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Turbidimetría Nefelometría
Turbidimetría Nefelometría
Mide la reducción de la Mide la luz difractada por los
intensidad de la luz transmitida a inmunocomplejos a un ángulo
180º por la formación de determinado de la luz incidente
inmunocomplejos. (normalmente 90º )
https://es.slideshare.net/abzhamozarth/expo-turbidimetria-y-nefelometria
4.3 TURBIDIMETRÍA Y
NEFELOMETRÍA
Cuando un haz de luz golpea una partícula en suspensión, una parte de la luz es reflejada, otra
absorbida, otra desviada y el resto es transmitida. La turbidimetría mide la reducción de la
intensidad de la luz en su paso a través de una suspensión, a causa de las partículas presentes
en ésta, y cuantifica la luz residual transmitida. La nefelometría mide la luz desviada en
diversos ángulos (entre 15º y 90º) por las partículas presentes en esta suspensión. La
sensibilidad de la turbidimetría está limitada por la exactitud y sensibilidad del instrumento
utilizado para la medición, y depende de la capacidad del detector para registrar pequeños
cambios en la intensidad de la luz. Las lecturas realizadas en longitudes de onda bajas, en un
espectrofotómetro de buena calidad, permiten obtener buenos resultados. Para la
nefelometría es necesario emplear un equipo con características específicas, que recibe el
nombre de nefelómetro. Sus componentes básicos son:
http://bibing.us.es/proyectos/abreproy/4821/fichero/MEMORIA%252FCAPITULO+4.p
df
Nefelometría y turbidimetría
Cuando la luz incide en una solución, parte de la luz se dispersa por las partículas en
suspensión, otra parte se absorbe y otra se transmite (fig. e1-7A). La luz dispersada dependerá
de distintos factores, como el tamaño y el peso molecular de la partícula en solución, la
longitud de onda de la energía incidente, la distancia entre el detector y la cubeta, y la
concentración de la muestra. Los equipos emplean longitudes de onda que evitan aquéllas a
las cuales absorben los compuestos presentes en la muestra. Las más frecuentes están entre
500 y 650 nm, y la energía de la luz transmitida o dispersada tiene la misma longitud de onda.
La nefelometría mide la luz dispersada, mientras que la turbidimetría mide el descenso de la
luz transmitida:
2. La nefelometría, en cambio, mide la luz dispersada por una solución de partículas, por lo
que el detector se sitúa formando un ángulo con la luz incidente (fig. e1-7B). En casi todas las
aplicaciones del laboratorio, la mayor dispersión de la luz es hacia delante, por lo que el
detector en estos equipos se coloca formando un ángulo entre 10 y 90°. El equipo es similar a
un fluorímetro, pero con la importante diferencia de que la longitud de onda incidente y la
dispersada es la misma. La concentración del compuesto (C) es proporcional a la relación entre
la luz incidente (I0 ) y la luz dispersada
(ID): C K= × I /I D 0
http://www.studentconsult.es/ficheros/booktemplate/9788490224311/files/cap_e1.p
df
La turbidimetría
Cuando un rayo de luz colimado (aquel que atraviesa una suspensión homogénea de parơ
culas) atraviesa una suspensión homogénea de parơ culas, una parte de esta dicha luz se
absorbe, otra se refl eja, otra se tramite y otra úlƟ ma es dispensada en todas las direcciones.
La turbidimetría consiste en medir la canƟ dad de luz que se bloquea, es decir, canƟ dad de luz
no trasmiƟ da por suspensión y por lo tanto no capaz de emerger de ésta en misma dirección
que el rayo incidente. Cuanto más luz bloqueada, es decir cuanƟfi cada en un
espectrofotómetro (aparato uƟ lizado para cuanƟfi car muestras) en forma de absorbancia,
mayor será el numero de parơ culas presentes en suspensión y por lo tanto más alta la
concentración de la sustancia problema que da lugar a las parơ culas y que está presente en la
muestra. Por un lado cuando se combinan un anơ geno con un anƟ cuerpo en un medio
líquido, se formarán agregados de inmunocomplejos que se quedarán en suspensión dado
aspecto turbio a ese líquido. Por otro lado cuando las parơ culas detectadas por estas técnicas
las de turbidimetría sean inmunocomplejos, dichas técnicas recibirán el nombre de
inmunoturbidemetría.
7.2 La nefelometría.
En el caso de la nefelometría lo que ocurre es que se mide la canƟ dad de luz que se dispara
por las parơ culas en suspensión, es decir se cuanƟfi ca la canƟ dad de luz que es desviada por
éstas, en determinado ángulo, con relación a dirección de rayo incidente. El ángulo del rayo
incidente uƟ lizado, para evaluar la canƟ dad de luz dispersada, se comprende entre los 30º y
90º C. Cuando las parơ culas en suspensión sean agregados de inmunocomplejos, dicha técnica
será conocida como inmunonefelometría.
http://www.fatedocencia.info/2019/2019.pdf
Nefelómetro
Aplicación[editar]
Generalmente, nefelometría y turbidimetría se utilizan en el análisis de la calidad química
del agua para determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento. Estos
métodos pueden ser también apropiados para ensayos cuantitativos que usan complejos
antígeno-anticuerpo o para medir la cantidad de proteínas en fluidos. Las medidas
turbidimétricas y nefelométricas ocupan una posición destacada en los laboratorios
clínicos. Se han aplicado para la determinación de inmunoglobulinas, proteínas del
complemento, proteínas de fase aguda, proteínas de coagulación entre otras.
Diferencia con la turbidimetría
La elección entre uno de ambos métodos reside en la dispersión de luz, si es extensa, es
apropiado aplicar la turbidimetría, en cambio si es mínima es apropiada la nefelometría. De
la nefelometría se obtienen mejores resultados, porque determina concentraciones de
pocas partes por millón (ppm), con una precisión de 1 al 5%.
La nefelometría se basa en la medición de radiación dispersa, en cambio la turbidimetría
en la medición de la intensidad de un haz disminuido.
El instrumento usado en la nefelometría, el nefelómetro se asemeja al fluorómetro. En
cambio en turbidimetría se utiliza el turbidíemetro que es un fotómetro de filtro.
https://es.wikipedia.org/wiki/Nefelometr%C3%ADa
Transcripción de TURBIDIMETRÍA-NEFELOMETRÍA
3.- Detección de la luz dispersa
¿CÓMO SE PUEDE MEDIR LA LUZ DISPERDADA?
La dispersión de la luz se puede medir por turbidimetría o por nefelometría.
4.-Turbidimetría
¿QUÉ ES?
Es una técnica analítica basada en la dispersión de la luz cuando atraviesa partículas en
suspensión.
2.-PRINCIPIOS
Fenómeno de separación de las ondas de distinta frecuencia al atravesar un material.
Incluye una interacción entre el rayo luminoso incidente y la partícula con la que
choca.
5.-Nefelometría
Es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de la radiación que
atraviesan las partículas de la materia.
7.-Instrumental
El sistema genérico consta de:
Fuente de energía radiante.
Colimador.
Selector de longitud de onda.
Cubeta
Sistema de detención.
TURBIDIMETRÍA-NEFELOMETRÍA
INDICE
1.INTRODUCCION
2. PRINCIPIOS
3.DETECCION DE LUZ DISPERSADA
4. TURBIDIMETRIA
5.NEFELOMETRIA
6.APLICACIONES CLINICAS DE LA TURBIDIMETRIA Y NEFELOMETRIA
7. INSTRUMENTAL
8.ASPECTOS PRACTICOS
8.1 Comparación de métodos
8.2 Sensibilidad
8.3 Efecto matriz
8.4 Longitud de onda
8.5 Tipos de análisis
8.6 Ejecución de las técnicas
8.2.SENSIBILIDAD
Nefelómetro: la sensibilidad depende de la lectura del blanco y del ángulo de
detección.
FACTORES
1. Tamaño de la partícula
La luz dispersada depende de la relación entre el tamaño de esta y la longitud de onda
de la luz incidente.
Cuando el tamaño de la partícula es intermedio, la luz aparece dispersa hacia delante
(dispersión de Rayleigh) en distintos ángulos, lo que favorece las medidas
nefelometrías.
2. Dependencia de la longitud de onda
La intensidad de la luz dispersada es inversamente proporcional a la longitud de onda
elevada a la cuarta potencia; lo que quiere decir que a menor longitud de onda de
excitación, obtendremos mayor sensibilidad en las medidas
3. Influencia de la concentración
La intensidad de la luz dispersada es directamente proporcional al peso molecular de
las partículas y a su concentración en la solución.
4. Influencia de la distancia del detector
La intensidad de la luz dispersada es inversamente proporcional a las distancia del
detector elevado al cuadrado; por lo que cuanto más cerca este el detector de la
cubeta, mayor sensibilidad obtendremos.
No existe una formula universal que permita calcular la concentración de las partículas
en suspensión a partir de la medición de la luz dispersada (similitud con fluorimetria)
Dispersión de Rayleigh
8.3.Efecto matriz.
8.4.longitud de onda.
8.5.Tipos de análisis.
8.6.Ejecución de las técnicas.
8.3.Efecto matriz.
La matriz de un espécimen, es por tanto, el conjunto de todos sus componentes
exceptuando el componente a estudiar.
Tanto en los reactivos como en el suero pueden existir partículas que produzcan una
dispersión de luz no deseada y por tanto una interferencia analítica.
Esto ocurre con las lipoproteínas y quilomicrones de los sueros lipémicos , por
ejemplo, se puede observar mediante el empleo de técnicas cinéticas. También las
partículas de suciedad pueden producir dichos efectos → (efecto matriz).
8.4.longitud de onda.
Según la ley de Rayleigh, la intensidad de la luz dispersada aumenta cuando disminuye
la longitud de onda.
Los sueros con los que trabajamos contienen proteínas, y componentes que absorben
la luz a determinadas longitudes de onda. Las proteínas tienen un pico de absorción
por debajo de 300 nm, y los cromógenos del suero tienen otro pico de absorción entre
400 y 425 nm. Los instrumentos tienden por ello a trabajar a λ de 320 a 380 nm.
1. INTRODUCCIÓN
1.-Tecnicas analíticas
1.1.No espectroscópicas
1.1.1.Basadas en la dispersion de la luz (Light scattering)
Turbidimetría
Nefelometría
¿QUÉ SON?
La turbidimetría y la nefelometría son técnicas analíticas basadas en la dispersión de la
luz producida partículas de una sustancia en suspensión.
¿QUÉ OCURRE?
Cuando un rayo de luz monocromática, polarizada y colimada (paralelos) atraviesa una
suspensión homogénea de partículas :
Una parte de la energía es reflejada regularmente
Otra parte es difundida, es decir reflejada en todas las direcciones: DISPERSADA
Otra parte es absorbida
Otra parte es transmitida
LA DISPERSIÓN LUMINOSA
En una determinación cuantitativa de un compuesto determinado todos los factores
citados van a ser constantes excepto la concentración
TURBIDÍMETRO
NEFELOMETRO
¿QUÉ MIDE EL TURBIDÍMETRO?
El turbidímetro va a medir la disminución de la luz transmitida a través de una
suspensión de partículas utilizando para ello un espectrofotómetro (detector en la
misma dirección del haz de luz, se mide A o %T)
¿QUÉ VA A MEDIR EL NEFELOMETRO?
Mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente
con ángulos que oscilan entre 15 y 90°)
¿QUÉ SE MIDE?
Mide la reducción de la intensidad de la luz en su paso a través de una suspensión, a
causa de las partículas presentes en ésta, y cuantifica la luz residual transmitida.
FUNCIONAMIENTO
¿CÓMO SE MIDE?
El aparato utilizado para la medida es el espectrofotómetro.
La luz transmitida se mide a 0o del haz incidente es decir en su misma dirección.
Se puede medir como tanto por ciento en transmitancia (%T) o como absorbancia (A).
¿DE QUÉ DEPENDE LA SENSIBILIDAD DEL MÉTODO?
Dependerá principalmente de la exactitud y sensibilidad del aparato.
¿PARA QUE SE UTILIZA?
Se suele utilizar para soluciones concentradas (para que haya una buena disminución
de la luz transmitida). Ejemplo: determinación de proteínas totales en suero, LCR u
orina.
¿EN QUÉ SE BASA?
La turbidez es la propiedad óptica de una muestra que hace que la radiación sea
dispersada y absorbida mas que transmitida en línea recta a través de la muestra.
¿QUÉ ES?
¿CÓMO FUNCIONA?
NEFELOMETRÍA
Esta dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la
dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en
cualquier ángulo.
¿DE QUÉ DEPENDE LA INTENSIDAD DE ESTA RADIACIÓN?
El número de partículas suspendidas
Tamaño
Forma
Índices refractivos de la partícula
Medio dispersante
Longitud de onda de la radiación dispersada.
CONCENTRACIÓN
LA LONGITUD DE ONDA
De la que depende también la sensibilidad del método .
Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca.Puesto que la luz detectada en
el ángulo de dispersión 0 en ausencia de partículas con un fondo negro, es nula.
¿CÓMO SE MIDE?
El aparato que se utilizan para la medición es el nefelómetro.
Es un aparato diseñados exclusivamente para esta técnica.
Tiene un sistema de detección situado un ángulo fijo de lectura. ( 90˚)
INSTRUMENTAL
FUENTE DE ENERGÍA RADIANTE
CUBETA
Donde se coloca la muestra.
Formas : pueden ser redondas o cilíndricas y cuadradas.
Volumen : pueden ser macrocubetas, semimicrocubetas o microcubetas.
Material : pueden ser vidrio, cuarzo, plástico.
TURBIDÍMETRO SENCILLO
NEFELÓMETRO
LAMPARA DE FILAMENTOS DE TUNGSTENO
LAMPARA DE LÁSER
LAMPARA DE XENÓN
LAMPARA DE HALÓGENO
COLIMADOR
SISTEMA DE DETECCIÓN
Una de las utilidades de estas técnicas son para aquellos análisis en los que hay
reacciones antígeno-anticuerpo, donde se distinguen tres etapas:
1.-Una primera, más lenta donde no hay casi variación en la dispersión lumínica.
2.-La segunda , donde hay un gran aumento en esta dispersión.
3.-Una ultima donde la dispersión se hace lenta hasta ser casi constante.
Tanto en orina, como sangre, LCR, estas técnicas son adecuadas para medir cualquier
sustancia que se encuentre en ella, para la realización de pruebas inmunológicas.
Hemoglobina
Transferrina
IgG, IgM, IgA
Albúmina
Factores de complemento
Presencia de fármacos
https://prezi.com/v1fsfwc3a8b7/turbidimetria-nefelometria/
Los accesorios suministrados con el turbidímetro incluyen seis celdas de muestras, un juego de
seis standards secundarios de Gelex (inclusive un standard de luz parásita), una ampolla con
standard primario de formazina 7500 NTU, un cable de corriente, aceite de silicona, un paño
para aplicar el aceite a la celda de muestras, una cubierta contra el polvo, 2 rollos de papel de
impresora y el manual del instrumento.