INSTRUCTIVO PARA REALIZAR ANLISIS CON CLCULO DE INDICES DE RETENCIN.

SOFTWARE: UNKNOWN ANALYSIS DE MASSHUNTER.

Este software permite realizar screening, cualificacin, clculos de ndice de retencin, creacin de
libreras, entre otros.

Lo importante antes de realizar cualquier anlisis por este software es determinar exactamente lo
que se va a buscar.

Lo primero es buscar el cono

Fig. 1. cono del software

Y la ventana que se va a mostrar es la siguiente

Fig. 2. Software Unknowns Analysis.

Seleccionar donde dice New Analysis y colocarle un nombre que se encuentre relacionado con el
anlisis el que creamos conveniente:
 Fig. 3. Creacin del archivo de anlisis.

En este caso se coloca el nombre Analisis1-1 y la extensin del archivo es .uaf. Se debe tener en
cuenta para los hispanohablantes no utilizar smbolos que no se encuentren en el idioma ingls
como tildes, , entre otros.

Luego volvemos a la pestaa File y adicionamos muestra de anlisis en Add Samples.

Fig. 4. Adicionar muestras.

Luego nos aparecer la ventana en la cual escogemos la muestra deseada, en este caso como lo
que queremos es calcular ndices de retencin entonces adicionamos una corrida con alcanos
normales.

Fig. 5. Muestra de alcanos.

Luego lo que debemos ver es lo siguiente:

Fig. 6. Cromatografa de Alcanos.

Todos los anlisis se realizan con la creacin de mtodos, para editar el mtodo actual se ingresa
como dice la figura:

Fig. 7. Editar mtodo de anlisis.

Luego en el parmetro library escogemos la librera.

Fig. 8. Escoger librera para identificar compuestos.

Y la velocidad con la que queremos realizar el anlisis:

Fig. 9. Seleccionar velocidad de anlisis.

Esta es la ventana que se muestra cuando se encuentra realizando el anlisis:

Fig. 10. Progreso del anlisis.

Cuando aparecen los compuestos en lista en la parte inferior derecha se realiza el siguiente paso
para hacer la librera de alcanos.

Fig. 11. Exportar compuestos para creacin de librera de alcanos.

Si se va a crear una nueva librera entonces se escoge la opcin Newly created library. En caso
contrario Existing library.

Fig. 12. Software Library Editor.

Luego se adiciona la columna de Retention index en la que escribiremos los ndices de retencin que
es el resultado del nmero de carbonos multiplicado por 100.

Fig. 13. Adicin de la columna RETENTION INDEX.

As debe quedar:

Fig. 14. Editar indice de retencin.

Despus se guarda el archivo de librera que quedar con extensin .mslibrary.xml.

Ahora se debe dirigir al software donde se lleva a cabo el anlisis y se busca la columna
Component RI, se adiciona y click en Analyze All.
Nota: Slo los alcanos presentes en la muestra aparecern con ndice de retencin. Para calcular el
ndice de retencin, es necesario hacer el archivo de calibracin que contiene los ndices de
retencin de los alcanos y su extensin es .rtc.

Fig. 15. Columna RI en Unknowns Analysis Software.

Para realizar el archivo de calibracin .rtc es necesario los siguientes pasos:

1- Abrir el archivo de los alcanos en el software Agilent MassHunter Quantitative Analysis y

crear un batch.

Fig. 16. Crear un Batch.

2- Ir a Method/Edit y luego en la pestaa Method Task dar click en New Method from Acquired
Scan Data.

Fig. 17. Editar mtodo.

3- Clic con el cursor sobre cada alcano y con clic derecho seleccionar la opcin Extract
spectrum.

Fig. 18. Extraer espectro.

4- Sobre el espectro de masas extrado, dar clic derecho y seleccionar Search library. Luego
de identificar el compuesto, clic en Create Compound.

Nota: En caso de no encontrar una librera, se debe adicionar una.

Fig. 19. Identificacin de espectros

Fig. 20. Adicin de compuestos al anlisis.

5- Cuando ya se han adicionado todos los alcanos, es necesario validar lo que se est
realizando, para eso en el Method Task donde dice Save/Exit y clic en Validate y yes.

Fig. 21. Validacin de mtodo.

6- En este momento se le da clic en Analyze Batch y se confirman que todos los alcanos estn
identificados en la muestra.

Fig. 22. Anlisis del Batch con el mtodo realizado.

 Fig. 23. Confirmacin de compuestos con sus tiempos de retencin.

7- Ya realizado el batch de anlisis de la inyeccin de alcanos, de vuelta en el software

Unknowns Analysis/Method/Library Search y se carga la librera recin creada por los
alcanos, luego donde dice RT calibration file/New.

Fig. 24. Creacin del archivo de calibracin a partir de la cromatografa de alcanos.

8- Luego se cargan las diferentes direcciones o Paths donde estn los archivos (Batch folder,
Batch file y Library). Para la seccin que dice Output se hace clic en Browse y se coloca el
nombre que identifique el anlisis el nombre que el usuario desee.

Fig. 25. Enlaces de anlisis para crear el archivo de calibracin.

9- Luego de creado el archivo con extensin .rtc, se carga la cromatografa a la que se le va

a hacer el anlisis y las dos o ms libreras, junto con el archivo de calibracin creado
anteriormente y aplicar a todas las muestras, dependiendo si se tienen varias muestras para
analizar.

Fig. 26. Calculo de indices de retencin con muestra.

De esta manera se realiza anlisis de una muestra con ndice de retencin calculado.

Fig. 27. Indices de retencin calculados.