Universidad de Santiago de Chile

Facultad de Qumica y Biologa

Tcnico Universitario en Anlisis Qumico y Fsico
Laboratorio De Qumica Analtica Cuantitativa

Laboratorio N1
Espectrofotometra visible

Profesora: Daniela Muoz Lira

Integrantes: Ignacio Mateluna
Diego Silva Gmez
Fecha entrega: lunes 4 de septiembre 2017
1.- RESUMEN

Se determin la concentracin de fosfatos en una muestra problema mediante la realizacin

de una curva de calibrado utilizando soluciones estndar de distintas concentraciones de
fosfatos a partir de una solucin de 20 ppm, a dichas soluciones estndar se les agreg
molibdato de amonio y cloruro estaoso para formar un complejo con una tonalidad azul
(dependiendo de la presencia de PO4-2), a las que luego se les midi la absorbancia (con
una longitud de onda = 700 nm), junto a la muestra problema, para as determinar la
concentracin de esta muestra observando la relacin que hay entre radiacin absorbida y
concentracin de sustancia, descrita por la ley de Lambert-Beer, se obtuvo que la muestra
problema tiene una concentracin de fosfatos de 2,3 ppm.

Objetivos:
Conocer la tcnica espectroscpica en la regin visible
Conocer las caractersticas de operacin de un espectrmetro de un haz
Determinar fosfato en una muestra de agua

2.- INTRODUCCIN

Desde hace aos se ha usado el color como ayuda para reconocer las sustancias qumicas,
junto con detectores de radiacin, se puede lograr estudiar la absorcin de sustancias, no
solamente en la zona del espectro visible, sino tambin en ultravioleta e infrarrojo.
Antes de hablar de la espectrofotometra se deben conocer ciertos conceptos bsicos que
se utilizan para caracterizar la energa radiante considerando la interaccin de la radiacin
con las especies qumicas presentes.

Transmitancia: Se define como la razn de la luz transmitida y la luz incidente, a

una longitud de onda especificada, que pasa a travs de una muestra.
Absorbancia: Se define como la relacin entre la intensidad de la luz que incide
sobre una muestra y la intensidad de esa misma luz que es transmitida a travs de
esa muestra. Cuando una luz de una longitud de onda determinada, seleccionada
por un filtro, incide sobre una muestra, parte de esa luz es absorbida.
Luminiscencia: Ocurre debido a la emisin de luz por una sustancia determinada y
esto ocurre cuando un electrn regresa a su estado inicial despus de haber sido
excitado y libera energa como un fotn. (1)

La espectrofotometra resulta ser el mtodo de anlisis ptico ms utilizado en las

investigaciones qumicas y biolgicas. Se le denomina como la medicin de la cantidad de
energa radiante que absorbe un sistema qumico en funcin de la longitud de onda de la
radiacin, por estas razones mencionadas, todos los componentes de la solucin van a
tener un patrn de absorcin de luz determinado (Skoog, 2015). Por otra parte, el principio
bsico de la espectrofotometra visible, en un grado ms especfico, se relaciona con la
absorcin de la radiacin ultravioleta, que es visible por una molcula, lo que provoca la
promocin de un electrn de un estado inicial a uno excitado. El espectro de absorcin se
observa cuando se pasan a travs de una sustancia una radiacin de una gama de
frecuencias. Se absorben aquellas frecuencias que son capaces de producir excitacin
electrnica.
En cuanto a la operacin que se emplea, se utiliza un espectrofotmetro, que es un
instrumento el cual permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin
que contiene una cantidad desconocida de soluto (blanco), y una que contiene una cantidad
conocida de la misma sustancia.
La radiacin electromagntica se puede considerar como una forma de energa radiante
que se propaga como onda transversal con movimiento ondulatorio. La distancia entre las
ondas se denomina longitud de onda (). La regin visible es una parte muy pequea del
espectro electromagntico y se extiende desde el ultravioleta hasta infrarrojo (380-780 nm
aproximadamente). (Muoz.D, 2017)

Figura n1: Espectro Electromagntico

Como bien se mencionaba, la espectrofotometra visible mide la cantidad de luz absorbida

o transmitida por la muestra en estudio, habitualmente en la determinacin cuantitativa de
soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos orgnicos. La absorcin de las
radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y
es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte
de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser
absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de
onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas
longitudes de onda no absorbidas (Fogler.H, 1992).
Cabe decirse que la espectrofotometra visible se erige por sobre otros mtodos analticos
gracias a una serie de ventajas. Entre ellas podemos mencionar su rapidez, su fcil uso, su
precisin extrema, su versatilidad. Asimismo, presenta una eficiencia en el costo. (2)
La cantidad de radiacin absorbida por una especie qumica se puede relacionar con la
concentracin de la sustancia que se analiza mediante la Ley de Beer (Beer-Lambert).
La ley explica que hay una relacin exponencial entre la transmisin de la luz a travs de
una sustancia, as como tambin entre la transmisin y la longitud del cuerpo que la luz
atraviesa. La forma original de esta ecuacin fue la ley de Lambert, que se refiere a la
absorcin de luz por slidos homogneos y la ley de Beer es una modificacin a la ley de
Lambert para hacer aplicable a las soluciones.
A=k b C
Donde: A es absorbancia; C es la concentracin del analito; b es el paso ptico y k es la
constante de proporcionalidad. La constante k se denomina Absortividad () si la
concentracin es expresada en g/L y Absortividad molar () si se expresa en moles/L.
(Muoz.D, 2017)

3.- DESARROLLO EXPERIMENTAL

Materiales y Equipos

-Matraces de aforado de 25 mL (6).

-Vasos de precipitado (2).
-Bureta Schellbach de 50 mL.
-Gotario de 2 mL
-Cubetas de vidrio
-Espectrofotmetro Visible.

Reactivos:
-Molibdato de amonio
-Cloruro estaoso
-Solucin de fosfato

PROCEDIMIENTO
Preparacin de soluciones:

Preparar soluciones
(1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0
ppm) a partir de PO4-2
20 ppm

Agregar 1 mL de Molibdato Preparar blanco (25 mL Preparar muestra

de amonio y 2 gotas de H2O destilada + problema (25 mL muestra
Cloruro estaoso a cada molibdato de amonio + + molibdato de amonio +
matraz cloruro estaoso) cloruro estaoso)

Espectro de absorcin:

Medir absobancia de la Obtener el grfico de

solucin 3 ppm entre absorbancia versus
550 nm y 750 nm longitud de onda
(utilizar sol. Blanco)
Curva de calibracin:

Seleccionar la longitud de onda

Medir la absorbancia de todas las
en el punto de mxima absorcin
soluciones preparadas, adems de
(de la grfica absorbancia v/s
la muestra problema.
longitud de onda)

4.- RESULTADOS y DISCUSIN

La medida de la absorbancia se lleva a cabo con la ayuda de un espectrofotmetro, que

en esencia consta de un monocromador (prisma o red de difraccin) que controla la longitud
de onda de la radiacin que se hace incidir sobre la muestra. La radiacin no absorbida se
detecta y mide convenientemente. La absorbancia de la muestra se compara con la de una
referencia que consta estrictamente de disolvente. (3)

La ley de Beer-Lambert predice que la Absorbancia determinada para un analito es

proporcional a la concentracin del mismo, es decir que cuanto ms concentrado se
encuentre un analito, mayor ser la lectura de absorbancia.

En este prctico es muy importante colorear las soluciones con las que se va trabajar para
la deteccin de fosfatos ya que, al formar complejos coloreados, estos presentan espectros
de absorcin caractersticos y la seleccin cuidadosa de las longitudes de onda mxima
permite analizar los componentes de una mezcla de estas sustancias coloreada. Si se pasa
luz blanca a travs de una solucin coloreada, algunas longitudes de onda se absorbern
con preferencia sobre otras. Por el contrario, si la solucin no es coloreada, esta no
absorber longitudes de onda y por ende no arrojar valores de absorbancia (blanco).
La intensidad de color es proporcional a la concentracin del compuesto que se mide,
mientras que la cantidad de luz absorbida es proporcional a la intensidad del color y por lo
tanto a la concentracin. (4)

Clculos de volumen de fosfato para la preparacin de las soluciones:

1) 25 mL x 1 ppm = (Volumen de alcuota) x 20 ppm

Volumen de alcuota = 1,25 mL

2) 25 mL x 2 ppm = (Volumen de alcuota) x 20 ppm

Volumen de alcuota = 2,5 mL

3) 25 mL x 3 ppm = (Volumen de alcuota) x 20 ppm

Volumen de alcuota = 3,75 mL

4) 25 mL x 4 ppm = (Volumen de alcuota) x 20 ppm

Volumen de alcuota = 5 mL

5) 25 mL x 5 ppm = (Volumen de alcuota) x 20 ppm

Volumen de alcuota = 6,25 mL

Barrido espectral:

En un barrido espectral se busca determinar la longitud de onda mxima (donde el analito

absorbe ms luz).

El perfil de los barridos espectrales representa cmo interacta la sustancia a radiacin

electromagntica de las longitudes de onda evaluadas, siendo este perfil propio de cada
sustancia. Se utilizan para identificar sustancias incgnitas, por lo general, cuando se busca
identificar una sustancia coloreada se realiza un barrido espectral a lo largo de todo el rango
visible (5) (para este compuesto 550-750 nm). Nos permite visualizar la variacin de la
absorbancia con la longitud de onda de la radiacin electromagntica, mediante el anlisis
de los barridos podemos elegir una longitud de onda ptima de trabajo (donde el compuesto
presenta la mayor absorbancia). Dicha longitud de onda se utilizar cuando busquemos
cuantificar una sustancia o bien evaluar si cumple con la Ley de Lambert-Beer.

Por lo tanto, para elegir la longitud de onda ptima de trabajo se tendrn en cuenta los
siguientes criterios:
Se prefiere un mximo de absorbancia, dado que as se obtiene mayor
sensibilidad en las lecturas
Hay que evitar en lo posible, trabajar en regiones del espectro donde hay
cambios bruscos de absorbancia, ya que un pequeo desplazamiento en la
longitud de onda puede causar un error grande en la correspondiente lectura.

Grfico 1: Absorbancia vs Longitud de onda (nm)

Barrido para determinacin de longitudes de onda y absorcin mxima de radiacin
electromagntica:

1. Se prepara el blanco para calibrar el espectrofotmetro en 0, junto con la solucin de

concentracin 3 ppm.
2. Encender el espectrofotmetro.
3. Seleccionar la funcin SCAN.
4. Hacer click en la pestaa preparar y seleccionar los siguientes parmetros: Modo:
longitud de onda. Modo: absorbancia. Velocidad de barrido: medio.
5. Seleccionar el rango en que se har el barrido (550 a 750 nm).
6. Colocar el blanco dentro de la cubera.
7. Leer el blanco hasta que la respuesta del aparato sea 0.
8. Colocar la muestra (3 ppm) dentro de la cubeta.
9. Hacer doble click en INICIAR.

Del espectro donde se obtiene la mxima absorcin (700 nm), se selecciona la longitud de
onda a usar, y se miden las absorbancias de todas las soluciones preparadas,
posteriormente se procede a realizar una curva de calibracin de Absorbancia en funcin
de la Concentracin (ppm).

Tabla 1: Concentracin y absorbancia de las soluciones

Concentracin (ppm) Absorbancia ( = 700 nm)

Blanco 0

1 0,314

2 0,514

3 0,846

4 0,957

5 1,202

[muestra problema] 0,597

Curva de calibracin:
Una curva de calibracin representa la absorbancia (A) en funcin de la concentracin de
cada muestra. Por eso es que se prepararon soluciones de sustancias que se conoce su
concentracin y a estas se les mide la absorbancia a la longitud de onda elegida (en este
caso 700 nm).

Grfico 2: curva de calibrado (Absorbancia v/s Concentracin (ppm))

Dado que la cantidad de radiacin absorbida por la solucin se relaciona con la

concentracin del analito mediante la ley de Beer, se tiene:

A = kb * C
Y=m*x

Si esta ley resulta ser vlida para la sustancia o solucin que est siendo analizada a esas
concentraciones, la relacin se apreciar como una recta en un grfico lineal.

Para la muestra problema:

0,597 = 0,2494 * [PO4-2]

[PO4-2] = 2,398 ppm (concentracin de fosfatos en la muestra problema)

Peso molecular PO4-2 = 95 g/mol

[PO4-2] = 2,398 ppm = 2,398 mg/L x 1 g /1000 mg = 2,398 x10-3 g/L x 1 mol/95 g = 2,524 x
10-5 mol/L
5.- DISCUSIN DE RESULTADOS

El valor obtenido de concentracin de la muestra problema (2,3 ppm) tiene sentido en

relacin a la curva de calibracin ya que utilizando la absorbancia obtenida para la muestra
problema y analizando este dato con la Ley de Beer se puede ver que la concentracin de
la muestra problema cae dentro de la curva de calibrado.

Respecto a la obtencin de los datos, se utilizaron los datos de otro grupo, debido a hubo
un error en la preparacin de las muestras, en la que se utiliz la muestra problema para la
preparacin de las soluciones estndar, en otras palabras, se agreg una solucin con
concentracin de fosfatos desconocida para preparar los estndares de concentraciones
supuestamente conocidas, lo que hizo que estas muestras fueran inservibles para medir su
absorbancia.

6.- CONCLUSIONES

Se determin la concentracin de fosfatos de una muestra problema mediante la

preparacin de soluciones a distintas concentraciones conocidas y el uso de una curva de
calibrado. Se observ la utilidad de un barrido de longitudes de onda trabajando con una
misma solucin coloreada (de concentracin constante) y midiendo los valores de
absorbancias correspondientes a distintas longitudes de onda seleccionadas dentro de un
determinado rango de trabajo.

Se observ la importancia de la formacin de complejos coloreados para su uso en la

determinacin de la absorbancia en la espectrofotometra visible.

7.-BIBLIOGRAFA Y REFERENCIAS

Elements of Chemical Reaction Engineering (2 ed.). London: Prentice-Hall

Fogler.H, 1992
Gua de laboratorio. Anlisis Instrumental Espectroscpico, Muoz.D, 2017
D.A.Skoog; D.West; J.Holler; R.Crouch. Fundamentos Qumica Analtica. 9 Ed.
Mc Graw Hill, 2015.

(1)- Conceptos Bsicos. M.Sturla 2015

https://prezi.com/rjq0gthluwda/espectrofotometria-de-absorcion-de-luz-visible/

(2)- Espectrofotometra visible.

http://www.basculasbalanzas.com/instrumentos-de-medicion/espectrofotometria-
visible.html

(3)- Prctica de espectrofotometra UV-visible

http://campus.usal.es/~quimfis/apoyo/Carmen/Practicas/Espectrofotometria.PDF

(4)- Colorimetra y espectrofotometra

http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp04.pdf

(5)- Barridos Espectrales

http://virtual.ffyb.uba.ar/mod/book/view.php?id=67407&chapterid=1057