BIOQUIMICA 201103_35

UNIDAD 2: ÁCIDOS NUCLEICOS - FASE 4 TRABAJO COLABORATIVO 1

PRESENTADO POR:
MAIRA ALEJANDRA GALLEGO NARVÁEZ 1.116.238.414
CAMILA ALEJANDRA MENDOZA MONTANO 1.116.264.760
OLGA FERNANDA REYES 1.116.259.779
GLORIA ELSY AGUDELO 1.116.238.059

TUTOR
ALBERTO GARCIA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA - UNAD

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS, TECNOLOGÍA E INGENIERÍA – ECBTI
CEAD PALMIRA
ABRIL 20 DE 2017
INTRODUCCIÓN
En este trabajo se estudiaran conocimientos básicos acerca de las Biomoléculas y su
metabolismo y la utilización de la ingeniería de la genética, al mismo tiempo de la
importancia de la insulina, cuando el cuerpo humano no es capaz de producir esta
hormona que se fabrica en el páncreas y que permite que la glucosa de los alimentos
pase a las células del organismo, en la ingeniería genética la producción de insulina es
un avance muy importante para la producción de esta en pacientes con diabetes; La
bioquímica es muy importante ya que esta es la encargada de estudiar la composición
química de los seres vivos en especial las proteínas, carbohidratos, lípidos y ácidos
nucleicos, además de otras pequeñas moléculas presentes en las células y las
reacciones químicas que sufren estos compuestos (metabolismo) que les permiten
obtener energía (catabolismo) y generar biomoléculas propias (anabolismo).
La bioquímica es frecuentemente descrita como el estudio de la química de la vida e
incluye el estudio de todas las formas de vida y utiliza los conceptos básicos derivados
de la biología, química, física y matemáticas.

OBJETIVOS

 Analizar En términos de bioquímica la composición y su estructura de un ácido

nucleico bacteriano es idéntico o igual a cualquier célula llámese eucariota o
cualquier otro tipo de célula.

 Determinar La importancia de ingeniería genética dado que es técnica que

consiste en la introducción de genes en el genoma de un individuo que carece
cuando carece de estos.

 Demostrar que la ingeniería genética la producción de insulina es un avance

muy importante para la producción de esta en pacientes con La diabetes esta
insulina es la hormona hipoglucemiante lo que hace de reducir la concentración
de glucosa en sangre.

DESARROLLO DE LA ACTIVIDAD
1.1 Situación problema 1

Muchas bacterias poseen además ADN extra cromosómico, también circular y cerrado,
denominado ADN plasmídico por estar contenido en los plásmidos. Éstos, portan
información génica para muchas funciones que no son esenciales para la célula en
condiciones normales de crecimiento. Este plásmido ha sido aprovechado para realizar
la inserción de un gen de interés y en 1978, se logró cultivar bacterias E.coli
(Escherichia coli), la cual contenía un gen humano para producir insulina en gran
cantidades y a bajo costo. Aunque esta alternativa fue contundente dio paso a nuevas
aplicaciones biotécnicas, mejorando la calidad de vida de las personas diabéticas que
no pueden Producir secreción de insulina por las células β del páncreas en respuesta al
aumento de los niveles de glucosa.

 1 Analice En términos bioquímicos la composición y estructura de los ácidos

nucleicos bacterianos e identifique si hay diferencia estructurales con el de otra
célula (p.e eucariotas).

Los ácidos nucleicos son dos: ADN (ácido desoxirribonucleico) y ARN (ácido
ribonucleico) estos son biopolímeros de nucleótidos formados a su vez por:

Un
Un azúcar
azúcar (puede
(puede Un grupo fosfato
ser
ser una
una pentosa
pentosa == Una
Una base
base
monosacárido)
monosacárido) nitrogenada
nitrogenada

Unidos por enlaces fosfodiéster y su función es a almacenamiento y transmisión

genética

El ADN es (BICATENARIA) helicoidal, anti paralela, está formado por dos

cadenas de nucleótidos y es complementaria

EL ARN está formado por una sola cadena mono catenaria, es lineal, no es
complementaria participa en la formación de las proteinas y existen tres tipos:

 Mensajero: copia información y lo transfiere hacia el ribosoma

 Ribosómico: se asocia a las proteínas y forma ribosomas
 Transferencia: se une a los aminoácidos y transfiere una proteína a otra
El tipo de proteína en una célula, es lo que determina la función de esta.
En términos de bioquímica la composición y su estructura de un ácido nucleico
bacteriano es idéntico o igual a cualquier célula llámese eucariota o cualquier otra,
pero hay que recordar que los ácidos nucleicos son macromoléculas compuestas de
nucleótidos unidos en forma covalente por medio de enlaces fosfodiester entre los
carbonos de las posiciones 3´ y 5´ de dos residuos de azúcares adyacentes. Estos
forman un esqueleto de azúcar y fosfatos en toda esta macromolécula, la variación
entre los nucleótidos que constituyen la cadena de ácido nucleico y bases nitrogenadas
ADN son: adenina (A), timina (T), citocina (C) y guanina (G) y para el ácido ribonucleico
(ARN) son en lugar de timina, el uracilo (U). La A y G se denominan bases púricas o
purinas, mientras que T, U, y C se denominan bases pirimidínicas o pirimidinas.
normalmente las células se enfrentan a un problema para almacenar cadenas largas
como las del ADN y que en las células eucariotas que poseen histonas asociadas a su
genoma las cuales compactan el ADN en estructuras tipo nucleosomas se da de
manera fácil en cualquier de las células eucariotas, Por lo tanto, deben compactar su
ADN de otra manera esta habilidad con la que no cuentan las células bacterianas, por
otra parte solucionan dicho inconveniente adaptando el ADN a una estructura terciaria
denominada súper enrollamiento, el cual consiste en enrollar su propio eje de doble
hélice sobre sí mismo. Este súper enrollamiento se dice que tiene sentido negativo
porque tiene el sentido contrario al enrollamiento de una hebra de ADN sobre la otra.

 2 Analice La importancia de ingeniería genética en una técnica que consiste en

la introducción de genes en el genoma de un individuo que carece de ellos, esto
se realiza a través de las enzimas de restricción que son capaces de "cortar" el
ADN en puntos concretos; denominándose ADN recombinante, el que se ha
formado cuando se intercala un segmento de ADN extraño en un ADN receptor.

Se realiza a través de las enzimas de restricción que son capaces de "cortar" el ADN
en puntos concretos. Se denomina ADN recombinante al que se ha formado al
intercalar un segmento de ADN extraño un ADN receptor. Por ejemplo, la integración
de un ADN vírico en un ADN celular, esta tecnología nos permite obtener fragmentos de
ADN en cantidades ilimitadas, que llevará además el gen o los genes que se desee.
Este ADN puede incorporarse a las células de otros organismos (vegetales, animales,
bacterias...) en los que se podrá "expresar" la información de dichos genes. (De una
manera muy simple podemos decir que "cortamos" un gen humano y se lo "pegamos"
al ADN de una bacteria; si por ejemplo es el gen que regula la fabricación de insulina, lo
que haríamos al ponérselo a una bacteria es "obligar" a ésta a que fabrique la insulina.
Actuación de las distintas enzimas de restricción, se pueden separar por tamaños, es
decir, según el número de pares de nucleótidos que llevan, mediante la
técnica de electroforesis y así estudiar los distintos trozos. Según donde se hallen las
secuencias de reconocimiento, un gen determinado puede estar fragmentado en varios
trozos, o bien un trozo puede contener varios genes, posibilidades que hay que
confirmar. En el proceso de la electroforesis se prepara una mezcla de fragmentos de
ADN y se ponen en distintas soluciones. Los fragmentos se desplazan en relación
inversa con su tamaño, los fragmentos más pequeños se mueven rápidamente,
mientras que los grandes lo hacen muy lentamente.

 3 Analice La insulina es como una llave que abre la cerradura de las puertas de
las células del cuerpo para que la glucosa (azúcar en la sangre) pueda entrar y
sea utilizada como energía. La glucosa no puede entrar en las células, se
acumula en la sangre.
Si la glucosa no puede entrar en las células, se acumula en la sangre. Si se deja sin
tratamiento, la acumulación de azúcar en la sangre puede causar complicaciones a
largo plazo. Además, cuando los niveles de azúcar alcanzan cierto nivel, los riñones
tratan de eliminarla por medio de la orina, lo que quiere decir que necesitará orinar con
más frecuencia. Esto puede hacer que se sienta cansado, sediento y hambriento.
Puede también empezar a perder peso. Su cuerpo empezará a formar energía de un
azúcar complejo llamado glucógeno, que se almacena en el hígado y músculos. El
hígado convierte el glucógeno en glucosa y lo libera en el torrente sanguíneo cuando
se está en estrés o cuando se tiene mucha hambre. Cuando la insulina está presente,
los músculos pueden utilizar el glucógeno como energía sin tener que liberarlo al
torrente sanguíneo.
Mapa conceptual de la situación 1 “resumen”

Situación 1
En las bacterias poseen además ADN extra cromosómico, también circular
y cerrado, denominado ADN plasmídico por estar contenido en los
plásmidos. Éstos, portan información génica para muchas funciones que
no son esenciales para la célula en condiciones normales de crecimiento.

1 Analice: en términos bioquímicos, 2 Analice: La importancia de 3 Analice: La insulina es como una

diferencia estructural entre los
ácidos nucleicos bacterianos con el
de otra célula (p.e eucariotas).
ingeniería genética en una técnica
que consiste en la introducción de
genes en el genoma de un
individuo que carece de ellos.
llave que abre la cerradura de las
puertas de las células del cuerpo
para que la glucosa (azúcar en la
sangre) pueda entrar y sea utilizada
como energía.

 En términos de bioquímica la  Se realiza por medio de enzimas

composición y su estructura de
un ácido nucleico bacteriano es
idéntico o igual a cualquier célula
llámese eucariota.
 Las células enfrenta un problema
para almacenar cadenas largas
como las del ADN y que en las
células eucariotas que poseen
histonas asociadas.
de restricción que son capaces
de "cortar" el ADN en puntos
concretos.
 Con la ingeniería genética por
medio de esta tecnología nos
permite obtener fragmentos de
ADN en cantidades ilimitadas.
 Si la glucosa no puede entrar en
las células, se acumula en la
sangre puede causar
complicaciones a largo plazo ya
que alcanza el nivel el más alto
y pueda que se sienta cansado,
sediento y hambriento
empezando a formar glucógeno.
 2. Situación problema 2 La inhibición enzimática (paso 1)

Gran parte de la farmacoterapia está basada en los conceptos la inhibición enzimática.

Los fármacos se diseñan en la inhibición específica de la ruta metabólica y se puede
destacar fármacos antivíricos, antibacterianos y antitumorales. En el caso de los
envenenamientos irreversible se conoce también como "envenenamiento" del enzima.
Por ejemplo algunos compuestos organofosforados tóxicos llamados venenos
nerviosos, que se utilizan como insecticidas, actúan inhibiendo irreversiblemente al
enzima acetilcolinesterasa, la cual interviene en la actividad del sistema nervioso.

 1 Analice. Los tipos de inhibición que existen y la importancia tanto en la

regulación del metabolismo celular. Igualmente es importante reconocer la
acción de la sustancias extrañas al organismo pueden causar alteraciones en el
funcionamiento celular.

Si bien sabemos la inhibición enzimática es un compuesto que impide que algunas

enzimas se catalicen. De esta forma inhiben el proceso de las enzimas específicas. En
este grupo de inhibidores podemos encontrar fármacos, venenos, antibióticos o
conservantes alimentarios. Un ejemplo de envenenamiento podría ser por toxinas de
origen bacteriano como el (Botulismo : Exoneurotoxinas del Clostridium botulinum, las
cuáles inhiben la secreción del receptor de la acetolcolina a nivel del terminal
sináptico.) o por metales pesados como el (Mercurio: Produce síntomas a nivel del
SNC: temblor, ataxia y alteraciones neuropsiquiatrías; junto con afectación del SNP en
forma de poli neuropatía dolorosa y afectación del sistema nervioso autónomo) En
ambos casos pueden causar la muerte. La inhibición suicida es un tipo común de
inhibición irreversible donde la enzima convierte al inhibidor en una sustancia reactiva
en su centro activo. Un ejemplo de esto es el inhibidor de biosintetizadores
de poliaminas α-difluorometilornitina o DFMO, que es un análogo del
aminoácido ornitina, y es usado para tratar la Tripanosomiasis Africana (enfermedad del
sueño). La ornitina decarboxilasa puede catalizar la descarboxilación del DFMO
sustituyendo a la ornitina, como se muestra en la figura del apartado anterior. Sin
embargo, esta reacción de descarboxilación es seguida por la eliminación del átomo de
flúor, lo que convierte a este intermediario en una imina, una especie
altamente electrofílica. Esta forma reactiva del DFMO reacciona posteriormente con un
residuo de cisteína o lisina en el centro activo para inactivar la enzima
irreversiblemente.

 2 Analice Los inhibidores reversibles se combinan transitoriamente con el

enzima, de manera parecida a como lo hacen los propios sustratos. Algunos
inhibidores reversibles no se combinan con el enzima libre sino con el complejo
enzima-sustrato. NOTA-1: La comprensión de están variantes de la actividad
 enzimática ha cambiado la industria farmacológica, de alimentos, desarrollos
biotecnológicos y de la industria, de ahí la importancia de su comprensión.

Una inhibición enzimática irreversible es cuando, modifica o destruye el enzima, y

este no puede recuperar su actividad nuevamente. ¿Por qué se dice que es
irreversible?, esto es porque la enzima colisiona con el inhibidor no puede seguir
catalizando debido a la toxicidad de estos compuestos ya que tienen una concentración
muy alta dentro de un sistema viviente, y pueden detener una vía metabólica debido a
la pérdida total de alguna de las enzimas que catalizan esa serie de reacciones. Los
inhibidores reversibles se combinan transitoriamente con el enzima, de manera
parecida a como lo hacen los propios sustratos. Algunos inhibidores reversibles no se
combinan con el enzima libre sino con el complejo enzima-sustrato. Como se ha
definido un inhibidor enzimático son moléculas que se unen a enzimas y disminuyen
su actividad, fueron creados para imitar el estado de transición o intermedio de una
reacción catalizada por una enzima como por ejemplo el Ritonavir que es un inhibidor
de la proteasa, una clase muy efectiva de fármacos antirretrovirales usados para tratar
el VIH.

La inhibición enzimática reversible comprende tres tipos:

 Inhibición competitiva: ocurre es cuando el sustrato y el inhibidor no se

pueden unir a la misma enzima al mismo tiempo.
 Inhibición no competitiva: que es cuando el sustrato y el inhibidor se pueden
unir a la enzima al mismo tiempo, sin embargo el inhibidor afecta la unión de
sustrato y viceversa
 Inhibición mixta: ocurre cuando al unirse el inhibidor la enzima, esta reduce su
actividad pero no afecta la unión del sustrato, por lo tanto el grado de inhibición
depende de la concentración del inhibidor
Mapa conceptual de la situación 2 “resumen”

Situación 2. Gran parte de la farmacoterapia está basada en los

conceptos la inhibición enzimática, Los fármacos se diseñan en la
inhibición específica de la ruta metabólica y se puede destacar fármacos
antivíricos, antibacterianos y antitumorales.

2 Analice: Los inhibidores

1 Analice: Los tipos de inhibición que existen y reversibles se combinan
la importancia tanto en la regulación del transitoriamente con el enzima, de
metabolismo celular. Reconocer la acción de manera parecida a como lo hacen
las sustancias extrañas al organismo puede los propios sustratos, algunos no se
causar alteraciones combinan con el enzima libre sino
con el complejo enzima-sustrato.

 la inhibición enzimática es un
 La inhibición enzimática irreversible es cuando,
compuesto que impide que
modifica o destruye el enzima, y este no puede
algunas enzimas se catalicen.
recuperar su actividad nuevamente y se vuelven
 En este grupo de inhibidores
irreversibles porque la enzima colisiona con el
podemos encontrar fármacos,
inhibidor no puede seguir catalizando debido a la
venenos, antibióticos o
toxicidad de estos compuestos por sus
conservantes alimentarios.
concentraciones altas.
 También se puede encontrar
 Algunos inhibidores reversibles no se combinan
La inhibición suicida es un tipo
con el enzima libre sino con el complejo enzima-
común de inhibición irreversible
sustrato.
donde la enzima convierte al
inhibidor en una sustancia.
reactiva en su centro activo
(Paso 2)
Para esta actividad realice el cálculo de la tabla 1. Para dichos cálculos, utiliza el
método de Lineweaver – Burk, Calcule los recíprocos de la actividad enzimática y
concentración de sustrato y grafique 1/v como función de 1/[S].

De esta gráfica, determine los valores para Vmax y Km, determinando los recíprocos
de los interceptos en Y y X de la gráfica. Consulte el documento: Aplicación de las
herramientas informáticas en el tratamiento de la información científico de
Mauricio Restrepo Gallego

El Método de Lineweaver – Burk

[s](Mm) Vo(Mm/min) 1/[s] 1/v0

50 10 0,02 0,1
100 19 0,01 0,052632
160 29 0,00625 0,034483
190 34 0,005263 0,029412
210 44 0,004762 0,022727
240 49 0,004167 0,020408
290 46 0,003448 0,021739
300 51 0,003333 0,019608
400 58 0,0025 0,017241
500 63 0,002 0,015873 m b
720 73 0,001389 0,013699 4,692306 0,004997
800 81 0,00125 0,012346
1000 87 0,001 0,011494

1. Analice las principales características estructurales de las enzimas, sitio activo, la

formación de complejos y la cinética enzimática Modelo de Michaelis y Menten
(Dependencia de la concentración de sustrato).

Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentración de la

enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite. Las reacciones de orden
cero, se refieren a aquéllas en las que la velocidad de la reacción es independiente de
la concentración de reactantes. Pará una reacción catalizada por una enzima, se tiene
diferentes órdenes de reacción, dependiendo de la concentración del sustrato. En el
ejemplo de la gráfica se tiene una concentración fija y constante de enzima que no
varía a lo largo del experimento. Lo único que cambia es la concentración del sustrato.
A bajas concentraciones de sustrato, la velocidad de la reacción depende de la
tendencia inherente a reaccionar en la superficie de la enzima y de la concentración del
sustrato, por lo que la velocidad aumenta al aumentar la concentración del sustrato. En
esta parte de la curva se tiene una típica reacción de primer orden. En el extremo
derecho de la gráfica.
EL modelo cinético de michaelis-menten
El planteamiento del modelo se inicia con la suposición de que las reacciones
catalizadas por una enzima proceden en dos pasos. En la primera etapa, la enzima se
una al sustrato para dar el complejo enzima-sustrato [ES] en donde K1 es la constantes
de velocidad de segundo orden que describe la interacción de la enzima con el
sustrato; k2 es la constante de velocidad de primer orden para la disociación del
complejo ES y Ks la constante de equilibrio para la disociación del complejo ES. En la
segunda etapa, el complejo ES forma el producto (P) y lo libera con una constante de
velocidad de primer orden que se llama constante catalítica (K3), debido a que está
asociada al proceso catalítico de la transformación del sustrato en producto. En los
primeros momentos de la reacción la concentración del producto P, es depreciable y se
hace la suposición simplificadora de que puede ignorarse la reacción inversa PS.
3. Analice Significado biológico de Km. En términos prácticos la K m, como una
medida de la afinidad de la enzima por su sustrato, más pequeño es su valor
mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato.

Teniendo en cuenta la importancia de Km debemos precisar:

 El Km es la concentración de sustrato para la que la velocidad de reacción es

la mitad de la velocidad máxima.

 El valor de Km me ayuda a identificar la afinidad de la enzima con el sustrato,

por tanto:
Km = Menos afinidad de enzima con sustrato
Km = Mayor afinidad de enzima con sustrato

 Los valores de Km de muchas enzimas son próximos a los de la

concentración fisiológica de sus sustratos por tanto debemos tener en cuenta
que variaciones en (s) pueden suponer grandes cambios en la velocidad de
toda la ruta metabólica. En la gráfica se puede observar que la enzima con alta
afinidad tiene un Km bajo contrario muy diferente a lo que ocurre a su Km es
mayor demorándose más en su saturación por eso es de suma importancia
identificar el valor de Km que establece la semejanza que presenta la enzima
por el sustrato y para hallarlo solo se divide el valor de m con el valor de B, para
este caso se obtiene lo siguiente:
Km= = 939,012191
4. Analice Las enzimas con una Km muy baja (10 -6-10-8M) son importantes en
el metabolismo.
Si bien sabemos la obtención de la Km y la Vmax de una enzima, es importante no sólo
porque son parámetros que la identifican, sino también por motivos que, en ocasiones,
pueden ser de vital importancia. Podemos hablar de un tipo de leusemia (enfermedad
en la que los glóbulos blancos proliferan anormalmente) pueden evitarse por la
administración de una enzima, la Asparraginasa, que cataliza la reacción de hidrólisis
de la asparragina (Asn) a ácido aspártico (Asp), es así que la Asn presente en la
sangre es un principio nutritivo para el crecimiento de los linfocitos malignos; el
problema apareció cuando se utilizaron distintas fuentes de asparraginasa,
descubriéndose que no todas eran eficientes. Al final se encontró la razón. Estas
enzimas, de diferentes fuentes (animal, vegetal o microbiana), tenían diferente Km
respecto a la Asn. Como la [Asn] en la sangre es muy baja, sólo aquellas enzimas con
el valor de Km muy bajo (una mayor afinidad por el sustrato) serían capaces de
provocar la hidrólisis de la Asn. Así, se comprobó al obtener los parámetros que la
enzima que presentaba menor Km para la Asn era la de una bacteria (E. coli), y fue la
que se utilizó para controlar la enfermedad.
 CONCLUSIONES

Gracias a este trabajo colaborativos podemos participar de forma activa discutiendo y

organizando cada uno de los puntos requeridos por la guía y tutor, también pudimos
aprender las técnicas y procedimientos utilizados en la realización de las pruebas
descriptas anteriormente. Todos estos conceptos hacen parte de nuestra formación
como profesionales, ya que nos ayudan a entender de mejor forma el comportamiento
de los distintos nutrientes suministrados en la formación de nuevos bloques de
proteínas, carbohidratos y lípidos, así como también las alteraciones que sufren
conllevando a la alteración del metabolismo y enfermedad del organismo de igual
forma el avance que la tecnología y ciencia ha obtenido a partir de la ingeniería de la
genética.
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