Professional Documents
Culture Documents
Departamento de Biotecnología
T E S I S
P R E S E N T A
fronda nueva de un helecho, que se desarrolla para ser una hoja del helecho. Sin
desarrollo de una nueva vida, con la esperanza del futuro, pero también la
DRA. MA. DE LA LUZ ARREGUIN SANCHEZ POR LOGRAR “SACAR” MI GUSTO NATURAL
POR LO HELECHOS, POR GUIARME EN LA LICENCIATURA Y TAMBIEN EN LA
MAESTRIA, POR CONFIAR EN MI.
MIS AMIGOS DE TODA LA VIDA (CASI): RUBEN, CARMEN Y EMANUEL, CON USTEDES
HE CRECIDO DEMASIDO COMO PERSONA.
LA COMUNIDAD MAS DIVERSA DEL CEPROBI: ARNOLD (SEÑOR), PABLO (SEÑOR DR.),
FERCHITO Y GUS (MAMI!!!).
ÍNDICES, RESUMEN-JADE
ÍNDICE
CAPÌTULO PÁGINA
ÍNDICE DE CUADROS. iii
ÍNDICE DE FIGURAS. iv
LISTA DE ABREVIATURAS Y SIMBOLOS. vi
RESUMEN. vii
ABSTRACT. viii
1. ANTECEDENTES. 1
1.1. Recursos Fitogenéticos de México: el caso de las plantas ornamentales. 1
1.1.2. La Horticultura Ornamental. 1
1.1.3. Sustratos en horticultura ornamental. 2
1.1.4. Fuentes de propágulos en horticultura ornamental. 3
1.2. Comercialización de las plantas ornamentales en el país. 3
1.2.1. Los helechos como plantas ornamentales. 4
1.2.2 Comercialización de helechos ornamentales en la zona centro-sur 4
de México.
1.2.3. Los helechos ornamentales en el Estado de Morelos. 5
1.2.4. Los helechos silvestres de Morelos con potencial ornamental. 5
1.3. División Pteridophyta divis. J.Y. Bergen & B.M. Davis. 6
1.3.1. Los Helechos. 7
1.3.2. Distribución. 7
1.3.4. Morfología. 7
1.3.5. Ciclo Biológico. 8
1.4. Descripción de las especies en estudio. 10
1.4.1. Familia Aspleniaceae fam. Newman 10
1.4.2. Género Asplenium L. 10
1.4.2.1. Asplenium muenchii A.R. Sm. 10
1.4.2.2. Asplenium sessilifolium Desv., Ges. 11
1.4.3. Familia PTteridaceae fam. E.D.M. Kirchn. 11
1.4.4. Género Adiantum L. 12
1.4.4.1. Adiantum poiretii Wikstr 12
1.5. Germinación y viabilidad de esporas. 13
1.6. Propagación de helechos. 14
1.6.1. Propagación in vitro. 15
1.6.1.1. Cultivo de tejidos vegetales. 15
1.6.2. Propagación in vitro de helechos. 16
1.6.2.1. Germinación de esporas in vitro. 16
1.6.2.2. Uso de explantes vegetativos in vitro. 17
2. JUSTIFICACIÓN E HIPÓTÉSIS. 19
3. OBJETIVOS. 21
4. MATERIALES Y METÓDOS. 22
4.1. Selección del sitio de colecta para la elección de las especies en 22
estudio, con base a antecedentes de tipos de vegetación y de
pteridoflora del Estado de Morelos.
4.2. Descripción del sitio de colecta y abundancia de las especies en 22
estudio.
4.3. Colecta de esporas y especimenes de las especies en estudio para 26
fuentes de propágulos, aclimatización y herborización.
i
ÍNDICES, RESUMEN-JADE
CAPÌTULO PÁGINA
4. MATERIALES Y METÓDOS
4.4. Desinfección de esporas. 28
4.5. Medio de cultivo y del sustrato adecuado para la germinación de esporas 30
in vitro.
4.6. Evaluación de la viabilidad de esporas. 34
4.7. Desinfección y medio de cultivo adecuado para prefoliaciones y yemas 35
apicales foliares in vitro.
5. RESULTADOS. 40
5.1. Abundancia de las especies en estudio. 40
5.2. Colecta de esporas y especimenes de las especies en estudio para 41
fuentes de propágulos, aclimatización y herborización.
5.3. Desinfección de esporas. 47
5.4. Medio de cultivo y del sustrato adecuado para la germinación de esporas 48
in vitro.
5.5. Evaluación de la viabilidad de esporas. 51
5.6. Desinfección y medio de cultivo adecuado para prefoliaciones y yemas 52
apicales foliares in vitro.
6. DISCUSIONES. 54
6.1. Abundancia de las especies en estudio. 54
6.2. Colecta de esporas y especimenes de las especies en estudio para 56
fuentes de propágulos, aclimatización y herborización.
6.3. Desinfección de esporas. 57
6.4. Medio de cultivo y del sustrato adecuado para la germinación de esporas 59
in vitro.
6.5. Evaluación de la viabilidad de esporas. 63
6.6. Desinfección y medio de cultivo adecuado para prefoliaciones y yemas 64
apicales foliares in vitro.
7. CONCLUSIONES Y SUGERENCIAS. 67
8. BIBLIOGRAFIA. 69
ANEXOS. I
ANEXO 1. COMPOSICIÓN DE AGROQUÍMICOS: BACTERICIDAS I
FERTILIZANTES Y FUNGICIDAS.
ANEXO 2. SUSTRATOS HORTÍCOLAS. IV
ANEXO 3. VARIOS. VI
ii
ÍNDICES, RESUMEN-JADE
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro 10. Evaluación del desarrollo de las prefoliaciones de las plantas madre 46
provenientes de campo en el proceso de aclimatización.
iii
ÍNDICES, RESUMEN-JADE
ÍNDICE DE FIGURAS
iv
ÍNDICES, RESUMEN-JADE
v
ÍNDICES, RESUMEN-JADE
% porcentaje
µmol.m-2s-1 micromoles por metro cuadrado sobre segundo
2,4-D ácido 2,4-diclorofenoxiacético
2n diplóide;dos juegos de cromosomas
AG ácido giberelico
ANA ácido naftanelacético.
BA bencil aminopurina.
cm. centímetros
FIRA Fideicomisos Instituidos en Relación con la Agricultura.
g gramos.
GPS Global Positioning System (Sistema de Posicionamiento Global).
ha hectárea
HCl acido clorhídrico
HR humedad relativa.
I Intensidad luminosa
IAA ácido indol acético.
IB acido indol butirico
IG índice de germinación
INEGI Instituto Nacional de Estadística, Geografia e Informática.
kg kilogramo
KIN cinetina
L litro
lb/kg libras sobre kilogramos
m2 metros cuadrados
mg miligramos.
min minutos
ml mililitros
mm milímetros
MS medio de cultivo de Murashige y Skoog (1962).
n haploide; un solos juego de cromosomas
N normalidad
NaOCl hipoclorito de sodio.
NaOH hidróxido de sodio
o
C grados centígrados
pH potencial de hidrogeniones
rpm revoluciones por minuto.
T temperatura
v/v Volumen sobre volumen
µs micro siemens por metro
vi
ÍNDICES, RESUMEN-JADE
R E S U M E N.
vii
ÍNDICES, RESUMEN-JADE
A B S T R A C T.
The industry of the Ornamental Horticulture, is a good source of jobs, either directly or
indirectly, with the states of Puebla, Mexico, Michoacan, Morelos and Sinaloa those
with higher production and area under cultivation of ornamental plants (Mundo, 2006).
In the case of ornamental ferns in Mexico are handled around 20 genera, including 33
species and 35 varieties; being marketed more genres: Adiantum, Asplenium,
Blechnum, Cyathea, Davallia, Nephrolepis, Pteris, Platycerium y Rumorha.
In Morelos reported species of wild ferns, which have architectural features, which
might be considered ornamental potential (Díaz, 1995; Riba et al., 1996; Red de
Ornamentales, 2006), stressing gender Thelypteris, Asplenium, Adiantum,
Cheilanthes, Pellaea y Pteris; this paper provides information collected in situ three
wild species Adiantum poiretii Wikstr, Asplenium muenchii A. R. Sm. y Asplenium
sessilifolium Desv. related abundance; germination of spores both in culture media
as horticultural substrates in vitro, with the implementation of the protocol and testing
disinfection feasibility; acclimatization of plants collected in the field, and also,
information about protocols for disinfection and a half crop prefoliaciones and apical
leaf buds in vitro.
viii
ANTECEDENTES-JADE
1. A N T E C E D E N T E S.
1
ANTECEDENTES-JADE
En general los requerimientos que un sustrato debe tener son: elevada capacidad de
retención de agua fácilmente disponible, elevada aireación, baja densidad aparente,
elevada porosidad, baja salinidad, elevada capacidad tampón, baja velocidad de
descomposición, estabilidad estructural, reproductividad y disponibilidad, bajo costo y
fácil manejo (mezclado, desinfección, entre otras) (Pastor, 1999).
2
ANTECEDENTES-JADE
Para el cultivo in vitro una planta madre, además de cumplir con las características
arriba señaladas, debe proveer explantes con un nivel nutricional y un grado de
desarrollo adecuado, por lo que deben de mantenerse semanas o meses, en
condiciones de invernadero, cuidando la calidad sanitaria y nutricional, y de ser
posible, el fotoperíodo y la irradiancia (Olivera, 2005;
www.etsea2.vdl.es/micropro.htm#fase0). A pesar de que son importantes cuando se
inicia un programa de propagación in vitro la información encontrada en la literatura
es poca, en el caso concreto de los helechos se tienen reportes del manejo
agronómico de plantas madre (Hvoslef-Eide, 1991a, 1991b y 1992; Nowak et al.,
2002), de un cultivar ya establecido como ornamental: “Bostonienis” de la especie
Nephrolepis exaltata (L.) Schott. El tener una cantidad adecuada de plantas madre,
ya aclimatizadas, permitió que estos estudios exploraran los efectos de la
temperatura, la irradiancia, el fotoperíodo y la fertilización nitrogenada, sobre la
calidad de los explantes (puntas del rizoma) para la propagación in vitro.
3
ANTECEDENTES-JADE
4
ANTECEDENTES-JADE
De acuerdo a Riba et al. (1996), el Estado de Morelos cuenta con 170 especies de
helechos, agrupadas en 45 géneros. Con base a la arquitectura foliar (arreglo, forma
y tamaño de las frondas u hojas), de las especies citadas pueden ser consideradas
como potenciales plantas ornamentales de interior (Díaz, 1995) el 60%, destacando
por el número de especies los géneros Asplenium, Adiantum, Polypodium,
Cheilanthes, Elaphoglossum, y Thelypteris (Figura 1).
8
8 24
12 16
Cheilanthes Asplenium
Polypodium Thelypteris
Adiantum Elaphoglossum
Es una división del Reino Plantae que incluye a helechos y plantas afines. El nombre
proviene del griego “pteris” que significa helecho y “phytón” que significa planta
(Strasburguer et al., 1994). Son vegetales que se caracterizan por no presentar flor ni
semilla, es decir, son plantas pertenecientes a la Clase Cryptogamia, pero poseen
tejido vascular verdadero por lo que también se les denomina criptógamas superiores
(Arreguín et al., 2004). El origen de este grupo de plantas es incierto, pero se cree
que se derivaron en el Devónico de líneas antiguas de algas y musgos. Se
reconocen cuatro clases de pteridofitas (Figura 2), con base a sus diferencias en
origen y morfología (Moran, 2006):
I. Psilotpsida: incluye a los géneros Psilotum y Tmesipteris.
II. Lycopodiopsida: incluye a los géneros Lycopodium y Phylloglossum.
III. Equisetopsida: incluye a los géneros Isöetes, Stylites y Equisetum.
IV. Polypodiopsida: considera a los helechos.
A B C D
Figura 2. Géneros representativos de las principales Clases de la División
Pteridophyta: A. Psilotum, B. Lycopodium, C. Equisetum y D. Polypodium.
Fuente:A.www.richmond.edu/~jhayden/greenhouse&images/psilotum_nudum1_s.JPG,B.www.saxifraga.de/foto_bot/lycopodium_
clavatum.jpg, C.www.nichegardens.com/images/plants/equisetum_hyemale.jpg, y D.www.legambientearcipelagotoscano.it/
biodiversita/flora/habitat/bosco/polypodium%20vulgare%20felce%20dolce002.JPG.
Estas clases pueden dividirse en subclases, ordenes y familias con base a las
particularidades de su sistema de reproducción, ornamentación de la pared de la
espora, el arreglo de los esporangios, entre otras características.
6
ANTECEDENTES-JADE
1.3.2. Distribución.
En general se considera que los helechos forman parte de casi todos los tipos de
vegetación, sobre todo en zonas templadas (Rzedowski, 2006), siendo el bosque
mesófilo de montaña el tipo de vegetación más rico en este tipo de plantas, le siguen
el bosque tropical perennifolio, el bosque de Quercus, el bosque tropical
subcaducifolio, el bosque tropical caducifolio, los matorrales xerófilos y la vegetación
acuática (Riba, 1993). En Morelos se tienen registradas 158 especies y 15
variedades de helechos agrupados en 50 géneros y 21 familias (Riba et al., 1996).
1.3.4. Morfología.
Los helechos son plantas cormofitas, es decir, presentan verdaderos órganos como
raíz, tallo, generalmente subterráneo llamado rizoma y hojas que comúnmente se les
llama fronde (Figura 3), constituidas por lámina, pecíolo y raquis. Es característico de
7
ANTECEDENTES-JADE
A
B
F
C
8
ANTECEDENTES-JADE
Agrupa a plantas terrestres, rupícolas o epífitas, con rizoma rastrero o erecto, las
raíces fibrosas; escamas presentes por lo menos en el rizoma y en la base del
pecíolo, con o sin tricomas; hojas pequeñas a medianas, monomorfas, dimorfas o
polimorfas, agrupadas; pecíolo brillante u opaco; lámina simple a dividida, coriácea a
membranacea; yemas prolíficas ausentes o presentes en la axila de las pinnas
terminales, en la punta del raquis; esporas bilaterales o globosas con perisporio
reticulado-crestado y a veces equinulado, o liso, espinuloso, verrugoso o papiloso.
Aproximadamente 700 spp (Adams, 2006).
10
ANTECEDENTES-JADE
11
ANTECEDENTES-JADE
Rizoma rastrero o cortamente rastrero, las escamas 2-4 x 0.1-0.4 mm, lanceoladas a
linear-lanceoladas, anaranjadas a castaño oscuro; pecíolo glabro; fronda 15-40 x 7-
15 cm, deltada a lanceolada, 2-3-pinnada, glabra en ambas superficies, verde o
glauco en el envés; pinnas 4-10 pares, la más grande 5-12 x 4-8 cm, pediculada;
raquis glabro; últimos segmentos 5-10 x 5-8 mm, semicirculares a flabelados, en su
mayoría simétricos, lobados, pediculados, el pedículo 2-6 mm; soros 2-8 por
segmento, reniformes o lunulares, generalmente con farina amarilla entre los
esporangios. En bosque de Quercus, bosque de coníferas, bosque mesófilo de
montaña, a lo largo de arroyos o entre rocas (Moran, 2006).
12
ANTECEDENTES-JADE
Existen dos tipos de esporas en los helechos heterospóricos: las verdes o clorofílicas
y las esporas no verdes o no clorofílicas, que son de color café en general. Las
esporas verdes germinan en dos días o menos después de que son sembradas y
tienen viabilidad corta, de 48 días en promedio. Aunque hay indicios de que las
esporas verdes en el ambiente natural pueden permanecer viables por más tiempo.
Las esporas no verdes generalmente tienen tasas de germinación más lentas, pero
no se ha podido separar aquellas que son capaces de germinar en la oscuridad de
las que no lo son (Sheffield, 1996). La primera mitosis de la espora da origen al
rizoide primario y a la célula protonemal, estos son signos de germinación. Los
factores que están involucrados en la germinación son:
A. Agua: humedades relativas ambientales desde 15% hasta el 100%, son
favorables.
B. Temperatura: en general el intervalo ideal es de 15 a 30oC.
C. Nutrientes minerales: las esporas aparentemente contienen suficientes nutrientes
para completar la germinación con el agua disponible.
D. pH: la mejor germinación se lleva en un intervalo de 5.0 a 7.5, las diferencias
podrían estar relacionadas con el hábitat del helecho.
E. Fuente de carbono: las pentosas en general inhiben la germinación; las hexosas la
estimulan pero en algunos casos la inhiben, en otros pueden propiciar apogamia en
los gametofitos formados.
F. Factores bióticos: en especies como Thelypteris patens Schott, la germinación se
favoreció por los hongos contaminantes del medio de cultivo. En experimentos
realizados con esporas de Pteridium lobatum la germinación se incremento al estar
en contacto con hongos como Pythium debaryanum Hess o Penicillium notatum
Westling.
G. Densidad: es un efecto no muy claro sobre la germinación, generalmente una
densidad moderada es mejor, aunque en casos de esporas como las de Pteridium
aquilinum (L.) Kunth., la germinación se favoreció al cultivarlas agrupadas.
13
ANTECEDENTES-JADE
La viabilidad de las esporas (tiempo en que permanecen viables, esto es, que son
capaces de llevar a cabo una germinación exitosa), es un factor básico para el
establecimiento de los helechos en su hábitat natural (Pérez y Reyes, 1993). Esta
viabilidad esta controlada por factores intrínsecos como el genotipo, edad y latencia y
factores extrínsecos como el pH, humedad, temperatura, luz, competidores, entre
otros. Contabilizando el número de gametofitos que aparecen en un cultivo de
esporas, se puede tener una idea aproximada del número de esporas viables
(Ramírez et al., 2000).
Los helechos son plantas que pueden reproducirse tanto de manera sexual como
asexual (vegetativamente). El que lleven a cabo una de las dos formas de
reproducirse depende de varios factores, entre los que se pueden citar: condiciones
ambientales, época del año, estrategias adaptativas, entre otras.
14
ANTECEDENTES-JADE
Las técnicas desarrolladas para el cultivo de tejidos vegetales in vitro se han utilizado
con éxito en la producción rápida y uniforme de plantas libres de enfermedades y de
alta calidad (IAEA, 2004). Se han aplicado para obtener plantas de ornato, plantas
productoras de metabolitos industrializables, plantas haploides o de plantas híbridas
(que por otras técnicas son difíciles de lograr), entre otras.
15
ANTECEDENTES-JADE
En México existen dos grupos de investigación que han realizado diversos estudios
de la germinación in vitro de helechos; el primero se ha dedicado al estudio de la
morfogénesis de la fase sexual de helechos silvestres de México, la cual incluye la
germinación de las esporas, para ello ha usado con éxito el medio de Thompson
(Reyes y Pérez, 1991; Pérez y Riba, 1993; Mendoza et al., 1999; Reyes et al., 2000;
Pérez et al., 2001; Mendoza et al., 2002; Mendoza y Pérez, 2003; Granados et al.,
2003; Reyes et al., 2003; Mendoza y Pérez, 2005). El segundo grupo ha enfocado
sus estudios en el ciclo de vida de especies mexicanas de helechos silvestres, para
16
ANTECEDENTES-JADE
17
ANTECEDENTES-JADE
18
JUSTIFICACIÓN, HIPÓTESIS, OBJETIVOS-JADE
2. J U S T I F I C A C I Ò N E H I P Ó T E S I S.
J U S T I F I C A C I Ò N.
El mercado de helechos ornamentales en la zona centro-sur de México, está
acaparado por los de importación y un gran número de las especies mexicanas que
se comercializan son saqueadas de su hábitat natural, lo que puede ponerlas en
peligro de extinción (Monterrubio et al., 2001).
Las especies que se seleccionaron para este trabajo son: Adiantum poiretii Wikstr.,
Asplenium muenchii A. R. Sm y Asplenium sessilifolium Des, por presentar
características fenotípicas para ser comercializadas como plantas ornamentales;
además de que pertenecen a géneros que son de los más distribuidos en México y a
nivel mundial; así también, son abundantes en su hábitat original y no están incluidas
en la NOM-059-ECOL-2000.
19
JUSTIFICACIÓN, HIPÓTESIS, OBJETIVOS-JADE
H I P Ó T E S I S.
20
JUSTIFICACIÓN, HIPÓTESIS, OBJETIVOS-JADE
3. O B J E T I V O S
O B J E T I V O G E N E R A L.
O B J E T I V O S P A R T I C U L A R E S.
- Desinfección de esporas.
21
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
4. M A T E R I A L Y M E T Ó D O S.
4.1. Selección del sitio de colecta para la elección de las especies en estudio,
con base a antecedentes de tipos de vegetación y de pteridoflora del Estado de
Morelos.
22
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
A B C
23
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
*Promedios de tres lecturas de temperatura, humedad relativa e intensidad luminosa, ± error estándar.
**Promedios de tres determinaciones de pH para cada una de las tres muestras de suelo, ± error
estándar.
24
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
1. El DLi se obtiene al dividir el número de intersecciones de organismos de una especie entre la longitud total de la línea o
transecto, por lo que al aumentar el numero de organismos que interceptan esa línea el valor de DLi aumentara, siempre y
cuando la longitud de la línea se mantenga. En el caso de la CL, esta se obtiene al dividir la longitud total de las intersecciones
de una especie (es decir que longitud de la línea ocupa cada organismo), entre la longitud total de la línea, en este caso entre
mayor sea la longitud de las intersecciones de los individuos, el valor de CL tendera a 1, al mantenerse fija la longitud de la
línea (Guadarrama et. al, 1998).
25
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
Con una pala de jardinería limpia se excavó por debajo del rizoma y se sacó la planta
completa (con cepellón), cubriéndola inmediatamente con papel absorbente,
previamente humedecido y se colocó dentro de una bolsa de polipapel de 40X50
cm., esto se realizó con la finalidad de evitar la deshidratación y disminución del
estrés durante el transporte. Se colectaron 3 plantas por especie, llevándose a cabo
tres colectas en diferentes épocas del año (que correspondieron a las estaciones de
invierno, primavera y verano).
26
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
27
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
28
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
*Corresponde al protocolo de desinfestación para esporas del helecho cuerno de alce (Evangelista et
al., 2001).
-NaOCl al 1% de cloro activo: 17 ml de cloro comercial (Clorox®) por cada 100 ml de agua
desionizada estéril.
-NaOCl al 0.5% de cloro activo: 8.5 ml de cloro comercial (Clorox®) por cada 100 ml de agua
desioniozada estéril.
-Tween 80 (Hycel®): 3 gotas (aprox. 1 ml), por cada 100 ml de agua.
-Estreptomicina (Sulfestrep®): 2 mg/ml.
29
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
La metodología descrita por Cox et al. (2003), para la desinfección de esporas del
helecho Schizaea dichotoma fue la que se usó como protocolo 4 (P4), que consistió
en colocar 6 muestras de las esporas de cada especie en tubos Eppendorf® a los
que se les agregó 1.5 ml de agua desionizada estéril, con micropipetas de 1000 µL,
se centrifugaron a 10,000 rpm durante 5 minutos, el sobrenadante se desechó.
Enseguida se agregó una solución de NaOCl al 1 % de cloro activo, la exposición de
las esporas al mismo fue de 5 minutos, posteriormente se centrifugaron a 10, 000
rpm durante 2 minutos, el sobrenadante se eliminó. Se les agregó 1.5 ml de una
solución de estreptomicina a 2 mg/L, se dejo actuar durante 3 minutos, al término de
estos se centrifugaron a 10, 000 rpm durante 2 minutos, eliminando el sobrenadante.
Finalmente se agregó a los tubos 1.5 ml de agua desionizada estéril y se
centrifugaron durante 3 minutos a 10,000 rpm. Se sellaron los tubos y se
almacenaron en refrigeración 4-5 oC, para su posterior utilización.
30
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
1969), debido a que estos fueron utilizados para germinar esporas de otras especies
de helechos (Fernández y Revilla, 2003; Mendoza y Pérez, 2005; González et al.,
2006).
*MS1: medio para la propagación in vitro de cuerno de alce (Evangelista, et al., 2001).
Se decidió usar Phytagel® para todos los medios, con la finalidad de tener el mismo
agente gelificante y evitar así posibles variaciones en la germinación de las esporas;
ya que se cita en la bibliografía que aun utilizando un mismo agente gelificante en
diferentes concentraciones interfiere en la respuesta de explantes in vitro del mismo
origen (Scholten y Pierik, 1998). En el caso del medio MT la concentración en la que
gelificó fue a 5.5 g/L, posiblemente por el tipo y concentración de las sales del medio
(principalmente por el Cloruro de Calcio (CaCl2) y el Sulfato de Magnesio (MgSO4),
según Sigma, 2005), a diferencia de los medios MS y MK, en los que la gelificación
se da en la concentración de 2.2 g/L. La sacarosa utilizada fue de la marca Sigma®.
31
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
Para ajustar el pH se usaron NaOH y de HCl, con dos soluciones de cada uno, cuyas
concentraciones eran de 1 N y de 0.1 N.
*Capa formada por las raíces adventicias y por parte de las bases de los pecíolos de algunos
helechos arborescentes.
32
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
Para evaluar los protocolos se consideró cual de ellos no permitió contaminación por
algas, bacterias u hongos tanto en los medios como en los sustratos. Asignándose el
valor de 0 a los protocolos en los que se observó contaminación, y un valor de 1 para
los no contaminados; a los 5 días después de la siembra, escala cualitativa 2 (EC2).
33
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
Los reactivos utilizados en esta parte del estudio fueron: azul de Evans (ADE),
cloruro de trifenil tetrazolio (TTC) y diacetato de fluoresceína (DAF) (Anexo 3), son
recomendados para valorar la viabilidad de semillas en angiospermas y células o
tejidos de diversos tipos de organismos (Pritchard, 1985;Vázques, 2003) y en el caso
del reactivo de Mutzing (RM) (Anexo 3) para viabilidad de granos de polen (Andrada
et al., 1998).
34
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
separando las esporas en viables cuando la tinción fue total y no viables cuando no
se observó tinción o fue parcial; expresándose los resultados como el promedio de
los porcentajes de las esporas viables (Andrada et al., 1998).
*Flores Olascoaga R. 2006. Comunicación personal. Técnico responsable de la Unidad de Laboratorio de Micropropagación del
CDT-Tezoyuca del FIRA.
35
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
El medio de cultivo que se utilizó para establecer in vitro las prefoliaciones y yemas
foliares apicales fue el de etapa I (MEI) para helecho “Boston” (Flores, 2006)
(Cuadro 5).
36
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
La sacarosa utilizada fue azúcar estándar. Para ajustar el pH se usaron NaOH y HCl,
con dos soluciones de cada una, cuyas concentraciones eran de 1N y de 0.1 N. Se
utilizaron frascos tipo “Gerber®” conteniendo aproximadamente 25 ml de medio y el
tiempo de esterilización fue de 18 minutos a una temperatura de 121oC y una presión
de 15 lb/pulg2.
37
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
Para valorar la sobrevivencia de los dos tipos de explantes, se uso una escala
cualitativa (EC4), en la que el valor de 0 correspondió a aquellos explantes que al
cabo de 15 días se oxidaban y el valor de 1 a los que no se oxidaban, que
presentaban todavía una coloración verde y eran turgentes.
Se realizó una repetición, con el protocolo de desinfestación y los medios que mejor
respuesta dieron. Esta repetición también se evaluó con la escala cualitativa EC4.
38
MATERIAL Y METÓDOS-JADE
39
RESULTADOS-JADE
5. R E S U L T A D O S.
40
RESULTADOS-JADE
Especie Mediana
*0: Pocos individuos, pequeña cobertura; 1: numerosos individuos, cubren menos del 5% del área; 2:
cualquier número de individuos con cobertura entre 5 y 25%; 3: cualquier número de individuos con
cobertura entre 25 y 50%; 4: cualquier número de individuos con cobertura entre 50 y 75% y 5:
cualquier número de individuos con cobertura mayor del 75%.
-Los datos son medianas de frecuencias de la valoración de tres áreas de 10 m2.
41
RESULTADOS-JADE
42
RESULTADOS-JADE
C B
B
C
43
RESULTADOS-JADE
A B C
44
RESULTADOS-JADE
45
RESULTADOS-JADE
Cuadro 10. Evaluación del desarrollo de las prefoliaciones de las plantas madre
provenientes de campo en el proceso de aclimatización.
46
RESULTADOS-JADE
A B
C
D
47
RESULTADOS-JADE
La germinación de las esporas se evalúo por medio del Índice de Germinación (IG)
(Cuadro 13); usando la escala EC3*, en la que se considera la cobertura de los
gametofitos desarrollados, que es un indicativo de germinación de las esporas
(Ramírez et al., 2000). Se mencionan las evaluaciones para el protocolo 5, debido a
que fue en el que se observó germinación (Cuadro 13).
48
RESULTADOS-JADE
Cuadro 12. Índice de germinación (IG)* de las esporas de las especies de helechos en
estudio en medios y sustratos.
IG
Mediana
Medio de cultivo o sustrato intervalo inferiror ≥mediana≤intervalo superior
Adiantum Asplenium Asplenium
poiretii muenchii A. R. sessilifolium
Wikstr. Sm Desv.
MK 1.0≥1.0≤1.0 1.0≥2.0≤2.0 1.0≥1.5≤2.0
Medio de Knudson
MS4
MS:2.2g/L, sin sacarosa, 1.0≥2.0≤2.0 1.0≥3.0≤4.0 2.0≥3.0≤4.0
sin carbón activado, pH:5.7-5.8
MT 0.0≥1.0≤2.0 2.0≥2.0≤3.0 1.0≥2.0≤3.0
Medio de Thompson
AGR 0.0≥1.0≤2.0 1.0≥1.5≤2.0 1.0≥2.5≤3.0
Agrolita
MAQ 1.0≥1.0≤2.0 2.0≥3.0≤4.0 1.0≥2.5≤3.0
Maquique
SEH
Sustrato para germinar esporas de helechos 0.0≥1.0≤1.0 0.0≥1.5≤2.0 0.0≥1.0≤2.0
Luna (2002)
VER 1.0≥1.5≤2.0 1.0≥2.0≤3.0 1.0≥3.0≤3.0
Vermiculita
*EC3: 0=Sin germinación, 1=numerosos gametófitos cubrieron 5% del frasco de cultivo., 2=cualquier
número de gametofitos con cobertura entre 5 y 25% del frasco de cultivo, 3=cualquier número de
gametofitos con cobertura entre 25 y 50% del frasco de cultivo, 4= cualquier número de gametofitos
con cobertura entre 50 y 70% del frasco de cultivo.
-Los datos son medianas de frecuencias de la evaluación de tres repeticiones con seis frascos c/una.
49
RESULTADOS-JADE
El pH de los sustratos hortícolas fue el siguiente: agrolita: 6.0; maquique 5.3; sustrato
para germinar esporas de helechos: 4.8; turba: 3.5 y vermiculita: 5.7.
B
A
50
RESULTADOS-JADE
Los resultados al someter las esporas de las especies de helechos estudiadas a los
diferentes reactivos para evaluar la viabilidad fueron negativos en azul de Evans
(ADE), diacetato de fluoresceína (DAF) y cloruro de trifenil tetrazolio (TTC);
obteniéndose una reacción positiva solamente con el Reactivo de Mutzing (RM)
(Cuadro 14 y Figura 15).
Cuadro 13. Viabilidad de las esporas de los helechos en estudio, utilizando el Reactivo
de Mutzing.
Especie % Viabilidad
Asplenium muenchii A. R. Sm 68.5±12.3b
Asplenium sessilifolium Desv. 73.4±7.85ab
Adiantum poiretii Wikstr 54.3±4.56a
51
RESULTADOS-JADE
1 2 3
A B 4 C
Se utilizaron solo las especies de Asplenium, debido a que son las que presentaron
una buena fuente de explantes, en cuanto a la calidad fisiológica y cantidad de los
mismos. El protocolo que en el que no se presentó contaminación y que permitió la
sobrevivencia de las prefoliaciones y yemas apicales foliares fue el PB de 18 min
(Cuadro 14).
52
RESULTADOS-JADE
53
DISCUSIÓN-JADE
6. D I S C U S I Ó N.
Respecto al pH del suelo, fue semejante en las muestras de las tres especies, debido
posiblemente a que las zonas de colecta se encuentran, desde el punto de vista
fisiográfico, en la misma zona: la vertiente sur del sistema volcánico transversal
(Rzedowski, 2006), cuyos suelos son similares, tanto en sus propiedades físicas
como químicas.
54
DISCUSIÓN-JADE
La abundancia-cobertura fue un dato que nos indicó, que las dos especies silvestres
del género Asplenium, con valores que van del 3 al 4 (Cuadro 8), presentaron una
cobertura mayor al 50%, en las dos localidades; que se considera intermedia a alta
(Mermoz y Martín, 1993), siendo importante mencionar que los individuos de estas
especies crecen formando “manchones”, por lo que al ampliar el área de muestreo
(se hizo para un área de 10m2), es posible que estos valores cambien. Con Adiantum
poiretii Wikstr, los valores de su abundancia-cobertura se ubicaron entre 1 y 2
(Cuadro 7), es decir una cobertura no mayor del 25 %, por lo que se considera baja a
intermedia, esto explica en parte a que los individuos de esta especie crecen
esparcidamente.
La segunda técnica que se aplicó fue la del transecto, la cual es utilizada en los
inventarios de vegetación para obtener información rápida, debido a su fácil
aplicación. Esta técnica está basada en la medición de todas las plantas
interceptadas por un plano vertical de líneas, localizadas aleatoriamente y de igual
longitud (González Uribe y Sánchez Pérez, 2001). Los parámetros que se obtienen
son el Índice de Densidad Lineal (DLi) y la Cobertura Lineal (CL).
El valor del DLi obtenido para las dos especies de Asplenium (Cuadro 9), nos indica
que la cantidad de individuos que interceptaron la línea es baja; pero los valores de
la CL (Cuadro 8), que el espacio que cubrieron en la misma fue amplio (González
Uribe y Sánchez Pérez, 2001). Los valores más bajos de ambos parámetros
correspondieron a Adiantum poiretii Wikstr. En los tres casos los valores de los dos
parámetros concordaron con lo obtenido con la escala de abundancia-cobertura de
Braun-Blanquet (Cuadro 9).
55
DISCUSIÓN-JADE
56
DISCUSIÓN-JADE
57
DISCUSIÓN-JADE
2003; Rogge Renner y Randi, 2004; González Rosas et al., 2006). En este sentido,
en cuatro de los cinco protocolos de desinfestación implementados en este trabajo
se manejaron concentraciones de cloro activo que coinciden con lo mencionado en la
literatura, además se uso Tween 80 y en uno de ellos estreptomicina (Cuadro 3);
logrando en los protocolos 2, 3 y 4 frascos de cultivo sin contaminantes, en los
tiempos de exposición altos, pero no se observó germinación de las esporas (Cuadro
11).
58
DISCUSIÓN-JADE
Este ensayo se realizó a la par que el anterior, es decir, para probar que protocolo de
desinfestación era el adecuado, las esporas desinfestadas se sembraron en los
medios de cultivo y sustratos hortícolas seleccionados. Por lo que sólo se evaluó la
germinación de las esporas desinfectadas con el protocolo 5, debido a que fue en el
que se observó germinación y no se presentaron contaminantes (Cuadro 11). La
evaluación se expresó a través de un Índice de Germinación (IG) (Cuadro 13); el cual
considera la cobertura de los gametofitos desarrollados, como un indicativo de
germinación de las esporas (Ramírez et al., 2000).
En la mayor parte de los datos se utilizó el MS4 (desde el 100% hasta el 25% de las
sales del medio de Murashige y Skoog, 1962), el medio de Knudson (MK) y el medio
de Thompson (MT), para la germinación de esporas de helechos los resultados
fueron favorables al observarse la formación de gametofitos (Douglas y Sheffield,
1990; Camloh y Gogala, 1992; Pangua et al., 1994; Fernández et al., 1997; Edwards
y Roux, 1998; Bertrand et al., 1999; De Paula et al., 1999; Pivetta y Gomes, 2000;
Cox et al., 2003; Nondorf et al., 2003; Rogge y Randi, 2004; González Rosas et al.,
2006; Fernández y Revilla, 2003; Mendoza Ruiz y Pérez García, 2005; González
Rosas et al., 2006 ); al igual que en este trabajo, puesto que el medio de cultivo en
el que se registró un mayor IG en las tres especies de helechos, fue el MS4, el cual
contenía el 50% de las sales del medio MS (Murashige y Skoog, 1962), sin sacarosa
y carbón activado y a un pH de 5.7-5.8; características que al parecer fueron las
59
DISCUSIÓN-JADE
Los anteriores resultados se pueden deber, en parte, a que las sales del MS4 fueron
las suficientes para que después de la germinación, el gametofito en desarrollo
(protalo), pudiese llevar a cabo la síntesis de sus nutrimentos (Izco et al., 1998),
reflejándose en la mayor cobertura de los gametofitos; lo que al parecer no ocurrió
con las sales del medio de Kundson (MK) y el medio de Thompson (MT), medios en
los que la concentración de sales es menor (Fernández y Revilla, 2003; Mendoza y
Pérez , 2005), que el MS4.
Las esporas contienen sustancias de reserva y al formarse los gametofitos, que son
autótrofos, no requieren en general la presencia de sacarosa (Cronquist, 1971;
Rhagavan, 1988; Izco et al., 1998); aunque se ha citado en algunas especies de
helechos que la presencia de hexosas, como la sacarosa, estimulan el desarrollo de
los gametofitos pero en otros casos los inhiben o pueden propiciar apogamia, lo que
retrasa la aparición de esporofitos, pero podría aumentar la producción de estos
(Sheffield, 1996;Rogge y Randi, 2004; Aguilar , 2005).
Con respecto a los sustratos hortícolas los que presentaron un mayor índice de
germinación (IG) fueron el maquique (MAQ) y la vermiculita (VER), siendo la agrolita
(AGR)y el sustrato para germinar esporas de helechos (SEH) los que obtuvieron un
IG menor (Cuadro 12), es decir, permitieron el adecuado desarrollo de los
gametofitos. El MAQ al ser de origen orgánico, raíces secundarias de helechos
arborescentes (Palacios, 2007), contiene una mayor cantidad de nutrientes; la VER
al aportar iones potasio y magnesio, considerados elementos mayores, y retener una
mayor humedad, por su estructura a base de mica (Martínez, 1994). La AGR se
considera un sustrato inerte y con mediana retención de humedad (Martínez, 1994),
características que se vieron reflejadas al observarse un bajo desarrollo de los
gametofitos formados, que finalmente se murieron.
60
DISCUSIÓN-JADE
Otro factor relevante en los sustratos hortícolas fue el pH, se ha reportado que el
intervalo ideal para la germinación de esporas en diferentes especies de helechos
esta entre 5.0 y 7.5 (Sheffield, 1996; Aguilar, 2005). Aunque el pH óptimo para la
germinación dependerá de la especie, por ejemplo en un estudio hecho por Douglas
y Sheffield en 1990, sobre germinación de esporas de Platycerium bifurcatum (Cav.)
C. Chr., el peso fresco de los gametofitos formados fue dependiente del pH,
obteniéndose el peso más alto en el pH de 5.5, observándose una disminución del
mismo conforme se aumentó; por otro lado en Cheilanthes feii (Nondorf et al., 2003),
el más alto porcentaje de germinación se presento en el pH de 4.5, disminuyendo
casi a la mitad en el de 8.5. En este trabajo la agrolita (AGR) el maquique (MAQ), el
sustrato para germinar esporas de helechos (SEH) y la vermiculita (VER) tenían un
pH de 6.0, 5.3, 5.3, 4.8 y 5.7 respectivamente; a excepción del SEH, los demás
presentaron valores que cayeron dentro del intervalo de pH de 5.0 a 7.5 antes
mencionado, lo que se reflejo en los valores de IG obtenidos para estos sustratos,
además de que el pH fue muy similar al registrado en los lugares de colecta de las
especies en estudio (Cuadro 1); el pH del SEH fue poco adecuado para la
germinación de esporas, como se ve en el IG obtenido para las tres especies
(Cuadro 12), a pesar de haber funcionado para otras especies de helechos (Luna,
2000). Se considera en general, que las variaciones en el pH afectan la capacidad
por parte de los gametofitos de absorber nutrientes del medio en el que se
desarrollan (Rhagavan, 1988).
61
DISCUSIÓN-JADE
Con respecto a los sustratos se debe considerar que el maquique esta protegido en
nuestro país (NOM-004-RECNAT-1996, 2005; NOM-059-ECOL-2001, 2005), por lo
62
DISCUSIÓN-JADE
La respuesta del RM, permitió separar las muestras de esporas en viables, cuando
se tiñeron de rojo, y en no viables cuando no se pigmentaron o la tinción fue parcial
(Andrada et al., 1998); lo que es indicativo de que atravesó la pared y membrana
celular, reaccionando con las estructuras celulares que contenían ácidos nucleicos
(el RM contiene carmín, reactivo usado para teñir ácidos nucléicos).
63
DISCUSIÓN-JADE
Debido a que la calidad y cantidad de los propágulos de las plantas madre de campo
aclimatizadas no fue la adecuada, ni se obtuvieron plántulas in vitro de la
germinación de esporas, se optó por colectar de plantas de campo tomando
explantes de prefoliaciones (de las dos especies de Asplenium) y yemas apicales
foliares (de Asplenium sessilifolium Desv.). En el caso de Adiantum poiretii Wikst.,
no forma yemas apicales foliares y la cantidad de prefoliaciones fue muy baja (1 o 2
por individuo); decidiéndose no colectar para evitar afectar a la población natural.
Las condiciones de transporte de los dos tipos de explantes fueron las óptimas para
su conservación: se colocaron en contenedores (cámara húmeda) con papel
absorbente humedecido y se asperjaron con una solución que contenía Rovral®,
Bayfolian®, Confidor® y Agrex-F® (Anexo 1), todos al 0.1% (Flores, 2006);
permitiendo que las prefoliaciones se mantuviesen turgentes, y en el caso de las
yemas apicales foliares permitió que después de 3 meses en el contenedor formaran
de manera constante nuevas prefoliaciones (se considera prometedor a este tipo de
explante para en un futuro inducir la brotación múltiple in vitro); sin crecimiento
importante de contaminantes (datos no citados).
64
DISCUSIÓN-JADE
En la literatura se menciona el uso del rizoma, estolones del rizoma y hoja para
inducir la brotación múltiple in vitro en diferentes especies de helechos,
desinfectando con hipoclorito de sodio NaOCl, a diferentes concentraciones de cloro
activo, combinándolo con el uso de Tween 20 y complementándolo con etanol;
logrando el establecimiento de los explantes, hasta la brotación múltiple (Loescher y
Albrecht, 1979; Hvoslef Eide, 1990; Pasqual et al., 1994; Guimaraes et al., 1999;
Hvoslef-Eide, 1990; Ambrosio y de Melo, 2004; González Rosas et al., 2006); en este
trabajo debido a las características de las especies (el rizoma es corto, para obtener
una buena cantidad de explantes se tendría que colectar una gran cantidad de
plantas; no forman estolones y las hojas son membranáceas, lo que las hace muy
susceptibles al NaOCl y etanol; las hojas de las especies de los helechos usados en
los reportes citados son coriáceas, más resistentes a los desinfectantes); se
utilizaron prefoliaciones y yemas foliares apicales, sin lograr inducir brotación; no se
ha encontrado reportes del uso de este tipo de explantes.
65
DISCUSIÓN-JADE
(turgencia). A la par se trató de evitar la oxidación de los explantes, para tal fin se
utilizaron el carbón activado y los ácidos cítrico y ascórbico, a diferentes
concentraciones (Cuadro 4); sustancias que se reportan como antioxidantes (Phyto
Technology Laboratories™, 2004; González, 2005).
Por último se hicieron ensayos con rizoma y hojas, en los se logró controlar la
contaminación in vitro, pero no se consiguió mantener la viabilidad (datos no citados).
66
CONCLUSIONES, SUGERENCIAS-JADE
7. C O N C L U S I O N E S Y S U G E R E N C I A S.
C O N C L U S I O N E S.
67
CONCLUSIONES, SUGERENCIAS-JADE
S U G E R E N C I A S.
68
BIBLIOGRAFÍA-JADE
8. B I B L I O G R A F Ì A.
69
BIBLIOGRAFÍA-JADE
70
BIBLIOGRAFÍA-JADE
71
BIBLIOGRAFÍA-JADE
72
BIBLIOGRAFÍA-JADE
73
BIBLIOGRAFÍA-JADE
Knudson C. 1946. A new nutrient solution for orchid seed germination. American
Orchid Society Bulletin. 15:214-17.
Kwa S. H., Wee Y. C., Lim T. M. y Kumar P.P. 1995. IAA-induced apogamy in
Platycerium coronarium (Koening) Desv. gametophytes cultured in vitro. Plant
Cell Reports. 14: 598-602.
Leal E. A. 2002. Ciclo de vida de Platycerium bifurcatum. Tesis Profesional. ENCB-
IPN.
Leszczyñska-Borys, H. y M. W. Borys. 2001. Plantas bulbosas para flor de corte,
macetas, jardines y parques. Ed. SIZA-CONACyT.
Ley General de Vida Silvestre. 2005. SEMARNAT. [En línea] Disponible: http://www.
www.semarnat.gob.mx/leyesynormas/Leyes%20del%20sector/vidasilvestre.pd
f - 13 de Septiembre de 2005.
Lincoln, R. J., G. A. Boxshall y P. F. Clark. 1995. Diccionario de Ecología, Evolución y
Taxonomía. Fondo de Cultura Económica.
Lira R. y Riba R., 1993. Las Pteridofitas (helechos y plantas afines) de México.
Revista de la Sociedad Mexicana de Historia Natural. Vol. XLIV (especial).
México.
Loescher W. H. y Albrecht C. N. 1979. Development in vitro of Nephrolepis exaltata
cv. bostonienis runner tissues. Physiol. Plant. 47: 250-254.
Lot A. y Chiang F. (Comps.). 1986. Manual de Herbario. Consejo Nacional de la Flora
de México, A.C. México.
Luna T. 2000. Native fern propagation in Glaciar National Park’s, native plant nursery.
Spring. 5-9.
Martin K. P., Sini S., Zhang C.-L., Slater A. y Madhusoodanan P. V. 2006. Efficient
induction of apospory and apogamy in vitro silver fern (Pityrogramma
calomelanos L.). Plant Cell Reports. 25: 1300-1307.
Martínez Ma. F. 1994. Manual Básico de Sustratos. OASIS Consultoría. México.
Mendoza A., Pérez G. B. y Riba R. 1999. Morfogénesis de la fase sexual del
helechos Arachniodes denticulata (Dryopteridaceae). Rev. Biol. Trop. 47: 791-
797.
74
BIBLIOGRAFÍA-JADE
75
BIBLIOGRAFÍA-JADE
76
BIBLIOGRAFÍA-JADE
77
BIBLIOGRAFÍA-JADE
78
BIBLIOGRAFÍA-JADE
79
BIBLIOGRAFÍA-JADE
80
BIBLIOGRAFÍA-JADE
81
ANEXOS-JADE
Composición
Ingrediente activo: % en peso
Mezcla de tensoactivos no iónicos 29.9%
Dioctil sulfosuccinato 2.3%
Diluyentes y acondicionadores 67.8%
Total: 100.00%
\ Bactrol®
Bactericida, con alta humectación y suspensibilidad. Ingrediente Activo:
estreptomicina y oxitetraciclina (filsa.com.mx/plm/labs/labs/84.htm).
\ Bayfolan®
Fertilizante líquido inorgánico, regula y mejora las condiciones generales de la planta,
aporta nutrientes vía foliar. Tamponea el pH hacia valores neutros a ligeramente
ácidos. Ingredientes activos: elementos mayores (nitrógeno, fósforo, potasio),
elementos menores (fierro, manganeso, boro, cobre, zinc, níquel, cobalto, molibdeno,
cloro, sodio y azufre), vitamina B1, auxinas de crecimiento y sustancias tampón
(www.bayercropscience.cl/folletos/a_bayfolan.pdf)
\ Benlate®
Benlate®, fungicida sistémico de amplio espectro, perteneciente al grupo de los
bencimidazoles, polvo humectable (www.dupontagricola.com.co/descprodnew.asp?
nompais=Colombia&codpais=1&codprod=14&tipo=Fungicidas; www.afipa.cl/afipa/
dupont/hojaSeguridad5.pdf). Composición:
I
ANEXOS-JADE
\ Malathion 1000®
Insecticida organofosforado concentrado emulsionable (www.anajalsa.com.mx/
malathion.html). Composición:
\ Raizal 400 ®
Fertilizante arrancador para plántulas y trasplantes, cristales solubles
(filsa.com.mx/plm/prods/632.htm). Composición:
II
ANEXOS-JADE
\ Rovral®
Fungicida de contacto con limitado efecto sistémico, de acción preventiva y curativa;
polvo huemectable, perteneciente al grupo de las Dicarboxamidas. Ingrediente
activo: iprodiona al 50.0 % (Tris-(O-etil fosfonato) de aluminio)
(www.bayercropscience.com.mx/bayer/cropscience/bcsmexico.nsf/id/Rovral_BCS;
www.bayercropscience.com.mx/.../bcsmexico.nsf/id/4EED3729D5B7DAA4C1256FE0
00769275/$file/ind_rovral.pdf).
\ Tecto 60®
Es un fungicida sistémico, de amplio espectro, perteneciente al grupo de los
bencimidazoles; suspensión concentrada. Ingrediente activo: thiabendazol 2-(4-
tiazolil)- 1H – bencimidazol 500 g/L, materias inertes y adyuvantes hasta completar 1
L (www.syngenta.cl/prodyserv/fitosanitarios/prod/etiqueta_fitosanitarios/Tecto500SC.
pdf; www.syngenta.cl/prodyserv/Hoja/Engeo.pdf)
III
ANEXOS-JADE
\ Agrolita (perlita).
\ Maquique.
La palabra maquique parece derivar de “malque”, nombre que los nahuas del estado
de Puebla atribuyen a los helechos arborescentes. También se usa para denominar a
la capa formada por las raíces adventicias y por parte de las bases de los pecíolos
de algunos helechos arborescentes (principalmente las especies Alsophila firma
(Baker) Conant, Sphaeropteris horrida (Liebm.) R.M. Tryon y Dicksonia sellowiana
Hook.). Presenta una consistencia similar a la madera porosa, tiene buen drenaje y
se mantiene húmeda por mucho tiempo. Sirve como sostén para plantas epifitas,
principalmente orquídeas y helechos (Palacios Ríos, 2007).
De acuerdo con Luna (2000), el sustrato que utilizo para germinar esporas de
helechos consiste en una mezcla de turba, agrolita y vermiculita, en una proporción
6:1:1 v/v.
IV
ANEXOS-JADE
\ Vermiculita.
Mineral de estructura en forma de mica calentado a 1000 oC, que aporta potasio y
magnesio a las plantas. Con el manejo se puede romper su estructura, eliminando
sus propiedades benéficas. Partículas grandes para producción y chicas para
germinación, buena aireación, buena retención de humedad, baja densidad, pH
cercano a neutro, excelente capacidad amortiguadora, bajo contenido de sales
solubles, libre de plagas y/o enfermedades, libre de sustancias tóxicas, fácil de
mezclar (puede usarse hasta en un 60 % de la mezcla), uniformidad entre lotes, no
se le encuentra fácilmente, ingrediente caro (Martínez Martínez, 1994).
V
ANEXOS-JADE
ANEXO 3. VARIOS.
\ Forma LABC-01 Información del sitio de colecta (INEGI, 2005).
VI
ANEXOS-JADE
\ Medio de Thompson.
Soluciones madre utilizadas para la preparación del medio de cultivo semisólido de
Thompson (Mendoza Ruiz, 2001).
VII
ANEXOS-JADE
MACROELEMENTOS Volumen en ml
Nitrato de amonio (NH4NO3) 5
Fosfato de potasio (K2HPO4) 25
Sulfato de magnesio (MgSO4 7 H2O) 12
Cloruro de calcio (CaCl2) 2
MICROELEMENTOS (ml)
Sulfato de magnesio (MnSO4) 10
Sulfato cúprico (CuSO4 5H2O) 10
Sulfato de zinc (ZnSO4 7H2O) 10
Acido bórico (H3BO3) 10
Molibdato de sodio (Na2MoO4 2H2O) 10
Sulfato ferroso (FeSO4 7H2O) 10
Sodio EDTA (etilendinitrilotetracetato disódico) 10
Agar 10 g
Agua destilada 1000
\ Tween 80®.
Polioxietilén-20 sorbitán monooleato; detergente industrial.
\ Cal Tolteca®.
Compuesta principalmente por carbonato de calcio, reduce y neutraliza la acidez de
la tierra o sustratos; además de proporcionar calcio y magnesio a las plantas
(www.cemexmexico.com/pr/pr_po_ca.html).
\ Reactivo de Mutzing.
VIII
ANEXOS-JADE
IX