CAPTULO I

INTRODUCCIN

El cultivo in vitro es una tcnica que abarca una serie de componentes que la hace

importante en la produccin de plntulas libres de plagas y enfermedades,

especialmente virus, hongos y bacterias. Por otro lado el proceso de cultivo in

vitro involucra el uso de explantes en diferente estado fisiolgico como las yemas

dormantes, las cuales requieren de reguladores de crecimiento (por ejemplo cido

giberlico) para estimular y acelerar el crecimiento de la yema.

Dentro de la produccin de plntulas in vtro lo ms importante es la

asepsia para que se consiga un buen producto final, es por eso que los laboratorios

de cultivos in vitro toman en cuenta lo que es la desinfeccin de los explantes que

utilizaran desde el momento que se colecta de las plantas madre hasta que ingresa

al laboratorio donde se realiza una serie de pruebas entre ellas la prueba de Elisa

donde al final nos dar como resultado la presencia o no de virus.

1
El producto final sern plntulas que pasaran a vivero donde empezara la fase de

aclimatacin es ah donde empieza nuestro trabajo, y determinaremos el grado de

sobrevivencia de estas plntulas en el vivero. En este caso consideramos el uso de

plntulas de papa variedad Canchan, porque la es uno de los cultivos ms

importante de la zona.

Durante el proceso de cultivo in vitro hay una estrecha conexin entre el

invernadero y el laboratorio, por ello es necesario tomar las precauciones para

evitar el ingreso de contaminantes al laboratorio.

2
 CAPTULO II

OBJETIVOS

2.1. Objetivo general

Estudiar todo lo relativo a cultivos in vitro

2.2. Objetivos especficos

Evaluar el proceso de aclimatacin de plntulas de papa (Solanum tuberosum)

provenientes de 3 laboratorios

Determinar el nmero de plantas sobrevivientes a la aclimatacin

3
 CAPTULO III

DESARROLLO DEL TEMA

3.1. Marco terico

3.1.1 Biotecnologa

El Convenio sobre la diversidad biolgica (CDB) define la biotecnologa como:

"toda aplicacin tecnolgica que utilice sistemas biolgicos y organismos vivos o

sus derivados para la creacin o modificacin de productos o procesos para usos

especficos" (Camarena et al 2012).

Tambin es definida como una tcnica que utiliza organismos vivos para

crear o adecuar productos, plantas, animales y microorganismos para diferentes

usos muy especficos. En este sentido, la biotecnologa es tan antigua como la

propia humanidad (Vallejo y Estrada, 2002).

La biotecnologa no es un reemplazo al trabajo del fitomejorador normal es un

4
complemento necesario para incrementar el rendimiento de los cultivos a travs de

las nuevas tcnicas aplicadas como cultivo de tejidos, la manipulacin y

transferencia de genes, tipificacin del DNA, seleccin asistida por marcadores

moleculares, seleccin y clonacin de plantas nos den la garanta para mejorar las

plantas otorgndoles una serie de funciones que esperamos encontrar en los

cultivos como son resistencia a plagas y enfermedades, a la sequia, para dejar de

usar productos qumicos, adems de incrementarles otros factores deseables como

valor nutritivo, mayor rendimiento. La rapidez con que se pueden mejorar las

plantas a travs de la biotecnologa es mucho mayor que cuando se aplican

mtodos tradicionales (Camarena et al 2012).

Bisang, 2009 Explicando la tabla 1 nos dice lo siguiente:

- La primera parte consiste en aislar parte del germoplasma y lograr la produccin

de plantines en cultivos in vitro libres de enfermedades, se aplica a una gran

cantidad de cultivos.

- La segunda parte es la identificacin de genes y secuencias responsables de

atributos que se busca tenga la planta como resistencia a enfermedades, salinidad

del suelo, sequias y otros. No es transgenia solo es un procedimiento de compleja

biologa que mejora los sistemas tradicionales si le sumamos el cultivo in vitro la

seleccin por cruzamiento sern en tiempos cortos.

- El tercer tema si se habla de transgenia es decir, a partir de la identificacin y el

aislamiento de uno o varios genes de otras especies, se suma a la variedad

preexistente y se obtiene una planta nueva.

5
Tabla 1

Aplicaciones de la biotecnologa a gentica vegetal

Tcnica Casos Efectos

1. -Clonacin produccin de plantines Libres de enfermedad

Homogeniza la calidad
De la materia prima
Mejorar la eficacia
reproductiva
Modifica las tcnicas
posteriores de cultivo
Estabiliza nuevas
especies

2.- Secuencia Stress hdrico Facilita los procesos de

enraizamiento natural
de genoma adems que son rpidos
Resistencia a insectos Permite test para validar
Coloracin calidad de cultivos
Madurez
Contenidos especficos protenas y otros

3.- Reduccin costos de

Modificaciones Soja, maz, canola, algodn, produccin
genticas pasturas todos resistentes a herbicidas
Maz y otros inmunes a ciertos insectos Amplia fronteras
Productivas mejora la
Arroz con incremento de protenas calidad de producto en
cuanto al contenido
nutricional
Elimina etapas
oleaginosa con grasa saturada industriales
Fuente Bisang 2009

3.1.2 Cultivos in vitro

El principio bsico del cultivo de tejidos es la aplicacin de la totipotencia celular,

esto es la capacidad de regenerar plantas a partir de clulas aisladas, no

diferenciadas a partir de rganos y tejidos vegetales. Tales clulas, cuando son

colocadas en un medio apropiado, pueden dividirse indefinidamente y hasta

6
diferenciarse, lo que propiciar la regeneracin de una parte de la planta y

posteriormente de la planta entera (Vallejo y Estrada, 2002)

La propagacin de plantas por medio de cultivos de tejidos es una tcnica

donde se utiliza fragmentos de tejidos o pequeos rganos en crecimiento y en

condiciones aspticas. Es llamado cultivos in vitro debido a que el cultivo se

encuentra dentro de un frasco de vidrio transparente. La propagacin in vitro se

denomina tambin micro propagacin debido a la obtencin y manejo de plantas

en miniaturas (Meja 1991)

3.1.2.1 Etapas del cultivo in vitro

Segn Martnez 2012 el cultivo in vitro presenta las siguientes etapas:

A Etapa 0. Seleccin de la planta madre o preparacin del material vegetal

Se selecciona a las plantas donantes de los explantes y debe considerarse lo

siguiente:

1. El tipo de rgano que servir como explante.

2. La edad ontognica o fisiolgica del explante, se dice que los rganos jvenes

son los que tienen una mejor respuesta que los obtenidos de materiales adultos.

3. La poca del ao en la que se recolecta el material.

4. El tamao de los explantes.

5. El estado sanitario general de la planta donante.

7
B Etapa 1. Establecimiento del cultivo

Los explantes escogidos sern seleccionados y el proceso de asepsia para luego

sembrarlos en el medio de cultivo. Se considera los explantes ms jvenes de la

planta porque reaccionan ms rpido y adems se le realizaran a los explantes

anlisis de sanidad.

C Etapa 2. Multiplicacin

La finalidad es aumentar la cantidad de brotes par el nuevo ciclo de multiplicacin

y pasar a una nueva etapa de produccin. Se debe evitar la formacin de callos

para evitar variacin somaclonal. En esta etapa las hormonas de crecimiento

juegan un papel primordial, existen tres vas de multiplicacin: la organognesis,

embriognesis somtica y multiplicacin por yemas, pices o meristemos

D Etapa 3. Enraizamiento

Se produce la formacin de races, este proceso puede realizarse en ex vitro o in

vitro, esta etapa es un poco difcil para las especies que tengan problemas de

formar races.

Bajo condiciones in vitro es necesario colocar los explantes en un medio

de cultivo para la diferenciacin de la raz y la parte area, por otro lado ex vitro

se realiza con un sustrato y permite el enraizamiento y la aclimatacin al mismo

tiempo. El enraizamiento se conoce como la formacin y elongacin del sistema

radical para hacer ms viable la adaptacin al ambiente externo.

8
E Etapa 4. Aclimatacin

Es el paso mas critico durante el proceso de cultivo in vitro debido a que la planta

se someter a un ambiente natural para evaluar su comportamiento, pero no al

campo sino a ambientes donde se tiene las condiciones ambientales controladas,

en esta etapa la planta puede sufrir estrs hdrico mecnico entre otros (Prez

2009).

Tambin conocida como endurecimiento, donde las plantas de cultivos in

vitro se transfiere gradualmente a un ambiente ex vitro, para el xito de la

aclimatacin se debe reducir en forma gradual la humedad para que la planta

controle la transpiracin y se adapte ms rpido a condiciones de campo (

Harmann et al, 1997).

3.1.2.2. Diferentes alternativas de propagacin de plantas a partir de cultivo

de tejidos

Segn Camarena et al 2012 son las siguientes

a) Cultivo de clulas.-

Se logra colocando las clulas bajo condiciones apropiadas de luz, temperatura y

nutrientes, los callos son transferidos a un medio liquido donde las clulas se

disgregan dando lugar al cultivo de clulas en suspensin y deben ser

resembradas peridicamente

9
b) Organognesis

La generacin de nuevas formas y estructuras a partir de explantes, donde no las

haba, se denomina morfognesis, organognesis o embriognesis Cuando un

callo es cultivado bajo condiciones adecuadas de luz, temperatura y nutrientes,

pero sobre todo cuando el cociente de citoquinina/auxina es elevado algunas

clulas inician una divisin ordenada (promeristemos) para dar lugar a un brote

que se desarrolla en un tallo

c) Embriognesis

Las clulas cultivadas in vitro dan origen a estructuras con organizacin bipolar

semejante a los embriones y se llaman embriones Somticos. Los embriones

somticos germinan desarrollndose en plntulas completas con tallo y raz y son

transferidas a tierra

d) Semillas sintticas

Los embriones somticos a partir de cierto grado de desarrolla son encapsulados

en compuestos gelificantes que les aporta nutrientes y proteccin al desecamiento

y a factores negativos biticos abitico estas semillas pueden tratarse como

semillas naturales procediendo de plntulas producidas en vivero

e) Cultivos de meristemos

El cultivo de yemas axilares y apicales son importantes por dos razones la

primera, porque siendo tejidos ya organizados presentan una gran estabilidad

10
gentica. La segunda es, que los meristemos apicales se encuentran por lo general

libres de patgenos

3.1.3 Laboratorio

Segn Garcia 2002 afirma que La asepsia es muy importante en un laboratorio de

cultivo de tejidos. El rea donde se realiza los cultivos est en una habitacin

aislada y se encuentra junto a la cmara de flujo laminar. La estructura y las

condiciones ambientales varan segn el cultivo celular que trabaja con agentes

patgenos y aquel que no los usa, en el primer caso son ms estrictos hasta debe

filtrar el aire y presenta los siguientes equipos:

A. Cabina de flujo laminar.- su funcin es mantener el rea de trabajo donde se

manipulan las clulas libre de contaminantes. Existen diferentes tipos de cabina

de flujo laminar cuya funcin es:

- proteger al operario de agentes patgenos

- proteger el cultivo de patgenos

-Proteger el medio ambiente de patgenos o contaminantes

B. Incubador de CO2.- son equipos que mantienen la temperatura y controlan

la humedad del ambiente, es importante la estabilidad porque los cultivos pueden

tolerar bajas temperaturas pero no las altas El nivel de CO2 se ajusta para

mantener equilibrio carbonato-bicarbonato del medio de cultivo.

C. Microscopios.- la fuente de iluminacin y los objetivos se encuentran en

posicin invertida respecto de los microscopios pticos convencionales. Por ello

11
se suelen llamar microscopios invertidos. El motivo por el que se usa estos

microscopios es que los frascos de cultivo tienen diferentes grosores y por lo tanto

los microscopios convencionales no tienen una distancia focal en sus objetivos

que permita la observacin.

D. Congeladores y equipo de criogenia.- Es recomendable disponer de distintos

equipos que mantienen temperaturas bajas:

Frigorficos de 4C: para mantener almacenados medios o tampones

Congeladores de -20C: para mantener suero, aditivos y enzimas

Congeladores de -80C: para mantener a largo plazo aditivos del medio de

cultivo y para substancias muy sensibles como enzimas, mitgenos, inductores,

factores de crecimiento,

Unidad de almacenamiento en nitrgeno lquido (-196C): para el

almacenamiento de lneas celulares

E. Equipo de esterilizacin y filtracin.- para garantizar la asepsia del

laboratorio se cuenta con la cmara de flujo, pero tambin se utiliza frascos y

otros materiales de vidrio y para su esterilizacin se usa autoclave

Otros sistemas son la esterilizacin por irradiacin con rayos gamma o

rayos X, la esterilizacin por gas (oxido de etileno o formaldehdo), luz

ultravioleta, calor seco, para elementos de cristal o de plstico como frascos,

tubos, pipetas, etc. Para esterilizar soluciones lquidas se suelen utilizar sistemas

de filtros de 0.22m de poro (Millipore) que no dejan pasar ni bacterias ni hongos

mayores de dicho tamao, realizndose por lo tanto una esterilizacin por

filtracin

12
F. Otros instrumentos

Balanzas

Bao termostatado

Centrfugas refrigeradas y no refrigeradas

Equipos de purificacin de agua

Micropipetas de volumen variable o de

Volumen fijo

pHmetro

Pipeteadores automticos

3.1.4 Medios de cultivos

Para cultivos in vitro una vez que se haya escogido el explanto se debe elegir un

medio de cultivo.

3.1.4.1 Componentes del medio

Mroginski, 2002 Existen muchos formulaciones de medios de cultivo que pueden

tener de 15 a 35 componentes quimicos que suministran lo siguiente:

A Carbono.- Los cultivos in vitro no son autrotofos por lo que es util agregar una

fuente de carbono, la sacarosa es la mas utilizada, pero tambien se puede usar

glucosa siendo menos efectivas la fructuosa, maltosa y galactosa.

B Nutrientes minerales.- Los medios de cultivos aportan los macro y

micronutrientes requieridos por la planta, las concentraciones altas de N se

13
suministra en forma de nitrato o amonio. Tambien contienen fosforo calcio, boro

y azufre. No debemos olvidarnos de los micronutrientes.

C Vitaminas,. Los medios de cultivo contienen una serie de vitaminas, pero en

forma global solo se necesario solo la tiamina

D Agente gelificantes.- Al medio de cultivo generalmente se le adiciona agar, el

cual bede estar puro, porque tambien se encuentra con impurezas que puede

contaminar el medio de cultivo

E Sustancias reguladoras de crecimiento (hormonas).- En algunos casos no se

utiliza hormonas por que el medio le da a la planta la facilidad de crecer, pero

cuando se utilizan hormonas esto en la mayoria de plantas las que mas utilizan son

las auxinas y las citoquininas. Las auxinas que se usan son 2,4-D, ANA, AIA, y

AIB; las citoquininas son KIN; BAP; y ZEA, el uso de las giberelinas solo se usa

para el cultivo de apices o meristemas caulinares.

F Otros compuestos.- Pueden ser fuentes de N reducido, factores de

crecimiento, carbohidratos, agua de coco, jugo de tomate, extracto de levadura,

extracto de tuberculo de papa, glicina, aminoacidos como aspargina, cisteina, L

tirosina, acidos organicos como el citrico, malico, piruvico y otros.

3.1.4.2 Propiedades fsicas

Segn Garcia 2002 estas propiedades son: ph de 7,4; osmolaridad entre 260-320

mOsm/kg; Temperatura, es fundamental para el correcto crecimiento de las

clulas e influye asimismo en el pH; Viscosidad, relacionada con la concentracin

14
de suero; Tensin superficial, que debe de mantenerse lo suficientemente baja

para evitar la formacin de espumas.

3.1.4.3 Instalaciones utilizadas en la aclimatizacin

3.1.4.3.1 Invernaderos o invernculos

Segn hurtado y Merino, 1986) Son construcciones cerradas cubiertas con

materiales tranparente dentro de las cuales se mantiene un clima artificial. Se

originaron especialmente en lugares de climas templados a fros y lo que se quiere

es que la radiacin solar pase a travs de materiales transparentes y calienten el

ambiente y las superficies dentro del invernadero. Los rayos infrarrojos no

regresan al exterior se quedan dentro del invernadero y hace que la temperatura

sea ms alta, lo que es contraproducente; es por ello que debe contar con

ventilacin controlada y cuando hace mucho frio calefaccin adicional mas la

iluminacin artificial que ayuda a controlar este microclima. El invernadero

ahorra agua, fertilizantes y mejora el control de plagas y enfermedades.

3.1.4.3.2 Sustratos

Los sustratos deben proporcionar un buen drenaje y aireacin para evitar el

desarrollo de microorganismos. Algunas mezclas de sustrato consisten de tierra de

hoja o turba mezclada en partes iguales con materiales cuya reaccin es neutra,

como son la perlita (material de origen volcnico con capacidad de absorcin de

agua y sin capacidad de intercambio) y la vermiculita (mineral de mica,

compuesto por un silicato de hierro, aluminio y magnesio hidratados; posee

15
propiedades de intercambio catinico y alta capacidad de absorcin de agua).

(Meja, 2006 citado por Ochoa, 2014)

3.1.5 Cultivo de la Papa Solanum tuberosum

3.1.5.1 Origen

El origen de la papa es entre Peru y Bolivia para la subespecie andigenum,

aunque existen muchas especies silvestres en Mxico, Guatemala, Ecuador y

Chile; en este ltimo, la Isla Chiloe se considera el centro secundario de la

subespecie tuberosum (Romn y Hurtado, 2013)

3.1.5.2 Taxonoma de la papa

De acuerdo a Hawkes (2002), taxonoma del cultivo es la siguiente:

Tipo: Spermatophyta

Clase: Angiospermas

Subclase: Dicotiledonea

Orden: Tubbiflorae

Familia: Solanaceae

Gnero: Solanum

Especie: S. tuberosum

Subespecies: andigenum,

tuberosum

16
3.1.5.3 Morfologa de la papa

Segn Inoztroza (2009) citado por Zepeda y Menjivar, 2016 dice que la papa es

una planta herbcea. Puede medir desde los 40 cm hasta 80cm

A. Races: Cuando la papa crecen a partir de semilla la raz es axonomorfa y es

delicada con ramificaciones laterales, pero si es de tubrculos primero forman

races adventicias en la base de cada brote y al final encima de los nudos en la

parte subterrnea de cada tallo.

B Tallos: Consta de varios tallos, estolones y tubrculos, las plantas de semilla

solo tiene un tallo, pero las que proviene de tubrculos tiene varios tallos.

C Estolones: Son tallos laterales crecen en forma horizontal bajo el suelo a partir

de las yemas de la parte subterrnea de los tallos. Los estolones forman tubrculos

mediante el crecimiento de su extremo terminal, pero sin embargo si estos

estolones no se encuentran cubiertos por tierra tienden a formar follaje

D Tubrculos: Constituyen los rganos de almacenamiento de la planta y son

tallos modificados. Tiene dos extremos basal que esta ligado al estoln y el

extremo apical o distal

E Brotes: Crecen de las yemas que se encuentran en los ojos del tubrculo y su

color es la caracterstica varietal de las diferentes variedades, es blanco y puede

ser en la base o el pice parcialmente o total coloreado. Cuando se exponen a la

luz se tornan verdes.

F. Hojas: Son compuestas distribuidas en el tallo de forma de espiral

G Inflorescencia: Es de forma cimosa.

17
H. Las Flores: Son bisexuales y poseen las cuatro partes esenciales de una flor:

cliz, corola, estambres y pistilo.

I Frutos: Es una baya, en general esfrico pero en algunas variedades son

esfricos o cnicos

J. Semillas: Son llamadas semillas verdaderas tiene la forma plana, ovaladas y

pequeas. Cada semilla est envuelta con una testa que protege al embrin y un

tejido de reserva que se llama. (Eguzquiza, 2000)

3.1.5.4 Requerimientos edafoclimaticos

Segn Romn y Hurtado, 2013 la papa requiere de lo siguiente

a Temperatura.- Requiere temperaturas de 15 a 20C para su tuberizacin, y

crecimiento pero tambin requiere temperaturas bajas de 10C, menos de estas

temperaturas afecta el crecimiento y la formacin de tubrculos.

b Horas luz.- Requiere periodos de 8 a 12 horas luz, la luminosidad que reciba

las plantas ayuda a la funcin del cloroplasto incrementndose la fotosntesis.

c Precipitacin.- La cantidad requerida por la papa es de 600mm que se

distribuye en todo su ciclo vegetativo, requiriendo ms cantidad de agua en la

etapa de germinacin y crecimiento de los tubrculos.

d Viento.- Debe ser moderado porque las plantas de papa no soportan vientos de

20 km/hora causando daos en su rendimiento.

f Altitud.- La altitud ideal para la produccin de papa es de 1500 a 2500 msnm ,

pero puede cultivarse a menor altitud hasta 500 msnm

18
g Suelos.- Los mejores suelos son los francos, franco arenoso, franco-limoso, y

franco arcilloso de textura liviana y buen drenaje, que permita el crecimiento de

los tubrculos y faciliten la cosecha

3.1.5.5 Variedad Canchan-INIA

Segn Usucachi, 2011 tiene las siguientes caractersticas:

- Se encuentra en la costa y la sierra

- Porte mediano, flores de color rojo violceas, son escasas y dan pocos frutos

- Tubrculos redondeados. Piel roja clara, ojos superficiales a semiprofundos;

pulpa blanca cremosa, brotes rojizos

- Tolerante a la rancha y un periodo vegetativo de 4-5 meses, de buena calidad

comercial

3.2. Caso Prctico

El presente trabajo se realizo en el distrito de Ayacucho en la zona denominada

Canan bajo donde se encuentra ubicado el invernadero sitio de nuestro trabajo.

Hemos trabajado con tres laboratorios, los cuales son los siguientes:

- laboratorio INIA Ayacucho siendo considerado tratamiento 1

- Laboratorio INIA Huancayo tratamiento 2

-Laboratorio INIA Cusco tratamiento 3

19
Nuestro trabajo est orientado en la etapa final de cultivo in vitro y esta es la

aclimatacin de plntulas de papa en invernadero, el cual est ubicado en la

Estacin experimental Agraria Canan en Ayacucho que se encuentra en el

distrito de Ayacucho, provincia de Huamanga, presenta las siguientes

caractersticas:

- Tiene una altitud de 2 730 msnm

- Est ubicado en las siguientes coordenadas:

Latitud Sur: 1309'48' y

Longitud Oeste: 7412'20''

- tiene una precipitacin entre 250 500 mm

Nuestro objetivo es llevar a cabo esta aclimatacin con las plntulas obtenidas de

los laboratorios y llevarlos al invernadero ya mencionado, evaluarlos cada 3 das

para ver la aclimatacin de estas plntulas.

3.2.1 Metodologa

Desinfectamos el vivero para que no se contamine nuestro material de trabajo y lo

acondicionamos. Aparte preparamos el sustrato a utilizar el cual tambin debe ser

desinfectado y preparamos las camas donde trasplantaremos nuestras plntulas.

Las plntulas deben ser tradas 3 a 5 das antes del trasplante, se recomienda pedir

a los laboratorios que les hagan la prueba de Elisa para determinar la condicin de

planta libre de virus, si en esta prueba alguna plntula se le encuentre virus debe

ser eliminada inmediatamente. Las plntulas deben tener un tamao de 4 a 8 cm y

un buen sistema radicular que le ayudara a pasar esta etapa. Las bandejas donde se

20
encuentran las plntulas se debern colocar dentro de un tnel cubierto con una

malla que solo deje pasar el 60% de luz para que el proceso sea gradual por 3 a 5

das.

Pasados los 3 a 5 das se procede a sacarlos de los frascos y sin daar las

races se siembran en las enterrando el 40% de la planta en el sustrato

manteniendo la cobertura por un lapso de 10 das, es importante el riego no le

debe faltar agua se aplica cuando se necesite por eso se recomienda el uso de

riego por goteo. Despus de los 10 das se debe quitar la cobertura y se les deja a

exposicin total de la luz (Larios et al, 2013). Se evalu el porcentaje de

supervivencia y el desarrollo de las plantas.

3.3. Representacin de Resultados

3.3.1 Evaluacin de la aclimatacin de plntulas de papa

La aclimatacin se realiz en invernadero, utilizando un sustrato estril con buena

retencin de agua, aireacin y permeabilidad, se recomienda el uso de sustrato

comercial de turba ms vermiculita o perlita, adems de estar fumigados con

fungicidas para evitar pudriciones a nivel radicular, despus de ser plantados y

bajo cubierta se observo lo siguiente:

21
- Luego del trasplante y puesto bajo cubierta a los tres das hicimos la primera

evaluacin, lo primero que notamos es que las plntulas sufran de stress hdrico,

a consecuencia de que las races con las que salieron del laboratorio son dbiles y

no presentan pelos radicales, van a desaparecer, las nuevas races que van a salir

son las que al final van a absorber el agua, se trata de mantener una humedad

constante que va a ayudar a mantener las plnulas turgentes.

- En la segunda Evaluacin a los 6 das vemos que las plntulas se van

recuperando, las plantas van siendo auttrofas es decir que se van alimentando a si

mismas, ya que sabemos que cuando estn en laboratorio no se alimentan por si

mismos ya que los medio de cultivos les dan lo que necesitan, algunas plantas

mueren, se debe dosificar con el riego el uso de fungicidas.

- En la tercera evaluacin a los 9 das encontramos que algunas plantas mueren

por stress hdrico o mucha agua, tenemos que regular el riego para que no vuelva

a suceder.

- En la cuarta evaluacin a los 12 das, ya se quit la cubierta ahora las plantas se

encuentran con mas luz, algunas plantas se secaron pero no por mucha humedad

solo que no soportaron la luz, esto se debe que las hojas con las que salen de

laboratorio, por la cantidad de luz con la que estuvieron hacen las hojas con

cutculas muy delgadas y se deshidratan mas fcilmente al no poder controlar la

transpiracin, por eso la cubierta de 60% de luz era para que las plantas se

adecuen a la nueva luz, algunas no pasaron, pero la mayora se adapta bien a este

cambio, porque sus hojas ya estn fotosintetizando y ya controlan su transpiracin

estomtica.

22
- En las ltimas evaluaciones las plntulas van mantenindose mas fuertes es decir

ya se estn aclimatando mejor, hay plantas muertas por problemas de agua, la falta

o el exceso de riego pero no son muy altas, quedando la mayora de las plntulas

de papa ya instaladas a las condiciones del invernadero.

Foto 1 Plntulas listas para la etapa de aclimatamiento

Foto 2 Plntulas listas para salir a invernadero

23
 Foto 3 Plntulas en plena aclimatacin sin cobertura

Foto 4 Las camas para la aclimatacin de plntulas de papa

24
 Foto 5 Cultivar canchan

Foto 6 Cama de aclimatacin cultivar canchan

25
Foto 7 Plntulas aclimatadas

Foto 8 Plntulas aclimatadas

26
 Foto 9 Plntulas en produccin

Foto 10 Mostrando los tubrculos

27
 Foto 11 Invernadero de aclimatacin de plntulas de papa

3.3.3. Plntulas sobrevivientes a la aclimatacin

Tabla 2

Porcentaje de plntulas sobrevivientes a la aclimatacin

FT
F. de V. GL SC CM FC Sig.
0,05 0,01
Tratamiento 2 9,8667 4,9333 0,3819 3,35 5,49 NS
Error
Experimental 27 348,8000 12,9185
Total 29 358,6667
Cv 0,001%

Fuente elaboracin propia

El anlisis de varianza de nmero de plntulas sobrevivientes a la aclimatacin

nos indica que no existen diferencias estadsticas, el campo experimental fue

homogneo, la respuesta de los tratamientos fue no significativa es decir tuvieron

28
efectos similares sobre la variable en estudio El coeficiente de variabilidad de

0,001% lo cual es un indicador de confiabilidad de los resultados, por lo tanto

hubo precisin en el experimento. Esto nos indica que las plntulas provenientes

de los diferentes laboratorios presentan la misma calidad y garanta.

En la figura 1 Observamos los promedios de porcentaje de aclimatacin de

plntulas de papa a los 30 das, donde las plntulas obtenidas del T3 presenta un

promedio de 96,4, seguida del T2 con 95,5 y por ltimo el T1 con 95

Figura 1 Porcentaje de sobrevivencia de plntulas aclimatadas a los 30 das

Fuente elaboracin propia

29
 CAPTULO IV

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

4.1. Conclusiones

PRIMERO En cultivos in vitro, la produccin de plntulas de papa en

el laboratorio nos garantiza el incremento en la

productividad, mantenimiento de las caractersticas de las

variedades.

SEGUNDO Las plntulas se adaptaron exitosamente a las condiciones

del invernadero.

TERCERO La sobrevivencia a la aclimatacin de las plntulas de papa

obtenidas de laboratorios han sido optimas puesto que han

sobrevivo un 95% de ellas.

30
4.2. Recomendaciones

PRIMERO Considerar hacer cultivos in vitro de otros cultivos

importantes de la zona

SEGUNDO Hacer ms trabajos de aclimatamiento de otras variedades

de papa, especialmente las nativas.

TERCERO Hacer nuevos trabajos de aclimatacin, pero utilizando otros

tipos de sustrato.

31
 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Bisang, R, Campi, M, Cesa V (2009) Biotecnologa y desarrollo Comisin

Econmica para Amrica Latina y el Caribe (CEPAL)

Camarena F, Chhura J, Blas R (2012) Mejoramiento gentico y

Biotecnologa de plantas AGROBANCO, Universidad Agraria La Molina

Espinoza et, al., (1993). Tcnicas de multiplicacin de papa. ed. Manual de

Capacitacin. Lima- Per.

Egsquiza,B (2000) La papa, produccin, transformacin y comercializacin

Lima

Garcia JM, (2002) Introduccin al cultivo de tejidos

http://histolii.ugr.es/jmgarcia/cultivos/cultivos.pdf

Hartmann,,H. Kester, F. Davies, R. (1997) Plant propagation principles and

practices 6 edicion. Prentice Hall Inc

Hawkes, J.G (2002) The potato: evolution, biodiversity and genetic resources.

Belhaven Press. London

Hurtado y Merino. (1986). Cultivo de tejidos vegetales. 2da ed. Revisada.

Lima, Centro Internacional de la Papa

32
Larios, R. Santos, J. Pineda,L. Hernandez, S. (2013) Manual de produccin de

semilla de papa mediante tcnicas de multiplicacin asexual

Martnez P (2014) Respuestas embriognicas en papa (Solanum tuberosum

L.) Empleando diferentes explantes cultivados in vitro., tesis realizada

para obtener el grado de maestro en biotecnologa vegetal

Meja, A. (1991) Cultivo in vitro de plantas de papa Lima

Mroginski L.A. Roca W.M (2002) Establecimiento de cultivos de tejidos

vegetales in vitro Unidad de investigacin en Biotecnologa Centro

internacional de agricultura tropical

Ochoa, F, (2014) Efecto de tres dosis de cido indolbutrico (aib) y tres

concentraciones de sales, sobre el enraizamiento crecimiento y

rendimiento de micro-esquejes de dos variedades de papa (solanum

tuberosum l.) en condiciones de invernadero. Tesis realizada para obtener

el ttulo de Ing., agrnomo

Prez, E. (2009). Introduccin al Cultivo de Tejidos Vegetales. Editorial

Universidad Autnoma de Aguascalientes. Aguascalientes, Mxico. 185 p.

Romn M Hurtado G (2013) Gua tcnica cultivo de la papa Centro Nacional de

Tecnologa Agropecuaria y forestal

33
 https://drive.google.com/file/d/0B6bGYMpRwvFyc3RPcW9FWlBOaDA/

view

Usucachi, P. (2011) Proceso de obtencin de Bioetanol a partir de la papa

peruana Tesis para obtener el ttulo de Ing. Qumico Lima-Per

Vallejo F, Estrada E (2002) Mejoramiento gentico de plantas Publicacin

Financiada por DIPAL Universidad Nacional de Colombia - Sede Palmira

Zepeda, M. Menjivar W (2016) Evaluacin de tres variedades de papa

(solanum tuberosum l.) multiplicadas in vitro en dos volmenes de

sustrato para la produccin de mini tubrculos bajo invernadero. Tesis

realizada para obtener el ttulo profesional

34