UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

UNAD
ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS, TECNOLOGIA E INGENIERIA
CURSO DE BIOLOGIA
TUTORA:
Yamile.cortes@unad.edu.co
Cortes.yamile@gmail.com

OBJETIVO

Conocer y cumplir las principales normas de seguridad e higiene que se deben

seguir en el laboratorio, con el fin de evitar posibles riesgos, tanto para las
personas como para el medio ambiente.

INTRODUCCIN

La bioseguridad, es la aplicacin del conocimiento, de las normas y tcnicas en el

desarrollo de las prcticas que se realizan en el laboratorio para prevenir la
exposicin del personal y del medio ambiente a cualquier riesgo.

Los riesgos pueden estar relacionados con las propias instalaciones, con las
muestras de origen biolgico, con los procedimientos y manipulaciones que se
realicen.

Para el desarrollo de esta prctica el estudiante debe observar el video normas de

seguridad en el laboratorio y contestar las preguntas presentadas en el formato de
observacin del video.

PRINCIPALES NORMAS

Las principales normas a tener en cuenta para el desarrollo de prcticas en el

laboratorio de Biologa son las siguientes:

En la zona de trabajo del laboratorio no se debe consumir alimentos ni bebidas

para evitar riesgos de contaminacin.
Est prohibido fumar en el rea del laboratorio o sus alrededores. Recordemos
que se trabaja con gas y que algunos qumicos generan vapores inflamables.
No se deben llevar a la boca lpices, etiquetas o cualquier otro material
utilizado en el laboratorio.
Se debe mantener el laboratorio limpio y aseado. Por consiguiente al terminar
la prctica se debe descontaminar la superficie de trabajo.
Las manos se deben lavar despus de manipular material infeccioso, as
como al abandonar el laboratorio.
Se recomienda el uso de zapatos cerrados con el fin de evitar daos
corporales en el caso de derrame de reactivos al suelo.
Todo estudiante debe hacer uso de la bata blanca, esto le proteger la ropa del
contacto con reactivos y colorantes empleados en el laboratorio.
Slo se debe permitir el paso a la zona de trabajo del laboratorio a las personas
autorizadas.
Durante el trabajo se mantendrn cerradas las puertas del laboratorio.
No se debe pipetear con la boca. Debe utilizarse siempre un dispositivo de
pipeteo. Todas las pipetas deben tener tapones de algodn para reducir la
contaminacin de los dispositivos de pipeteo.
Todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con
materiales potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes. Los
guantes deben ser desechados antes de salir del rea de trabajo. Jams se
debe salir de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se deben tomar
objetos personales.
Se recomienda no colocar sobre el rea de trabajo objetos que no favorezcan un
buen desempeo de la prctica y as se evitaran accidentes y/o contaminacin
de objetos de uso personal.
Marque y rotule adecuadamente las lminas. Deben llevar claramente escrito
en un lugar visible, el nombre o identificacin del grupo de trabajo, prctica
realizada y fecha.
Cada grupo debe llevar sus implementos completos, entre ellos, las laminas
portaobjetos y cubreobjetos, con el fin de evitar contaminacin de sus muestras
a observar.
Una vez concluida la prctica, proceda a organizar el sitio de trabajo,
desinfectando el mesn con toallas de papel humedecidas con hipoclorito de
sodio o alcohol y dejando tanto el material como el equipo utilizado limpio y en
el lugar adecuado.
Es importante conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que
existen en el laboratorio.
Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse
de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulacin.
Es necesario conocer el manejo de cada uno de los equipos existentes en el
laboratorio.
Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y
microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus
mecanismos.
Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despus de
haberlos calentado con el fin de evitar roturas. Se recomienda no colocar este
material caliente directamente sobre la superficie fra de los mesones, se
aconseja dejarlos sobre servilletas de papel.
En neveras que no posean un sistema de proteccin antideflagracin no deben
almacenarse reactivos que contengan compuestos voltiles inflamables como
ter etlico.
Los productos inflamables como gases, alcohol, ter, entre otros deben
mantenerse alejados de la llama del mechero.
Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se har al bao Mara,
nunca directamente a la llama.
Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las
llaves de paso al apagar la llama.
Se debe lavar muy bien la cristalera antes y despus de su uso.
 Preste atencin y cuidado al manipular cristalera mojada.
En el laboratorio habr un recipiente plstico, para cristalera rota y para
plsticos que hayan estado en contacto con cultivos de clulas o virus.
Por favor, deseche cada cosa en el envase apropiado.
Mantenga despejadas las reas.
Trate de traer la menor cantidad posible de pertenencias al laboratorio.
Coloque sus pertenencias en un rea designada o donde no estorben.
Es importante llevar a las practicas todos materiales solicitados para agilizar el
trabajo y evitar contratiempos y retrasos.
La imprudencia y la carrera a la hora de trabajar en el laboratorio, son
malas compaeras y pueden provocar accidentes graves.
Siga al pie de la letra las indicaciones de su tutora o tutor.

CUESTIONARIO

Entregar en el informe

1.1 Que es bioseguridad?

1.2 Cules seran para usted las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio
de biologa?

1.3 Cmo puede usted evitar en el laboratorio daos a su salud?

1.4 Conclusiones
OBJETIVOS

MATERIALES

 I. EL MICROSCOPIO

TIPOS DE MICROSCOPIOS

.
 MARCO TERICO

Tipos de Microscopio

El Microscopio ptico simple

Constituido por una lente biconvexa nica o lupa que hace converger los rayos
luminosos que la atraviesan en un punto denominado foco y a una distancia focal muy
corta.

El Microscopio ptico Compuesto

El microscopio se define como un instrumento ptico formado por un sistema de

lentes: objetivos y oculares que amplan los objetos extremadamente pequeos para
posibilitar su observacin. La lente del objetivo proporciona una imagen intermedia
ampliada del objeto, es decir, funciona como una lente simple, y la lente del ocular que
recoge la imagen dada por el objetivo y la aumenta.

El Microscopio electrnico

Este microscopio en lugar de una fuente de luz, utiliza un haz de electrones que se
desplazan en el vaco y en lnea recta. Con el microcopio electrnico es posible
observar objetos muy pequeos como los virus que no pueden ser resueltos con el
microscopio ptico.

En el microscopio ptico en lugar de lentes se emplean campos magnticos que

enfocan los haces de electrones.

El Microscopio ptico Compuesto:

Componentes

A continuacin se describen las partes que lo conforman:

Los objetivos: estn localizados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza
metlica, denominada revlver o portaobjetivos, que permite cambiarlos fcilmente.
Estos generan una imagen real, invertida y aumentada, esta imagen intermedia es
captada y sufre una nueva ampliacin por el ocular.
 Los objetivos ms frecuentes son los de 4X, 10X,
40X y 100X aumentos. Este ltimo de 100X se
llama de inmersin ya que para su utilizacin se
necesita aplicar aceite de cedro sobre la
preparacin. Y se utiliza para observar lminas
coloreadas completamente secas. El poder de
aumento de cada objetivo se indica en el nmero
grabado en la manga del lente. Generalmente el
objetivo de 4X se encuentra marcado por un anillo
rojo, el de 10X por un anillo de color amarillo, el de
40X con un anillo de color azul y el de 100X con un
anillo de color blanco

La abertura numrica se encuentra (A.N.) se encuentra grabada en la manga del

objetivo, junto a la indicacin del aumento.

0,30 En el objetivo de 10X

0,65 En el objetivo de 40X

1,30 En el objetivo de 100X

A medida que aumenta la A.N. disminuyen las dimensiones de la lente frontal,

montada en la base del objetivo. La lente del objetivo de 100x tiene el tamao de una
cabeza de alfiler es mayor el poder de resolucin. Adems a medida que aumenta A.N.
es mayor el poder de resolucin. Cuanto mayor sea el poder de resolucin del objetivo,
ser ms clara la imagen y aumentar la capacidad de poner de manifiesto detalles
adyacentes muy cercanos, separndolos y aclarndolos. El poder de resolucin mximo
de un buen microscopio es aproximadamente 0,25 nanmetros, el poder de resolucin
del ojo humano es de 0,25 milmetros.

Los oculares se denominan as porque estn muy cercanos al ojo.

Su funcin es la de captar y ampliar la imagen formada en los
objetivos.
El poder de aumento del ocular se encuentra marcado en el ocular. Un
ocular por 4 aumenta 4 veces la imagen que produce el objetivo. Un
ocular por 6 la aumenta 6 veces. Un ocular por 10 la aumenta 10
veces Nunca se deben tocar las lentes con las manos. Si se ensucian,
se deben limpiar muy suavemente con un papel de ptica

El tubo ptico: es una cmara oscura unida mediante una cremallera. Tiene el
revlver con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior.

El Brazo: es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al
pie con el tubo.

Platina Es una plataforma horizontal con un

orificio central, sobre el que se coloca la
preparacin, que permite el paso de los
rayos procedentes de la fuente de
iluminacin situada por debajo.
Dos pinzas sirven para retener el
portaobjetos sobre la platina y un carro
con un sistema de cremallera guiado por
dos tornillos de desplazamiento que
permite mover la preparacin de delante
hacia atrs o de izquierda a derecha y
viceversa. Est dotado de una escala
graduada para medir de forma precisa
las observaciones.

El condensador: es un sistema de lentes convergentes situadas bajo la platina, su funcin es

la de concentrar la luz generada por la fuente de iluminacin hacia la preparacin.
Diafragma-iris Es una cortinilla que regula la cantidad de luz que entra en el
condensador, eliminando los rayos demasiado desviados. Se acciona mediante una
perilla. Esta situado debajo de la platina, inmediatamente debajo del condensador. La
disminucin del diafragma permite visualizar partes de protozoos u hongos se utiliza
en las preparaciones frescas

La fuente de iluminacin: se trata de una lmpara halgena de intensidad

graduable. Esta situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un
interruptor y en su superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar
filtros que facilitan la visualizacin.

Tornillo Macromtrico: Se encuentra en la parte inferior del microscopio. Sirve para

alejar o acercar el tubo a la platina movindola de arriba hacia abajo y viceversa.
Permite un enfoque aproximado o grueso de la muestra

Tornillo micromtrico: Generalmente se encuentra incorporado al tornillo

macromtrico. Sirve para dar claridad a la imagen al lograr un ajuste fino y preciso,
mediante movimiento de la platina hacia arriba y hacia abajo de forma lenta. Ambos
tornillos llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una
determinada altura.

Por ltimo definimos el pie o base: sirve como base del microscopio y tiene un peso
suficiente para dar estabilidad al aparato. En el se integra la fuente luminosa.
 Poderes o capacidades del microscopio

Poder de aumento

Permite magnificar la imagen. Corresponde al aumento (A) dado por la relacin:

Tamao de la imagen / tamao del objeto. La ampliacin es igual al producto del
aumento del lente ocular por el del objetivo. Cada objetivo y cada ocular tienen
grabado el nmero de veces que aumentan la imagen. Si la imagen del objeto, se hace
aumentar 40 veces mediante el objetivo y enseguida 10 mediante el ocular, su
aumento total ser 10X40= 400

Cmo se calcula el aumento de una muestra? Se multiplica el aumento que

seala el ocular por el aumento del objetivo dando como resultado el aumento total de
la muestra o nmero de veces en que el objeto se encuentra ampliado con respecto a
su tamao original.

Aumento total = aumento del ocular X aumento del objetivo

Poder de definicin

Es la capacidad del microscopio para

formar imgenes ntidas y con
contornos definidos

Poder de penetracin o profundidad

Permite visualizar los diferentes planos de una preparacin y est dado por el ajuste de
precisin que se logra con el tornillo micromtrico.

Poder de resolucin es la capacidad de presentar dos puntos que se encuentran

muy cercanos entre s como separados, lo cual permite observar detalles de los
objetos que con el ojo humano no se podran ver.

El ojo humano no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una
dcima de milmetro. Con el Microscopio ptico, el poder separador mximo es de 0,2
dcimas de micra. Mejora la visin unas 500 veces con relacin a la del ojo humano.
En la imagen se observan espacios blancos entre la tinta negra que a simple vista no
seran vistos

En la imagen se observan varias fibras de hilo que a simple vista no seran vistos
 El poder de resolucin depende de la longitud de onda
( ) y de la apertura numrica del objetivo (A.N.)

El Poder de resolucin esta dado por la formula:

Poder de resolucin=

2x A.N.

A.N relaciona el ngulo de apertura de los rayos de

luz, que provienen de la muestra, con el ndice de
refraccin.

Principios generales de microscopa

Principios pticos

Una lente sencilla (biconvexa) posee dos focos, uno a cada lado de la lente (F y F).
Cuando los rayos luminosos pasan a travs de la lente se concentran en el foco. La
distancia focal es la distancia entre el centro de la lente y el punto en donde convergen
los rayos.

La distancia focal de una lente depende del ndice de refraccin del material del cual
est hecha, y del medio que envuelve la lente. Por eso, es diferente la distancia focal
de una lente en el agua, que esta misma en el aire. Como tambin es diferente la
distancia focal de una lente de vidrio en comparacin con una construida en plstico.
 http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/lenses/simplethinlens/index.html

Cuanto ms pequea es la distancia focal de una lente tanto mayor es su aumento. Si

el objeto se coloca a distancia mayor del foco, se obtiene una imagen real invertida,
mientras que si el objeto se localiza a una distancia menor del foco la imagen ser
virtual. A medida que se aleja el objeto del foco, la imagen se percibe ms pequea.
La distancia de trabajo focal de un objetivo, es el espacio que existe entre la superficie
de la lente del objetivo y la laminilla, una vez se encuentre enfocada la preparacin. A
mayor aumento del objetivo la distancia de trabajo disminuye.

Como determinar la posicin de los objetos observados

Los objetos que se observan en el campo microscpico se pueden localizar en relacin

con las manecillas del reloj.

Los objetos que aparecen en la parte inferior del fondo del campo microscpico se
encuentran realmente en la parte superior.

Los objetos en el lado izquierdo del campo microscpico se encuentran realmente al

lado derecho.

Desplazamiento del objeto

Si se mueve el portaobjetos hacia la derecha, el objeto examinado se desplazar hacia

la izquierda. Si se mueve el portaobjetos hacia usted, el objeto examinado se alejar.
Formacin de la imagen real invertida

http://www.edumedia-sciences.com/a301_l3-microscope.html

Las imgenes se observan invertidas por las lentes.

Refraccin de la luz
La distancia focal de una lente depende del ndice de refraccin del material del cual
est hecha y del medio que envuelve la lente.

Cuando los rayos de luz se mueven en un medio homogneo como el aire, se propagan
en lnea recta, pero cuando caen sobre la superficie de un medio de diferente
densidad, a la del medio en el cual se vena propagando, cambian de direccin y de
velocidad a estos cambios se les conoce como refraccin de la luz.

Los rayos de luz procedentes de los objetos sumergidos en el agua se desvan al

atravesar dos medios de diferente densidad (agua-aire), originando este efecto de
refraccin. Por ejemplo si introducimos un lpiz en un vaso con agua, el lpiz se ver
cortado al pasar del agua al aire.

En la prctica de microscopa encontramos diferentes medios: aire, agua aceite de

inmersin y vidrio, cuyos ndices de refraccin son 1.0, 1.33, 1.51, .1.54
respectivamente. Al observar una muestra a travs del microscopio, los rayos de luz
tienen que atravesar estos medios y son refractados cambiando su direccin.
Al aplicar el aceite inmersin se entre el preparado y la lente, aceite de inmersin, que
tiene un ndice de refraccin igual al de la lente y evita la refraccin de los rayos
luminosos.

Campo de Visin

El campo de visin de un microscopio es la zona circular que se observa al mirar la

preparacin bajo un determinado aumento. Para medir el campo de visin de un
microscopio, se debe usar una unidad llamada micra. Una micra equivale a 0,0001
mm; en otras palabras, hay 1000 micras en un milmetro. El dimetro de este campo
es su medida.

Preparaciones

Las preparaciones pueden ser de varios tipos:

a. Frescas: Son montajes generalmente hmedos. La muestra se observa sin

modificar, diluida o concentrada. Permite observar la movilidad de los
microorganismos vivos. Se utiliza tambin para observar procesos como la mitosis,
meiosis, la formacin d esporas.

Para realizar un montaje hmedo se debe verter una gota de agua o del lquido que
contiene los microorganismos en el centro de una lmina portaobjetos y cubrirlo con
una laminilla cubreobjetos. Para evitar la evaporacin se puede sellar el espacio que
hay entre el portaobjetos y el cubreobjetos con vaselina o alguna sustancia similar.

Frescas ligeramente modificadas: Las muestras se pueden diluir con agua o con agua
con sal, esta ltima evita que la presin osmtica del medio no sea demasiado baja. Se
puede aplicar un colorante o reactivo para observar mejor las estructuras.
b. Fijadas y teidas: Se coloca una suspensin homognea de microorganismos
en una gota de agua sobre el portaobjetos y se fija (mediante calor o agentes
qumicos) y despus se tien mediante diferentes tcnicas. Estas preparaciones se
observan sin cubreobjetos y, habitualmente, con objetivos de inmersin.

Cuidados del microscopio ptico

Es importante tener en cuenta los siguientes cuidados y precauciones al usar el

microscopio:

Cuando se transporte el microscopio tmelo siempre con las dos manos, una en el
brazo del aparato y la otra sosteniendo la base. Nunca tenga objetos adicionales
en sus manos.
Al colocar el microscopio en la mesa, sitelo a 10 o 15 cm del borde.
Se debe revisar el microscopio y reportar cualquier irregularidad al auxiliar o al
profesor.
Los lentes solo se deben limpiar con un papel y una solucin destinada para tal fin.
No utilice otro tipo de papel.
Nunca utilice el lente de 100X sino se le ha solicitado hacerlo. Recuerde que se
requiere el uso del aceite de inmersin, de lo contrario puede daar el lente.
Cuando se utilice el objetivo de inmersin se debe limpiar antes de guardarlo.
Regule la menor intensidad luminosa cuando observe organismos acuticos.
Cuando no est utilizando el microscopio, apguelo.
Cuando termine de trabajar y al final de cada observacin, deje el microscopio en
el lente objetivo de menor aumento (4X o 3.5X).
El cable de conexin y todos los dems aditamentos del equipo los debe manipular
el tutor o monitor del laboratorio.
 ACTIVIDAD I.

Vdeo: Normas generales de uso del laboratorio

vdeo:_El microscopio parte 1
vdeo:_EL microscopio parte 2
 ACTIVIDAD II.

A. RECONOCIMIENTO DEL MICROSCOPIO

B. CALCULO DEL DIAMETRO DEL CAMPO



Medida en mm
Equivalencia Tamao de las
(escala del
en m marcas (divisiones)
portaobjetos)

1mm 1000 m grandes

0.1 mm 100 m medianas

0.01mm 10 m ms pequeas
 ACTIVIDAD III

MANEJO DEL MICROSCOPIO

 INDICACIONES

ILUSTRE Y REGISTRE CADA UNA DE LAS OBSERVACIONES REALIZADAS AL MICROSCOPIO,

INDICANDO EL OBJETIVO UTILIZADO (por ejemplo 10X, 40X). PROCURE INDICAR SUS PARTES.

Al finalizar el trabajo, deje el microscopio en su correcta posicin, limpie los objetivos,

colquele la funda y gurdelo en su respectivo puesto.

RECUERDE QUE AL FINAL DE LA PRCTICA, SE DEBE ENTREGAR UN INFORME COMPLETO Y

DETALLADO DE LOS ITEMS SOLICITADOS.

SE PUEDEN ORGANIZAR GRUPOS NO MAYORES DE CINCO (5) PERSONAS.

 BIBLIOGRAFIA

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Biologa General. Guas de Laboratorio y de Campo. Universidad Nacional de
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Castro, F.; Vlez, M.C.; Gonzlez, I.A. y Rondn, F.2002. Manual de prcticas
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Roberts, M.B.V. 1986. Biology for life. Segunda edicin. Espaa. 403 p.