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Dans un produit biologique (lait, srum...) lazote peut se trouver sous forme minrale et
organique (protines, phospho-amino-lipides...) ; pour le doser dans sa totalit, il faut dtruire
les composs organiques de manire obtenir tout l'azote sous une mme forme minrale. On
effectue pour cela une minralisation. L'azote est ensuite dos par dosage acide-base.
Mthode de Kjeldahl.
L'analyse des protines dans les denres alimentaires consiste doser l'azote total selon la
mthode de Kjeldahl et multiplier la teneur en azote par un facteur conventionnel.
Principe :
La matire organique est dtruite par oxydation, sous l'effet combin de l'acide sulfurique et
de catalyseurs. Dans ces conditions l'azote contenu dans laliment est transform en sel
d'ammonium. L'ammoniac libr de ce sel en milieu basique est entran par distillation et
recueilli dans une solution acide.
- La teneur en protines est obtenue par multiplication de la teneur en azote trouve par un
facteur de conversion (qui correspond l'inverse de la teneur en azote dans la protine).
Comme la teneur en azote est variable (en fonction des acides amins prsents et de leurs
proportions), un facteur de conversion diffrent devrait tre utilis pour chaque sorte de
protines.
Ce facteur est appel coefficient de digestibilit , selon lorigine de laliment, on a :
1. Minralisation
La minralisation est effectue l'aide d'un excs d'acide sulfurique concentr et chaud, en
prsence d'un mlange de catalyseurs (K2SO4 et CuSO4).
En prsence d'acide sulfurique concentr et chaud, le carbone, l'oxygne, l'hydrogne et
l'azote des composs organiques se retrouvent sous forme de CO2, H2O et NH3. L'acide
sulfurique tant en excs, on a :
L'azote total est donc obtenu sous la forme minrale NH4 + (ions ammonium).
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- K2SO4 permet d'lever la temprature d'bullition de l'acide sulfurique 350-400 C ; on
peut ainsi effectuer la minralisation ces tempratures sans avoir de pertes trop importantes
d'acide sous forme de vapeurs ;
- CuSO4 est le catalyseur de minralisation proprement dit : il augmente la vitesse de la
minralisation.
La lessive de soude tant en excs, tous les ions ammonium sont transforms en ammoniac et
donc tout l'azote se retrouve sous forme de NH3.
NH3 + H+ NH4+
(Lorsque l'ammoniac arrive dans l'acide borique il alcalinise le milieu qui vire au vert, on
verse alors la solution talonne dacide fort pour ramener l'indicateur sa teinte).
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On a :
Il existe dautres mthodes de dosage des protines, mais cest la mthode de Kjeldahl qui est
la plus utilise, cest la mthode de rfrence. On cite parmi elles :
Inconvnient :
Autres mthodes
Il existe dautres mesures et analyses qui se font sur les protines, dont :
La qualit des protines est dtermine en fonction de leur digestibilit et de leur valeur
biologique, elle peut tre modifie par des traitements technologiques. On utilise beaucoup de
techniques :
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Ce sont des essais qui se font sur des animaux de laboratoire pour mesurer la qualit des
protines consommes.
Ces mthodes sont longues et demandent des locaux (laboratoire, matriel, ), on les
applique titre exprimental.
Les rsultats :
Les lments minraux quon retrouve dans les aliments sont de deux classes : les lments
majeurs (macro lments) et les oligolments (micro lments).
Selon les quantits mises en jeu dans l'organisme, ils sont diviss en 2 groupes :
- les lments principaux ou macrolments : Ca, P, K, Cl, Na, Mg
- les lments traces ou oligolments : Fe, Zn, Cu, Mn, I, Mo, F, Si, Se, etc.
-Il existe aussi les oligolments toxiques : (mtaux lourds), par rapport leur masse molaire
qui est grande, ex : le pb : 207 g.
Les mtaux lourds sont un ensemble de corps de masse atomique relativement leve qui
peuvent tre toxiques mme trs faibles teneurs (plomb, mercure,), ils provoquent le
risque dun effet cumulatif par ingestion rpte de laliment ou par augmentation continue du
niveau de pollution en un lment.
Les plus surveills habituellement dans les aliments sont : larsenic, lantimoine, le plomb, le
mercure, le cadmium, le chrome, le nickel, et ltain.
Le dosage des minraux dans les aliments rpond une double proccupation :
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-Dune part, la connaissance de la valeur nutritionnelle de laliment quil sagisse des
lments majeurs ou des oligo lments .
-Dautre part, de vrifier si laliment contient certains minraux en quantit dangereuse pour
la sant du consommateur qui ils soient prsents naturellement dans laliment ou dus une
pollution. Cest ce dernier souci qui est en gnral le but de la recherche des mtaux lourds.
sur des lments qui se trouvent en quantit notable et ne ncessitent pas une
recherche dune grande sensibilit comme le phosphore, le calcium, le magnsium,
sur des traces.
Le facteur qui constitue un obstacle pour lanalyse des lments minraux dans les aliments,
est la prsence de la matire organique, seule leau en est dpourvue, donc il faut dtruire
cette matire.
Parfois les contaminations proviennent et sajoutent aux quantits de minraux qui existent
dans laliment, les causes sont multiples : les broyeurs, les rcipients, les ractifs, les
poussires,donc des prcautions doivent tre prises concernant :
Mthodes de minralisation :
-La nature du produit analyser : certains aliments qui font lobjet dune grande prise
dessai sont difficiles incinrer ou minraliser (aliments trs gras).
-Limportance des risques de pertes : elle est lie la teneur de llment doser, elle est
trs grande lorsquil sagit de faibles traces, dans ce cas on vite lincinration qui se fait
seulement dans le dosage des lments majeurs.
La teneur en cendres d'un aliment s'obtient par incinration (ou combustion complte) dans un
four 550 - 800C. Laliment est mis dans ce four jusqu destruction de toute particule
charbonneuse. L'adjonction de ractifs chimiques peut faciliter ou acclrer la combustion.
-Bonne circulation dair, pour viter la formation de charbon, dur faire disparaitre par la
suite.
-Eviter les tempratures trop leves. Dans un four bien conu, la minralisation peut tre
ralise entre 400 et 450C.
Ce procd peut tre appuy par laction dagents oxydants : acide nitrique, nitrate
dammonium ou de magnsium, ils aident dtruire les dernires traces des particules
charbonneuses.
On peut aussi ajouter des substances raction alcaline (MgO, MgNO3, KOH ).
Une fois les cendres de laliment obtenu, on les fait passer en solution.
Exemples :
Bl : matires minrales 2.16 % cendres 1.90 % pertes de S, Cl, ...
Lait : matires minrales 0.69 % cendres 0.80 % augmentation due la formation de
carbonates
Pommes : cendres 0,25 % idem lait
Les cendres insolubles dans l'acide chlorhydrique sont principalement constitues de silice et
silicates. Ce rsidu aussi appel "sable" est assimil de la terre et autres impurets d'origine
minrale. Sa teneur est un indice de puret de certaines denres (pices, caf, cacao...)
Ces dosages sont effectus par les mthodes classiques de la chimie analytique
(Gravimtrie pour P, S, Cl, Si ..., titrimtrie pour S, Cl, Ca, Mg ..., colorimtrie pour P, Cl, Si,
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Fe) ou par absorption atomique (Na, K, Fe ...), en gnral aprs minralisation.
Exemples :
Mthodes de dosage :
Mthodes chimiques classiques :
La gravimtrie : cette mthode tait la plus pratique, son principe se base sur la sparation,
la filtration, le lavage et la fin la pese. (Pour beaucoup de minraux).
Spectromtrie dmission :
On utilise le principe des rayonnements caractristiques produits et mis par des atomes
excits par llvation de la temprature. On emploie des appareils dots dquipements qui
permettent lexcitation des lments minraux : torches plasma .
Elle se base sur le principe suivant : des atomes neutres excits (dans une flamme) absorbent
lnergie extrieure apporte par des photons. La mesure de la diminution de cette nergie
permet de mesurer la quantit dlments minraux rencontrs par le faisceau de photons.
La polarographie :
Principe se basant sur la polarit en utilisant deux lectrodes, lune polarisable et lautre non
polarisable qui donne un potentiel et une intensit quon dose elle-mme pouvant donner une
ide sur la teneur en minraux.
Electrodes spcifiques :
Le principe se base sur la diffrence de potentiel qui stablit entre une lectrode ionique
spcifique et une lectrode de rfrence est fonction de lactivit des ions contenus dans les
minraux.
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Chapitre VI : Analyse des vitamines dans les denres alimentaires
Une vitamine est une substance organique qui est la fois ncessaire au mtabolisme de
lorganisme vivant et qui ne peut tre synthtise en quantits suffisantes et dont labsence
dans la ration alimentaire a pour consquence moyen et long terme le dveloppement de
maladies de carence.
Les plantes et les microorganismes peuvent synthtiser les vitamines dont ils ont besoin.
Il existe deux types de vitamines : celles qui sont hydrosolubles, cest--dire elles se
solubilisent dans leau et dautres qui sont insolubles dans leau et sont appeles vitamines
liposolubles.
On compte 13 vitamines, chaque vitamine possde un nom commun, un nom chimique et des
formes vitaminiques actives dans lorganisme.
Vitamine A Rtinol
Vitamine E tocophrol
Vitamine B1 thiamine
Vitamine B6 Pyridoxal
Vitamine B 8 biotine
Vitamine B 12 cobalamine
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Quelques vitamines et leur importance :
-La vitamine A : elle est prsente sous forme desters de rtinol dans certains aliments (foie,
lait, beurre, ufs) mais galement sous forme de prcurseurs (carotnodes) dans les lgumes
et les fruits colors. Ces prcurseurs sont transforms en vitamine A lors de leur absorption
intestinale.
-La vitamine D : dont les 2 principales formes sont la vitamine D2 (ergocalcifrol) dorigine
vgtale et la vitamine D3 (cholcalcifrol) dorigine animale, est une vitamine qui est en trs
faible quantit dans lalimentation humaine. La source essentielle dans lorganisme rsulte en
fait de la transformation dans les couches profondes de la peau sous laction des rayons UV
du soleil dun prcurseur : le 7 dshydro cholestrol. Ce dernier peut tre apport par
lalimentation mais pour lessentiel il est synthtis par le cholestrol.
-La vitamine K et certaines vitamines du groupe D : elles peuvent tre synthtises dans le
colon par la flore intestinale.
-La vitamine PP (niacine) : elle a une double origine : alimentaire et endogne, dans ce
dernier cas elle rsulte de la transformation par une srie de ractions enzymatiques dun
acide amin : le tryptophane.
Le dosage des vitamines dans les aliments reste malgr les amliorations rcentes un travail
difficile dont lexprience et le savoir-faire sont ncessaires.
Pour le dosage des vitamines liposolubles, on utilise les techniques : lHPLC et la CPG.
Pour les vitamines hydrosolubles, les mthodes de dosage par voie microbiologiques et pour
certaines vitamines on utilise la colorimtrie et actuellement lHPLC.
Les vitamines doivent tre dabord extraites avant quelles soient doses.
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La riboflavine B2 : par Hcl ou voie enzymatique.
La Vitamine PP : Hcl.
2-Techniques de dosage :
La plupart des vitamines sont sensibles la lumire et certaines soxydent rapidement, il faut
donc viter une lumire directe ou intense.
La meilleure lumire artificielle est fournie par des tubes fluorescents, dans certains cas on
utilise une verrerie ambre. Les traitements la chaleur sont viter.
Les mthodes d'analyse mises en jeu sont soit des mthodes chimiques et physicochimiques
soit des mthodes microbiologiques et biologiques :
2. Mthodes microbiologiques
Un microorganisme dont le mtabolisme et la croissance dpendent de la prsence et de la
concentration de la vitamine recherche est mis en prsence d'un extrait de la denre
examiner. L'intensit du rendement mtabolique ou de la croissance est mesure (titrimtrie,
gravimtrie ou autre) et compare avec celle obtenue partir dune srie de standards de
concentrations diffrentes.
Ce sont des mthodes trs sensibles et trs spcifiques, principalement utilises pour les
vitamines du groupe B.
Exemples :
vit. B2 avec Lactobacillus casei par titrage du lactate form, vit. B6 avec
Neurospora sitophila par mesure par gravimtrie du myclium.
3. Mthodes biologiques
Ces mthodes de tests sur animaux ne sont plus actuellement utilises que pour les
vitamines difficilement extractibles comme celles du groupe D.
Dans ce cas, on donne des rats rachitiques des doses diffrentes de la prparation tester et
on observe l'effet sur la sant des rats (mesure par rayons X des piphyses du tibia), test qui
ncessite beaucoup de temps (plusieurs semaines) et d'animaux, et qui, de plus, est peu prcis.
Maintenant la HPLC a largement remplac ce type de test.
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Dosages particuliers
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