible que un hongo forme micorrizas con ms de una planta a la vez, establecindose
de este modo una conexin entre plantas distintas; esto facilita la existencia de
plantas parsitas (algunas de las cuales ni siquiera realizan la fotosntesis, como las
del gnero Monotropa), que extraen todo lo que necesitan del hongo micobionte y las
otras plantas con las que ste tambin establece simbiosis. As mismo, varios hongos (en
ocasiones de especies diferentes) pueden micorrizar una misma planta al mismo tiempo.
(S.N, 2015)

Imagen2: imagen de una asociacin simbitica entre un hongo y la raz de una planta de papa. Imagen obtenida de http://agriculturers.com

-7-
III) Cebolla (Allium cepa)
Es una planta herbcea bienal perteneciente a la familia de las amarilidceas. Es la
especie ms ampliamente cultivada del gnero Allium, el cual contiene varias especies
ms que se denominan cebollas y que se cultivan como alimento. Ejemplos de las
mismas son la cebolla de verdeo (Allium fistulosum), la cebolla escalonia (Allium
ascalonicum) y la cebolla de hoja o ciboulette (Allium schoenoprasum). (Vera, 2009)
La cebolla es el bulbo subterrneo y comestible que crece en la planta del mismo nombre.
Se trata de una hortaliza de origen asitico cultivada desde 6.000 a.C. Desde Asia se
extendi por Europa, de donde pas a Amrica. Actualmente existe una amplia gama de
variedades, que pueden clasificarse en funcin del color del bulbo, forma, tamao, usos,
origen y precocidad. Tiene muchos usos culinarios, pudiendo usarse de distintas maneras,
ya sea cruda o cocinada. Adems, se le conocen distintas propiedades medicinales. (Perez
, 2011)

Imagen3. Imagen de una Cebolla (Allium cepa) comn obtenida de Google imgenes.

1.6. Hiptesis
El control biolgico de Botritis cinerea en el cultivo de cebolla (Allium cepa)
utilizando micorrizas, genera un mtodo ms sustentable para tratamiento de la
enfermedad en la planta, dejando de lado el uso de agroqumicos.

-8-
 Captulo II
2.Materiales y mtodos

2.1. Ubicacin de la Investigacin

2.1.1. Provincia: Pichincha
2.1.2. Cantn: Rumiahui
2.1.3. Lugar: Hacienda el Prado IASA-1
2.1.4. Latitud: 02320 S
2.1.5. Longitud: 782444 E
2.1.6. Altitud: 2748 m.s.n.m.
2.1.7. Piso altitudinal: Montano Bajo
2.1.8. Regin latitudinal: Templado
2.1.9. Zona de vida: Bosque Hmedo

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 2.1.10. Provincia de humedad: Hmedo
2.1.11. Clasificacin bioclimtica: Hmedo Temperado
2.1.12. Formacin vegetacional: Bosque hmedo montano
2.1.13. Piso zoo geogrfico: Temperado- Alto andino.

2.2. Materiales

Equipo Microorganismos Reactivo

Cepas de:
Autoclave Trichoderma spp. PDA (Agar papa
dextrosa)
Cmara de flujo laminar Micorriza sp.
Cajas petri
Parafilm
Incubadora
Mechero
Asa de inoculacin
Matraz graduado
Balanza

2.3. Mtodos

2.3.1. Recoleccin hongos patgenos:

Se colecto diferentes muestras de la cebolla que estn infectadas con Botrytis cinerea.
Posteriormente se coloc las muestras en bolsas con cierre Ziploc, roseando con agua
para que el hongo esporule durante una semana.
2.3.2. Preparacin de medios de cultivo:
Se realiz un medio de cultivo; pesando 40 gramos de PDA y se disolvi en 500 cc de
agua destilada que est caliente, luego se esper que todo el sustrato est completamente
disuelto.
Se esterilizo el medio de cultivo en la autoclave en una temperatura de 121 C durante
15 minutos.
Se sac el agar de la autoclave y se dej que se enfre por 7 minutos para posteriormente
se coloc cierta cantidad en las cajas Petri.
Se puso las cajas Petri listas en el refrigerador para luego ser utilizadas en el cultivo de la
muestra.
2.3.3. Cultivo del hongo patgeno:
Se encendi el mechero para proceder con el cultivo de la muestra.
Se desinfecto y flameo el asa de inoculacin.

- 10 -
Con el asa de inoculacin estril se tom una pequea muestra de la bolsa Ziploc que
contiene al hongo esporulado (Botrytis cinerea), recordando que todo este proceso se
realiz detrs de la llama del mechero de Bunsen para evitar que el cultivo se contamine.
Se coloc la muestra de Botrytis cinerea en el medio de cultivo de agar papa dextrosa.
Proceder a flamear los bordes de la caja Petri.
Luego se sell la caja Petri con papel para film.
Se coloc nuestro cultivo a la incubadora de laboratorio, la cual se encontr a 23 C,
procurando que la tapa de la caja Petri est boca abajo para proporcionar una adecuada
humedad al medio de cultivo.
2.3.4. Cultivo del hongo benfico:
Se encendi el mechero para proceder con el cultivo de la muestra.
Se desinfecto y flameo el asa de inoculacin.
Con el asa de inoculacin estril se tom una pequea muestra de un medio de cultivo
adulto de Micorriza sp, recordando que todo este proceso se debe realizar detrs de la
llama del mechero de Bunsen para evitar que el cultivo se contamine.
Se coloc la muestra de Micorriza sp en el medio de cultivo de agar papa dextrosa.
Se procedi a flamear los bordes de la caja Petri.
Luego se sell la caja Petri con papel para film.
Se llev a nuestro cultivo a la incubadora de laboratorio, la cual se encontraba a 23 C,
procurando que la tapa de la caja Petri est boca abajo para proporcionar una adecuada
humedad al medio de cultivo.
2.3.5. Evaluacin del antagonismo
La evaluacin de la capacidad antagnica in vitro se efectu en PDA por medio de la
tcnica de cultivos duales, la cual consiste en colocar en un extremo de la caja Petri los
microorganismos a estudiar, y medir el halo de crecimiento de cada microorganismo;

El que el biocontrolador (Micorriza sp.) crezca significa que acta de manera

antagnica e inhibe el crecimiento de Botrytis cinrea.
El que Botrytis cinrea crezca ms que Micorriza sp. Significa que Micorriza
sp. No es un hongo antagnico.

Caja Petri 1: Colocar en un extremo de la caja Petri 1 un disco de 5 mm de diametro, del

medio de cultivo que contenia el antagonista (Botrytis cinrea) y en el otro extremo de la
caja un disco del medio que contena el biocontrolador (Micorriza sp )

2.4. Caracterizacin macro y microscpica

- 11 -
 2.4.1. Caracterizacin Macroscpica:

2.4.1.A. Botrytis cinrea

Se caracteriz la estructura macroscpica y del botritis empleado

observaciones y mediciones de la muestra cultivada. Se hizo un estudio
macroscpico in vitro de la muestra aislada en otro medio de cultivo, y se
colectaron muestras de esta cepa para la evaluacin microscpica posterior.
El estudio macroscpico revel que el hongo causante del moho gris, es un
hifomiceto que produce gran cantidad de micelio gris y varios conidiforos
largos ramificados, las clulas apicales redondeadas producen racimos que
aparecen en una masa parda griscea. Los conidiforos y los racimos de
conidios se asemejan a un racimo de uvas. las colonias de Botrytis son de
crecimiento moderado, nuestra muestra se desarroll en un lapso de 10 das
alcanzando en el da 10 su esporulacin. La muestra consumi casi toda la
caja Petri lo cual indica su gran capacidad de adaptacin al medio utilizado
(agar papa dextrosa), tal y como lo indica la siguiente imagen. (Enriquez ,
2012)

Imagen 4: cultivo in vitro de Botrytis cinrea, en el cual se puede apreciar sus

caractersticas macromtricas siendo al ms representativo su color gris.

2.4.1.B. Micorriza sp.

La caracterizacin macroscpica se efectu 7 das despus de la siembra. La
observacin se realiz en condiciones sin vitro con el cultivo aislado. La
micorriza present un tipo de ramificacin en su mayora ausente y en menor
proporcin dicotmica, con una longitud de 1 a 8 mm y 0.2 mm de dimetro,
las morfologas de las puntas no ramificadas fueron sinuosos o inclinados.
De jvenes presentaban una coloracin caf claro distribuido
homogneamente; por el contrario, con el tiempo se va diferenciado la base
de un color caf obscuro y la punta caf claro, con la terminacin cilndrico.
En su etapa adulta la base es mayor que el pice. El tipo de manto en la
superficie era liso, su anatoma fue plectenquimatica. Macro

- 12 -
 morfolgicamente, se apreciaron estructuras alargadas de las hifas, color
caf y blanco en las puntas. (Carren, Gmez, & Martnez, 2008)

Imagen 5: Cultivo de micorrizas en el cual se puede observar su coloracin gris interna y blanca en
los extremos tal y como esta descrito en la caracterizacin macroscpica.

2.4.2. Caracterizacin Microscpica

2.4.2.A. Botrytis cinrea
Para la caracterizacin microscpica se tom una muestra de la cepa
cultivada y se la coloco en el microscopio para su posterior observacin, y
desacuerdo a esta se determin lo siguiente:
El micelio est constituido por un conjunto de filamentos, los cuales son las
hifas de acuerdo a la literatura estudiada, tabicados, cilndricos, que se
multiplican vegetativamente mediante divisin citoplasmtica, siendo
comn que tenga lugar una divisin nuclear sin que se haya producido
divisin citoplasmtica, lo que da lugar a hifas cenocticas con un elevado y
variable nmero de ncleos. la coloracin y el dimetro de las hifas son muy
variables, dependiendo en gran medida de las condiciones de desarrollo del
micelio. (Enriquez , 2012)
Las ramificaciones que salen de las hifas son los conidiforos en cuyo
extremo se encuentran los conidios, que son necesarios para la produccin
de esporas. Para que la esporulacin o formacin de los conidios pueda tener
lugar son necesarias unas determinadas condiciones de luz y humedad (las
cuales fueron proporcionadas por le medio de cultivo utilizado). La
proliferacin de un gran nmero de estos conidiforos sobre la superficie
vegetal da lugar a una coloracin blanquecina, parda o griscea, a la que hay
que atribuir la denominacin comn de la enfermedad producida por el
hongo, Podredumbre Gris. (Gonzlez, 2006)

- 13 -
 Imagen 6: Observacin de la muestra de Botrytis cinrea obtenida de la cepa cultivada. Se puede
apreciar el micelio (la estructura filamentosa alargada), las hifas (las ramificaciones que salen del
micelio), y los conidiforos (estructuras circulares que estn en los extremos de las hifas).

2.4.2.B. Micorrizas sp.

Despus de la caracterizacin microscpica de la cepa de Botrytis cinrea se
realiz el mismo procedimiento para la caracterizacin microscpica de la
micorriza en la cual se determin lo siguiente:
Las hifas de la micorriza penetran las clulas del crtex de la raz, sin romper
el plasmalema o el tonoplasto. Forman unas estructuras dendroides
llamadas arbsculos o protuberancias llamadas vesculas, que quedan
revestidas por la membrana plasmtica. estas micorrizas son del tipo
endomicorrizas por la formacin de estas estructuras. El hongo nunca
penetra la endodermis, ni la estela, ni el meristema apical, ni la caliptra. Las
hifas se extienden varios centmetros por fuera de la raz, incrementando la
cantidad de nutrientes absorbidos. El intercambio entre hongo y hospedante
tiene lugar en los arbsculos. (Carren, Gmez, & Martnez, 2008)

Imagen 7: Observacin de micorrizas al microscopio, en el cual se puede apreciar

su caracterstica microscpica ms representativa las estructuras dendroides
llamadas arbusculos y las vesculas

- 14 -
 Captulo III

3.1. Resultados
- En el antagonismo entre Botrytis cinrea y Micorriza spp. se observ que el hongo
predominante es Micorriza spp. con un amplio crecimiento en casi toda la caja
Petri dejando a la botritis sin espacio para desarrollarse y crecer se aproxima un
crecimiento de 2 y 0,5 cm por da respectivamente.

- 15 -
 Captulo IV
4.1. Discusin

- La capacidad antagonista de Micorriza spp. frente a otros hongos ha sido

estudiado incontables veces y diferentes maneras. Este hongo presenta una
alta agresividad ante presencia de otros microorganismos. En nuestra
investigacin el estudio de dos hongos diferentes dio datos sobre la naturaleza
de Micorriza spp. pues este tuvo un efecto abrasivo en nuestros medios los
mismos que colonizo en una buena parte.

- Otros estudios de Micorriza spp. obtuvieron los mismos resultados

antagnicos utilizando mtodos diferentes de aplicacin y siembra de los
mismos, como lo cita (Noda , 2009), en su estudio de Las Micorrizas: Una
alternativa de fertilizacin ecolgica en los pastos., con la diferencia

de la extensiva aplicacin y siembra del mismo en diferentes medios.

- Por otra parte, queda demostrado la eficacia de Micorriza spp. como bio
controlador de plagas como el caso de Botrytis cinrea que afecta a varios
tipos de cultivos y en caso de esta investigacin, en cultivo de cebollas, el
mismos que aparecen en forma de tizones de inflorescencias y pudriciones del
fruto, pero tambin como pudriciones del tubrculo, en el bulbo y races.

- 16 -
 Captulo V

5.1. Conclusiones

1. Al efectuar el proyecto se observ que el hongo colocado de Micorriza spp. sobre

Botrytis cinrea (hongo patgeno de las cebollas) es un hongo que inhibi
completamente el crecimiento del mismo. actuando como un notorio antibitico
sobre Botrytis cinrea y siendo un hongo con efectos beneficiosos no solo en el
suelo sino tambin frente a otro hongo.

2. Al aislar Micorriza spp. en una caja Petri se identific colonias helicoidales de

color blanco brillante- cristalino creciendo a medida de 1cm diario con gran
cantidad de esporas (observadas en microscopio) y con hifas largas y abundantes.

3. Se observ que al aislar el hongo Botrytis cinrea este present un color verde
fuerte con pequeas colonias en toda la caja Petri y gran cantidad de esporas; se
consider un desarrollo de 0.5 a 0.8 cm por da.

- 17 -
 Captulo VI
6.1. Recomendaciones

- Los estudios realizados son exclusivamente pruebas in vitro, las mismas que
pueden tener otros resultados en campo variando en los efectos que pudimos
obtener.

- Los factores climticos pueden afectar el resultado de nuestro experimento, por lo

que se recomienda realizar estudios en diferentes pisos climticos.

- Aplicar antagonismo de los microorganismos estudiados, con otros organismos, y

comparar la eficacia que se podra obtener con los hongos que no lograron
desarrollarse por efecto del ser con caractersticas ms agresivas de colonizacin.

- Realizar un seguimiento de cultivos de cebolla y de su incidencia en la

contaminacin con Botrytis cinrea, y determinar causas o patrones de su
aparicin.

- 18 -
Bibliografa
Carren, Y., Gmez, N., & Martnez, M. (2008). Las micorrizas arbusculares en la proteccin
vegetal. Morelia-Michoacn-Mxico.

Enriquez , P. (17 de Febrero de 2012). Universidad de Chile . Obtenido de

http://extension.illinois.edu/focus_sp/graymold.cfm

Gonzlez, M. (5 de abril de 2006). EcuRed. Obtenido de EcuRed:

https://www.ecured.cu/Fumagina

Herbario virtual. (2013). Obtenido de Fumagina en ctricos:

http://herbariofitopatologia.agro.uba.ar/?page_id=298

Museo Nacional de Historia Natural. (9 de Agosto de 2015). Obtenido de EL ORIGEN DE LA

FUMAGINA: http://www.mnhn.cl/613/w3-article-52856.html

Noda , Y. (2009). Las Micorrizas: Una alternativa de fertilizacin ecolgica en los pastos.
SCIELO, 15-20.

Perez , A. (14 de Enero de 2011). Tipos de contaminacin . Obtenido de

https://tiposdecontaminacion.net/ventajas-y-desventajas-de-los-fungicidas/

S.N. (20 de MAYO de 2015). GREENPEACE. Obtenido de GREENPEACE:

http://www.greenpeace.org/espana/Global/espana/2015/Report/agricultura/Plaguici
das_Y%20_Nuestra_Salud_ResumenCastellano.pdf

Vera, V. (4 de Julio de 2009). EL COMERCIO. Obtenido de EL COMERCIO :

http://www.elcomercio.com/actualidad/limon-tahiti-mas-productivo.html

- 19 -
Capitulo VIII
8.1. Anexos

1 2 3
Medio de cultivo utilizado: Agar Colocacin del medio de cultivo Preparacin del medio de cultivo
papa dextrosa. en el matraz para ser preparado.

4 5 6
Colocacin del medio de cultivo ya Medio de cultivo listo para ser
Colocacin de cajas Petri en la
preparado sobre las cajas Petri usado.
autoclave para su desinfeccin.
descontaminadas.

7 8 9
Inoculacin de la cepa de Colocacin de muestras ya
Proceso de siembra de la cepa de
micorriza en la caja Petri con el sembradas en la autoclave para
la muestra micorriza.
medio de cultivo. su preservacin.

- 20 -
 10 11 12
Vista posterior de Micorriza
Vista superior de la micorriza ya Proceso de siembra de cepa de
desarrollada en el medio
desarrollada. Botrytis.
utilizado.

13 14 15
Botrytis cinrea sembrada. Botrytis cinrea ya desarrollada. Observacin de muestras al
microscopio.

16 17 18
Control biolgico in vitro de
Botrytis cinrea Micorriza Botrytis cinrea utilizando
micorriza.

- 21 -