PRACTICA DE LABORATORIO BIOQUIMICA METABOLICA

PRESENTADO POR:

CENEIDA DE JESUS QUICENO AGUDELO

CAMILO

CARLOS HUMBERTO CORTES PATIO - CDIGO: 75147304

DIDIER STEVEN ESTRADA

JAIME ANDRS OSPINA FLREZ- CODIGO 1.088.290.492

JUAN SEBASTIN GMEZ HERNNDEZ - CODIGO 1.096.646.054

JOSE GUILLERMO HERNANDEZ MUOZ CDIGO: 1054987901

VCTOR ALFONSO LPEZ CARMONA - CDIGO 1.096.032.248

STEVEN OSSA VALENCIA CODIGO 1096038358

SEBASTIN MORALES JARAMILLO

MARTHA

Tutor de Practica

Lina Mara Monsalve

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y ADISTANCIA

ECAPMA- AGRONOMA

Noviembre 5 de 2017
 Introduccin

En la prctica se realizaron cinco pruebas las cuales fueron: Anlisis de la ureasa, determinacin en
carbohidratos no estructurales en forrajes, por el mtodo de fenol-cido sulfrico, capacidad amortiguadora de
fluidos y suelos, materia orgnica, anlisis de nitrgeno no proteico, anlisis de ureasa, capacidad
amortiguadora y potencial amortiguador de muestras biolgicas y actividad cataltica de la catalasa
 Objetivos

General

Dar desarrollo a las cinco pruebas propuestas en la gua de desarrollo de laboratorio

Especficos

Determinar la capacidad amortiguadora de un suelo

Determinar la capacidad amortiguadora de muestras biolgicas

Determinar el contenido de urea de muestras biolgicas

Determinar los carbohidratos no estructurales en forrajes

Analizar la actividad cataltica de la catalasa

Analizar el contenido de nitrgeno no proteico en forrajes y suelo

DETERMINACION DE CARBOHIRATOS NO ESTRUCTURALES EN FORRAJES, POR EL
METODO DE FENOL-ACIDO SULFURICO
 CARBOHIDRATOS

ESTRUCTURALES NO ESTRUCTURALES

ALMIDON, AZUCARES SIMPLES

LIGNINA
CELULOSA

FIBRA

PECTINA
HEMICELULOSA

MARCO TEORICO

Los carbohidratos son una gran cantidad de azucares, almidones, celulosa y gomas que contienen carbono,
hidrogeno y oxgeno en cantidades similares.
La principal funcin de los carbohidratos es suministrar energa al cuerpo; especialmente al cerebro y al sistema
nervioso.
Es muy importante el reconocimiento de los carbohidratos para as saber en qu cantidades se encuentra en cada
alimento.

NOTA: Los carbohidratos no estructurales se refiere a los azucares, almidones, cidos orgnicos y pectina.

Wm: peso de la muestra

Vt: Volumen del filtrado
Ast: Absorbencia del estndar
Am: Absorbencia del tubo que contiene el FFCNE

%CNE= Am/Ast x 0,01 x Fd

Fd = 5ml/2ml x 25/ Vf x 100 / Wm

CALCULOS

%CNE = 0,0062/2,3010 x 0,01 x 103,75

%CNE = 0,002694 x 0,01 x 103,75
%CNE = 0,00002694 x 103,75
%CNE = 0,00279502

Anexos

ACTIVIDAD CATALTICA DE LA CATALASA.

Materiales que se utilizaron:

Tijeras Tubo de centrifuga, agitador de vidrio, centrifuga de laboratorio, filtro, hielo, Erlenmeyer, montaje de
titulacin, Tubos de ensayo, gramara digital

Reactivos y qumicos utilizados

Permanganato de potasio (KMnO4), solucin fra de buffer fosfato (0,05M, pH 6,8-7,0) extractos de catalasa
(ECAT)
Procedimiento de extraccin.

Se trabaj con 3 muestras concentrado, (alimento para aves) verdura (apio) y suelo. (Tierra tamizada)

Se pesa muestras picada y pulverizadas: (se registran los pesos de las muestras en la tabla 2en la casilla Wm)

Pulverizado de Suelo Pulverizado de concentrado

Se ubicaron en un tubo de centrifuga y se le adiciona 10 ml de solucin fra de buffer fosfato.

Agitar y centrifugar a 2500rpm durante 5 min.

Muestras Centrifugadas
 Concentrado suelo

Se retira el sobrante, se filtra y se mide el volumen y se registra. (El volumen se registra en la casilla Vf de la
tabla 2)

Se toman 5 ml para depositar en tubos de ensayo y se rotulan con las siglas EVCAT (extracto de verduras),
ECCAT (extracto de concentrado), ESCAT (extracto de suelo) y EBCAT (extracto blanco).

Se colocan las muestras inmediatamente en bao de hielo.

Cuantificacin.

Se toman 4 tubos de ensayo y se asigna rtulos B, 1, 2 Y 3 luego se inicia a adicionar reactivos que se
encuentran en la siguiente tabla.

Tabla 1

Tubos de ensayo
Reactivos (mL)
B 1 2 3
H2O2 0,03M 4 4 4 4
Buffer fosfato 5 4 4 4
H2SO42N 1 0 0 0
EVCAT 0 1 0 0
ECCAT 0 0 1 0
ESCAT 0 0 0 1

A continuacin se alista el montaje de titulacin, se titulara con permanganato de potasio, y se anotara la cantidad
de permanganato utilizada para que el extracto se mantenga de color rosa durante 30 segundos
Una vez terminado el proceso se procede a realizar los clculos, con los datos registrados en la tabla 2

Tabla 2

Muestra/ tubos Indicadores

Wm (g) Vf (mL) VKMnO4 (mL)
Suelo 2,0027 5,2 0,8
concentrado 2,0046 5 1
Verdura 2,0044 5,4 0,5
Blanco 0,1
Tipo de muestra analizadas

Clculos.

Formula:

ACAT= (mL KMnO4 (B) mLKMnO4( tubo)x 0,01 x Fd

Wm x VF

Fd= (10mL/1mL)x 1000 m moles de H202.

Fd= 10,000 mL moles de H2O2

Clculos para la muestra suelo:

ACAT=(0,1mLKMnO40,8 mLKMnO4)x 0,01 x10.00Om moles de H2O2 =

2,0027 g x 5,2 mL

ACAT= 0,7 x 0,01 x 10.00O mLmoles de H2O2 =

2,0027 g x 5,2 mL

ACAT= 0,7 x 0,01 x 10.00OmL moles de H2O2 =

2,0027g x 5,2 mL

ACAT= 0,07 moles de H2O2 =0,0067 g de moles de H202.

10,414g

El suelo utilizado contiene 0,0067 g de moles de perxido de hidrogeno (H202).

Clculos para la muestra harina (concentrado)

ACAT=(0,1mLKMnO41 mLKMnO4)x 0,01 x10.00Om moles de H2O2 =

2,0046g x 5mL

ACAT= 0,9 x 0,01 x 10.00O mL moles de H2O2 =

2,0046g x 5mL

ACAT= 0,9 x 0,01 x 10.00OmL moles de H2O2 =

2,0046g x 5 mL

ACAT= 0,09 moles de H2O2 =0,0089 g de moles de H202.

10,023g

El concentrado utilizado contiene 0,0089 g de moles de perxido de hidrogeno (H202).

Clculos para la muestra verdura:

ACAT=(0,1mLKMnO40,5 mLKMnO4)x 0,01 x10.00Om moles de H2O2 =

2,0044 g x 5,4 mL
ACAT= 0,4 x 0,01 x 10.00O mL moles de H2O2 =

2,0044g x 5,4 mL

ACAT= 0,4 x 0,01 x 10.00OmL moles de H2O2 =

2,0044g x 5,4 mL

ACAT= 0,04 moles de H2O2 =0,0037 g de moles de H202.

10,823 g

La verdura utilizada (Cebolla) contiene 0,0037 g de moles de perxido de hidrogeno (H202).

Aplicabilidad de los anlisis

Importancia Aplicabilidad
La catalasa descomponen el perxido de Desinfectante
hidrogeno en oxgeno y agua fundamental para
el buen funcionamiento de las clulas animal y
vegetal
La catalasa es una enzima que se encuentra en Esterilizador
las clulas de los tejidos animales y vegetales.
Los catalizadores naturales son enzimas que Antisepsia
aceleran o controlan una reaccin qumica.

Se puede realizar este anlisis cuando se manifiesta sntomas de una enfermedad llamada acatalasemia presenta
sntomas de ausencia de catalasa en los glbulos rojos y con severas infecciones gangrenosas de la boca y as
puede producir perdida de los dientes y graves destrucciones de los maxilares y regiones blanda que los cubre.

en plantas que produzcan un alto contenido de toxicidad para determinar la cantidad de perxido de hidrxido
que contiene y evitar posibles reacciones fuertes de las clulas.

CAPACIDAD AMORTIGUADORA DE FLUIDOS Y SUELOS, MATERIA ORGANICA

Muestra de Suelo
Se tom aproximadamente 1 Libra de muestra de capa orgnica (primera capa hasta 10-15 cm de profundidad,
capa ms negra) posteriormente se empaco en bolsa Ziploc (bolsa con cierre hermtico).
Materiales y equipos.
Erienmeyer de 125 ml, pipetas graduadas de 10 ml , esptula metlica, agitador de video probeta graduada de
100 ml bureta de 25ml, Soporte universal, beaker de 250 ml, potencimetro, el equipo de titulacin, balanza
analtica espectrofotmetro, celdas espectrofotmetricas, Embudos, papel filtro, muestras de suelo.
Reactivos.
H2SO4 Concentrado K2CR207 1N7, H3PO4, difenilamina , FESO4 1N3 NAOH 0,1N, HCL 0,1 N fenolftalena,
Agua destilada y solucin buffer fosfato.
procedimiento.
1. carbono orgnico CO, Mtodo de titulacin volumtrica.
Se tomo muestra de acuerdo con las recomendaciones. Y se recolecto la informacin pertinente.
Informacin del suelo
Ubicacin del suelo: La Tebaida Quindo, Finca el edn
Altura sobre el nivel del mar: 1200
Textura: Franco arenoso

se tamizo la muestra, y se pes 0,40 g registrndose el valor como Wm y coloco en beaker de 200 ml.

se adicion 10 ml de dicromato de potasio1, se agit con varilla de vidrio por un minuto

En la cabina y extraccin de gases agreg cuidadosamente 10 ml cido sulfrico concentrado, se agit

con varilla de vidrio por 2 minutos y se dej enfriar por 15 minutos.
 Adicionamos agua destilada hasta completar 100 ml agitando cuidadosamente sobre un minuto y se dej
reposar una hora.

Al cabo de este tiempo alistamos montaje de filtracin y filtramos con papel filtro hasta obtener 20 ml
de filtrado.
se tom 10 ml de filtrado y lo depositamos en un Erlenmeyer y se afor hasta 100 ml con agua destilada,
agitamos por 1 minuto.
agregamos 5 ml De cido fosfrico Concentrado, agitamos por 1 minuto y se dej reposar por 5
minutos.

Agregamos 30 gotas de di fenilamina agitando suavemente por 30 segundos

 Alistar montaje de titulacin (lavar, purgar y cargar la bureta con la solucin titulante: sulfato ferroso
1N.
colocamos el Erlenmeyer que contiene la solucin diluida de suelo debajo de la bureta y titular
suavemente Adicionando el sulfato sobre la solucin hasta que aparezca y permanezca un color verde
esmeralda brillante.

registramos el volumen de sulfato ferroso gastado en la titulacin V Fe deSO4 .

Titulamos un blanco de reactivo y se registr el volumen B.

Carbono orgnico CO, mtodo espectrofotmetrico.

Alistamos el espectrofotmetro a una longitud de onda de 590 nanmetros.

Si calibr el aparato con agua destilada, ajustando a cero la absorbancia.
Colocamos 5 ml de filtrado anterior en la celda espectrofotmetrica se deposit en el espectrofotmetro
y lemos la absorbancia.
Se registraron todos los valores obtenidos en la tabla de datos 1

Capacidad amortiguadora. mtodo potenciomtrico

se alistaron 4 beakers y rotulamos del 1 al 4
Al primer frasco y segundo frasco se adicion 20 gramos de suelo tamizado y 40 ml de agua destilada,
agitamos con varilla de vidrio Por cinco minutos Se introdujo el electrodo de potencimetro Y
esperamos 60 segundos, se registr el PH
Posteriormente agregamos 5 ml de NaOH 0,1N agitamos de nuevo por un minuto y medimos el PH
 En el tercer y cuarto beakers, se adicion 20 ml de agua destilada y 20 ml de solucin buffer PH 7,0
respectivamente, se introdujo El electrodo del potencimetro Esperamos 60 segundos y se observ el
PH, llevamos registro.

Posteriormente agregamos 5 ml de NaOH 0,1N Agitamos de nuevo por minuto y medimos el PH

Se registraron todos los valores en la tabla de datos 2

Datos obtenidos
Clculos
Resultados
 ANLISIS DE NITRGENO NO PROTEICO

Muchos organismos superiores no pueden obtener aminocidos de otras formas, ms que absorbindolos de la
dieta. Los cuales pueden ser convertir algunos aminocidos en otros diferentes.

Los compuestos que forman el NNP son los que contienen amonaco, nitritos y nitratos y otros como la urea,
el biuret o el cido rico.

Los organismos que lo pueden utilizar el NNP son los hongos, las plantas y algas, bacterias y organismos que
viven en simbiosis con ellos.

En la ganadera de rumiantes es de gran importancia ya que las grandes colonias de bacterias que contienen en
el rumen pueden convertir alimento con un bajo nivel de protena en uno suficientemente nutritivo gracias a la
adicin de NNP, normalmente en forma de urea. O el aprovechamiento de productos de muy poco valor como
alimento, como estircol de animales Mono gstricos como gallinas o cerdos.

Para este anlisis se utilizo

Se tomaron muestras de suelo correspondiente a la finca la doctora en la vereda la paz del municipio de
Chinchin, que se encuentra a una altura de 1380 msnm con un cultivo de caf variedad castillo, con un tipo de
suelo unidad Chinchin.

E igual forma se utiliz muestra de pasto de la finca la Paz vereda la paloma del municipio de Armenia, a una
altura de 1540 msnm.

Reactivos utilizados:

cido tricloroactico (ATA) al 10% (CL3-C-COOH)

Agua destilada

Se empez por secar el suelo y se tomaron de cada muestra 2,0 g pesados en gramera analtica, luego se
adiciono 20 ml de agua destilada fra y se agito por 1 minuto, se dejo reposar la mezcla por 15 min,
adicionalmente a cada muestra se adiciono 30 ml de solucin de ATA, posteriormente se agito por 1 minuto.

Al dejar reposar por 20 minutos a temperatura ambiente se filtr con papel filtro para medir el volumen
filtrado (Vf) que se encuentra en la tabla 1.

Tabla 1

ANALISIS CANTIDAD ADIC. H2O-DES ADIC. ATA CANTIDA

FILTRADA

FORRAJE 2,00 GR 20 ML 30 ML 44 ML

SUELO 2,00 GR 20ML 30 ML 45 ML

Se tomaron 5ml del filtrado de cada muestra, totalmente rotulados de la siguiente forma

FFNNP: filtrado de forraje para nitrgeno no proteico

FSNNP: filtrado de suelo para nitrgeno no proteico.

Luego las muestras fueron cuantificadas en nitrgeno del filtrado por medio del mtodo espectrofotmetro de
Biuretlowry a una longitud de onda de ( )de 540 manmetros (nm) y calibrado o configurado con una solucin
de tubo blanco, los cuales se tomaron 4 tubos del ensayo rotulados de la siguiente forma

B: Blanco

ST: Estandar

M-1: Muestra 1 forraje

M-2: Muestra 2 suelo

Cada tubo contena lo siguiente

Tabla 2.

TUBO DE ENSAYOS

B ST M-1 M-1
Reactivos (ml)

Agua destilada 2

Albumina 0,5% 2

FFNNP 2

FSNNP 2

Reactivo de Biuret 3 3 3 3

RESULTADOS ANALISIS

Tabla 3

TUBO B ST M-1 M-2

RESULTADO O,5040 0.5679 0,6140 0,4952

ADSORBANCIA

De acuerdo a los resultados de estos anlisis podemos concluir los siguientes datos que se obtuvieron con las
muestras analizadas

RESULTADO FD

Suelo = fd = 5ml x 50 x 10 =2500 = 13,88

2m 45 ml 2gr 180

Forraje = fd = 5ml x 50 x 10 =2500 = 14,20

2m 44 ml 2gr 176
NITRGENO NO PROTEICO (NNP)

Suelo % NNP = 0,4885 X 0,5 X 13,88 = 6,846

0,4952

Forraje % NNP = 0,5010 X 0,5 X 14,20 = 5,793

ANEXOS Fotos del proceso en el laboratorio

 ANALISIS DE UREASA
Materiales utilizados

- Tubos de ensayo con gradilla.

- Pinzas para bureta.
- Erlenmeyer de 125 ml.
- Pipetas de 5 y 10 ml.
- Matraz aforado de 100 ml.
- Bao termostato.
- Beaker de 400 ml.
- Bureta de 25 ml.
- Soporte universal.

Lista de reactivos: Ureasa al 0,1% buffer fosfato de pH = 7.0, urea 0.25M, HgCl2 al 1%, HCl 0.1N, indicador de Tashiro.
Procedimiento

Extraccin y solubilizacin de ureasa en Harinas, suelos forraje (mtodo salting out)

En el caso de suelo, se rotula:

ESAU: Extracto de suelo para actividad Ureasica y para forraje:

EFAU: Extracto de forraje para actividad uresica.

Las materias primas, estn previamente picadas, cernidas,

Datos de peso:
Forraje 1 gramo

Se pes y se cortaron entre 8 y 10 cm divididos en dos recipientes cada uno don 0.5 gramos.

Concentrado: se
pesaron 0.5
gramos en dos
tubos de ensayo.

Suelo: Una vez

cernido, se pes 1
gramo y se
dividi en 2 tubos de ensayo cada uno con 0.5 gramos.

Se adicion 0.5 ml de NaCl 1% en cada tubo y luego se llevaron a la centrifuga.

Se obtuvo un sobrenadante y precipitados (fibras grasas). Este dato es para medir el volumen

El sobrenadante y precipitado se obtiene a travs de un filtro.

Una vez obtenido la sustancia a caer a la probeta se lleva a un tubo de ensayo rotulado.
CUANTIFICACION DE LA AU.

Mezcla de reactivos

Reactivos B St 1 2 3
(ml) / Tubos
Urea 0,25M 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
Buffer 5,0 4,5 4,5 4,5 4,5
fosfatos
PH=7.0
HgCl 2 4 - - - -
(Gotas)
Ureasa 0,5% - 0,5 - - -
EHUA (ml) - - 0,5 - -
ESAU (ml) - - - 0,5 -
EFAU (ml) - - - - 0,5
Agitar los tubos (10 Seg), dejar en bao de maria a 37 Grados Centgrados, durante 20 min, al final
adicionar.
HgCl2 - 4 4 4 4
(Gotas)

Titulacin

Alistar el montaje de titulacin: lavar, purgar, cargar y enrasar la bureta con HCl 0,1 N.
Pasar la solucin del tubo blanco a un Erlenmeyer o Beaker y adicionar 3 gotas de indicador de color Tashiro, un
color azul-verdoso, es prueba positiva para el ion Amonio (NH4*).
Colocar el Erlenmeyer que contiene la solucin blanco, debajo la bureta y adicionar lentamente el HCl, hasta que
aparezca y permanezca un color rosada violceo.
Esto indica que los equivalentes - gramo del hidrxido de amonio fueron neutralizados por los equivalentes
gramos de cido clorhdrico.
Registrar en su tabla de datos, los ml de HCl gastados en la titulacin del blanco.
Repetir el procedimiento anterior, con el tubo Estndar y anotar lo ml empleados de HCl.
Continuar el proceso con los tubos 1,2 y 3, que contienen los extractos de suelo, harina y forraje; registrar los ml
gastados de HCl en la tabla de datos.

Reacciones

Blanco: se puso blanco turbio cuando se aplic Hgcl2

Estndar: No se detecta una reaccin a la vista humana.

Harina: Turbulencia en la superficie de la mezcla.

Suelo: visualizacin densidad aceitosa.

Forraje: no se detecta reaccin a la vista.

Se agitaron los tubos por 10 segundos y se dejaron en el bao de mara por 2 min a 37 grados, una vez pasado los 20
minutos, se aplicaron 4 gotas de HgCl2

Tabla de Datos

Tabla 1. Datos obtenidos para actividad uresica de suelos, forrajes o harinas

Muestras / tubos INDICADORES

Wm (g) Vf (ml) V HCl (ml)
Suelo 1 8 18
Harina 1 1,5 19
Forraje 1 6 18
 estndar 18
Blanco 16
Tipo de muestras Origen, ubicacin geogrfica, regin, agro climatologa.
analizadas

Clculos

Actividad Uresica en el tubo estndar

( )0.11000
=
2()

(18 16)0.11000
= =5
2()

10
=
5

Actividad Uresica de la harina

( () ),
= =
()

=
()

( ),
= = .

Actividad Ureasica en el suelo (tubo 2)

( () ).
=
()

=
()

( ).
= =
()

Actividad Uresica del forraje

( () ).
=
()

=
()

( ).
= =

AU
Estndar 5
Harina 7.5
Suelo 5
Forraje 5

NOTA:
No se us el factor de disolucin, no se aplica porque no se diluy, se usaron las muestras completas.
De actividad Ureasica para cada una de las muestras.

CAPACIDAD AMORTIGUADORA Y POTENCIAL AMORTIGUADOR DE MUESTRAS

BIOLOGICAS

Materiales y equipos
 - 3 Erlenmeyer de 125 ml
- Probeta graduada de 100 ml
- Bureta de 25 ml
- Soporte universal
- Beaker de 250 ml
- Muestra de leche

Reactivos

- NaOH 0,1N
- Fenolftalena
- Agua destilada
- Solucin buffer fosfato

Procedimiento

1- Se rotularon los Erlenmeyer del uno al 3 , respectivamente cada uno

2- Al Erlenmeyer nmero se adiciona 20 ml de agua destilada

3- Al Erlenmeyer nmero dos se adiciona 20 ml de solucin buffer
4- Al Erlenmeyer nmero tres se adiciona 20 ml de leche

5- Se colocan en cada Erlenmeyer 2 gotas de fenolftalena

6- Se agita por 10 segundos cada uno
7- Se alista el montaje debido para la titulacin , ubicando la bureta en el soporte universal y colocando en
ella 25 ml de NaOH 0,1N
8- Colocamos el primer Erlenmeyer con el agua destilada y las gotas de fenolftalena bajo la bureta y
empezamos a adicional NaOH 0.1N, hasta obtener un color rosado

9- Cuando colocamos el primer Erlenmeyer para hacer la titulacin tememos que al adicional 0,2 mililitros
de NaOH 0,1N, la solucin se torna de color rosado.
10- Cuando colocamos el segundo Erlenmeyer con la solucin de buffer para hacer la titulacin tememos
que adicionamos los 25 ml de NaOH 0,1N, y la solucin no se torna rosada en ningn momento.
11- Cuando colocamos el tercer Erlenmeyer con la leche para hacer la titulacin tememos que al adicional
6,5 mililitros de NaOH 0,1N, la solucin se torna de color rosado.
Tabla de datos

Muestra Vm (ml) V NaOH 0,1N (ml)

Agua destilada 20 ml 0,2 ml
Buffer fosfato 20 ml 25 ml ( no hubo reaccin)
Leche 20 ml 6,5 ml

CLCULOS

Mtodo de titulacin Volumtrica

Capacidad amortiguadora

,
:
()

Muestras 1- Agua destilada

0,2 0,1 1000

:
20 ()

: 1

Muestra 2 Solucin buffer

En esta muestra se realiz el proceso de titulacin, se adiciono el NaOH 0,1N a la solucin, pero no hubo ninguna
reaccin, esto nos indica que la solucin buffer no tiene capacidad de amortiguacin.

Muestra 3- leche
 6,5 0,1 1000
:
20 ()

: 32,5
 Conclusiones

La enzima catalasa est presente en muchos tipos de clulas y la funcin principal es proteger a la clulas del
efecto toxico del perxido de hidrogeno, esta enzima se encarga de descomponer el perxido de hidrogeno en
agua y oxigeno esenciales para vida de la clula. Esta actividad nos ayuda a determinar la cantidad de perxido
de hidrogeno que se encuentra en un tejido animal o vegetal de igual forma nos demuestra que cantidad de agua
y oxigeno pude proporciona por la cantidad de perxido de hidrogeno que se encuentra en dicho tejido.

Al analizar el contenido de toxicidad de un tejido vegetal o animal evitando suministros inadecuados y exagerados
de los tejidos con un alto grado de oxidacin.
 Bibliografa

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