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Antibiogramas de Salmonella spp.

Artculo original

Perfil de resistencia a antibiticos


de serotipos de Salmonella spp. aislados
de carne de res molida en la Ciudad de Mxico
Nova Nayarit-Ballesteros, M en C,(1) Mara Salud Rubio-Lozano, D en C,(1) Enrique Delgado-Surez, M en C,(1)
Danilo Mndez-Medina, D en C,(1) Diego Braa-Varela, D en C,(2) Oscar Rodas-Surez, D en C.(3)

Nayarit-Ballesteros N, Rubio-Lozano MS, Delgado-Surez Nayarit-Ballesteros N, Rubio-Lozano MS, Delgado-Surez E,


E, Mndez-Medina D, Braa-Varela D, Rodas-Surez O. Mndez-Medina D, Braa-Varela D, Rodas-Surez O.
Perfil de resistencia a antobiticos de serotipos Antibiotic of resistence profile of
de Salmonella spp. aislados de carne de Salmonella spp. serotypes isolated from
res molida en la Ciudad de Mxico. retail beef in Mexico City.
Salud Publica Mex 2016;58:371-377. Salud Publica Mex 2016;58:371-377.
http://dx.doi.org/10.21149/spm.v58i3.7897 http://dx.doi.org/10.21149/spm.v58i3.7897

Resumen Abstract
Objetivo. Determinar el serotipo y perfil de resistencia a Objective. To determine the serotype and antibiotic re-
antibiticos de cepas de Salmonella spp. presentes en la carne sistance profile of Salmonella spp. isolated from retail ground
de res que se expende en la capital mexicana. Material y beef in Mexico City. Materials and methods. A total of
mtodos. Se analizaron 100 muestras de carne molida. Se 100 samples of ground beef were analyzed. The pathogen
aisl el patgeno por mtodos convencionales y se confirm was isolated by conventional methods and confirmed by
por PCR (gen InvA, 284 pb). El perfil de resistencia a antibiti- PCR (invA gene, 284 bp).The antibiotic resistance profile was
cos se determin por el mtodo de Kirby-Bauer y la seroti- determined by the Kirby-Bauer method while serotyping was
pificacin por el esquema de Kauffman-White. Resultados. performed according to the Kauffman-White scheme. Re-
Se detectaron los serotipos Lomita (6), Derby (4), Senftenberg sults. We isolated a total of 19 strains of Lomita (6), Derby
(2), Javiana y Cannsttat (1). Se observ alta resistencia a (4), Senftenberg (2), Javiana and Cannsttat (1) and undeter-
ampicilina (18/19), carbenicilina (16/19), tetraciclina (13/19) mined (5) serotypes. The strains showed a high resistance
y trimetoprim-sulfametoxasol (13/19). Cinco cepas fueron no rate to ampicillin (18/19), carbenicillin (16/19), tetracyclin
tipificables y 14 mostraron multirresistencia. Conclusiones. (13/19), and trimethoprim-sulfamethoxazole (13/19). Multi-
La carne de res que se vende en el principal centro de consu- drug resistance was observed in 14 isolates. Conclusions.
mo del pas est contaminada con serotipos de Salmonella spp. Several Salmonella spp. serotypes of public health significance
relevantes para la salud pblica. Una importante proporcin are circulating in ground beef sold in the major Mexican city.
de stos es resistente a mltiples antibiticos. Some of these strains are multi-drug resistance.

Palabras clave: Salmonella; serotipificacin; resistencia a anti- Keywords: Salmonella; serotyping; multidrug resistance; Mexico
biticos; Mxico

(1) Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Mxico.
(2) ELANCO Animal Health. Mxico.
(3) Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas, Instituto Politcnico Nacional. Mxico.

Fecha de recibido: 11 de junio de 2015 Fecha de aceptado: 1 de diciembre de 2015


Autor de correspondencia: Enrique Jess Delgado Surez. Centro de Enseanza Prctica e Investigacin en Produccin
y Salud Animal (CEPIPSA), Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Av. Cruz Blanca 486, col. San Miguel Topilejo. 14500 Tlalpan, Mxico DF, Mxico.
Correo electrnico: enriquedelgado.suarez@gmail.com

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L a salmonelosis transmitida por alimentos es una


de las principales preocupaciones de salud pblica
a escala global.1-3 La carne de diferentes especies, entre
Muestreo

Para determinar el nmero de lugares a muestrear, se


ellas la de bovino, es un importante vehculo de trans- utiliz la frmula para determinar el tamao de mues-
misin de Salmonella,4-6 de la cual se han identificado tra para una proporcin de una poblacin, cuando no
ms de 2 500 serotipos,7 algunos de los cuales tienen conocemos el nmero de elementos en esa poblacin:14
predominancia en ciertas especies animales o zonas geo-
grficas. Adems, algunas cepas de este patgeno han n= Z2*p*q* /e2
mostrado una creciente resistencia a antimicrobianos, lo
que constituye un gigantesco desafo para las autorida- donde:
des de salud. De ah que la tipificacin de aislamientos
sea de gran utilidad para entender la epidemiologa de n= tamao de la muestra
este agente infeccioso y, por tanto, desarrollar medidas Z2= 1.962 (ya que el nivel de confianza es de 95%).
preventivas para minimizar los riesgos asociados con p= proporcin esperada (como no tenemos idea de dicha
el mismo. proporcin, utilizamos el valor p=0.5 (50%) que maximiza
Desafortunadamente, la frecuencia con la que se el tamao de muestra)
presentan determinados serotipos de Salmonella spp., as q= 1-p
como su perfil de resistencia a antibiticos en distintas e= precisin (en este caso se fij en 10%)
especies animales, suele variar espacial y temporalmen-
te.1,8 En Mxico, las investigaciones ms recientes sobre Con base en la frmula anterior, el tamao de
carne de res fueron realizadas entre cinco y 13 aos muestra fue de 96, el cual se redonde a 100. De stas,
atrs.9-13 Por tanto, resulta necesario generar informacin la mitad se tom en supermercados (n=50) e igual n-
actualizada que contribuya a evaluar el riesgo a la salud mero en carniceras, mercados pblicos y tianguis. Los
pblica derivado de la presencia de Salmonella spp. en supermercados pertenecen a las principales cadenas
carne de bovino, que es el segundo tipo de carne ms de tiendas que conforman los sistemas de distribucin
consumido en el pas. Por ello, el presente trabajo tiene formal de carne refrigerada.15 A su vez, los mercados
por objetivo generar informacin sobre los principales pblicos, mercados sobre ruedas (tianguis) y carniceras
serotipos y perfiles de resistencia a antibiticos de las forman parte de los sistemas de distribucin informal
cepas de Salmonella spp. asociadas con la carne de res de carne caliente.15
que se expende en la capital mexicana. Los lugares para la toma de muestras se seleccio-
naron al azar, utilizando nmeros aleatorios generados
en Microsoft Excel. En el caso de los supermercados, se
Material y mtodos seleccionaron cuatro cadenas comerciales pertenecientes
Este trabajo no requiri de la aprobacin del Comit a la Asociacin Nacional de Tiendas de Autoservicio y
Institucional para el Cuidado y Uso de Animales Departamentales (ANTAD). El nmero de puntos de
de Experimentacin (CICUAE), de la Facultad de venta a muestrear por cadena comercial se determin
Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad con base en la probabilidad proporcional al tamao
Nacional Autnoma de Mxico. Lo anterior en virtud (nmero de tiendas) en cada una de stas. Los lugares
de que en el estudio no se emplearon animales de para la toma de muestras tambin fueron escogidos al
experimentacin. azar. El muestreo se llev a cabo entre abril y noviembre
de 2013. Las muestras se colocaron en hieleras con geles
Diseo del experimento refrigerantes para su transporte al laboratorio (2-4 C) y
fueron procesadas dentro de las siguientes cuatro horas.
En este experimento se realiz un muestreo por con-
veniencia en la Ciudad de Mxico, por ser el principal Anlisis microbiolgico
centro de consumo del pas y donde llega carne de varios
estados de la Repblica. La unidad muestral consisti Para la preparacin de las muestras, se sigui el pro-
en 100-200 gramos de carne molida de res, expedida cedimiento descrito en la Norma Oficial Mexicana
en supermercados, carniceras, mercados pblicos y NOM-110-SSA1-1994,16 que describe la preparacin y
mercados sobre ruedas (tianguis). dilucin de muestras de alimentos para su anlisis mi-

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crobiolgico. Asimismo, el aislamiento microbiolgico (Cb; 100 g) y tetraciclina (Tet; 30 g). Se utilizaron como
se realiz de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana organismos de control de calidad: Escherichia coli ATCC
NOM-114-SSA1-1994,17 segn el cual se deben seguir 8739, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Staphylococcus
los pasos de preenriquecimiento, enriquecimiento se- aureus ATCC 25923 y Pseudomonas aeruginosa ATCC
lectivo, aislamiento selectivo diferencial e identificacin 9027. stos fueron donados por el laboratorio de Mi-
bioqumica. crobiologa General de la Escuela Nacional de Ciencias
Biolgicas (ENCB) del Instituto Politcnico Nacional de
Confirmacin molecular Mxico. Las cepas fueron consideradas multirresistentes
cuando fueron resistentes a tres grupos de antibiticos o
Para la confirmacin molecular de la Salmonella, se de- ms. Se utilizaron las herramientas de anlisis de datos
termin la presencia del gen invA (284 pb), caracterstico de Microsoft Excel para elaborar la estadstica descripti-
de Salmonella spp. y relacionado con su capacidad inva- va. Para el anlisis de la relacin entre de la frecuencia
siva. Se usaron iniciadores especficos para Salmonella, de muestras positivas a Salmonella y los distintos puntos
utilizados anteriormente por Rahn y colaboradores.18 de venta, se utiliz la prueba de ji cuadrada (2), con un
La reaccin con estos iniciadores fue llevada a cabo en nivel de significancia de 95%.
2.5 L de buffer 10X para PCR (500 mM KCL, 200 Mm
Tris HCL), 1.25 L de dNTPs (10Mm), 1.6 L de MgCl2,
0.5 L de Taq DNA polimerasa (Fermentas) y 1.5 L de
Resultados
la extraccin de cada aislado. La PCR se corri bajo las Se encontr una frecuencia relativa promedio de
siguientes condiciones: incubacin inicial a 94C por Salmonella spp. en carne de res molida de 16% en la
60 segundos; seguida por 35 ciclos de desnaturaliza- muestra estudiada. No obstante, en los supermercados,
cin a 94C por 60 segundos; alineacin a 64C por 30 el porcentaje de muestras positivas fue del 6% (3/50);
segundos; finalmente una amplificacin a 72C por 30 mientras que en el sector informal fue del 32% (16/50):
segundos, seguida de un periodo de extensin final de 2 de tianguis, 4 de carniceras y 10 de mercados pblicos
7 minutos a 72C. La amplificacin de los productos de (cuadro I). La prueba de ji cuadrada evidenci que el
PCR fue analizada usando geles con 1.2% de agarosa, porcentaje de muestras positivas a Salmonella spp. estuvo
teidos con bromuro de etidio y visualizados con un asociado significativamente (P<0,05) con el tipo de mer-
transiluminador. cado (formal o informal) en el que se expende la carne.
Los serotipos predominantes fueron Lomita y
Serotipificacin Derby, aunque tambin se encontraron cepas de Senf-
tenberg, Javiana y Cannstatt. Cinco de los aislamientos
La serotipificacin se realiz de acuerdo con el esquema tuvieron resultados no concluyentes, por lo que se
de Kauffmann-White,7 para lo cual los aislamientos reportan como no serotipificados.
fueron enviados al Instituto de Diagnstico y Referencia En materia de susceptibilidad a antibiticos (cuadro
Epidemiolgicos (InDRE) de la Secretara de Salud. II), las resistencias ms frecuentes se presentaron en
-lactmicos; mientras que 73.7% (14/19) de los aisla-
Resistencia a antibiticos mientos resultaron multirresistentes. Como se muestra
en la figura 1, entre 70 y 95% de las cepas presentaron
Para determinar la sensibilidad de los aislamientos a resistencia a ampicilina (18/19), carbenicilina (16/19),
antibiticos, se utiliz la prueba de difusin en discos tetraciclina (13/19) y trimetoprim-sulfametoxasol
(sensidiscos individuales BIO-RAD) mediante el M- (13/19). En los dems antibiticos, el porcentaje de cepas
todo de Kirby-Bauer.19 Los resultados se reportaron de resistentes fue mucho ms bajo (entre 5 y 30%).
acuerdo con los criterios de interpretacin propuestos
por el Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI).20
Se probaron 14 antibiticos: ampicilina (Am; 10 g),
Discusin
amoxicilina-cido clavulnico (Ax; 30 g), amikacina Estudios previos en cortes de carne cruda9 y molida21
(Ak; 30 g), ceftriazona (Cro; 30 g), cefalotina (Cf; reportan porcentajes de positividad a Salmonella spp.
30 g), cefotaxima (Ctx; 30 g), cloranfenicol (Chl; 30 mucho mayores a los aqu observados. Sin embargo,
g), pefloxacina (Pef; 5 g), gentamicina (Ge; 10 g), estas diferencias no son necesariamente el reflejo de un
nitrofurantona (Nf; 30 g), netilmicina (Net; 30 g), mejor control del patgeno en fechas ms recientes, pues
trimetoprim sulfametazol (Stx; 250 g), carbenicilina se ha demostrado que su prevalencia en el ganado puede

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Cuadro I
Frecuencia relativa de Salmonella spp. y serotipos identificados en muestras de carne
de res molida de la Ciudad de Mxico. Abril-noviembre 2013

Origen de la muestra n Frecuencia relativa de Salmonella spp. Serotipos Nm. aislamientos

Cannstatt 1
Supermercados 50 6.0
N.D.1 2
Lomita 1
Tianguis 5 40.0
Senftenberg 1
Derby 2
Carniceras 15 26.7
Lomita 2
Derby 2
Javiana 1
Mercados pblicos 30 33.3 Lomita 3
N.D.* 3
Senftenberg 1
*
Serotipo no determinado en aislamientos con resultados no concluyentes

Cuadro II
Perfil de resistencia a antibiticos de los serotipos de Salmonella spp. aislados
de carne molida de res en la Ciudad de Mxico. Abril-noviembre 2013

Origen Serotipo Perfil de resistencia* Resistencia intermedia

Derby Am/Cb/Sxt/Tet
Javiana Am/Cb/Cf/Chl/Tet Cro/Ge
N. D. Am/Cb/Cf/Sxt/Ge/Nf/Net/Tet
Mercados
N. D. Am/Cb/Sxt/Ge/Tet Nf
N. D. Cb/Nf Cf/Ge
Lomita Am/Cb/Sxt/Tet
Lomita Am/Cb/Sxt/Tet
Lomita Am/Cb/Sxt/Tet
Carniceras
Derby Am Cb
Derby Am/Cb
Senftenberg Am/Cb/Sxt/Chl/Tet
Tianguis
Lomita Am/Cb/Cf/Sxt/Tet
Senftenberg Am/Cb/Cf/Sxt/Chl/Ge/Tet Ak
Lomita Am/Cb/Sxt/Pef/Tet Cf
Mercados
Lomita Am/Cf/Sxt/Ge/Tet Cb
Derby Am/Cf Cb
Cannstatt Am/Cb/Tet
Supermercados N. D. Am/Cb/Sxt/Ge/Net/Nf
N. D. Am/Cb/Sxt/Ge
*
Am:Ampicilina; Cb: Carbenicilina;Tet:Tetraciclina; Sxt: Sulfa-trimetoprim; Cf: Cefalotina; Nf: Nitrofurantona; Ge: Gentamicina; Pef: Pefloxacina; Chl: Cloranfenicol;
Net: Netilmicina; Cro: Ceftriaxona; Ak: Amikacina

ND: No determinado

variar con la zona geogrfica y con la poca del ao.22 Se ha sugerido que la presencia de ndulos linfti-
En cualquier caso, la frecuencia relativa observada en cos en los recortes y carne molida de res podra ser una
este estudio dista mucho de ser baja, lo que indica que de las principales fuentes de contaminacin con Salmone-
la carne bovina se mantiene como un vehculo potencial lla.23 Lo anterior a partir de la clonalidad observada entre
para la transmisinde Salmonella spp. cepas presentes en ndulos linfticos y carne cruda.

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Cloranfenicol en muestras de carne cruda y se han reconocido como


Pefloxacina causantes de infecciones transmitidas por alimentos en
Netilmicina humanos en Mxico y en otros pases.6,26-28
Gentamicina
Aunque la distribucin de serotipos de Salmonella
tanto en alimentos como en casos clnicos suele ser muy
Nitrofurantona
variable,1,2,8,29 la predominancia de S. Lomita no coincide
Sulfa-trimetoprim
con estudios anteriores realizados en Mxico,6,9,12,26,30
Tetraciclina en los que se reportan frecuencias nulas de esta serova-
Cefalotina riedad tanto en muestras clnicas como en alimentos.
Carbenicilina No obstante se ha sugerido que el hallazgo de cepas
Ampicilina que podran considerarse exticas en determinadas
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 regiones podra deberse a la globalizacin comercial y
% de cepas resistentes a la intensificacin del turismo, los cuales favorecen la
introduccin e intercambio de distintos serotipos de
Figura 1. Porcentaje de cepas de Salmonella spp.
Salmonella entre pases.31,32
(n=19) resistentes a cada uno de los antibiti-
Desafortunadamente, las muestras incluidas en el
cos probados en el estudio
presente trabajo fueron tomadas slo en punto de venta
y en un corto periodo de tiempo (aproximadamente
ocho meses). Estas limitaciones imposibilitan establecer
las razones que condicionan el predominio de deter-
Adems, la alta prevalencia del patgeno (55-91%) que minados serotipos. Tampoco se encontraron reportes
suele observarse en los ndulos linfticos,22,24 los cuales previos de estudios similares en la ciudad de Mxico
son muy difciles de eliminar por completo de la carne que permitieran establecer comparaciones cronolgi-
durante el faenado en los rastros, explica de manera cas. No obstante, resulta interesante analizar por qu
plausible el hallazgo persistente de tasas de positividad S. Lomita, un serotipo asociado principalmente con las
a Salmonella spp., de moderadas a altas, en muestras de palomas,27,28 fue aislado slo de muestras obtenidas en
carne cruda en los puntos de venta a lo largo de dcadas. el mercado informal. Los expendios informales tienen en
Al parecer, para un mejor control de la disemi- comn el pobre manejo sanitario de la carne y la falta de
nacin de Salmonella a travs de la carne de res, ser refrigeracin, adems de que en estos locales el control
necesario estudiar los factores que expliquen la colo- de plagas es, por lo general, muy limitado o inexistente.
nizacin de los ndulos linfticos por esta bacteria en Sin embargo, esto no explica el predominio de S. Lomita,
bovinos aparentemente sanos. Asimismo, el desarrollo una cepa que no haba sido reportada anteriormente
de estrategias para reducir la contaminacin de carne en muestras de alimentos en Mxico. Aun as, aparece
con el contenido de los ndulos linfticos, desde los como serotipo predominante en carne molida y adems,
rastros, podra ser un factor clave para la mitigacin exhibe un perfil de multirresistencia a antimicrobianos.
de este riesgo. Por ello, sera conveniente realizar otros estudios para
En adicin a lo anterior, se requiere una mejor identificar un origen ms probable, as como los factores
aplicacin de la ley, especficamente en lo relativo al que condicionan su diseminacin en la cadena de abasto
expendio de carne caliente. A pesar de que esta prctica hasta llegar al punto de venta.
est prohibida en la normatividad vigente,25 es tolerada En materia de susceptibilidad a antibiticos, la
en todo el pas. La prueba de ji cuadrada evidenci una elevada tasa de resistencia a -lactmicos, tetraciclina y
asociacin significativa de la frecuencia de positividad a trimetoprim-sulfametoxasol, as como el hecho de que
Salmonella con el mercado informal, donde el porcentaje casi las tres cuartas partes de los aislamientos resultaron
de muestras positivas fue casi seis veces superior en multirresistentes, evidencia que existe una considerable
relacin con los supermercados. Por tanto, es evidente presin de seleccin de cepas en diferentes segmentos
el potencial para reducir el riesgo de diseminacin del de la cadena productiva.
patgeno en la cadena de abasto si tan solo se aplicaran, En este trabajo se observ resistencia a medicamen-
de manera efectiva, las medidas ya contempladas en la tos empleados exclusivamente en teraputica humana,
legislacin vigente. tales como el cloranfenicol, cuyo uso en produccin ani-
Con respecto a los serotipos, afortunadamente no mal est prohibido desde hace dcadas.33 Este hallazgo
se detect ninguno de los de ms alta virulencia (ej. coincide con lo observado en un estudio que se realiz
Enteritidis y Typhimurium DT104). Sin embargo, todos en 2009 en el estado de Hidalgo,10 en donde el porcen-
los que se identificaron se han encontrado anteriormente taje de cepas resistentes a cloranfenicol fue ligeramente

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superior (23.1) al reportado en este trabajo. Ello reafirma Estudios futuros sobre diversidad gentica, presencia
la importancia de evaluar los riesgos relacionados con y mecanismos de transmisin de genes de resistencia
el empleo de antibiticos en medicina humana y vete- y de virulencia, e incluso de secuenciacin completa
rinaria. del genoma de las cepas circulantes, podran ofrecer
Por otra parte, se observ que casi 60% de las cepas informacin vital para mejorar la gestin de este riesgo
de Salmonella mostraron resistencia a sulfa-trimetoprim, microbiolgico.
utilizado para tratar infecciones tanto en humanos
como en animales. Cabe mencionar que el porcentaje Agradecimientos
de resistencia aqu encontrado es tres veces superior al
reportado hace seis aos.10 Adicionalmente, un nmero Esta investigacin fue realizada con financiamiento del
considerable de aislamientos resistieron antibiticos de proyecto SAGARPA-CONACYT 109127. Los autores
amplio espectro, tales como la gentamicina, usada en agradecen la colaboracin del personal del laboratorio
medicina veterinaria y humana en el tratamiento de de microbiologa general de la Escuela Nacional de
mltiples infecciones como septicemias, meningitis, Ciencias Biolgicas, Instituto Politcnico Nacional.
peste, neumonas, entre otras. Asimismo, la resistencia
a pefloxacina, si bien se present slo en una cepa, es Declaracin de conflicto de intereses. Los autores declararon no tener conflicto
de intereses.
de las ms preocupantes, pues se trata del antibitico
de eleccin para tratar casos de salmonelosis entrica
en adultos.34
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vincular las cepas aisladas de la carne con casos clnicos 1. CDC. National Salmonella Surveillance Annual Report Appendices,
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salud pblica de mxico / vol. 58, no. 3, mayo-junio de 2016 377


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