AGROBIOTECNOLOGIA

CURSO 2017
-

Control de malezas y resistencia a herbicidas

Esteban Hopp sobre la base de la teórica de Emiliano Altieri

Departamento de Biotecnología
NIDERA S.A

Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Universidad de Buenos Aires
Sumario
Desafíos para la agricultura

Malezas y su control

Herbicidas

Aplicaciones biotecnológicas al control de malezas

- Resistencia a glifosato
- Resistencia a glufosinato
- Resistencia a inhibidores de la acetolactato sintetasa
- Inhibidores de la fotosíntesis
- Otras resistencias metabólicas

El problema de la emergencia de malezas resistentes

(“supermalezas”)

Agrobiotecnología
Consideraciones sobre el uso de cultivos / herbicidas
Aplicaciones
de la biotecnología Referencias
al control
de malezas
Desafíos

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 Malezas

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 • Concepto:
Malezas - Plantas que crecen en un cultivo y que no corresponden
a la especie o al genotipo cultivado.
• Importancia:
- Están siempre presentes.
- Compiten con el cultivo por luz, agua, nutrientes y espacio.
- pueden ser reservorio de enfermedades y plagas.
. - Secretan sustancias alelotóxicas (alelopatía).
- Producen pérdidas de rendimiento.
- Pueden ser reservorios de plagas y enfermedades.
- Producen pérdidas económicas en la comercialización.

Es crítico conocer la naturaleza y el repertorio

. de las malezas que afectan a un cultivo

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas

Cultivo de soja con (izquierda) y sin (derecha) malezas

Malezas
Malezas en lote de girasol convencional
Rama negra (Conyza bonaeriensis)
resistente a glifosato en el cultivo de soja

Ejemplos de daño causado por malezas

durante todo el ciclo de cultivo de soja en Argentina:

Especie Densidad Daño (*)

Yuyo colorado (Amaranthus quitensis) 1 planta/m2 23

Chamico (Datura ferox) 1 planta/m2 29
Quínoa (Chenopodium album) 1 planta/m2 35
Gramímeas anuales 500 plantas/m2 50-75
Sorgo de Alepo (Sorgum halepense) 20-24 vástagos/m2 89
(*): % reducción de rendimiento
 Pérdida del rendimiento del cultivo de soja por la presencia de rama
negra y capín

Pautasso, JM. Serie Extensión Digital – Actualización Técnica Soja. Año 2015 INTA

Condición: aplicaciones de glifosato en post-

emergencia y no se observó control sobre estas
malezas

Rama negra (Conyza spp)

Capín (Echinochloa colona)
 Control de malezas

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 Historia del control de malezas

Fuente: F. L. Timmons, Weed Science (2005)

 Evolución en el control de malezas
MIM (Manejo
Mecánico integrado de
manual mecánico + químico químico malezas)

Siglo XVIII 2,4 D (40’) Cultivos Malezas

(Rev industrial) transgénicos resistentes
(90’) (hoy)

Patente de un arado por Thomas Jefferson (1794)

http://inventors.about.com/library/inventors/bljefferson.htm

1996: introducción del primer cultivo RG y aparición de la primer maleza RG

 • Manual
Control
- Fue la primera técnica empleada en la historia
de malezas de la agricultura.
- Muchas veces la similitud morfológica de las malezas
con el cultivo, no permite hacer el control temprano de
las mismas.
- No es compatible con el cultivo de grandes superficies.
- No es compatible con las sociedades modernas ya que
requiere disponer de mucha mano de obra.

Agrobiotecnología
FAO .org
Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 • Mecánico
Control -Consiste en el uso de herramientas
de malezas arrastradas por un tractor (rastras,
rastras rotativas, escardillos).
-Tiene alto costo energético.
- Causa problemas de erosión hídrica
o eólica, compactación del suelo y
pérdida de humedad.

•Químico
- Consiste en el uso de herbicidas.
- A diferencia de los otros métodos
permite el control temprano de
malezas, lo que evita la alelopatía.

Control químico: aplicación de herbicida para la preparación del terreno

para la siembra directa (pre-siembra) o durante el ciclo del cultivo (post-
emergencia)

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 •Químico
Control Nuevos desarrollos: sistemas de detección de malezas
de malezas (Weed IT & Weed Seeker)

Ahorro de herbicidas

Costo Impacto ambiental

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 Análisis de los “costos” por malezas en el cultivo
de soja en Argentina

100 % más en el costo por herbicida

SMD: sin malezas difíciles
CMD: con malezas difíciles

Fuente: REM
 Caso de Maíz guacho RR dentro de un lote de
soja RR

Con el surgimiento del maíz RR también aparece el problema del maíz

voluntario en lotes de soja RR

Fuente: Papa, 2012

 Herbicidas

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Herbicidas
Los herbicidas son productos que forman
parte de los denominados pesticidas:

La FAO (Food and Agriculture Organization) definió pesticidas como:

Cualquier sustancia o mezcla de sustancias destinada a prevenir,
destruir o controlar cualquier peste (plaga) , incluyendo vectores de
humanos o enfermedades de animales, especies no deseadas de
plantas o animales que causan daño o interfieren durante la
producción, procesamiento, almacenamiento, transporte
comercialización de alimento, commodities (granos) provenientes de la
agricultura, madera o productos de madera, alimentos para animales o
sustancias que puedan ser administradas a animales para el control de
insectos, arácnidos u otras pestes en o sobre su cuerpo. El término
incluye sustancias destinadas al uso como reguladores de crecimientos
de plantas, defoliantes, desecantes o agentes para reducir frutos o
prevenir la caída de frutos. También usadas como sustancias aplicadas
a cultivos ya sea antes o después de la cosecha para proteger el
grano del deterioro durante el almacenamiento o transporte.
Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control Generalmente el término pesticida está
de malezas
asociado sólo a los insecticidas
Herbicidas • Definiciones:

- Son compuestos orgánicos, generalmente

sintéticos, cuyas propiedades fisicoquímicas
(masa molecular 500 Da y lipofilicidad)
facilitan su entrada a la célula.

- Interfieren con procesos vitales de las plantas,

y a veces de las bacterias, tales como por
ejemplo la fotosíntesis, la síntesis de
aminoácidos o la síntesis de ácidos grasos.

- Se busca que el herbicida usado no afecte

al cultivo y que sea fitotóxico contra
sus principales malezas. Este aspecto
Agrobiotecnología
se denomina selectividad y puede lograrse
por mecanismos físicos o bioquímicos.
Aplicaciones
de la biotecnología
al control
- Su uso se difundió a partir de 1946 (2,4-D) y fue
de malezas una herramienta clave en la agricultura moderna
(ahora vuelve como producto mejorado)
Herbicidas

• Selectividad

- Los mecanismos físicos de selectividad se

basan en la diferencia entre los volúmenes de
herbicida retenidos por el cultivo y por las
malezas. Esto se relaciona al modo de
aplicación, las circunstancias ambientales,
la estructura de la planta y las propiedades
de las hojas de las malezas.

- Los mecanismos bioquímicos de

Agrobiotecnología selectividad implican la existencia de
tolerancia al herbicida por parte del cultivo.
Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Criterios
para la Los herbicidas pueden ser agrupados por:
clasificación
• Modo de aplicación:
de herbicidas
- Aplicados a la parte aérea de la planta:
contacto y sistémicos
- Aplicados al suelo: residualidad

• Tiempo de aplicación:
- Antes de la siembra del cultivo: pre-siembra
- Después de la siembra del cultivo:
pre-emergencia y post-emergencia

• Modo de acción:
- Inhibidores de la síntesis de aminoácidos
- Inhibidores de la fotosíntesis
Agrobiotecnología - Inhibidores de la síntesis de lípidos
- Inhibidores de la síntesis de pigmentos
Aplicaciones - Reguladores de crecimiento de tipo auxínico
de la biotecnología
al control
- Inhibidores de la división celular
de malezas
Grupos de herbicidas según su modo de acción/sitio blanco

1. Inhibidores de la síntesis de aminoácidos

Inhibidores de EPSPS: Glifosato

Inhibidores de ALS: Sulfonilureas
Imidazolinonas
Triazolopirimidinas
Inhibidores de GS: Glufosinato
Bialafos
2. Inhibidores de la fotosíntesis
Inhibidores del PSI: Bipiridilos
Inhibidores del PSII: Triazinas
Triazinonas
Ureas sustituidas
Uracilos
Hidroxibenzonitrilos
Piridazinonas
EPSPS: 5-enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintetasa Bis-carbamatos
ALS: actetolactato sintetasa
GS: glutamina sintetasa
PSI: fotosistema I
PSII: fotosistema II
Grupos de herbicidas según su modo de acción/sitio blanco
3. Inhibidores de la síntesis de lípidos

Inhibidores de ACCasa: Arilfenoxipropionatos (FOP)

Ciclohexanodionas (DIM)
Fenilpirazolinas
Inhibidores de elongación
de ácidos grasos: Tiocarbamatos

4. Inhibidores de la síntesis de pigmentos

Inhibidores de la síntesis Pirazoles
de carotenoides: Amitrol
Norflurazon
Fluridona
Inhibidores de Protox (PPO): Nitrodifenil éteres
Feniltalamidas
Saflufenacil
5. Reguladores de crecimiento de tipo auxínico
Acidos fenóxicos
Acidos benzoicos
Acidos picolínicos ACCasa: acetil-CoA carboxilasa
Acidos carboxílicos Protox: protoporfirinógeno oxidasa
(enzima que cataliza el último paso
6. Inhibidores de la división celular de la ruta biosintética de la
porfirina, que produce clorofila)
Inhibidores de la polimerización
de tubulinas: Dinitroanilinas
Fuente: weedscience.com
 26 MOA’s conocidos

6 MOA’s explican el 80% del

mercado de herbicidas (17
billones de U$S anuales)

1970: 45 compañías químicas de

desarrollo de nuevos herbicidas

2014: solo 6
Herbicidas Los herbicidas para ser comercializados deben estar
evaluados y aprobados por agencias nacionales de
regulación de pesticidas:

• Argentina: Dirección de Agroquímicos y

Biológicos dependiente de la Dirección Nacional
de Agroquímicos, Productos Veterinarios y
Alimentos del SENASA es el área que administra
el Registro Nacional de Terapéutica Vegetal en el
que están sujetos a inscripción todos los
productos fitosanitarios que se usan y
comercializan en la Argentina.
(http://www.senasa.gov.ar/)

Agrobiotecnología • USA: EPA (Environmental protection agency)

Aplicaciones
de la biotecnología
al control El costo de regulación e inscripción de un nuevo
de malezas
herbicida ronda los 250 M U$S y el proceso dura una
década (Green, 2014)
Herbicidas

Agropages.com

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 Resistencia vs tolerancia

• Resistencia y tolerancia a herbicidas utilizados indistintamente en la

literatura científica.

• Comité de plantas resistentes a herbicidas ( Herbicide Resistant Plant

Committee,http://www.hracglobal.com/):

• Resistencia: capacidad heredable de una población para sobrevivir y

reproducirse luego de la exposición repetida a una dosis de herbicida
normalmente letal para el tipo silvestre. Puede ser inducida por técnicas tales
como la ingeniería genética o la selección de variantes somaclonales o por
mutagénesis.

• Tolerancia: capacidad intrínseca de una especie para sobrevivir y

reproducirse luego del tratamiento con un herbicida. Supone que no hubo un
mecanismo de selección o inducción de la tolerancia ya que la especie es
naturalmente tolerante al herbicida.

Fuente: Weed Technology Volumen 12, número 4 (octubre –diciembre) 1998- p. 789.
Dos mecanismos principales de tolerancia a herbicidas

1. Tolerancia causada por mutaciones en sitios blanco del

herbicida (target-site tolerance).

Involucra una reducción en la sensibilidad de enzimas

blanco específicas o proteínas. Mayormente monogénica.
Ej: mutantes AHAS en soja.

2. Tolerancia causada por mutaciones en sitios no blanco (non

target site tolerance).

Están involucrados varios mecanismos, como reducida

absorción o translocación del herbicida, aumento en la
tasa de detoxificación, reducción en la tasa de activación,
y transporte del herbicida a vacuolas o apoplasto. Ej:
tolerancia a atrazina en maíz.
Non-target-site herbicide tolerance

Citoplasma Vacuola
ATP
H OH GSH SH
P450 GST ABC Transp.
+ O2 + GSH

AD
P

Target-site herbicide tolerance

Aminoácidos
Ejemplo: AHAS ramificados

Susceptible Aminoácidos
ramificados

Tolerante Aminoácidos
ramificados
La selectividad bioquímica implica
la existencia de una base genética
metribuzin (triazinonas, inhibidor del PSII )

Tomado de: Hain and Schreier, 1996.

Variabilidad natural en la respuesta del tomate al metribuzin

genotipo A genotipo A genotipo B genotipo C genotipo D

no tratado tratamiento de pulverización correspondiente a 500 g de principio activo/ha
Variedad silvestre susceptible- Variedad cultivada resistente a IMI en Variedad resistente a IMI portadora
USA estado vegetativo de modificadores

IMI: imidazolinonas (actúa sobre la misma enzima que la sulfonilurea)

Diversidad genética para la tolerancia a sulfonilureas en girasol

Variedad cultivada susceptible Variedad cultivada confitura susceptible

Metabolismo de xenobióticos en plantas

Las enzimas responsables de la detoxificación de los xenobióticos están localizadas en, o asociadas con, distintas
organelas celulares. Las líneas discontinuas representan una ruta propuesta de glicosilación en el Golgi seguida
por exocitosis al apoplasma.
CT: Transportador de glutatión conjugado; AT: Transportador de xenobióticos aniónicos ATP dependiente;
GT: Transportador de glucósidos conjugados; VP: Peptidasa vacuolar.
Reacciones
catalizadas por
Cyt P450 [O]
monooxigenasa Cyt
P450

[O]
Cyt
P450

[O]
Cyt
P450

1: aril hidroxilación
2: alquil hidroxilación
Agrobiotecnología 3: N-demetilación

Aplicaciones El atomo de oxígeno que deriva de O2 se halla subrayado

de la biotecnología
al control
de malezas
Ejemplos de reacciones catalizadas por
monooxigenasas P-450 y glutatión transferasas

(sulfonilurea) (dimetilurea)

(cloroacetamida)

[O] representa una oxidación. Los números (1,3) muestran reacciones

de hidroxilación o de N-demetilación que pueden generar sitios de
glicosilación. GSH representa una reacción de conjugación a glutatión
Detoxificación Metolachlor
(cloracetamida,
por inhibidor del la
síntesis lipídica)
conjugación
a glutatión
Complejo
Complejo
Metolachlor-
Metaclor
Metaclor
-GS-GS
GS
Mecanismo de
Herbicida selectividad en maiz.
GSH

GS-herbicida

Transporte

GS-herbicida Modificación Luego de la

y deposición conjugación, el
Agrobiotecnología
herbicida es
Aplicaciones Vacuola
transportado a la
de la biotecnología
al control
vacuola celular
de malezas
 Aplicaciones biotecnológicas
al control de malezas

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la Biotecnología
al control
de malezas
Aplicaciones
biotecnológicas
al control
de malezas
- Uso de marcadores moleculares para estudios
de taxonomía y ecología de malezas.

- Uso de instrumentos genómicos y de la

proteómica para la identificación de blancos
para herbicidas y de los efectos de los
herbicidas.

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la Biotecnología
al control
de malezas
Pest managment science Vol 3, issue 7, 2017
Aplicaciones
Existen diferentes estrategias para desarrollar nuevos
biotecnológicas caracteres de resistencia a herbicidas en un
al control cultivo:
de malezas • Caracteres nativos: identificados en viejos
cultivares, poblaciones, landraces, o especies
salvajes relacionadas (Ej: IMISUN en girasol).
• Por mutagénesis: proceso químico o de
irradiación para generar nuevas variantes de
genes. Aumenta la tasa natural de mutación
(Ej: STS en soja)
• Por transgénesis: introducción secuencias
génicas de otras especies a través de técnicas
transformación. (Ej: RR1, Enlist, NK603)
Agrobiotecnología • New Breeding techinques (NBTs): hace uso de
los métodos de transformación para “editar”
Aplicaciones
de la Biotecnología
un gen de interés en una posición particular
al control para cambiar una característica (Ej: Canola
de malezas
resistente a sulfonilurea)
Objetivos
buscados en - Resolver un problema de malezas para el que
el desarrollo no haya herbicidas disponibles.
de cultivos
- Reemplazar las combinaciones de herbicidas
tolerantes actualmente en uso por nuevos herbicidas
a herbicidas
- Reemplazar un herbicida de altas dosis por uno
de bajas dosis

- Reemplazar herbicidas con propiedades

ecológicas superiores y/o toxicológicas inferiores

- Reemplazar a un herbicida de pre-emergencia

por uno de post-emergencia
Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la Biotecnología
al control
de malezas
 ¿Por qué la tolerancia a herbicidas fue una de las primeras
Usos de la aplicaciones de la ingeniería genética de plantas?
ingeniería
Cambio de paradigma en el negocio de los herbicidas
genética para
desarrollar - Hasta mediados de los 90
cultivos - se probaban las moléculas nuevas por todas las
malezas y cultivos y se veía cual era la selectividad.
tolerantes “Spray and pray”
a herbicidas
- Los mecanismos de tolerancia a herbicidas se
conocían, por lo menos parcialmente, a partir
de estudios con aislamientos bacterianos resistentes,
selección in vitro de células vegetales y de
resistencia a campo en cultivos y malezas.

- Resultaba claro que el fenotipo de tolerancia podía

Agrobiotecnología . obtenerse a partir de la introducción de genes
. individuales. Ej: Resistencia a glifosato
Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Situación
- Siglo XXI
actual -Existía un marcado interés económico por parte
de un importante grupo de empresas agroquímicas
por diversificarse en forma horizontal hacia el
negocio de semillas. Se desarrollan paquetes
tecnológicos que consisten en el uso de cultivos
resistentes (mutagénesis, ingeniería genética) para
ser usado con moléculas existentes no selectivas o
nuevas acompañados de propiedad intelectual
sobre el gen y el herbicida.

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 Cultivos tolerantes a herbicidas

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la Biotecnología
al control
de malezas
 Estrategias
para obtener
cultivos
tolerantes
a herbicidas
mediante
ingeniería
genética

La resistencia a herbicidas e
insectos jugó un papel
fundacional en la
biotecnología de plantas:
fotos de 1985 de los resultados
de la Universidad de Gent (Marc
van Montagu)
Tolerancia a
herbicida (glifosato):

Gen de la enzima EPSPS de la

bacteria del suelo Agrobacterium
tumefaciens
Sitios blancos de herbicidas que afectan las rutas
biosintéticas de aminoácidos esenciales
Usos de la
La tolerancia a herbicidas jugó un papel
ingeniería fundacional en la biotecnología de plantas
genética para
desarrollar - La ingeniería genética permitió la introducción
cultivos de variabilidad genética útil para el mejoramiento
de los cultivos por métodos no sexuales.
tolerantes
a herbicidas - Se conocían secuencias codificantes de variado
origen que podían conferir tolerancia a ciertos
herbicidas en las plantas que los expresen.

- Se disponía, asimismo, de las herramientas

necesarias para su correcta expresión en plantas
(promotores, péptidos señal, etc.).

Agrobiotecnología - Las plantas transgénicas con tolerancia exclusiva a

herbicidas (soja, maíz, colza y algodón) o combinada
Aplicaciones
de la biotecnología
con resistencia a insectos (maíz y algodón) ocuparon
al control unos 185 millones de hectáreas a nivel mundial en 2016.
de malezas
Estrategias
para obtener
cultivos
tolerantes
a herbicidas • Existen tres estrategias principales:
mediante
ingeniería - Incrementar la expresión de la proteína
blanco del herbicida.
genética
- Alterar el sitio de acción del herbicida.

- Introducir genes que permitan

la detoxificación del herbicida.

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Herbicida, blancos primarios y estrategias para
desarrollar tolerancia a herbicidas en plantas

Ruta inhibidaRuta inhibida

Herbicida Herbicida Estrategia
Estrategia para paratolerancia
desarrollar desarrollar tolerancia
Blanco primario
Blanco primario ModificaciónModificación
del blanco del blanco Detoxificación
Detoxificación
FotosíntesisFotosíntesis
Atrazina AtrazinaProteína Qb Proteína Qb Gen psbA mutado
Gen psbA mutado Gen GST Gen GST
(planta) (planta) (planta) (planta)

Bromoxinil Bromoxinil
Proteína Qb Proteína Qb --------------------
-------------------- Gen bxn Gen bxn
(bacteria) (bacteria)

Biosíntesis
Biosíntesis de de Fosfinotricina
Fosfinotricina Glutamina sintetasa
Glutamina sintetasa Amplificación
Amplificación del gen GS del gen GS
Gen bar Gen bar
aminoácidosaminoácidos (GS) (GS) (bacteria) (bacteria)

Sulfonilurea Sulfonilurea
e e
AcetolactatoAcetolactato
sintasa sintasa Gen ALS mutado
Gen ALS mutado P450’s --------------------
--------------------
imidazolinonaimidazolinona (ALS) (ALS) (planta) (planta)

Glifosato Glifosato
5-enolpiruvil5-enolpiruvil
shikimato- shikimato- Amplificación
Amplificación del gen del genGen gox Gen gox
3-fosfato sintasa
3-fosfato sintasa EPSPS; gen EPSPS; gen AroA mutado
AroA mutado (bacteria) (bacteria)
(EPSPS) (EPSPS) (bacteria) (bacteria)
Regulación
Regulación del del
2,4-D 2,4-D No conocidoNo conocido --------------------
-------------------- Gen tfdA Gen tfdA
crecimiento crecimiento (bacteria) (bacteria)
Tolerancia Glifosato
a glifosato - En 1974 se introdujo al mercado el herbicida Roundup®
cuyo ingrediente activo es el glifosato. Este es un herbicida
post-emergente de amplio espectro, no selectivo y seguro
desde el punto de vista ambiental (baja toxicidad para
organismos no blanco, bajo movimiento en el agua
subterránea y persistencia limitada).
- El glifosato inhibe, en plantas, bacterias, algas, hongos
y parásitos apicomplejos, la 5-enolpiruvil shikimato-3-
fosfato sintetasa (EPSPS), enzima clave para la síntesis
de aminoácidos aromáticos (fenilalanina, tirosina
y triptofano). En las plantas, esta ruta biosintética
(ruta del shikimato) tiene lugar en el cloroplasto.

N-(fosfonometil)glicina

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
glifosato
de malezas
Ruta de
síntesis del
corismato
a partir de
fosfoenol-
piruvato
y eritrosa
4-fosfato

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
Además de la síntesis de tirosina, fenilalanina y triptofano, la ruta
al control
de malezas del shikimato controla la síntesis de muchos compuestos impor-
tantes como la de la lignina, la de los flavonoides y la de algunos
alcaloides.
Tolerancia
a glifosato Mecanismo de acción de la
5-enolpiruvil shikimato-3-fosfato sintetasa

Enzima: 5-enolpiruvil shikimato-3-fosfato sintetasa

S3P: shikimato-3-fosfato
PEP: fosfoenolpiruvato
EPSP: 5-enolpiruvil shikimato-3-fosfato
Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología El glifosato actúa como un inhibidor competitivo
al control ocupando el lugar del PEP en el complejo enzimático
de malezas
Homologías entre secuencias de EPSP sintetasas

Comparación entre las secuencias aminoácidicas maduras de EPSP sintetasa. Se muestran

las secuencias correspondientes a Petunia hybrida, Arabidopsis thaliana, Escherichia coli y
Saccharomyces cerevisiae. Las secuencias homólogas están subrayadas. Los aminoácidos
críticos están señalados con un asterisco
La EPSP
sintetasa es
transportada
al cloroplasto
mediante un
péptido señal

citoplasma cloroplasto

Agrobiotecnología
Comparación de las secuencias
Aplicaciones de los péptidos señal de las
de la biotecnología EPSP sintetasas de Petunia
hybrida, tomate y Arabidopsis
al control
thaliana. Se señalan las
de malezas regiones de homología
Estructura
cristalina de
EPSP
sintetasa

Agrobiotecnología
Estructura de la EPSP sintetasa de E. coli. Los residuos del
Aplicaciones sitio activo están marcados en azul. La región en rojo es una
de la biotecnología
al control región altamente conservada. La conversión de la Gly 96
de malezas a Ala transforma a la enzima en tolerante a glifosato
Tolerancia
a glifosato • Desarrollo de plantas transgénicas
. tolerantes a glifosato
- Se observó, tanto en bacterias como en cultivos
celulares de plantas, que el incremento en el número
de copias del gen codificante para la EPSPS confiere
tolerancia a este herbicida.
- Se obtuvieron plantas transgénicas de petunia
que expresaban un ADNc codificante para
la pre-proteína completa EPSPS de esa
misma especie bajo control del promotor 35S
del virus del mosaico del coliflor. Aunque la enzima
sobrexpresada era sensible al glifosato, estas plantas
eran tolerantes al herbicida.
- Otra estrategia explorada fue la búsqueda de formas
variantes de la EPSPS que tuvieran simultáneamente
Agrobiotecnología
baja afinidad por el glifosato y buena actividad
catalítica. Se demostró que las plantas transgénicas
Aplicaciones
que expresaban una EPSPS heteróloga con estas
de la biotecnología características, tenían muy buena respuesta frente
al control
de malezas
al herbicida.
Tolerancia
a glifosato Catabolismo del glifosato por bacterias del suelo

C-P liasa: ruta presente en Pseudomonas

GOX: ruta presente en Gram positivas y Gram negativas

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Tolerancia
• Desarrollo de plantas transgénicas
a glifosato . tolerantes a glifosato
- Se aisló el gen que codifica una EPSPS tolerante a
glifosato de la cepa CP4 de Agrobacterium tumefaciens
(cp4 epsps).
- Se clonó el gen gox, que codifica la enzima glifosato
oxidoreductasa (responsable del proceso de degradación
del glifosato por la ruta del ácido aminometilfosfónico) a
partir de la cepa LBAA de Achromobacter sp.

Cultivo
de soja
tolerante
a glifosato
Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
Gentileza Ing. Agr. S. Lorenzatti
de malezas
Tolerancia mediante EPSPS insensible a glifosato
Algunas mutaciones
en la EPSPS pueden tornar
a la enzima insensible
al glifosato. La unión
de este herbicida
a la enzima nativa bloquea
su actividad e impide
el transporte del complejo
EPSPS-shikimato 3-fosfato
al cloroplasto. La enzima
producida por el gen mutado
(epsps*) tiene una menor
afinidad por el glifosato
y es catalíticamente activa
en presencia del herbicida.

Tomado de Coruzzi and Last, Biochemistry and Molecular Biolgy of Plants, 2000.
Tolerancia Desarrollo de productos comerciales con tolerancia
a glifosato a glifosato
• Mediante las estrategias mencionadas se desarrollaron en
varias especies eventos de transformación que confieren
tolerancia a glifosato.
• Algunos están disponibles a nivel comercial en varios
países:
- Soja: promotor 35S / secuencia codificante cp4
epsps (1996).
- Canola: Promotor FMV (Figwort mosaic virus) /
secuencia codificante cp4 epsps y promotor
FMV / secuencia codificante gox (1996).
- Algodón: promotor FMV / secuencia codificante cp4
epsps (versión sintética con optimización de uso
de codones; 1997).
Agrobiotecnología - Maíz: promotor de actina 1 de arroz / secuencia
codificante cp4 epsps y promotor 35S /
Aplicaciones secuencia codificante cp4 epsps (2001).
de la biotecnología -Trigo: hubo desarrollos de plantas transgénicas pero
al control
de malezas nunca fueron comercializadas
• Todos los transgenes mencionados contienen la secuencia de
un péptido señal de transporte a cloroplasto en su extremo 5´.
Desarrollos de OGMs en soja. Con aprobación comercial

1993 – RR1 Soybean (Monsanto)

1996 – LL Soybean (Bayer)

2012 – Intacta (Monsanto) Croplife.com

2013 – FG72 (Bayer)
2014 – Cultivance (BASF) , Enlist (Dow)
Integración del uso de plantas transgénicas de soja
tolerantes a glifosato con prácticas de siembra directa

Siembra directa de soja sobre Siembra directa de soja sobre

rastrojo de trigo rastrojo de maíz

Gentileza Ing. Agr. S. Lorenzatti

 Conyza bonafriensis (rama negra)

Sorghum halepense
Tolerancia
a glufosinato Glufosinato
- El L-glufosinato (L-fosfinotricina) es el ingrediente activo
de herbicidas como Basta® o Liberty®. Es un herbicida
post-emergente, de amplio espectro, no selectivo y de baja
actividad residual.

- El L-glufosinato es un inhibidor potente de la glutamina

sintetasa, enzima que regula en las plantas la vía de asimilación
primaria y secundaria del amonio.

L-glufosinato

Agrobiotecnología

Aplicaciones
ácido 2-amino-4-
de la biotecnología (hidroximetilfosfinil)
al control
de malezas butanoico
La glutamino
sintetasa es
el sitio de
acción de la
fosfinotricina

Agrobiotecnología
La ruta de la glutamina sintetasa/glutamato sintetasa
Aplicaciones
de la biotecnología (GS/GOGAT) constituye el principal mecanismo para
al control la asimilación primaria y secundaria del amonio
de malezas
Inhibidores competitivos de la glutamina sintetasa

Metionin sulfoximina L-Fosfinotricina

glufosinato AcidoGlutamina
glutámico
. (MSO) (L-PPT)
Tolerancia a
glufosinato Mecanismo de acción de la glutamina sintetasa

GS: glutamina sintetasa

Agrobiotecnología El L-glufosinato actúa como un inhibidor

Aplicaciones
competitivo reversible ocupando el lugar
de la biotecnología del L-glutamato en el complejo enzimático
al control
de malezas
Degradación
ambiental de • El glufosinato tiene una movilidad en el suelo
glufosinato . considerada baja porque es adsorbido por los
. coloides presentes en los estratos superiores

• La principal ruta de eliminación del glufosinato

. es la degradación microbiana, Burkholderia
. sacchari, Serratia marcescens, Pseudomonas
. psychrotolerans han sido reportadas como
. fuertes degradadores de glufosinato.

• Los productos de degradación comprenden al

. ácido 3-metilfosfinil propiónico y al ácido 2-
. metilfosfinil acético, los que a su vez se
. descomponen en PO4H3, CH4, NH3, CO2 y H2O.
Agrobiotecnología
• La persistencia en el suelo, dependiendo de las
Aplicaciones
de la biotecnología
. condiciones ambientales, fluctúa entre 3 y 40 días.
al control
de malezas
Tolerancia
• Estrategias para la obtención de plantas
a glufosinato transgénicas con tolerancia a glufosinato
- Se obtuvieron plantas transgénicas que sobrexpresaban
el gen de glutamina sintetasa bajo un promotor constitutivo.
Estas plantas toleraron al herbicida a pesar de expresar una
enzima sensible a glufosinato.

Agrobiotecnología
Tomado de Eckes et al., MGG,1989.
Aplicaciones
de la biotecnología Plantas transgénicas de tabaco que sobrexpresan el den de la glutamina sintetasa
al control de alfalfa. Las plantas transgénicas (izquierda arriba) toleran una concentración
de malezas de 20 M de L-glufosinato que resulta letal para la planta control (derecha abajo)
Tolerancia
a glufosinato • Estrategias para la obtención de plantas
transgénicas con tolerancia a glufosinato

- Como estrategia alternativa, a partir de las

bacterias del suelo Streptomyces hygroscopicus
y Streptomyces viridochromogenes se clonaron
los genes bar y pat, respectivamente.

. - Ambos genes codifican la enzima fosfinotricin-

. acetil transferasa que convierte al L-glufosinato
en una forma acetilada sin actividad herbicida.

- Esta enzima permite a estas bacterias defenderse

Agrobiotecnología . de la acción tóxica de la fosfinotricina que ellas
. mismas producen.
Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Tolerancia
a glufosinato
• Obtención de plantas transgénicas
con tolerancia a glufosinato
- Las primeras plantas con niveles de tolerancia
a herbicidas suficientes para su uso agrícola
se construyeron expresando constitutivamente
el gen bar (tabaco, tomate y papa).

- Los genes bar y pat se encuentran en varios

cultivares transgénicos que actualmente tienen
. status comercial (maíz, colza, algodón, soja).
Estrategia de Non Target Site Tolerance.

- Los genes han resultado ser marcadores

Agrobiotecnología
seleccionables eficientes y por ello son usados
Aplicaciones . en muchos protocolos de transformación
de la biotecnología
al control
. genética.
de malezas
Tolerancia a
Evolución de la acumulación de NH4+
glufosinato en plantas de tabaco transgénicas
mediada por transformadas con el gen bar

genes de
fosfinotricin-
acetil
transferasas

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas Tomado de: et al., Nature, 1986?.
Tolerancia Plantas de
Nicotiana
a glufosinato tabacum no
transgénicas
tratadas con
glufosinato

Plantas de
Nicotiana
tabacum
transformadas
con el gen bar
tratadas con
glufosinato
Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Gentileza Dr. M. Van Montagu
El gen bar provee un alto nivel de tolerancia a glufosinato

Plantas transgénicas de Lycopersicon esculentum transformadas

con el gen bar (izquierda) y plantas control
no transgénicas (derecha) tratadas con glufosinato
Tolerancia a glufosinato

Plantas de Solanum tuberosum, transformadas con

el gen bar y plantas control, tratadas con glufosinato
Tolerancia -El glufosinato no es un herbicida muy difundido en
a glufosinato Argentina aunque el evento tiene liberación comercial
para soja, maíz y algodón. En este último cultivo, este
evento apilado con el de resistencia a glifosato y a 2,4D
(DAS-44406-6) tiene aprobación comercial de Conabia
(abril de 2015).

-En maíz generalmente está acompañando eventos

transgénicos de genes de resistencia a insectos, ya
que puede ser usado como marcador de selección
durante la transformación.

Eventos de resistencia a insectos y a glufosinato de

amonio en maíz:
BT11

Agrobiotecnología
TC1507
Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Tolerancia
a inhibidores • Herbicidas que inhiben la acetolactato sintetasa
de la aceto- - La acetolactato sintetasa (ALS; también llamada aceto
lactato hidroxiácido sintetasa) es una enzima clave en la
biosíntesis de aminoácidos ramificados (leucina,
sintetasa valina e isoleucina). Su inhibición causa la muerte
de la planta.

- La ALS es inhibida por herbicidas que pertenecen

a varios grupos (sulfonilureas, imidazolinonas
y triazolopirimidinas).

- Los herbicidas que inhiben la ALS son relativamente

recientes. El primero de ellos fue comercializado
en 1982 (chlorsulfuron, una sulfonilurea). Sin embargo,
han tenido una rápida difusión.
Agrobiotecnología
- Este grupo de herbicidas es de amplio espectro, tiene
baja actividad residual en suelo y brinda una amplia
Aplicaciones
de la biotecnología ventana de aplicación para el cultivo. La toxicidad para
al control mamíferos es baja.
de malezas
Tolerancia a inhibidores de la acetolactato sintetasa

Estructuras químicas de algunos herbicidas que afectan a la ALS

chlorsulfuron (herbicida del grupo imazaquin (herbicida del grupo

de las sulfonilureas) de las imidazolinonas)
Ruta de
síntesis de
aminoácidos
ramificados

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
La acetolactato sintetasa (o acetohidroxiácido sintetasa )
es inhibida por la acción de sulfonilureas, imidazolinonas
y triazolopirimidinas
Tolerancia
a inhibidores Mecanismo de acción de la ALS
de la aceto-
lactato
sintetasa

ALS: acetolactato sintetasa (aceto hidroxiácido sintetasa)

Las sulfonilureas actúan como inhibidores

competitivos del piruvato sobre
Agrobiotecnología el sitio catalítico de la enzima.
Las imidazolinonas actuan como inhibidores
Aplicaciones
de la biotecnología no competitivos con respecto al piruvato (bloquean
al control
de malezas
el canal de entrada).
Tolerancia
a inhibidores • Resistencia a inhibidores de la ALS en malezas
de la aceto-
lactato - El extenso y reiterado uso de los inhibidores de la ALS
hizo que, a pesar de su reciente difusión, la resistencia
sintetasa a los mismos haya evolucionado en las malezas.
Así, hay actualmente más especies o biotipos
de malezas resistentes a este grupo de herbicidas
que a cualquier otro.

- La resistencia observada se debe generalmente

a mutaciones en el sitio blanco de estos herbicidas.
La ALS está codificada por el genoma nuclear
y la localización subcelular de la forma madura
de la enzima es el cloroplasto.

- La resistencia observada en malezas es causada

por mutaciones puntuales que producen la sustitución
Agrobiotecnología de uno cualquiera de cinco aminoácidos conservados.
(alanina 122, Prolina 197, alanina 205, triptofano 574, serina
653; secuencia de ALS de Arabidopsis thaliana)
Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 Tipo y frecuencias de sustituciones aminoacídicas
encontradas en malezas resistentes a inhibidores de ALS
 • Cultivos con tolerancia a campo a inhibidores
Tolerancia de la ALS
a inhibidores
- Selección de plantas silvestres: se han aislado
de la aceto- plantas tolerantes a sulfonilureas e imidazolinonas en
lactato girasol.

sintetasa - Selección in vitro: Se han obtenido plantas de maíz

con resistencia a imidazolinonas mediante cultivo in
vitro de embriones en medio selectivo.

- Mutagénesis: Se han obtenido plantas resistentes

a imidazolinonas mediante tratamientos mutagénicos
de microsporas y posterior cultivo y selección in vitro
(colza). Asimismo, se obtuvieron plantas resistentes
a imidazolinonas por mutagénesis química
de semillas (arroz, trigo y maíz y girasol). También
se ha obtenido soja resistente a sulfoinilureas.

Agrobiotecnología - Plantas transgénicas: Se obtuvieron plantas

transgénicas de algodón (debida a la expresión
Aplicaciones
de la biotecnología de una ALS de tabaco mutagenizada in vitro) , lino
al control (con expresión de una ALS de Arabidopsis) con
de malezas
resistencia a sulfonilureas, soja (con expresión de
una ALS de Arabidopsis) y maíz (Als de maíz
modificado)
 Desarrollo de resistencia a imidazolinonas en girasol

Generación de una población

mutante Ej: EMS

Aplicación del herbicida a

la población mutante

Selección de una planta

resistente

Caracterización molecular

Desarrollo de la tecnología
AIR ensayo a campo:

Treatments Sulfo hybrid AIR3 hyb Convencional hyb IMI hyb AIR1 hyb

Imazapyr 2x

Imazapyr 4 X

Untreated

Sulfo 2x

Sulfo 4x

Mix (IMI+ Sulfo)

2x
Mix (IMI+ Sulfo)
4x
TZP 2x

TZP 4x
 Soja resistente a sulfonilureas obtenida por mutagénesis

• Sebastián et al. en 1989, obtuvo un mutante W20, que posee un alelo

semidominante del locus als1 de soja, que brinda tolerancia a las sulfonilureas.
Este gen ha sido introgresado en varios programas de mejoramiento.

• Antecedentes en otras plantas tolerantes: Tolerancia específica a SU

otorgada por sustituciones de prolina en la posición 197 de la enzima

Se desconocía:
el número de genes Ahas en soja
cuál/es de ellos son los que se hallan involucrado/s en la tolerancia a SU
 su localización genómica
el tipo de mutación que confiere la tolerancia

Fuente: Cecilia Ghio. Tesis “Ubicación genómica y secuenciación del gen que otorga tolerancia a las sulfonilureas
en el cultivo de la soja Glycine max (L.) Merr.” para la Maestría en Genética Vegetal ,UNR. Septiembre 2013
Tolerancia El trabajo que consistió en:

a inhibidores 1. un anáilisis in silico de secuencias para determinar el n° de

genes candidatos ahas en soja.
de la aceto- 2. un análisis genético por medio de mapeo con marcadores
moleculares en una población de mapeo.
lactato 3. Comparación de las secuencias de la línea tolerante y susceptible
sintetasa para determinar la mutación responsable de la tolerancia.

Als1 ubicado
cromosoma 4

Cambio aminoacídico
P197S: Prolina por
Agrobiotecnología
Serina

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
4 secuencias Ahas en los cromosomas
4, 6, 13 y 15 con una alta similitud con
las secuencia del gen Ahas de A.
thaliana
 Cultivos transgénicos con resistencia a inhibidores de AHAS

•Soja Cultivance ®: contiene el evento CV127 que brinda resistencia a

imidazolinonas. El evento contiene el gen Als de Arabisopsis thaliana con
la mutación en la posición 653. Regulado por el promotor nativo de
A.thaliana. Posee liberación comercial en Arg pero aún no se comercializa
como producto.

• Maíz Optimun GAT ®: contiene el evento DP-98140 que brinda

resistencia a glifosato y a imidazolinonas. El evento contiene el gen als de
maíz modificado y el gen de resistencia a glifosato producto de la
recombinación in vitro de tres genes de Bacillus lucheniformis que
codifican para la N-Acetiltransferasa que acetila al glifosato. Estos genes
están regulados por promotores de maíz. Se comportan como un locus
único. Liberado comercialmente en Argenitna en el 2011 pero aún no es
comercializado por la empresa propietaria del evento.
 Una situación específica puede direccionar
una tecnología……

Ejemplo: Orobanche cumana en lotes de girasol

Interacción girasol-Orobanche
Orobanche cumana:
• planta holoparasítica (carece
de clorofila)
• Gran problema en europa
(muchas razas y rápido sorteo
de genes de resistencia)
 Herbicide resistance + Orobanche genetic resistance
Development of traits for herbicide resistance in sunflower during the last
decade permits the combination of these technologies with Orobanche
resistance genes for a more sustainable strategy.
Also it will be possible to introduce new active ingredients in herbicides
formulations that are specific for the parasitic weed control and to develop
seed coatings using a variety of AHAS inhibitors

Or…

Ahasl1-…
and

Fuente: Bulos, 2014

Herbicidas que afectan la cadena de transporte
de electrones en el aparato fotosintético

PQ: Plastoquinona
Cyt b6f: Complejo citocromo b6f
PC : Plastocianina
Fdx: Ferredoxina
FNR: Ferredoxina NADP reductasa
CF0 y CF1: Complejos de la ATP sintetasa

Organización de los componentes de la cadena de transporte de electrones

del cloroplasto y del aparato de síntesis de ATP en la membrana tilacoidea
Herbicidas
que
afectan
la cadena DCMU, un inhibidor del Fotosistema II
Triazinas
de transporte
Ureas sustituidas
de electrones
Uracil herbicidas
en el
aparato Bromoxinil
fotosintético Ioxinil
Desmedipham
DBMIB, un inhibidor del complejo Cytb6f
Propanil
Pirazon
Agrobiotecnología Metribuzin
Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas Paraquat (metil viológeno), un inhibidor
del Fotosistema I
Herbicidas que afectan la cadena de transporte
de electrones en el aparato fotosintético

QA QB : Quinonas A y B
PQ: Plastoquinona
PC: Plastocianina
Pheo: Feofitina
Cytb6f: Complejo citocromo b6f
Fx, FA y FB: Centros Fe-S

atrazina

Sitios de acción del 3-(3,4-diclorofenil)-1,1-dimetilurea (DCMU), de la dibromoquinona

(DBMIBl) y del metil viológeno (herbicida bipiridil; Paraquat) en los complejos fotosintéticos
Triazinas
• Selectividad bioquímica
- La atrazina fue uno de los herbicidas más usados en el mundo
y corresponde al grupo de las triazinas. Se comenzó a usar en la
década del ’50 pero se está dejando de usar.
- Estos herbicidas son inhibidores fotosintéticos. Su mecanismo
de acción consiste en unirse a la proteína D1 (proteína de unión
. a QB, ubicada), impidiendo así su bloqueando el transporte de
electrones hacia el Fotosistema II.
- La atrazina se usa en cultivos como el maíz, que son
resistentes al mismo por tener la capacidad metabólica de
detoxificarlo. Esto ocurre a través de los mecanismos
enzimáticos de protección frente a compuestos xenobióticos.

Atrazina

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Triazinas • Selectividad debida a alteraciones en
el sitio blanco del herbicida
- En el contexto de reiterado uso de triazinas en monocultivo de maíz, Se
han identificado biotipos de malezas con resistencia a las mismas. Esta
resistencia se basa en la alteración del sitio blanco de estos herbicidas
. (proteína D1).
- La proteína D1 está codificada por el gen psb A, que está ubicado en el
plastoma. En varias especies vegetales se ha reportado como base
molecular de la resistencia a triazinas una mutación de puntual en el
codón 264 del mencionado gen, que produce una substitución de serina
por glicina en la forma resistente.
Tomado de: Rios et al., TAG, 2003.

En cebada,
a partir de un
genotipo mutado
de cloroplastos,
se aislaron dos
mutantes con
resistencia a la
atrazina.

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas Línea madre Mutantes
Ensayo hidropónico en presencia de atrazina
Análisis molecular de mutantes de cebada
con resistencia a la atrazina

790

BstXI

277 pb

190 pb

87 pb

Est á ndar Cebada sensible Cebada resistente Colza Colza Est á ndar
(l í nea madre) (l ínea madre) sensible resistente

Comparación parcial de la secuencia Detección por PCR-RFLP de una mutación

del gen psbA entre la línea madre (clon 1)
y una mutante con resistencia a atrazina
(clon 5). La sustitución de un nucleótido
(A por G) crea un sitio de restricción BstXI.
del gen psbA que confiere resistencia a
triazinas. Un fragmento interno de 277 bp
del mencionado gen fue amplificado por PCR
y posteriormente digerido con la enzima BstXI
y separado en un gel de agarosa de 2%.
Tolerancia
a atrazinas
• La proteína de 32 kDa (proteína de unión a QB o D1)
fue identificada como sitio de unión de las triazinas
en Amaranthus hybridus. Esta proteína integra el
núcleo del centro de reacción del Fotosistema II.
• En líneas resistentes de Amaranthus, se vio que las
triazinas no se unían a la proteína y se encontró una
mutación puntual de Ser a Gly en la posición 228.
• Se observaron mutaciones similares de la Ser 264
a Gly en la proteína de 32 kDa de Chlamydomonas
reinhardtii, Chenopodium album y Solanum nigrum.
• La búsqueda de resistencia por ingeniería genética
se ha orientado a la introducción de proteínas de 32
kDa mutadas en plantas transgénicas y a la
detoxificación de atrazinas mediante la introducción
Agrobiotecnología de un gen que codifica glutation-S-transferasa (GST).
El segundo enfoque ha dado mejores resultados.
Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
 • Tolerancia a pirazoles
Herbicidas
que - Los pirazoles son una familia de herbicidas inhibidores
afectan de la enzima HPPD (4- hidroxifenilpiruvato-dioxigenasa).
la síntesis de - Topramezone es un herbicida selectivo de la familia de
carotenoides los pirazoles para ser usado en el cultivo de maíz.

- Efecto de “bleaching” en las plantas produciendo la

muerte de las mismas.

- Se obtuvieron plantas transgénicas de soja resistentes

a inhibidores de HPPD.

- Estas plantas son resistentes a campo a los herbicidas

y están siendo evaluadas para su liberación
comercial en Argentina.

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
Efecto del herbicida
al control
sobre plantas de soja
de malezas
Otras
tolerancias • Genes bacterianos detoxificantes
metabólicas
- Se obtuvieron plantas transgénicas de varias especies,
resistentes al ácido 2,4-dicloro fenóxiacético (2,4-D;
regulador de crecimiento de tipo auxínico) por expresión
de una monooxigenasa con gran especificidad
de sustrato, obtenida de Alcaligenes sp.

- Se obtuvieron plantas transgénicas de varias especies

que expresan una secuencia codificante para
una dehalogenasa, obtenida de Alcaligenes sp.
que confiere resistencia al herbicida dalapon
(inhibidor de la síntesis de lípidos).

- Se obtuvieron plantas transgénicas de varias especies

que expresan una secuencia codificante para
Agrobiotecnología una carbamato hidroxilasa, obtenida de Alcaligenes sp.
que confiere resistencia al herbicida metolachlor
Aplicaciones (pertenece al grupo de las cloroacetamidas que
de la biotecnología inhiben la síntesis de lípidos).
al control
de malezas
Metabolismo de xenobióticos en plantas

Las enzimas responsables de la detoxificación de los xenobióticos están localizadas en, o asociadas con, distintas
organelas celulares. Las líneas discontinuas representan una ruta propuesta de glicosilación en el Golgi seguida
por exocitosis al apoplasma.
CT: Transportador de glutatión conjugado; AT: Transportador de xenobióticos aniónicos ATP dependiente;
GT: Transportador de glucósidos conjugados; VP: Peptidasa vacuolar.
Otras
• Genes eucarióticos detoxificantes
tolerancias
metabólicas - Se obtuvieron plantas de tabaco que expresan
una glutation S-transferasa de maíz, tolerantes
a cloroacetamidas.

- Se obtuvieron plantas transgénicas de papa

con expresión constitutiva de 3 secuencias codificantes
de citocromo-P450 monooxigenasas humanas.
Estas fueron tolerantes a herbicidas de varios grupos.

- Se expresó en papa, bajo control de un promotor

inducible por benzotiadiazol, una secuencia
que codifica la citocromo-P450 monooxigenasa
de rata, sola o fusionada con una de levadura.
Las plantas fueron tolerantes a herbicidas del grupo
de las fenilureas.
Agrobiotecnología
- Se obtuvieron plantas de tabaco y Arabidopsis
Aplicaciones
con expresión constitutiva de una citocromo-P450
de la biotecnología monooxigenasa de topinambur (Helianthus tuberosus).
al control
de malezas
Estas resultaron tolerantes a fenilureas.
New Breeding techinques (NBTs):

Están surgiendo como una alternativa a los transgénicos, básicamente por

el costo de desarrollo y desregulación.

Existen distintos sistemas para lograr un mismo objetivo, pero todas basadas en
la edición genómica. Algunas de ellas con propiedad intelectual.

Zinc Fingers (ZFN) TALEN

CRISPR/CAS9
 ¿Percepción Pública?

Cibus's Rapid Trait Development System is GMO and should be treated as such. Go to Earth Open Source GM
myths and truths report. Myth 1.2: "Crops created with RTDS can and should be described as GMOs, since RTDS
alters the genome in a manner that would not occur naturally through breeding or genetic recombination.
The fact that no foreign DNA is inserted into the recipient plant’s genome is immaterial.
In addition, RTDS still involves tissue culture, which introduces genome-wide mutations. Some or all of these
mutations (the latter in vegetatively propagated plants, e.g. potatoes) will be present in the final marketed product.
Also, there will inevitably be off-target effects from the RTDS process. The intent of the RTDS process is specific
targeting, but this technique is new and the research has not been done to assess the frequency and extent of
off-target effects. The old saying, “Absence of evidence of harm is not evidence of the absence of harm,” is pertinent
here.
This crop has been developed due to the failure of the RR crops. Wake up everyone. GM crops are a way for the
chemical companies that bought the seed companies to make money. The people who pay the price are those who
are poisoned by these chemicals. They include farmers and farm workers and eaters, especially babies and children.
What we need is a food system that supplies nutritious food, regenerates the land and allows food growers a decent
living. It is not this industrial poison using system. All the scientific evidence shows we need local food systems based
on agroecology. Canada you are a wonderful country, please protect your farms, food and people from this appalling
poison onslaught.
 El problema de la emergencia de malezas
resistentes (“supermalezas”)

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Aparición de malezas resistentes a herbicidas

http://weedscience.org/graphs/geochart.aspx
 Weedscience.com

Hay actualmente 481 casos únicos (especies por sitios de acción) de

malezas resistentes a herbicidas en el mundo. Las malezas han
desarrollado resistencia a 23 de los 26 sitios de acción de herbicidas
conocidos y a 163 diferentes herbicidas y han sido reportadas en 91
cultivos de 69 países.
 Weedscience.com
Hay una gran base de datos de malezas resistentes clasificadas por
países, herbicidas, sitios de acción, especie, cultivo…

11
 Monitoreo de malezas resistentes

Dato seguro: resistencia observada

en diversas aplicaciones

Sospecha de tolerancia
El problema de las malezas resistentes a herbicidas viene siendo noticia
hace tiempo....
Suplemento Campo de La Nación del 21 de Septiembre de 2013

Biotipos
resistentes
a herbicidas

Amaranthus palmeri: resistente a

inhibidores de Ahas (2013)

Red de conocimiento en malezas resistentes

(http://www.aapresid.org.ar/rem/que-es/)
Suplemento Rural , Clarín del 11 de Septiembre de 2015
 Suplemento Rural , Clarín del
3 de Septiembre de 2016

Y sigue siendo noticia en la actualidad…..

Ocurrencia y distribución de biotipos de malezas resistentes
a herbicidas seleccionados bajo condiciones de cultivo
 Consideraciones sobre el uso
de cultivos / herbicidas

Agrobiotecnología

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Criterios a • Transferencia de resistencia del cultivo a malezas
considerar - No se conocen ejemplos de transferencia en 50 años
para evitar el de uso intenso de herbicidas. La resistencia a herbicidas
en malezas evoluciona a partir del propio genoma de las
surgimiento mismas. La transferencia de genes de resistencia
de resistencia de malezas a plantas cultivadas es generalmente difícil.
en malezas - Una especie silvestre no se convierte en maleza
por incorporar un gen de resistencia a herbicidas.

• Cultivos que se convierten en malezas

- Las malezas voluntarias son un problema
anterior al desarrollo de las nuevas biotecnologías
(caso de la colza en Canadá).

- Ampliar el espectro de herbicidas a utilizar

en una especie particular para facilitar el control
Agrobiotecnología
de malezas voluntarias.
Aplicaciones
de la biotecnología - Reservar un respaldo químico para el control
al control
de malezas de malezas voluntarias.
Perspectivas

• Enfoques para mitigar la introgresión de genes de

tolerancia a herbicidas desde cultivos a malezas
emparentadas
- Utilización de apomixis.
- Selección de eventos de transformación ubicados
en genomas no compatibles con malezas
relacionadas al cultivo.

- Utilización de plantas transplastómicas.

- Utilización de genes de resistencia a herbicidas

divididos, dirigidos a genomas diferentes y cuyos
productos se ensamblan de manera funcional
Agrobiotecnología por trans-splicing de proteínas (inteínas).

Aplicaciones
de la biotecnología
al control
de malezas
Perspectivas • Prevención del surgimiento de resistencia en malezas
- Evitar la utilización repetida del mismo herbicida.
- Evitar resistencia cruzada por herbicidas que actúan
sobre el mismo blanco (ejemplos, sulfonilureas,
imidazolinonas y triazolopirimidinas sobre ALS).
- No introducir resistencia a herbicidas en un cultivo
si hay malezas que se puedan cruzar con el mismo
(ejemplos, avena cultivada/Avena fatua y sorgo
cultivado/sorgo de alepo) y si estos herbicidas se utilizan
para controlar las mismas malezas en otros cultivos.

- Manejo agronómico que incluye rotación de cultivos,

conocer las malezas existentes en el lote, elección correcta
del o los herbicidas, fechas de siembra, densidad de
siembra.

Agrobiotecnología - Apilamiento de genes de resistencia a herbicidas Ej: STS-

RR en soja. Apilamiento de eventos: RR x LL, 2,4D x
Aplicaciones FOPs, LL x Dicamba, RR + herbicidas selectivos (Ej: Kixor
de la biotecnología en soja), triples eventos.
al control
de malezas
- Necesidad de desarrollar nuevos herbicidas basados en
nuevos modos de acción.
 Mayor
sustentabilidad
de los sistemas de
producción actuales

Fuente: Argenbio, ASA y Casafe

Manejo preventivo y no reactivo:

• limpieza de máquinas al ingresar al lote

• control de los primeros manchones
• monitoreo permanente y de calidad
• inclusión de cultivos de cobertura
• rotación de cultivos
• rotación de mecanismos de acción herbicida
• dosis adecuada
• calidad de aplicación
Nuevos enfoques basados para una reducción en el uso de herbicidas

• Utilización de biocontroladores transgénicos (hongos o insectos que

afecten a las malezas)
• Desarrollo de cultivos transgénicos con mayor expresión de substancias
alelopáticas
• desarrollo de cultivos transgénicos que compitan mejor contra las
malezas (uso de fertilizantes que puedan ser utilizados solo por los
transgénicos, como por ej; fosfitos (PO3-3)
• desarrollo de bioherbicidas
• aumento en la tasa de crecimiento vegetativo
• rotaciones de cultivos diversas
• intercropping
• control físico de malezas
• destrucción de la semilla de la maleza
• reducción en la semilla de la maleza
• RNAi technology (aplicación tópica y con dsRNA de secuencias de
enzimas resistentes a herbicidas)
Referencias 1. Duke, S. Weeding with transgenes.Trends in Biotechnology, 21:192-195, 2003.
2. Gressel, J. Advances in achieving the needs for biotechnologically-derived
herbicide resistant crops. Plant Breeding Reviews, 11:155-198, 1993.
3. Gressel, J. Molecular Biology of weed control. Transgenic Research, 9:355-382,
2000.
4. Tranel, P. Weeds and weed control strategies. In: Plant Genes and Crop
Biotechnology. Chrispeels, M. and Sadava, D. (eds.), pp. 446-471. Jones and
Bartlett Publishers, 2003.
5. Roe R.M., Burton J.D., Kuhr R.J. Herbicide Activitiy: Toxicology, Biochemistry
and Molecular Biology. 1997. IOS Press.
6. Gianessi L.P. The increasing importance of herbicides in worldwide crop
production. Pest Management Science. 69: 1099-1105.
7. Green J.M. The benefits of herbicide-resistant crops. Pest Manag Sci 2012; 68:
1323–1331
8. Deyle C. Unravelling the genetic bases of non-target-site based resistance
(NTSR) to herbicides: amajor challenge for weed science in the forthcoming
decade. Pest Manag Sci. 2013. 69(2):176-87
9. Timmons F. L. A History of Weed Control in the United States and Canada. 2005
Weed Science, 53:748–761.
Agrobiotecnología 10. Bulos M & Altieri E. Herbicide tolerance in sunflower as a tool for Orobanche
control. 2014 . Proceedings of the Third Symposium on Broomrape (Orobanche
Aplicaciones spp.) in Sunflower.
de la biotecnología
al control
11. Papa, J.C. 2012. Interferencia de Maíz Voluntario o Guacho (Zea mays L.) sobre
de malezas un Cultivo de Soja (Glycine max L.). XIV Jornadas Fitosanitarias Argentinas