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SUBDIRECCIÓN DE POSGRADO
Tesis
i
RESPUESTA FISIOLÓGICA Y BIOQUÍMICA A LA APLICACIÓN DE
NANOPARTÍCULAS DE COBRE Y ÓXIDO DE HIERRO EN LA GERMINACIÓN
Y CRECIMIENTO DE Cucumis spp.
Tesis
_______________________________ ___________________________
Dra. Norma Angélica Ruiz Torres Dr. Celestino Flores López
Asesor principal Asesor
_______________________________ ____________________________
Dr. Ricardo Hugo Lira Saldívar Dra. Ileana Vera Reyes
Asesor Asesor
ii
Agradecimientos
iii
Dedicatoria
iv
Índice General
vi
4.1 BIOENSAYO I. Evaluación del efecto potencial de nanopartículas de
cobre NPsCu, como promotor de la germinación y vigor en semillas de
Cucumis sativus L. .................................................................................................... 46
4.2 BIOENSAYO II. Efecto de nanopartículas NPsFe2O3 y micropartículas
MPsFeSO4 a bajas concentraciones, en el comportamiento fisiológico de
semillas de Cucumis melo L. ................................................................................... 52
4.3 BIOENSAYO III. Comportamiento fisiológico de semillas de Cucumis
melo L., debido a la aplicación de nanopartículas de NPsFe2O3 y
micropartículas de MPsFeSO4 a concentraciones medias. ................................56
4.4 BIOENSAYO IV. Efecto de NPsFe2O3 en la germinación y vigor de
semillas de Cucumis sativus L., bajo condiciones in vitro. ................................. 61
4.5 BIOENSAYO V. Pruebas bioquímicas para la determinación de la
producción de estrés oxidativo, mediante la cuantificación de la activación del
sistema antioxidante enzimático y la producción de prolina en plántulas
tratadas con NPsFe2O3 y MPsFeSO4. ................................................................... 64
5 CONCLUSIONES ..............................................................................................70
6 REFERENCIAS ................................................................................................. 72
Commented [CTQ1]: No números (quitar)
vii
Índice de Cuadros
viii
Índice de Figuras
ix
Figura 13. Microgramos de prolina por peso fresco de material vegetal,
cuantificado en plántulas de C. melo sometidas a tratamientos de fierro en su
forma de NPs y MPs a concentraciones de 0 a 100 ppm. ________________ 67
x
Resumen
POR
xi
Se estudió el efecto potencial de NPsFe2O3 y NPsCu en los procesos
fisiológicos relacionados con el vigor de la germinación, crecimiento de
plántulas y su respuesta en el estrés oxidativo, en semillas de C. melo y C.
sativus. La investigación incluyo cinco bioensayos llevados a cabo en el
Laboratorio de Fisiología y Bioquímica del Centro de Capacitación y Desarrollo
en Tecnología de Semillas (CCDTS), de la Universidad Autónoma Agraria
Antonio Narro y en el Laboratorio de Biotecnología perteneciente al
Departamento de Plásticos en la Agricultura del Centro de Investigación en
Química Aplicada (CIQA), en Saltillo, Coahuila México. Se realizaron pruebas
preliminares para el establecimiento de los bioensayos que incluyeron curvas
de imbibición, pruebas de germinación estándar, preparación de soluciones con
NPs y MPs, y métodos para la adición de NPs en un medio de cultivo para la
germinación in vitro. Bioensayo I: ensayo de germinación y vigor de semillas de
C. sativus tratadas con NPsCu a dosis bajas (0- 100 ppm) y altas (0- 500 ppm)
imbibidas por 12 y 24 h por medio de agitación, estableciendo 24 tratamientos
con cuatro repeticiones cada uno, el vigor (VIG) se evaluó al cuarto día después
de la siembra y la germinación (GERM), plántulas anormales (PA), semillas sin
germinar (SSG), longitud de vástago (LV) y longitud de radícula (LR) al octavo
día después de la siembra. Bioensayo II: efecto diferencial del comportamiento
fisiológico en semillas de C. melo debido a la aplicación de NPsFe2O3 y
MPsFeSO4 a concentraciones de 0 a 50 ppm imbibidas por 24 h, se realizó una
prueba de germinación, donde se evaluó VIG, GERM, PA, SSG, LV y LR,
además de colectar muestras de tejido vegetal de 100, 200 y 500 mg.
Bioensayo III: se determinó los efectos de la aplicación de NPsFe2O3 y
MPsFeSO4 a concentraciones medias (0 a 100 ppm) en el proceso de la
germinación y vigor de semillas de C melo, se evaluó IVE, VIG, GERM, PA,
SSG, LV, LR. Bioensayo IV: efecto de NPsFe2O3 (0, 50, 100, 200 y 500 ppm)
en la germinación en medio de cultivo in vitro, para mejorar la expresión del
vigor en la germinación de C. sativus, se evaluó IVE, VIG, GERM, LR, LV y PS
(peso seco). Bioensayo V: se analizó el estrés oxidativo, mediante la
xii
cuantificación de la actividad enzimática antioxidante (POD y APX) y la
producción de prolina en las plántulas provenientes del Bioensayo II y
Bioensayo III. Los resultados del bioensayo I, indican que NPsCu a bajas
concentraciones promueven el vigor con respecto al crecimiento de plántulas, si
las semillas pasan por periodos cortos de imbibición y a medida que aumenta
las concentraciones el vigor de germinación se ve afectado de forma
progresiva, mientras que la aplicación de altas concentraciones de NPsCu
provoca toxicidad y esta es expresada con la inhibición del crecimiento de
raíces principales. Bioensayo II. Los resultados indican que es posible mejorar
la germinación y el crecimiento de plántulas de C. melo al aplicar
concentraciones de 0.5 y 50 ppm (NPsFe2O3) y con 0.5, 5, y 10 ppm
(MPsFe2SO4), además, que permiten reducir el número de plántulas anormales.
Bioensayo III. En la FV concentración se encontró que 10 y 50 ppm mejoran el
IVE y LV, y en la FV partícula la mejor fue NPs a 10 ppm. En cuanto a
interacciones, el porcentaje de germinación se incrementó 6 y 8 % con los
tratamientos de 50 y 100 ppm (MPs), respectivamente, para la variable IVE el
tratamiento con 100 ppm de MPs superó al testigo. De igual forma, para LV los
tratamientos de 10 y 50 ppm de NPs superó al testigo por 1.58 y 0.98 cm,
respectivamente. Bioensayo IV. Los resultados revelan que los tratamientos de
NPsFe2O3 bajo condiciones in vitro son favorables para mejorar la expresión de
semillas con bajo vigor de germinación y para el crecimiento de las plántulas, el
IVE (con 50 y 500 ppm) y acumulación de biomasa (con 100 y 500 ppm).
Bioensayo V. En lo que respecta actividad enzimática se observó que, con
tratamientos con 10 y 0.5 ppm de NPs y MPs respectivamente, aumentaron la
actividad de APX hasta 10 veces con respecto al testigo (en parte aérea),
además, en los tratamientos con MPs el APX decreció exponencialmente
(Bioensayo II). Por otro lado en plántulas obtenidas del Bioensayo III, con el
tratamiento de 50 ppm (MPs) la actividad enzimática aumento al doble con
respecto al testigo. En lo que respecta a POD, en la parte aérea, los
tratamientos con 50 ppm (MPs) y 10 ppm (NPs y MPs) superaron al control
hasta en un 60, 29 y 28 %, respectivamente. En la raíz la mayor actividad
xiii
enzimática se registró con tratamientos de 50, 10 y 5 ppm (MPs) y con 0.5 y 10
ppm (NPs) (Bioensayo II). Por otro lado en el Bioensayo III, la actividad
enzimática se mantuvo por debajo del control, tanto en la parte aérea como en
la raíz. En cuanto a prolina, en la parte aérea se registró un aumento de 444.2
µg (50 ppm de NPs) con respecto al control, y un incremento tanto en raíces,
como en parte aérea (con 1 y 10 ppm MPs) (Bioensayo II), y en la parte aérea
se observó un aumento de 437.5 y 241.8 µg (con 10 y 50 ppm de NPs),
respectivamente, mientras que con 50 y 100 ppm (MPs) se registró un aumento
en ambas partes de la plántula. En general NPsCu a bajas concentraciones y
tiempos reducidos de imbibición son favorables en el vigor con respecto al
crecimiento de plántulas, y al aumentar las concentraciones el vigor de
germinación se ve fuertemente afectado, y provocan toxicidad la cual es
expresada con la inhibición del crecimiento de raíces principales. Por otro lado
la aplicación de NPsFe2O3 y MPsFeSO4 resultan ser buenos candidatos como
fertilizantes y se descartó la fitotoxicidad en plántulas de C. melo, además que
al adicionar NPsFe2O3 en medio de cultivo in vitro mejoran considerablemente
la expresión de las semillas de C. sativus. Se puede intuir que las plántulas
podrían tolerar concentraciones <100 ppm de NPs y MPs mejorando las
actividades de enzimas antioxidantes que eliminan ERO y de prolina, como
resultado, logran un equilibrio entre la formación de ROS y la desintoxicación
celular.
xiv
Abstract
BY
xv
The potential effect of NPsFe2O3 and NPsCu on the physiological processes
related to the vigor of germination, seedling growth and its response in oxidative
stress, in seeds of C. melo and C. sativus was studied. The research included
five bioassays carried out in the Laboratory of Physiology and Biochemistry of
the Seed Technology Training and Development Center (CCDTS), the Antonio
Narro Autonomous Agrarian University and the Biotechnology Laboratory
belonging to the Department of Plastics in Agriculture of the Center for Research
in Applied Chemistry (CIQA), in Saltillo, Coahuila, Mexico. Preliminary tests
were conducted for the establishment of bioassays that included imbibition
curves, standard germination tests, preparation of solutions with NPs and MPs,
and methods for the addition of NPs in a culture medium for germination in vitro.
Bioassay I: germination and vigor test of C. sativus seeds treated with NPsCu at
low doses (0-100 ppm) and high doses (0-500 ppm) imbibed for 12 and 24 h by
means of agitation, establishing 24 treatments with four Each repetition, vigor
(VIG) was evaluated on the fourth day after sowing and germination (GERM),
abnormal seedlings (PA), ungerminated seeds (SSG), stem length (LV) and
radicle length (LR ) on the eighth day after sowing. Bioassay II: differential effect
of physiological behavior in seeds of C. melo due to the application of NPsFe2O3
and MPsFeSO4 at concentrations of 0 to 50 ppm imbibed for 24 h, an anchor
paper germination test was carried out, where VIG, GERM was evaluated , PA,
SSG, LV and LR, in addition to collecting tissue samples of 100, 200 and 500
mg. Bioassay III: the effects of the application of NPsFe2O3 and MPsFeSO4
were determined at medium concentrations (0 to 100 ppm) in the process of
seed germination and vigor of C melo, IVE, VIG, GERM, PA, SSG, LV were
evaluated , LR. Bioassay IV: effect of NPsFe2O3 (0, 50, 100, 200 and 500 ppm)
on germination in in vitro culture medium, to improve the expression of vigor in
the germination of C. sativus, IVE, VIG, GERM, LR, LV and PS (dry weight).
Bioassay V: Oxidative stress was analyzed by quantifying antioxidant enzymatic
activity (POD and APX) and proline production in seedlings from Bioassay II and
Bioassay III. The results of the bioassay I, indicate that NPsCu at low
concentrations only promote vigor with respect to the growth of seedlings, if the
xvi
seeds go through short periods of imbibition and as the concentrations increase
the vigor of germination is affected progressively, while that the application of
high concentrations of NPsCu causes toxicity and this is expressed with the
inhibition of the growth of main roots. Bioassay II. The results indicate that it is
possible to improve the germination and growth of C. melo seedlings by
applying concentrations of 0.5 and 50 ppm (NPsFe2O3) and with 0.5, 5, and 10
ppm (MPsFeSO4), in addition, that allow to reduce the number of abnormal
seedlings. Bioassay III. In the FV concentration it was found that 10 and 50 ppm
improve the IVE and LV, and in the particle FV the best was NPs at 10 ppm.
Regarding interactions, the germination percentage increased 6 and 8% with the
treatments of 50 and 100 ppm (MPs), respectively, for the variable IVE the
treatment with 100 ppm of MPs exceeded the control. Similarly, for LV,
treatments of 10 and 50 ppm of NPs surpass the control by 1.58 and 0.98 cm,
respectively. Bioassay IV. The results reveal that the treatments of NPsFe2O3
under in vitro conditions are favorable to improve the expression of seeds with
low germination vigor, besides being favorable for the growth of the seedlings,
the IVE (with 50 and 500 ppm) and accumulation of biomass (with 100 and 500
ppm). Bioassay V. Regarding enzymatic activity, it was observed that, with
treatments with 10 and 0.5 ppm of NPs and MPs respectively, they increased
the activity of APX up to 10 times with respect to the control (aerial part), in
addition, in the treatments with MPs the APX decreased exponentially (Bioassay
II). On the other hand, in seedlings obtained from Bioassay III, with 50 ppm
treatment (MPs) the enzymatic activity increased twice as compared to the
control. With regard to POD, in the aerial part, treatments with 50 ppm (MPs)
and 10 ppm (NPs and MPs) exceeded the control by up to 60, 29 and 28%,
respectively. At the root the highest enzymatic activity was registered with
treatments of 50, 10 and 5 ppm (MPs) and with 0.5 and 10 ppm (NPs) (Bioassay
II). On the other hand, in Bioassay III, enzymatic activity remained below control,
both in the aerial part and in the root. Regarding proline, in the aerial part an
increase of 444.2 μg (50 ppm of NPs) was registered with respect to the control,
and an increase in both roots, as in aerial part (with 1 and 10 ppm MPs)
xvii
(Bioassay II), and in the aerial part an increase of 437.5 and 241.8 μg was
observed (with 10 and 50 ppm of NPs), respectively, while with 50 and 100 ppm
(MPs) an increase was registered in both parts of the seedling. In general
NPsCu at low concentrations and reduced imbibition times are favorable in the
vigor with respect to the growth of seedlings, and when increasing the
concentrations the vigor of germination is strongly affected, and cause toxicity
which is expressed with the inhibition of the growth of main roots. On the other
hand, the application of NPsFe2O3 and MPsFeSO4 turned out to be good
candidates as fertilizers and the phytotoxicity in C. melo seedlings was ruled out,
besides adding NPsFe2O3 in in vitro culture medium considerably improves the
expression of C. sativus seeds. It can be intuited that the seedlings could
tolerate concentrations <100 ppm of NPs and MPs improving the activities of
antioxidant enzymes that eliminate ERO and proline, as a result, achieve a
balance between ROS formation and cellular detoxification.
xviii
1
INTRODUCCIÓN
REVISIÓN DE LITERATURA
1.7.1 Nanomateriales
Una definición de trabajo para una nanopartícula (NPs), es la de un agregado
de átomos entre 1 y 100 nm, visto como una subdivisión de un material
voluminoso y de dimensiones menores que la longitud critica de cierto
fenómeno (Poole y Owens, 2007). Usualmente, las NPs poseen dimensiones
nanométricas en sus tres dimensiones, mientras que los términos material
nanoestructurado y nanomaterial son más generales y se aplican a materiales
cuya fabricación, o cuyas dimensiones sean controladas a nivel nanométrico.
Hay tres tipos de NPs: las naturales (biológicas); las incidentales, como las
emisiones de la combustión en motores; y las fabricadas, generadas a propósito
con una finalidad (Medina et al., 2016).
El fundamento de los nanomateriales es que, muchas de las propiedades de los
materiales dependen de cómo se comporten los electrones que se mueven en
su seno o de como estén ordenados los átomos en la material. En un material
nanométrico, el movimiento de los electrones está muy limitado por las
dimensiones del propio material. Además la proporción de átomos en la
superficie con respecto al interior es con mucho, más alta que en materiales de
tamaño más elevado. Por consiguiente, si se reducen las dimensiones de un
material, se modifican sus propiedades y en consecuencia se pueden diseñar
materiales con propiedades de acuerdo a cada interés en particular (Díaz del
Castillo, 2012). Los nanomateriales se pueden construir mediante técnicas de
"top down", produciendo estructuras muy pequeñas a partir de piezas de
material más grandes o pueden construirse mediante técnicas de "botton up",
átomo por átomo o molécula por molécula. Una forma de hacerlo es el auto
16
1.8.1 Nanoplaguicidas
Implican partículas muy pequeñas de ingredientes activos de pesticidas u otras
estructuras pequeñas con propiedades pesticidas útiles, estos mismos, pueden
aumentar la dispersión y la humectabilidad de las formulaciones agrícolas (es
decir, la reducción de la escorrentía de disolventes orgánicos) y el movimiento
no deseado de plaguicidas (Bergeson, 2010). Los nanomateriales y
biocompuestos exhiben propiedades útiles tales como rigidez, permeabilidad,
cristalinidad, estabilidad térmica, solubilidad y biodegradabilidad (Bouwmeester
et al., 2009; Bordes et al., 2009), necesarios para formular nanoplaguicidas. Por
su parte, Jianhui y colaboradores (2005) desarrollaron un nanoplaguicida de
decilsulfato de sodio (SDS) modificado con el nanomaterial de TiO 2 / Ag
fotocatalítico, conjugado con dimetomorf (DMM) (plaguicida convencional) y
reportaron que la formulación modificada con granularidad de 96 nm, aumento
de la dispersividad y descomposición del plaguicida en el suelo, al tiempo que
aumentó su efectividad en estudios de plántulas vegetales (de col y pepino),
concluyendo que los nano plaguicidas también ofrecen una gran superficie
específica y, por lo tanto, una mayor afinidad con el objetivo. Las
nanoemulsiones, nanoencapsulados y nanocontenedores, son algunas de las
20
examinaron su efecto en tres especies de plantas; maíz (Zea mays L.), sandía
(Citrullus lanatus) y calabacín (Cucurbita pepo L.), evaluando porcentaje de
germinación, la tasa de germinación, el tiempo medio de germinación, la
longitud de la raíz, el peso fresco y seco de las plántulas. Se evaluaron siete
concentraciones (0.05, 0.1, 0.5, 1, 1.5, 2 y 2.5 mg / L), observaron una mejora
significativa en los valores de porcentaje de germinación para las plantas de
sandía y calabacín mediante el tratamiento con NPsAg en comparación con las
semillas no tratadas, sin embargo, las NPsAg mostraron un efecto tóxico en el
alargamiento de raíces de maíz, mientras que el crecimiento de plántulas de
sandía y calabacín se vio afectado positivamente por cierta concentración de
NPsAg. Este estudio mostró que la exposición a estas NPs causó efectos tanto
positivos como negativos sobre el crecimiento y la germinación de la planta. En
la misma línea Monica y Cremonini (2009), mencionan que una de las
preocupaciones de las aplicaciones de nanomateriales en la germinación de
semillas es su fitotoxicidad y que el nivel puede depender del tipo de
nanomaterial y su posible aplicación. Por ejemplo, Lin y Xing (2007) evaluaron
la fitotoxicidad de nanomateriales (Al2O3, ZnO, Al y Zn) y su impacto en las
tasas de germinación en rábano, canola de colza, ryegrass, lechuga, maíz y
pepino. Ellos confirieron la hipótesis de que las concentraciones más altas
(2000 mg / L) de NPsZn de (35 nm) y ZnO (20 nm) inhibieron la germinación en
el raigrás y el maíz, respectivamente, la longitud de la raíz también se inhibió a
2000 mg/l de NPsZn y ZnO. La fitotoxicidad de NPsAl y Al afectó
significativamente la elongación de la raíz de maíz; mientras que NPsAl facilitó
el crecimiento de la raíz del rábano y la colza.
Por otra parte, las nanopartículas de óxido de hierro (NPs γ-Fe2O3) que han
surgido como un método innovador y prometedor de aplicación de hierro en los
sistemas agrícolas. Sin embargo, la posible toxicidad de las NPs de γ-Fe2O3 y
su absorción y translocación requieren más estudios antes de la aplicación en el
campo a gran escala. Por lo que se ha investigado la absorción y distribución en
maíz (Zea mays L.) y se determinaron sus impactos en la germinación de
semillas, la actividad de enzimas antioxidantes, el contenido de
26
1.9.2 Prolina
La prolina es un aminoácido que se encuentra en las plantas en cantidades muy
pequeñas, en condiciones adecuadas para el desarrollo y crecimiento y es
considerada como un osmolito compatible, que se sabe que se acumula en
respuesta a diversos tipos de estrés abiótico, como la sequía, la salinidad, la
alta temperatura, la deficiencia de nutrientes y la exposición a metales pesados
(Moreno et al., 2010) la prolina se acumula en citosol y contribuye al ajuste
osmótico en respuesta al estrés de deshidratación y tiende a mantener
suficiente turgencia celular para crecer y evitar la deshidratación, además la
prolina participa con múltiples funciones y que está relacionada con la expresión
de genes de tolerancia de las plantas a diferentes condiciones de estrés,
actuando como osmorregulador, estabilizador de proteínas y membranas,
inductor de genes relacionados con estrés osmótico, fuente de carbono y
nitrógeno fácilmente disponible en la rehidratación celular (Hoque et al., 2007).
La acumulación del aminoácido en los tejidos vegetales en respuesta a
diferentes tensiones abióticas puede jugar un papel importante contra el daño
oxidativo causado por ERO, debido a su acción como desactivador de oxígeno
singlete y secuestrante de radicales hidroxilo, la prolina puede estabilizar ADN,
proteínas y membranas (Mohanty y Matysik, 2001). Además de ser un
eliminador de ERO, la prolina desempeña varios papeles importantes durante la
adaptación al estrés, actuando como un mediador de ajuste osmótico (Zhang et
al., 1999) y almacenamiento de carbono, nitrógeno y energía. Además, su
síntesis y degradación pueden proporcionar una forma de amortiguar el pH
citosólico, equilibrando el estado redox celular (Freitas et al., 2011). La dificultad
en su estudio se acentúa al considerar que la concentración del aminoácido se
afecta por la edad o etapa fenológica y que existen diferencias de concentración
entre los diversos órganos de la planta, Barcenas (1999), indica que la
acumulación de prolina se ve afectada por la edad o etapa fenológica, y
describe una tendencia a presentar una mayor acumulación del aminoácido en
las raíces primarias (más viejas) que en las raíces secundarias (más jóvenes),
de igual manera menciona los diferentes niveles de acumulación de prolina en
34
MATERIALES Y MÉTODOS
I. Medio convencional
Para la preparación del medio de cultivo, se utilizó MS 2% (4.4 g/L,) Phytagel™
Sigma- Aldrich (2.2 g/L) y sacarosa (20 g/L). Primero se pesó el MS y la
sacarosa y se colocarón en un vaso de precipitado de 1000 ml, se adiciono 600
ml de agua destilada, posteriormente se homogenizo en un agitador magnético
a una velocidad constante, después se ajustó el pH a 6.2. Finalmente se agregó
el Phytagel™ y se diluyó con calor en un horno de microondas convencional
durante dos ciclos de 50 segundos cada uno; luego se procedió a vaciar el
medio en frascos de vidrio de 100 ml, colocando 30 ml de medio en cada uno,
estos fueron tapados y llevados a la autoclave para su esterilización durante 15
minutos a 121 °C, a una presión de 15 libras.
Evaluación de variables
Se realizaron dos evaluaciones bajos las consideraciones de la International
Seeds Testing Association ISTA (2009), la primera al cuarto día después de la
siembra contabilizando:
Plántulas normales (PN): parámetro considerado como indicador del vigor (VIG)
que posee la semilla para una germinación en menor tiempo y la capacidad
para establecerse en campo, considerando como PN aquellas que presentan
todas sus estructuras básicas y que tienen el potencial para continuar
desarrollándose bajo condiciones óptimas.
Una segunda valoración al octavo día después de la siembra en la que se
evaluaron:
Germinación (GERM): porcentaje de plántulas normales al final del
bioensayo.
Plántulas anormales (PA): porcentaje de plántulas con alguna malformación
que impida su desarrollo normal.
Semillas sin germinar (SSG): porcentaje de semillas que iniciaron el proceso
de germinación, sin embargo no llegan a la tercera etapa de la misma.
40
I 0, 0.5, 1, 5,10, y 50
II 0.5, 1, 5,10, y 50
y = 0.0417x + 0.1426
0.6 R² = 0.9282
0.5
Absorbancia (UA)
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 10 20 30 40 50 60
BSA (µg/µl)
Peroxidasas (POD)
La actividad de peroxidasas se realizó utilizando como sustrato guayacol, de
acuerdo a la metodología reportada por Pütter (1974). El volumen de reacción
fue de 2 ml, el cual contenía: 10 µl de extracto proteico de parte aérea y de raiz,
300 µl de una solución de guayacol (100 mM), amortiguador de fosfatos 100
mM pH 6 y 60 µl de una solución de H 2O2 (100 mM), la reacción empezó
cuando se agregó el H2O2. Se leyó inmediatamente a 470 nm en
espectrofotómetro (Genesys 10 UV) por 2 min cada 20 segundos.
Dónde:
Yijk= La puntuación del i sujeto bajo la combinación del j valor del factor A y el k
valor del factor B.
μ= La media común a todos los datos del experimento.
αj= El efecto o impacto de j nivel de la variable de tratamiento A.
ßk= Efecto del k valor de la variable de tratamiento B.
(αß) jk= Efecto de la interacción entre el i valor de A y el k valor de B.
εij= Error experimental.
46
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Comparación de medias
El Cuadro 5 presenta la comparación de medias de acuerdo a la Prueba de
Tukey (α= 0.05), el cual arrojó diferencias estadísticas en la FV concentraciones
en todas las variables, donde para VIG se observa que ningún tratamiento
superó al testigo. En lo que respecta a la variable GERM, se observó que
ningún tratamiento a concentraciones bajas superó al testigo, mientras que en
tratamientos a concentraciones altas mostró que el porcentaje de germinación
es inversamente proporcional a las concentraciones. En las medias de la
48
Bajas
Testigo 89 b 94 a 5d 1 cd 9.1 ab 13.7 b
5 80 bc 92 a 7 cd 1 cd 9.7 a 15.0 ab
10 75 c 92 a 5 cd 1 bcd 9.1 ab 14.7 ab
20 76 c 94 a 5d 1 bcd 8.9 b 14.4 b
50 76 c 93 a 6d 1 bcd 9.5 a 15.5 a
100 66 d 95 a 4d 1 bcd 9.2 ab 15.5 a
Tukey (α= 0.05) 7.8 6.1 6.5 3.9 0.9 0.7
Tiempo
12 h 58 a 66 a 31 b 3a 9.6 a 16.3 a
24 h 47 b 62 b 36 a 2a 10.0 a 13.7 b
Tukey (α= 0.05) 1.8 1.4 1.5 1.4 0.2 0.8
Dosis
Bajas I 76 a 93 a 6b 1b 9.3 a 15.0 a
Altas II 29 b 35 b 61 a 4a 7.4 b 14.3 a
Tukey (α= 0.05) 10.7 11.5 11.3 1.2 0.3 0.6
100
90
80
70
1a 12h
60
1a 24h
50
%
2b 12h
40
2b 24h
30
20
10
0
VIG GERM PA SSG
Comparación de medias
En el Cuadro 7 se presenta la comparación de medias de las variables
evaluadas en la prueba de germinación de semillas tratadas con NPsFe2O3
(Tukey α= 0.05), mostrando para la variable VIG medias estadísticamente
diferentes entre tratamientos, y que todos los tratamientos presentan
porcentajes de vigor inferiores al testigo, excepto los tratamientos de 1 y 5 ppm
de NPs superando al testigo en un 14 y 6 %, respectivamente. Estos resultados
permiten deducir que existe diferencia en la respuesta en la aplicación de
nanopartículas de hierro y de sulfato ferroso durante la fase de imbibición de la
53
MPsFeSO4
0.5 35 e 85 a 7 de 8 e 5.9 ab 12.0 a
1 40 cd 72 de 15 b 13 ab 5.4 b 9.7 bc
5 39 cd 84 a 4 f 12 bc 7.5 a 12.4 a
10 24 f 83 a 6 ef 11 a 7.4 a 12.6 a
50 39 cd 70 e 16 b 14 a 5.4 b 9.5 c
100
NPs MPs
90
80
70
Porcentaje
60
50
40
30
20
10
0
0 0.5 1 5 10 50 ppm 0.5 1 5 10 50
VIG GERM PA
14 NPs MPs
12
10
Longitud (cm)
8
LV
6 LR
4
0
0 0.5 1 5 10 50 0.5 1 5 10 50
ppm
Comparación de medias
De acuerdo con la comparación de medias (Tukey, α= 0.05), en la FV
concentración ninguna variable mostró diferencias estadísticas entre los
tratamientos, con excepción del IVE y LV. En el que para la variable IVE se
observó índices más altos con respecto al testigo a concentraciones de 10 y 50
ppm. Mientras que para la variable LV a concentraciones de 10 y 50 ppm,
superó al testigo con 0.90 y 0.55 cm, respectivamente, y en la FV partícula, la
mejor partícula fue NPs a 10 ppm (Cuadro 8).
Tukey (α= 0.05) 2.2 3.3 3.6 2.9 0.2 0.4 0.2
Concentración
(ppm)
Testigo 23 a 86 a 8 a 6a 2.0 b 13.9 a 5.5 b
10 24 a 86 a 6 a 8a 2.7 a 13.4 a 6.4 a
50 23 a 86 a 10 a 4a 2.0 b 13.3 a 6.0 a
100 20 a 90 a 6 a 4a 2.9 a 13.3 a 5.2 b
Tukey (α= 0.05) 4.2 6.4 6.8 5.5 0.5 7.2 3.6
Media general 22.2 86.7 7.5 5.5 2.4 13.7 5.8
Concentración; VIG= Vigor; GERM= Germinación; PA= Plántulas anormales; SSG= Semillas sin germinar;
IVE= Índice de velocidad de emergencia; LV= Longitud de vástago; LR= Longitud de radícula; ppm=
Partes por millón; cm= Centímetros; NPs= Nanopartículas; MPs= Micropartículas.
NPs MPs
100
90
80
70 VIG
60 GERM
50
%
PA
40
30
20
10
0
0 10 50 100 ppm 0 10 50 100
4 4
3.5 3.5
3 3
2.5 2.5
IVE
IVE
2 2
1.5 1.5
1 1
0.5 0.5
0 0
0 10 50 100
A ppm 0 10 50 100
B
0 10
ppm
50 100
NPs MPs
Figura 6. Respuesta del IVE bajo efecto de la interacción entre tipo de partícula
(NPs y MPs) y concentración (A), e IVE obtenidos por concentración utilizada
(B).
59
8 8
7 7
6 6
5 5
4 4
3 3
2 2
1 1
0 0
0 10 50 100 0 10 50 100
A 0 10 ppm 50 100 B NPs MPs
Figura 7. Efecto de diferentes concentraciones (A) y su interacción con tipo de
partícula (NPs y MPs) en la longitud de vástago de plántulas de C. melo L.
C.V (%) 28.9 9.8 138 161.9 12.7 13.2 21.3 17.9
*, ** = Significativo al 0.05 y 0.01 niveles de probabilidad, respectivamente; FV = Fuente de
variación; GL= Grados de libertad; CV= Coeficiente de variación; VIG= Vigor; GERM=
Germinación; PA= Plántulas anormales; SSG= Semillas sin germinar; IVE= Índice de velocidad
de emergencia; PS= Peso seco; LV= Longitud de vástago; LR= Longitud de radícula; mg/pta =
Miligramos por plántula.
Comparación de medias
La comparación de medias mediante la Prueba de Tukey (α= 0.05) arrojó que
para las variables VIG, GERM, PS, LV y LR existe diferencia estadística entre
los tratamientos (Cuadro 10), donde para la variable VIG se observó un
aumento del 24 %, con respecto al control (con 500 ppm); mientras que para la
variable GERM superó al testigo en un 8 % (con 50 ppm) y se incrementa un 47
% comparado con la germinación inicial del material (53%, obtenido del estudio
preliminar de germinación) (Figura 8). En el caso de la variable LR el
tratamiento con 500 ppm superó al testigo al aumentar 2 cm (Figura 9); de igual
manera para la variable LV se obtuvo un incremento de 2.4 y 2.1 cm con los
tratamientos de 50 y 500 ppm, respectivamente; mientras que el IVE se duplicó
al aplicar 50 ppm, con respecto al control y finalmente se detectó un aumento
en la acumulación de biomasa superior al testigo con 100 y 500 ppm en un 99.6
y 82 mg/pta, respectivamente.
62
100
90
80
70
Porcentaje
60
50
40
30
20
10
0
0 50 100 200 500
ppm
VIG GERM PA SSG
10
9
8
7
Longitud (cm)
6
5 LV
4 LR
3
2
1
0
0 50 100 200 500
ppm
Bioensayo II
Bioensayo III
CONCLUSIONES
REFERENCIAS
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