Dacie y Lewis definen la prueba de fragilidad ósmotica como un parametro que indica el cociente

entre el área de superficie y el volumen de los hematies y refleja su capacidad para incorporar una
cierta cantidad de agua antes de lisarse. Es usada en gran medida para el diagnostico de
esferocitosis hereditaria, ademas se puede tambien utilizar para la deteccion de talasemias y
anemias drepanocíticas.

Dicho de otra forma, la prueba de fragilidad ósmotica indica la resistencia de los globulos rojos a la
lisis por medio de la presión ósmotica, ejercida sobre la membrana eritrocitaria.

Se usó como patron o control los datos registrados en la tabla 1 y graficados en la figura 1.

Tabla 1. Porcentaje de hemolisis frente a diferentes concentraciones de NaCl

Concentración
0,9 0,85 0,8 0,75 0,7 0,65 0,6 0,55 0,5 0,45 0,4 0,35 0,3 0,2 0,1 0,05
NaCl %
% Hemolisis 0 0 0 0 76,2 81,5 86,8 89,9 91,6 93,9 96,2 97,5 98 98,7 99,2 100
Paciente N° 1
% Hemolisis 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6,4 15,9 79,5 80 83,5 96,1 100
Paciente N° 2
% Hemolisis 0 0 0 0 0 0 0 0 0 20 80 96 100 100 100 100
Paciente N° 3

Figura 1. Grafica patrón o control para el análisis de las muestras.

Resultados y Discusión

Se tomó como control y valores normales los registrados en la figura 3, donde a partir de estos
valores se analizaron los datos de las muestras problema

Figura 2. Valores de referencia (control)

Se presentaron tres casos clínicos de fragilidad osmótica, donde se analizaron las líneas sigmoides
presentes en la figura 2 y 3. Para la resistencia globular mínima se toma como valor de referencia
el 10 % de hemólisis, que representa el valor máximo permisible para considerar la hemólisis
dentro de los límites normales. Se toma como valor de referencia para la resistencia globular
máxima el 90 % de hemólisis.

Figura 3. Caso clínico con paciente N° 1

PACIENTE N°1

CONTROL
Para la realización de una curva patrón o también llamada control de la fragilidad osmótica en
eritrocitos normales (Figura 1), otros investigadores calcularon el porcentaje de hemólisis en
presencia de soluciones con concentraciones decrecientes de NaCl. Al terminar los análisis se
observó que la resistencia mínima (comienzo de la hemolisis) fue en soluciones de 0,45% de NaCl y
la resistencia globular máxima (Hemólisis completa de los eritrocitos) se produce en 0,32% de NaCl.
Sintetizando lo susodicho, en individuos sanos la hemolisis se produce entre 0,45% y 0,35% de NaCl

Las soluciones hipotónicas, causan un incremento del flujo de agua hacia el interior (osmosis) para
lograr el equilibrio de concentración de soluto entre el interior y el exterior celular, los glóbulos rojos
se llenan de agua hasta ocasionar la ruptura de la membrana, ocasionando la hemolisis.

Los glóbulos rojos normales pueden soportar un aumento de su tamaño en un 70%, esto se logra
gracias a la forma bicóncava y propiedades elásticas de su membrana. Cuando el eritrocito supera
el limite del 70% en tamaño, se causa la ruptura de la membrana y por ende la hemolisis.

Análisis caso clínico paciente N° 1 y N° 2 (Figura 3 y Figura 4)

Comparando los resultados del paciente frente a los valores normales, se puede observar que la
curva sigmoide tiene un desplazamiento hacia la izquierda, lo que traduce un aumento en la
fragilidad osmótica del eritrocito. Esto hace pensar que el eritrocito tiene alguna alteración a nivel
de membrana, ya que esta es la encargada de mantener el equilibrio osmótico en la célula. Como
se mencionaba con anterioridad la hemolisis de una persona normal inicia aproximadamente a
una concentración de 0,45% de NaCl, en este caso el paciente N° 1 tiene una hemolisis precoz,
dado que a una concentración de 0,65% inicia haber destrucción eritrocitaria. Por otro lado, el
paciente N°2 presentó una fragilidad osmótica aun respecto al paciente numero N°1 con una
hemolisis inicial de 0,74%.

Indagando en la literatura, se menciona que los esferocitos tienen la razón volumen/área de

superficie aumentada; la capacidad para captar agua antes de distender la superficie de su
membrana es, por tanto, más limitada de lo normal y son, en consecuencia, particularmente
susceptibles a la lisis osmótica. El incremento en la fragilidad osmótica es una propiedad de la
forma esferoide de la célula y es independiente de la causa de la esferocitosis (Dacie y Lewis)

Además de un aumento en la fragilidad osmótica para relacionarla con esferocitosis hereditaria

(EH), se deben observar otras manifestaciones clínicas de la EH: anemia, ictericia y esplenomegalia
se asocian a: aumento de reticulocitos, esferocitos en frotis de sangre periférica y litiasis vesicular.
Completan el diagnóstico una historia familiar positiva (presente aproximadamente en el 75%) y el
aumento de fragilidad osmótica en los eritrocitos. Lo anterior es importante para realizar un
diagnóstico diferencial de:

Otras patologías relacionadas con un aumento de la fragilidad osmótica de las cuales se debe
realizar un diagnóstico diferencial son: la eliptocitosis hereditaria, la estomatocitosis hereditaria,
anemia hemolítica autoinmune y otras anormalidades de la membrana.
La prueba de fragilidad osmótica adolece de falta de especificidad y de sensibilidad y falla en la
detección de EH atípicas o leves. Además, puede verse afectada por factores no relacionados con
defectos citoesqueléticos del hematíe; por ejemplo, se pueden obtener resultados positivos de los
hematíes de pacientes embarazadas o que presentan anemias hemolíticas inmunitarias o de otro
tipo o una insuficiencia renal. Por esto es importan realizar pruebas confirmatorias para
esferocitosis hereditaria como lo es la citometría de flujo con fijación de colorante.

Análisis caso clínico, paciente N° 3 (Figura 4)

Este paciente presenta a diferencia de los anteriores una desviación de la curva sigmoide hacia la
derecha, lo cual discrepa de la fragilidad osmótica de los pacientes 1 y 2, ya que en el paciente N°3
la fragilidad osmótica disminuyo, donde fue necesario disminuir la concentración de NaCl hasta un
0,145% para provocar una hemolisis total. Lo anterior según estudios realizados por Geli y Moreno
(2015) es compatible con la anemia drepanocítica también llamada anemia de células falciformes,
por otro lado, Dancie y Lewis mencionan la presencia de una B-talasemia mayor cuando hay una
disminución en la fragilidad osmótica de los eritrocitos, lo que representa mayor resistencia de
estos a la hemólisis en presencia de soluciones hipotónicas. Otras patologías relacionadas con la
disminución de la fragilidad osmótica pueden ser: las anomalías enzimáticas, xerocitosis
hereditaria y ferropenia.

No existen muchos datos sobre la causa de este fenómeno una hipótesis que permite un
acercamiento a las causas del fenómeno está relacionada con factores facilitadores de la
drepanocitosis como el aumento de la concentración corpuscular media de hemoglobina S (CCMH)
y la disminución del volumen corpuscular medio (VCM). El incremento de la CCMH pone de
manifiesto un grado extremo de deshidratación celular, que se explica por las alteraciones de
polimerización irreversible de la deoxi-Hb S y el efecto que ejerce sobre la membrana eritrocitaria,
particularmente en las alteraciones de sus propiedades fisicoquímicas (Geli et al. 2015)

Fuente de errores en la prueba de fragilidad osmótica

En el libro de Hematología Practica se mencionan 3 variables que se deben controlar, ya que estas
pueden afectar notablemente los resultados, afectando por ende la precisión de la prueba,
generándose errores aleatorios Las variables que se deben controlar son las siguientes:

1. Los volúmenes relativos de sangre y solución salina, ya que es importante agregar en todos los
tubos el mismo volumen.

2. El pH final de la sangre en la suspensión salina, se debe controlar agregando un tampón fosfato

3. La temperatura a la que se realizan las pruebas.

Por otro lado, existen variables como la cantidad de oxigeno en los eritrocitos, ya que se ha
demostrado pequeñas diferencias entre la sangre venosa con poco oxigeno y con el máximo de
oxígeno. Para finalizar se debe tener en cuenta el mantenimiento y estado de los equipos, dado
que, al trabajar con instrumental no calibrado, se corre el riesgo de generar errores sistemáticos
los cuales pueden ser evitados con un programa de mantenimiento. En este caso se hace
referencia al espectrofotómetro y las micropipetas, las cuales son fuentes de errores
instrumentales.

HACER BIBLIOGRAFIA

https://oncouasd.files.wordpress.com/2015/06/hematologia-practica.pdf

http://scielo.sld.cu/pdf/ind/v27n2/ind01215.pdf

http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-29572012000400007

http://www.scielo.org.co/pdf/med/v15n1/v15n1a14.pdf

https://es.slideshare.net/SergioCarrascoAnabaln/final-seminario-resistencia-osmotica-sc-nf

http://www.sah.org.ar/revista/numeros/vol13.n3.113-116.pdf

http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-00752015000200025