Captulo 6 - SOBREPRODUCCIN DE METABOLITOS DE

MICROORGANISMOS INDUSTRIALES
La complejidad de las actividades que se desarrollan dentro de una clula se mencion
al comienzo del captulo 5 cuando discutimos el metabolismo de una clula de levadura
introducida en una solucin acuosa de glucosa y sales de amonio. La clula de levadura
debe permitir primero la entrada en s de las sales de glucosa y amonio. Bajo
condiciones ambientales adecuadas como el pH y la temperatura, crecer brotando en
aproximadamente media hora. Para que estos brotes ocurran, cientos de actividades
habrn transcurrido dentro de la clula. Se habrn sintetizado nuevas protenas a
incorporar en enzimas y otras estructuras; Los cidos nucleicos para los cromosomas y
los carbohidratos para las paredes celulares han sido todos sintetizados. Cientos de
diferentes enzimas han participado en estas actividades sintticas. El organismo debe
sintetizar cada uno de los compuestos en el momento y en las cantidades apropiadas. Si
a lo largo de las sales de amonio laterales, se suministraran aminocidos, las clulas de
levadura dejaran de absorber la sal de amonio y en su lugar utilizaran el sustrato
'confeccionado' suministrado. Algunas levaduras pueden utilizar almidn. Si nuestra
levadura perteneciera a este grupo y se le proporcionara nada ms que almidn y sales
de amonio, secretara enzimas extracelulares para descomponer el almidn en azcares.
Estos azcares seran entonces absorbidos y se usaran con sales de amonio, para las
actividades sintticas descritas anteriormente. Es evidente que, mientras que el aparato
gentico del organismo determina en trminos generales las potencialidades sintticas
totales del organismo, lo que realmente se sintetiza depende de lo que est disponible en
el medio ambiente. Lo que es ms importante, el organismo no slo es capaz de
"decidir" cundo fabricar y secretar ciertas enzimas para permitirle utilizar materiales en
el medio ambiente, sino que puede decidir detener la sntesis de ciertos compuestos si se
les suministran. Estos mecanismos de deteccin para el encendido y apagado de los
procesos sintticos permiten al organismo evitar la sobreproduccin de cualquier
compuesto particular. Si no tuviera estos mecanismos reguladores, desperdiciara
energa y recursos (que por lo general son escasos en entornos naturales) en la
fabricacin de materiales que no requera.

Un cuerpo eficiente o "riguroso" que no desperdicia sus recursos en la produccin de

materiales que no requiere sobrevivir bien en ambientes naturales donde la
competencia es intensa. Sin embargo, un organismo de este tipo que sobrevivi bien en
la naturaleza no sera de gran utilidad como organismo industrial. El microbilogo o
industrial biotecnolgica prefiere, y de hecho busca, el organismo intil, ineficiente y
relajado cuyos mecanismos reguladores son tan pobres que sobreproducir el metabolito
particular buscado. El conocimiento de estos mecanismos reguladores y rutas
biocinticas es esencial, por lo tanto, para permitir que el microbilogo industrial los
desarrolle y desorganice para que el organismo sobreproduzca los materiales deseados.
Este captulo discutir los procesos por los cuales el organismo est regulado y previene
la sobreproduccin mediante la regulacin enzimtica y el control de la permeabilidad.
A continuacin, habr una discusin de los mtodos por los cuales el microbilogo
conscientemente daa estos dos mecanismos para permitir la sobreproduccin. La
manipulacin gentica de los organismos se discutir en el prximo captulo. Los
mtodos reguladores y las formas de interrumpir los microorganismos para la
sobreproduccin de metabolitos se comprenden mucho mejor en los metabolitos
primarios que en los metabolitos secundarios. De hecho durante algn tiempo se pens
que los metabolitos secundarios no necesitaban ser regulados ya que los
microorganismos no tenan necesidad aparente de ellos. En la actualidad se entiende
mejor y ahora se sabe que tambin estn regulados. En la discusin subsiguiente, los
metabolitos primarios sern considerados primero. Slo se darn algunos ejemplos con
respecto a los mecanismos reguladores de los metabolitos primarios. Los libros de texto
sobre fisiologa microbiana se pueden consultar para ms detalles.

6.1 MECANISMOS QUE PERMITEN MICROORGANISMOS PARA

EVITAR LA SOBREPRODUCCIN DE LOS PRODUCTOS
METABLICOS PRIMARIOS A TRAVS DE LA REGLAMENTACIN
ENZIMTICA

Algunos de los mecanismos reguladores que permiten a los organismos evita la

sobreproduccin se Cuadro 6.1. Cada uno de ellos ser discutido brevemente.

Tabla 6.1 Mecanismos reguladores en microorganismos

1. Substrato de induccin
2. Reglamento catablico
2,1 Represin
2.2 Inhibicin
3. Regeneracin Reglamento
3.1 La represin
3.2 Inhibicin
3.3 Modificaciones utilizados en vas ramificados
3.3.1 concertada regulacin (multivalente) de realimentacin
3.3.2 inhibicin por retroalimentacin cooperativa de regulacin
3.3.3 retroalimentacin acumulativa
3.3.4 Regulacin compensatoria de la regeneracin
3.3.5 Regulacin secuencial de la regeneracin
3.3.6 Regulacin de la regeneracin de la isoenzima
4. Aminocido Regulacin de la sntesis del ARN
5. Regulacin de la carga de la energa
6. Control de la permeabilidad
6.1.1 Induccin de sustrato
Algunas enzimas son producidas por microorganismos slo cuando el sustrato sobre el
que actan est disponible en el medio. Tales enzimas se conocen como enzimas
inducibles. Los anlogos del sustrato pueden actuar como inductores. Cuando un
inductor est presente en el medio, a veces puede ser sintetizado un cierto nmero de
enzimas inducibles diferentes por el organismo. Esto ocurre cuando la va para el
metabolismo del compuesto se basa en la induccin secuencial. En esta situacin, el
organismo es inducido a producir una enzima por la presencia de un sustrato. El
producto intermedio resultante de la accin de esta enzima sobre el sustrato induce la
produccin de otra enzima y as sucesivamente hasta que se logra el metabolismo. El
otro grupo de enzimas se produce con o sin el sustrato sobre el que actan. Estas
enzimas son conocidas como constitutivas. La induccin enzimtica permite que el
organismo responda rpidamente, a veces en segundos, a la presencia de un sustrato
adecuado, de modo que no se fabriquen enzimas no deseadas. Bases moleculares para la
induccin enzimtica: El mecanismo molecular para la respuesta rpida de un
organismo a la presencia de un inductor en el medio se refiere a la sntesis de protenas
ya que las enzimas son de naturaleza proteica. Existen dos modelos para explicar en una
base molecular la expresin de genes en la sntesis de protenas: uno es un control
negativo y el otro positivo. El control negativo de Jacob y Monod publicado por primera
vez en 1961 es el ms conocido y ms ampliamente aceptado de los dos y ser descrito
en primer lugar.

6.1.1.1 El modelo de Jacob-Monod del control (negativo) de la sntesis de protenas

En este esquema (figura 6.1) la sntesis de polipptidos y, por lo tanto, de las

enzimas, la protena est regulada por un grupo de genes conocido como opern
y que ocupa una seccin de El ADN cromosmico. Cada opern controla la
sntesis de una protena particular. Un opern incluye un gen regulador (R) que
codifica una protena represora. El represor puede unirse al gen operador (O) que
controla la actividad de los genes estructurales vecinos (S). La produccin de las
enzimas que catalizan la transcripcin del mensaje sobre el ADN en ARNm (a
saber, ARN polimerasa) est controlada por el gen promotor (P). Si la protena
represora se combina con el gen operador (O), entonces se bloquea el
movimiento de la ARN polimerasa y no se puede hacer ARN complementario al
ADN en los genes estructurales (S). En consecuencia, no se producirn
polipptidos ni enzimas. En ausencia de la unin del represor al gen operador, la
ARN polimerasa del promotor puede moverse hacia, y transcribir los genes
estructurales, S. Se hacen enzimas inducibles cuando se aade un inductor. Los
inductores inactivan o eliminan la protena represora dejando as el camino libre
para la sntesis de protenas. Las enzimas constitutivas se producen cuando el
gen regulador (R) no funciona, produce un represor inactivo, o produce un
represor al que el operador no puede unirse. A menudo, ms de un gen
estructural puede ser controlado por un operador dado. Las mutaciones pueden
ocurrir en los genes regulador (R) y operador (O) alterando as la naturaleza del
represor o haciendo imposible que un represor existente se una al operador. Tal
mutacin es llamada constitutiva y elimina la necesidad de un inductor. Los
genes estructurales de las enzimas inducibles suelen ser reprimidos debido a la
 Figura. 6.1 Diagrama que ilustra el control negativo de la sntesis de protenas
segn el modelo de Jacob y Monod

fijacin del represor al operador. Durante la induccin el represor ya no es un obstculo,

por lo tanto la induccin tambin se conoce como de-represin. En el modelo de Jacob y
Monod la expresin gnica slo puede ocurrir cuando el gen del operador est libre. (Es
decir, en ausencia de la unin de la protena represora el gen operador O. Por esta razn
se dice que el control es negativo.

6.1.1.2 Control positivo de la sntesis de protenas

El control positivo de la sntesis proteica ha sido menos estudiado pero se ha establecido

en al menos un sistema, a saber, el opern ara, responsable de la utilizacin de L-
arabinosa en E. coli. En este sistema, el producto de un gen (ara C) es una protena que
se combina con el inductor arabinosa para formar una molcula activadora que a su vez
inicia la accin en el opern. En el esquema como se muestra en la Fig. 6.2, la protena
'C' se combina con arabinosa para producir un complejo de protena arabinosa - 'C' que
se une a la protena
Promotor P e inicia la sntesis de las diversas enzimas isomerasa, quinasa. Epimerasa)
que convierten la L-arabinosa en D-xilulosa-5-fosfato, una forma en la que puede
utilizarse en la va de la Pentosa Fosfato (Captulo 5). El control positivo de la sntesis
de protenas tambin funciona durante la represin cataboltica (vase ms adelante).

6.1.2 Regulacin de catabolitos

La presencia de compuestos de carbono distintos de los inductores tambin puede tener

efectos importantes sobre la sntesis de protenas. Si se dispone de dos fuentes de
carbono para un organismo, el organismo utilizar el que soporta el crecimiento ms
rpidamente, durante el cual las enzimas necesarias para la utilizacin de la fuente de
carbono menos disponible se reprimen y, por lo tanto, no se sintetizarn. Como se
observ por primera vez cuando se suministr glucosa y lactosa a E. coli, a menudo se
la denomina "efecto glucosa", ya que la glucosa es la ms disponible de los dos azcares
y la utilizacin de la lactosa se suprime mientras la glucosa est disponible. Pronto se
supo que el efecto no era directamente un efecto de glucosa sino que se deba a algn
catabolito. Por consiguiente, el trmino represin catablica fue adoptado como ms
apropiado. Hay que tener en cuenta que otras fuentes de carbono pueden causar
represin (ver ms adelante) y que a veces es la glucosa la que se reprime. Se ha
encontrado que el catabolito activo implicado en la represin catablica es un
nucletido cclico 3'5'-adenosina monofosfato (cAMP), (figura 6.3). En general, menos
C-AMP se acumula en la clula durante el crecimiento de compuestos de carbono que
apoyan el rpido crecimiento del organismo, viceversa. Durante el crecimiento rpido
que se produce en la glucosa, la concentracin intracelular de AMP cclico es baja. C-
AMP estimula la sntesis de un gran nmero de enzimas y en necesario para la sntesis
del mRNA para todas las enzimas inducibles en E. coli. Cuando es baja como resultado
del crecimiento en una fuente favorable, las enzimas que necesitan ser inducidas para la
utilizacin del sustrato menos disponible no se sintetizan. A diferencia del control
negativo de Jacob y Monod, c-Amp ejerce un control positivo. Otro modelo explica la
accin especfica en la represin catablica de la glucosa. En este modelo una
concentracin aumentada de c-AMP es una seal para el hambre de energa. Cuando se
da una seal de este tipo, c-Amp se une a una protena intracelular, la protena del
receptor c-AMP (PCR) para la cual tiene alta afinidad. La unin de este complejo al
sitio promotor de un opern estimula la iniciacin de la transcripcin del opern por
ARN polimerasa (figura 6.3). La presencia de glucosa o un derivado de glucosa inhibe
la adenilato ciclasa la enzima que convierte ATP en c-AMP. La transcripcin por
operones susceptibles se inhibe como resultado. En resumen, por lo tanto, la represin
de la catabolita se invierte por c-AMP. En tiempos recientes, por ejemplo, se ha
demostrado que c-AMP y CRP no son los nicos mediadores de la represin catablica.
Se ha sugerido que mientras que la catabolica represin en entero bacterias al menos es
ejercida por el catablico (s) de una fuente de glucosa de uso rpido que se regula de
una doble manera: control positivo por c-AMP y un control negativo por Un factor de
modulacin de catabolitos (CMF) que puede interferir con el funcionamiento de
operadores sensitivo a la represin catablica. En Bacilos c-AMP no se ha observado,
pero probablemente est implicado un anlogo de c-AMP.

6.1.3 Reglamento de retroalimentacin

Regeneracin o control de las regulaciones del producto final ejercido por el producto
final de una va metablica, de ah su nombre. Las regulaciones de retroalimentacin
son importantes en el control de las enzimas anablicas o biosintticas, mientras que las
enzimas implicadas en el catabolismo se controlan generalmente por induccin y
regulacin de catabolitos. Existen dos tipos principales de regulacin de
retroalimentacin: la inhibicin de retroalimentacin y la represin de
retroalimentacin. Ambos ayudan a ajustar la tasa de produccin de los productos
finales de la va a la velocidad a la que se sintetizan las macromolculas (vase la figura
6.4).

6.1.3.1 Inhibicin de la retroalimentacin

En la inhibicin de la retroalimentacin, el producto final de la va metablica inhibe la

accin de las enzimas anteriores (normalmente la primera) de dicha secuencia. El
inhibidor y el sustrato no necesitan parecerse unos a otros, por lo tanto la inhibicin se
denomina a menudo alostrica en contraste con la inhibicin isosttica en la que el
inhibidor y el sustrato tienen la misma conformacin molecular. La inhibicin de la
reaccin puede explicarse a nivel enzimtico por la estructura de la molcula
enzimtica. Tales enzimas tienen dos tipos de subunidades proteicas. El sitio de unin
en la subunidad se une al sustrato mientras que el sitio en la otra subunidad se une al
inhibidor de retroalimentacin. Cuando el inhibidor se une a la enzima se cambia la
forma de las enzimas y por esta razn, ya no es capaz de unirse al sustrato. La situacin
se conoce como el efecto alostrico.

6.1.3.2 Reaccin de retroalimentacin

Mientras que la inhibicin de retroalimentacin da como resultado la reduccin de la

actividad de una enzima ya sintetizada, la represin de retroalimentacin se ocupa de
una reduccin en la velocidad de sntesis de las enzimas. En las enzimas que se ven
afectadas por la represin de retroalimentacin se dice que el gen regulador (R) produce
un aporepresor proteico que es inactivo hasta que est unido al corepresor, que es el
producto final de la va biosinttica. La protena represora activada entonces interacta
con el gen operador (O) y evita la transcripcin de los genes estructurales (S) sobre el
mRNA. Un derivado del producto final tambin puede producir retroalimentacin. Es
particularmente activo para detener la produccin excesiva de vitaminas, que se
requieren slo en pequeas cantidades (vase la figura 6.1). Mientras que la inhibicin
de retroalimentacin acta rpidamente, a veces en cuestin de segundos, para prevenir
el desperdicio de carbono y energa en la fabricacin de un catabolito ya disponible, la
represin de retroalimentacin acta ms lentamente tanto en su introduccin como en
su eliminacin. Se requieren aproximadamente dos generaciones para que la actividad
especfica de las enzimas reprimidas se eleve a su nivel mximo cuando se elimina el
metabolito de represin; Se requieren aproximadamente el mismo nmero de
generaciones para que la enzima sea reprimida cuando se introduce un metabolito
competitivo.

6.1.3.3 Regulacin en la va ramificada

En una va ramificada que conduzca a dos o ms productos finales, surgirn dificultades

para el organismo si uno de ellos inhibe la sntesis de la otra. Por esta razn, se han
desarrollado varios patrones de inhibicin de retroalimentacin para vas ramificadas,
de las cuales slo se discutirn seis. Cada tipo de aplicable a la inhibicin de
retroalimentacin oa la represin de realimentacin Las descripciones a continuacin se
refieren a la Fig. 6.4

(i) Regulacin de retroalimentacin concertada o multivalente: Los

productos finales individuales F y H tienen poco o ningn efecto
negativo, en la primera enzima, E1, pero juntos son potentes inhibidores.
Se produce en Salmonella en la secuencia ramificada que conduce a
valina, leucina, isoleucina y cido pantotnico

(Ii) Regulacin cooperativa de retroalimentacin: En este caso, los productos finales

F y H inhiben individualmente dbilmente a la enzima primaria, E1, pero juntos actan
sinrgicamente, ejerciendo una inhibicin que excede la suma de sus actividades
individuales.

(Iii) Regulacin de realimentacin acumulativa: En este sistema, un producto final,

por ejemplo (H), inhibe la enzima primaria E1 hasta un grado que no depende de otros
inhibidores. Un segundo inhibidor aumenta adicionalmente la inhibicin total pero no
sinrgicamente. La inhibicin completa ocurre slo cuando todos los productos (E, G, H
en la Fig. 6.4) estn presentes.

(Iv) Antagonismo compensatorio de la regulacin de retroalimentacin: Este

sistema opera donde uno de los productos finales, F, es un intermedio en otra va J, K, F
(Fig. 6.4). Con el fin de evitar que el otro producto final, H, de la va original inhiba la
Enzima primaria E1 y, finalmente, provoque la acumulacin de H, el intermedio en la
segunda va J, K es capaz de impedir su propia acumulacin disminuyendo El efecto
inhibitorio de H sobre la enzima primaria E1.
(V) Regulacin de retroalimentacin secuencial: Aqu los productos finales inhiben
las enzimas al comienzo de la bifurcacin de las vas. Esta inhibicin causa la
acumulacin del intermedio justo antes de la bifurcacin. Es la acumulacin de este
intermedio que inhibe la enzima primaria de la va.

(Vi) Enzimas mltiples (isoenzimas) con efectores reguladores especficos: Se

producen varias enzimas primarias, cada una de las cuales cataboliza la misma reaccin
de A a B pero est controlada por un producto final diferente. De este modo, si un
producto final inhibe una enzima primaria, los otros productos finales pueden formarse
todava mediante la mediacin de una de las enzimas primarias restantes.

6.1.4 Regulacin de aminocidos de la sntesis de ARN

Tanto la sntesis de protenas como la sntesis de ARN se detienen cuando un

aminocido que requiere un mutante agota el aminocido que se le suministra en el
medio. De esta manera la clula evita la sobreproduccin de ARN no deseado. Tales
cepas econmicas son 'estrictas'. Ciertas cepas mutantes estn sin embargo 'relajadas' y
continan produciendo ARN en ausencia del aminocido requerido. La interrupcin de
la sntesis de ARN en cepas rigurosas se debe a la produccin del tetrafosfato de
guanosina de nucletidos (PpGpp) y guanosina pentaphosfato (ppGpp) cuando el
aminocido suministrado se convierte en limitante. La cantidad de ppGpp en la clula es
inversamente proporcional a la cantidad de ARN y la tasa de crecimiento. Las clulas
relajadas carecen de las enzimas necesarias para producir ppGpp de guanosina difosfato
y ppGpp de guanosina trifosfato.

6.1.5 Regulacin de la carga de energa

La clula tambin puede regular la produccin por la cantidad de energa que hace
disponible para cualquier reaccin en particular. Los compuestos de alta energa de la
clula, adenosina trifosfato (ATP), adenosina difosfato (ADP) y adenosina monofosfato
(AMP) se producen durante el catabolismo. La cantidad de energa alta en una clula
est dada por la carga de adenilato o carga de energa. Esto mide el grado en que los
sistemas ATP-ADP-AMP de la clula contienen enlaces fosfato de alta energa, y est
dado por la frmula.

Usando esta frmula, la carga para una clula cae entre 0 y 1.0 por un sistema que se
asemeja a la regulacin de la realimentacin, la energa se niega las reacciones que son
energa que renden y shunted a sas que la requieren. Por lo tanto, en el punto de
ramificacin en el metabolismo de carbohidratos, el fosfoenolpiruvato es desfosforilado
para dar piruvato o carboxilado para dar oxaloceta- to. Una alta carga de adenilato
inhibe la desfosforilacin y conduce as a una disminucin de la sntesis de ATP. Por el
contrario, una carga de alta energa no afecta a la carboylation del oxoloacetato. Puede
incluso aumentarlo debido a la mayor disponibilidad de energa.
6.1.6 Control de Permeabilidad

Mientras que el control metablico evita la sobreproduccin de macromolculas

esenciales, el control de permeabilidad permite a los microorganismos retener estas
molculas dentro de la clula y permitir selectivamente la entrada de algunas molculas
al medio ambiente. Este control se ejerce en la membrana celular. Una molcula de
soluto pasa a travs de una membrana de lpido-protena slo si hay fuerza motriz
actuando sobre ella, y existen algunos medios para que la molcula pase a travs de la
membrana. Existen varios medios para el transporte de solutos a travs de membranas,
los cuales pueden dividirse en dos: (a) difusin pasiva, (b) transporte activo a travs de
un mecanismo portador o de transporte.

6.1.6.1 Transporte pasivo

La fuerza motriz en este tipo de transporte es el gradiente de concentracin en el caso de

los no electrolitos o, en el caso de los iones, la diferencia de carga elctrica a travs de
la membrana entre el interior de la celda y el exterior. Las levaduras absorben el azcar
por este mtodo. Sin embargo, pocos compuestos fuera del agua pasan a travs de la
frontera por el transporte pasivo.

6.1.6.2 Transporte a travs de portadores especficos

La mayora de los solutos pasan a travs de la membrana a travs de algn mecanismo

portador especfico en el cual las macromolculas situadas en la membrana celular
actan como transbordadores, capturando molculas de soluto y ayudndolas a travs de
la membrana. Se conocen tres de estos mecanismos: (i) Difusin facilitada: Esta es la
ms simple de las tres, y la fuerza motriz es la diferencia en la concentracin del soluto
a travs de la frontera. El portador en la membrana simplemente ayuda a aumentar la
velocidad de paso a travs de la membrana, y no la concentracin final en la clula. (Ii)
Transporte activo: Esto ocurre cuando el material se acumula en la clula contra un
gradiente de concentracin. La energa se gasta en el transporte mediante la ayuda de
enzimas conocidas como permeasas, pero el soluto no se altera. Las permeasas actan
sobre compuestos especficos y son controladas en muchos casos por induccin o
represin para evitar desperdicios.

(Iii) Traslocacin de grupo: En este sistema el soluto se modifica qumicamente

durante el proceso de transporte, despus de lo cual se acumula en la clula. Las
molculas portadoras actan como enzimas que catalizan las reacciones de transferencia
de grupos utilizando el soluto como sustrato. La translocacin grupal puede
considerarse como consistiendo en dos actividades separadas: el proceso de entrada y el
proceso de salida. El proceso de salida aumenta en velocidad con la acumulacin de
soluto celular y es mediado por el portador, pero no es seguro si las mismas portadoras
median entrada y eflujo.

El transporte mediado por el portador es importante porque es selectivo, y tambin

porque es el paso limitante del metabolismo de las fuentes de carbono y energa
disponibles. A medida que aumenta la velocidad de acumulacin de la fuente de
carbono metabolizable puede aumentar la extensin de la represin catablica de la
sntesis enzimtica, la tasa de transporte de carbono metabolizado puede tener efectos
generalizados sobre el metabolismo de todo el organismo.

6.2 DERRAMIENDO O DESTRUCCION DE LOS MECANISMOS

REGULADORES PARA LA PRODUCCIN EN EXCESO DE METABOLITOS
PRIMARIOS

Los mecanismos ya discutidos por los cuales los microorganismos regulan su

metabolismo aseguran que no sobreproduzcan metabolitos y por lo tanto eviten
desperdicio de energa o bloques de construccin. Desde el punto de vista del
organismo, un organismo eficiente como Escherichia coli es aquel que no permite
ningn desperdicio: se conecta y desconecta sus mecanismos sintticos slo como se
requieren y no hace concesiones a la necesidad del microbilogo industrial de mantener
Su trabajo a travs de la obtencin de metabolitos en exceso de ella! El inters del
biotecnlogo, del microbilogo industrial, del ingeniero bioqumico y, de hecho, de
todo el establecimiento industrial e incluso del pblico consumidor, es ver que el
microorganismo produce los metabolitos deseables. Si el microorganismo es altamente
eficiente y econmico sobre lo que hace, entonces el enfoque adecuado es desorganizar
su armamentario para el establecimiento del orden y as hacer que se sobreproduzca. En
la seccin anterior discutimos mtodos por los cuales el organismo evita la
sobreproduccin. Vamos a discutir ahora cmo estos mtodos de control estn
desorganizados. En primer lugar se discutir la situacin relativa a los metabolitos
primarios y se examinarn los metabolitos secundarios posteriores. Los mtodos
utilizados para el trastorno del control metablico de los metabolitos primarios se
discutirn en los siguientes epgrafes: (1) Control metablico; (A) regulacin de
retroalimentacin, (b) restriccin de la actividad enzimtica; (2) Control de
permeabilidad.

6.2.1 Control metablico

6.2.1.1 Control de retroalimentacin

El control de retroalimentacin es el principal medio por el cual se evita la

sobreproduccin de aminocidos y nucletidos en microorganismos. Los ingredientes
bsicos de esta manipulacin son el conocimiento de la va de sntesis del producto
metablico y la manipulacin del organismo para producir los mutantes apropiados (los
mtodos para producir mutantes se discuten en el Captulo 7).

(I) Sobreproduccin de un intermedio en una va no ramificada: La

acumulacin de un intermedio en una va no ramificada es la ms fcil de las
diversas manipulaciones a considerar. Consideremos la produccin del
producto final E siguiendo las series de la Fig. 6.5.
El producto final E inhibe la Enzima 1 y reprime las Enzimas 2, 3 y 4. Se produce un
mutante auxotrfico (Captulo 7) que carece de Enzima 3. Este mutante, por lo tanto,
requiere E para crecer. Si ahora se suministran limitaciones (niveles bajos) de E al
medio, la cantidad en la clula no ser suficiente para causar inhibicin de la Enzima 1
o la represin de la Enzima 2 y C ser por lo tanto producida y excretada de las clulas.
Este principio se aplica en la produccin de ornitina por un mutante sin citrulina
(citotrolina auxotrfica) de Corynebacterium glutamicum al que se suministra un bajo
nivel de arginina (Fig. 6.6).

(Ii) Sobreproduccin de un intermedio de una va ramificada; Inosina -

5monofosfato (IMP) fermentacin: Esto es un poco ms complicado que el caso
anterior. Los nucletidos son importantes como agentes aromatizantes y la
sobreproduccin de algunos puede llevarse a cabo como se muestra en la Fig. 6.7. En el
camino mostrado en la Fig. 6.7 productos finales de adenosina 5- monofosfato (AMP) y
guanosina -5 monofosofato (GMP), tanto acumulativamente retroalimentacin inhibir y
reprimir la enzima primaria [1].

Adems, AMP inhibe la enzima [11] que cubre IMP a xanthosina-5monofosfato (XMP).
Al alimentar los niveles bajos de adenina a un mutante auxotrfico de Corynebacterium
glutamicum que carece de enzima [11] (tambin conocido como adenineless porque no
puede hacer adenina) IMP se causa a acumular. La conversin de IMP a XMP es
inhibido por GMP en [13]. Cuando se elimina la enzima [14] por mutacin, se obtiene
una cepa que requiere tanto guanina como adenina. Dicha cepa excretar grandes
cantidades de XMP cuando se alimentan concentraciones limitantes de guanina y
adenina.
Fig 6.6: Esquema para la sobreproduccin de ornitina por un mutante sin citrino de
Corynebacterium glutamicum

(Iii) Sobreproduccin de productos finales de una va ramificada: La

sobreproduccin de la produccin final de productos finales es ms complicada
que la obtencin de productos intermedios. Entre los productos finales, la
produccin de productos finales de las vas de acceso es ms fcil que en las
vas no ramificadas. La sobreproduccin de productos finales de vas
ramificadas se discutir en esta seccin; La va no ramificada ser tratada ms
tarde.
Esto se ilustra mejor (Fig. 6.8) usando lisina, un aminocido importante que
carece de cereales y, por tanto, aadido como complemento a los alimentos a
base de cereales, alimentos. Se produce utilizando Corynebacterium
glutamicum o Brevibacterium Flavum La lisina se produce en estas bacterias
por una va ramificada que tambin produce metionina, isoleucina y treonina.
La enzima inicial en esta va aspartoquinasa se regula mediante la inhibicin
concertada de retroalimentacin de treonina y lisina. Por eliminacin
mutacional de la enzima que convierte aspartato semialdehdo a homoserina, a
homoserina deshidrogenasa, el mutante no puede crecer a menos que metionina
y treonina se aadan al medio. Mientras la treonina se suministra en cantidades
limitantes, la concentracin intracelular del aminocido es baja y no
retroalimenta la enzima primaria, la aspartoquinasa. Los intermedios
 metablicos se mueven as a la rama lisina y la lisina se acumula en el medio
(figura 6.8).

Fig: 6.7: Esquema para la sobreproduccin de cido inosnico por un auxtrofo de

adenina de Corynebacterium glutamicum

(Iv) Sobreproduccin del producto final de una va no ramificada: Se

utilizan dos mtodos para la sobreproduccin del producto final de una va
no ramificada. El primero es el uso de un anlogo txico del compuesto
deseado y el segundo es el de mutar hacia atrs un mutante auxotrfico.
Fig 6.8: Sobreproduccin de lisina usando un mutante de Corynebacterium glutamicum
la Enzima Homoserina Deshidrogenasa

Uso de anlogos txicos o retroactivos: En este mtodo, el organismo (clulas

bacterianas o de levadura, o esporas de hongos) se exponen primero a un mutgeno. A
continuacin, se colocan en un medio que contiene el anlogo del compuesto deseado,
que es tambin txico para el organismo. La mayora de las clulas mutagenizadas sern
destruidas por el anlogo. Los que sobreviven sern resistentes al anlogo y algunos de
ellos sern resistentes a la represin de retroalimentacin e inhibicin por el material
cuya sobreproduccin se desea. Esto se debe a que el organismo mutagenizado habra
sido "engaado" para sobrevivir sobre un sustrato similar, pero no igual al ofrecido
despus de la mutagnesis. Como resultado, puede presentar inhibicin de
retroalimentacin en un medio que contiene el anlogo, pero puede ser resistente a la
inhibicin de retroalimentacin del material a producir, debido a ligeros cambios en la
configuracin de las enzimas producidas por el mutante. El efecto neto es modificar la
enzima producida por el mutante para que sea menos sensible a la inhibicin de
retroalimentacin. Alternativamente, el sistema de formacin de enzimas puede estar
alterado de tal manera que sea insensible a la represin de retroalimentacin. La Tabla
6.2 muestra una lista de compuestos que se han utilizado para producir mutantes
resistentes a los anlogos.

Uso de la mutacin inversa: Una mutacin inversa puede ser causada en los genes
estructurales de un mutante auxotrfico en un proceso conocido como reversin. A
menudo resultan enzimas que difieren en estructura de la enzima original, pero que
todava son todava activas. Se ha informado de que la reversin de mutantes
auxotrficos que carecen de la enzima primaria en una va metablica a menudo da
como resultado revertentes que excretan el producto final de la va. La enzima en el
revertante es activa pero difiere de la enzima original en ser insensible a la inhibicin
de
retroalimentacin.

6.2.1.2 Restriccin de la actividad enzimtica

En el ciclo del cido tricarboxlico, la acumulacin de cido ctrico puede estimularse en

Aspergillus niger limitando el suministro al organismo de fosfato y los metales que
forman los componentes de las co-enzimas. Estos metales son hierro, manganeso y zinc.
En la produccin de cido ctrico la cantidad de stos es limitada, mientras que la del
cobre que inhibe las enzimas del ciclo TCA se incrementa (Captulo 20).

6.2.2 Permeabilidad

La facilidad de permeabilidad es importante en los microorganismos industriales no

slo porque facilita el aislamiento del producto sino, ms importante an, debido a la
eliminacin del producto del sitio de regulacin de retroalimentacin. Si el producto no
se difundi fuera de la clula, pero permaneci unido a las clulas, entonces la clula
tendra que ser interrumpida para permitir el aislamiento del producto, aumentando as
los costes. La importancia de la permeabilidad se demuestra ms fcilmente en las
bacterias productoras de cido glutmico. En estas bacterias, la barrera de
permeabilidad debe ser alterada para que se acumule un alto nivel de aminocido en el
caldo. Esta permeabilidad aumentada puede ser inducida por varios mtodos:

(I) Deficiencia de biotina: La biotina es un coenyme en las reacciones de

carboxilacin y transcarboxilacin, incluida la fijacin de CO2 a
acetato para formar malonato. La enzima que cataliza esta es rica en
biotina. La formacin de COA de malonilo por esta enzima (acetil-
COA carboxilasa) es el factor limitante en la sntesis de cidos grasos
de cadena larga. Por lo tanto, la deficiencia de biotina provocara
aberraciones en el cido graso producido y, por lo tanto, en la fraccin
lipdica de la membrana celular, Fugas en la membrana. Se ha
demostrado que la deficiencia de biotina tambin causa formas
aberrantes en Bacillus polymax, B. megaterium y en levaduras.
(II) Uso de derivados de cidos grasos: Derivados de cidos grasos que son
agentes de accin superficial, p. El monoestearato de polioxileno-
sorbitano (tween 60) y el tween 40 (-monopalmitato) tienen acciones
similares a la biotina y deben aadirse al medio antes o durante la fase
logartmica del crecimiento. Estos aditivos parecen causar cambios en
la cantidad y calidad de los componentes lipdicos de la membrana
celular. Por ejemplo, provocan un aumento relativo de los cidos grasos
saturados en comparacin con los cidos grasos insaturados.
(III) Penicilina: La penicilina inhibe la formacin de la pared celular en las
bacterias susceptibles al interferir con la reticulacin de las unidades de
polipptido acetilmurnico en el mucopptido. La pared celular est as
trastornada causando la excrecin del glutamato, probablemente debido
al dao a la membrana, que es el sitio de la sntesis de la pared.
6.3 REGULACIN DE LA SOBREPRODUCCIN EN METABOLITOS
SECUNDARIOS
La base fisiolgica de la produccin de metabolitos secundarios es mucho menos
estudiada y comprendida que el metabolismo primario. Sin embargo, hay cada vez ms
pruebas de que controles similares a los discutidos anteriormente para el metabolismo
primario tambin se producen en los metabolitos secundarios. A continuacin se dan
algunos ejemplos:

6.3.1 Induccin

El efecto estimulador de algunos compuestos en la fermentacin del metabolito

secundario se asemeja a la induccin enzimtica. Un buen ejemplo es el papel del
triptfano en la fermentacin de alcaloides de ergot por Claviceps sp. Aunque el
aminocido es un precursor, su papel parece ser ms importante como inductor de
algunas de las enzimas necesarias para la biosntesis del alcaloide. Esto se debe a que
los anlogos del triptfano mientras no se incorporan al alcaloide, inducen tambin las
enzimas usadas para la biosntesis del alcaloide. Adems, se debe aadir triptfano
durante la fase de crecimiento, de lo contrario la formacin de alquoides se reduce
drsticamente. Esto tambin indicara que algunas de las enzimas biosintticas, o
algunas reacciones qumicas que conducen a la transformacin alcaloide tienen lugar en
la trofofa, estableciendo as un enlace entre la idiofasa y la trofofase. Parece que una
induccin similar es ejercida por la metionina en la sntesis de cefalosporina C por
Cephalosporium ocremonium.

6.3.2 Regulacin de catabolitos

La regulacin catablica tal como se ha visto antes puede ser por represin o por
inhibicin. Todava no es posible determinar cul de ellos funciona en el metabolismo
secundario. Adems, debe observarse que las regulaciones de catabolitos no se limitan a
catabolitos de carbono y que la regulacin recientemente descubierta de catabolitos de
nitrgeno observada en el metabolismo primario tambin ocurre en el metabolismo
secundario.

6.3.2.1 Regulacin del catabolito de carbono

La regulacin del metabolismo secundario por el carbono se conoce desde hace mucho
tiempo. En la produccin de penicilina se haba sabido durante mucho tiempo que la
penicilina no se produce en un medio que contenga glucosa hasta despus del
agotamiento de la glucosa, cuando la idiofasa se pone en; El mismo efecto se ha
observado con la produccin de cefalosporina. De hecho, el "efecto glucosa" en el que
la produccin se suprime hasta el agotamiento del azcar es bien conocido en un gran
nmero de productos secundarios. Aunque el fenmeno en el que se agota una fuente
fcilmente utilizable antes de utilizar un menos disponible se ha descrito como efecto de
glucosa, es claramente un trmino engaoso porque otras fuentes de carbono pueden ser
preferidas en sistemas de dos azcares cuando no hay glucosa. As, la produccin de \
beta - caroteno por Mortierella sp. Es mejor en fructosa, aunque la galoctosa es una
mejor fuente de carbono para el crecimiento. Las fuentes de carbono que se han
encontrado adecuadas para la produccin de metabolitos secundarios incluyen sacarosa
(tetraciclina y eritromicina), aceite de soja (kasugamicina), glicerol (butirosina) y
almidn y dextrina (fortimicina). La Tabla 6.3 muestra una lista de metabolitos
secundarios cuya produccin est suprimida por glucosa as como fuentes de carbono
no interferentes.

Es bastante fcil decidir si el catabolito est reprimiendo o inhibiendo la sntesis. En la

represin catablica se reprime la sntesis de las enzimas necesarias para la sntesis del
metabolito. Se prueba mediante la adicin del sustrato de prueba justo antes de la
iniciacin de la sntesis de metabolitos secundarios donde, tras la sntesis, se reprime
severamente. Para probar la inhibicin de la catabolita por glucosa u otra fuente de
carbono, se aade a un cultivo que ya produce el metabolito secundario y se observa
cualquier inhibicin en la sntesis.

6.3.2.2 Regulacin del catabolito de nitrgeno

La regulacin de catabolitos de nitrgeno tambin se ha observado en el metabolismo

primario. Implica la supresin de la sntesis de enzimas que actan sobre sustancias que
contienen nitrgeno (proteasas, ureasas, etc.) hasta que se agotan las fuentes de
nitrgeno fcilmente utilizables, por ejemplo, amonaco. En la fermentacin con
estreptomicina, donde la harina de soja es el sustrato preferido como fuente de
nitrgeno, la ventaja puede ser similar a la de la lactosa en la penicilina, es decir, la de
la utilizacin lenta. Los metabolitos secundarios que se ven afectados por la regulacin
de catabolitos de nitrgeno incluyen la produccin de trihidroxitolueno por Aspergillus
fumigatus, bikaverin por Gibberella fujikuroi y cephamycins por Streptomyces spp.
En todos estos casos se debe agotar el nitrgeno antes de iniciar la produccin del
metabolito secundario.
6.3.3 Reglamento de retroalimentacin

Esta regulacin de retroalimentacin existe en el metabolismo secundario se muestra en

muchos ejemplos en los que el producto inhibe su posterior sntesis. Un ejemplo es la
inhibicin de la penicilina por la lisina. La penicilina biosntesis de Penicillium
chrysogenum se ve afectada por la inhibicin de retroalimentacin de la L-lisina, ya que
la penicilina y la lisina son productos finales de una va de bracket (Fig. 6.9). La
retroalimentacin por la lisina inhibe la enzima primaria en la cadena, la homocitrato
sintetasa, e inhibe la produccin de \ alpha - aminoadipato. La adicin de \ alpha -
aminoadipato elimina el efecto inhibidor de la lisina.

Autoinhibicin por meabolitos secundarios: Se ha demostrado que varios productos

secundarios o incluso sus anlogos inhiben su propia produccin mediante un
mecanismo de retroalimentacin. Ejemplos son el audorox, un antibitico activo contra
las bacterias Gram-positivas, y utilizado en alimentos para aves de corral, cloranfenicol,
penicilina, cicloheximidos y cido 6-metilsaliclico (producido por Penicillium urticae).
La represin del cloranfenicol de su propia produccin se muestra en la Fig. 6.10, que
tambin muestra la inhibicin del cido corsmico por el triptfano.

6.3.4 Regulacin del ATP o del cargo energtico de Metabolitos Secundarios

El metabolismo secundario tiene una tolerancia mucho ms estrecha para las

concentraciones de fosfato inorgnico que el metabolismo primario. Una gama de
fosfato inorgnico de 0,3 - 30 mM permite un crecimiento excelente de organismos
procariticos y eucariticos. Por otro lado, el nivel ms alto promedio que favorece el
metabolismo secundario es 1,0 mM, mientras que la cantidad media ms baja que
suprime al mximo el proceso secundario es de 10 mM. Los altos niveles de fosfato
inhiben la formacin de antibiticos, por lo que la industria antibitica selecciona
empricamente los medios de bajo contenido de fosfato o reduce el fosfato Por adicin
de agentes complejantes de fosfato al medio. Se han dado varias explicaciones para este
fenmeno. Uno de ellos es que el fosfato estimula la alta tasa de respiracin, la sntesis
de ADN y ARN y la utilizacin de glucosa, desplazando as la fase de crecimiento de la
idiofasa a la trofofa. Este cambio puede ocurrir sin importar la etapa de crecimiento de
los organismos. El agotamiento del fosfato por lo tanto ayuda a desencadenar idiophase.
Otra hiptesis es que un alto nivel de fosfato cambia las formas de catabolismo de
carbohidratos HMP a la va EMP que favorece la gluclisis. Si este es el caso, entonces
NADPH se convierten en limitantes de la sntesis ridiolita.
Fig 6.9: Sntesis de penicilina por un mutante de Penicillium chrysogenum, L2
Fig 6.10: Camino Biosinttico para el Cloranfenicol
6.4 MTODOS EMPRICOS EMPLEADOS A MECANISMOS
REGLAMENTARIOS DESORGANIZADOS EN PRODUCCIN SECUNDARIA
DE METABOLITO

Las vas metablicas de los metabolitos secundarios son cada vez ms conocidas y se
estn empleando enfoques ms racionales para interrumpir las vas de sobreproduccin.
Parece existir ms trabajo con respecto a los metabolitos primarios. Los mtodos que se
utilizan para inducir la sobreproduccin de metabolitos secundarios son principalmente
empricos. Tales mtodos incluyen mutaciones y estimulacin mediante la
manipulacin de componentes y condiciones de los medios.

(I) Mutaciones: Las variantes naturales de organismos que han mostrado

evidencia de buena productividad se someten a mutaciones y las clulas
tratadas se seleccionan aleatoriamente y se ensayan para la
sobreproduccin de metabolitos. A menudo no se conoce la naturaleza
del gen mutado.
(II) Efecto estimulante de los precursores: En muchas fermentaciones para
metabolitos secundarios, la produccin es estimulada y los rendimientos
aumentados por la adicin de precursores. As, la produccin de
penicilina se estimul mediante la adicin de cido fenilactico presente
en el licor de maz en los primeros das de la fermentacin con
penicilina. Para la sntesis experimental de aflatoxina por Aspergillus
parasiticus, se requiere metionina. En la formacin de mitomicina por
Streptomyces verticillatus, la L-citurulina es un precursor.
(III) Compuestos inorgnicos: Dos compuestos inorgnicos que tienen
efectos profundos de fermentacin para los metabolitos secundarios son
fosfato y manganeso. El efecto del fosfato inorgnico se ha discutido
anteriormente. En resumen, si bien altos niveles de fosfato fomentan el
crecimiento, son perjudiciales para la produccin de metabolitos
secundarios. Por otra parte, el manganeso alienta especficamente la
produccin de idiofasas particularmente entre los bacilos, incluyendo la
produccin de bacilina, bacitracina, micobacilina, subtilina, D-
glutamina, antgenos protectores y endosporas. Sorprendentemente, la
cantidad necesaria es de 20 a varias veces la cantidad necesaria para el
crecimiento.
(IV) Temperatura: Aunque el rango de temperatura que permite un buen
crecimiento (en la trofofa) se extiende alrededor de 25 C entre los
microorganismos, el rango de temperatura dentro del cual se producen
los metabolitos secundarios es mucho menor, siendo del orden de slo 5-
10 C. Por lo tanto, las temperaturas utilizadas en la produccin de
metabolitos secundarios son un compromiso de estas situaciones. A
veces se utilizan dos temperaturas - una ms alta para la trofofa y otra
ms baja para la idiofasa.