REGENERACIÓN DE CALLOS NUCELARES EN 3 ESTADOS DE FRUTOS EN BABACO (Carica pentagona).

Andrés Vallejo, Valeria Paguay, Fernanda Cabrera, Elizabeth Moreno

RESUMEN

EI babaco (Carica pentagona) es una especie perteneciente a la familia de las caricacea, es un híbrido
natural proveniente de las especies Carica stipulata H. (toronche) y Carica pubescen L. (chamburo),
originario de las zonas andinas del Ecuador y Colombia. Al no poseer semillas, la propagación del
fruto del babaco se hace de forma asexual. Se realiza mediante estacas, brotes tiernos o por
injertos. Ante esta problemática se ha buscado soluciones para poder obtener más plantas
de buena calidad mediante la aplicación de embriogénesis somática que es la formación de
un embrión a partir de una célula, sin la necesidad de la fusión de gametos. Es por eso que
este trabajo investigativo tiene como objetivo dar una primera instancia en el protocolo de
multiplicación de babaco a partir del callo nucelar en tres estados del fruto. El proyecto se
realizó en el laboratorio de Investigación de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la
Universidad de Cuenca; el material vegetal se obtuvo a partir de las mejores condiciones que
se encontraran en cada uno de sus tres diferentes estados: maduro, semimaduro e
inmaduro. Cada fruto se colocó en un recipiente para su desinfección con 500ml de cloro al
5%; estos recipientes se sellaron y se agitaron suavemente durante 10 min con el fin de lograr
una mejor desinfección. Para los diferentes estados del fruto existió una clara diferencia en la
generación de callos por repetición, teniendo en cuenta que el fruto inmaduro presentó hasta un
100% de generación de los mismos, a diferencia del fruto semimaduro y maduro con 50% y 25%,
respectivamente. En cuanto al diámetro medido para cada una de las fechas se estableció una clara
diferencia entre los tres estados frutales, teniendo en cuenta que el fruto inmaduro tuvo una mayor
media de generación

Palabras clave: Callo nucelar, regeneración, Carica pentagona, Fruto del babaco

INTRODUCCION de vitaminas y minerales, lo que ha

despertado interés entre productores y
EI babaco (Carica pentagona) es una
consumidores (AAIC, 2003) y las
especie perteneciente a la familia de las
expectativas que crea la exportación de
caricacea, es un híbrido natural
babaco en el agricultor han incrementado
proveniente de las especies Carica
su necesidad de propagación (Castillo,
stipulata H. (toronche) y Carica pubescen
2008).
L. (chamburo), originario de las zonas
andinas del Ecuador y Colombia. Se lo Al no poseer semillas, la propagación del
viene cultivando bajo invernadero con un fruto del babaco se hace de forma asexual.
gran interés comercial gracias a la calidad Se realiza mediante estacas, brotes tiernos
gustativa de la fruta, sus bajos contenidos o por injertos (AAIC, 2003).
de azucares y calorías y su alto contenido

1
Sin embargo, al realizar este tipo de babaco a partir del callo nucelar en tres
propagación los problemas esenciales son estados del fruto.
la diseminación de enfermedades internas
MATERIALES Y MÉTODOS
de la planta madre y la pérdida de
variabilidad genética que facilita la El proyecto se realizó en el laboratorio de
adaptación de los microorganismos al Investigación de la Facultad de Ciencias
medio (Vaca, 2008). Ante esta Agropecuarias de la Universidad de
problemática se ha buscado soluciones Cuenca, políticamente se encuentra
para poder obtener más plantas de buena ubicado en la parroquia Yanuncay del
calidad mediante la aplicación de cantón Cuenca dentro de la Provincia del
diferentes tipos de métodos, un claro Azuay.
ejemplo es la técnica de embriogénesis
somática que es la formación de un
embrión a partir de una célula, sin la
necesidad de la fusión de gametos
(Tisserat, Esan, & Murashige, 1979).

Este proceso es conocido en la naturaleza

como una forma de apomixis, el método,
teóricamente, es el más eficiente para una
producción masiva de plantas in vitro por
su naturaleza bipolar del embrión, así
mismo la posibilidad de que todo el
proceso sea automatizable, los altos
Figura 1. Mapa de ubicación de la Facultad
coeficientes de multiplicación en cortos
de Ciencias Agropecuarias de la
períodos de tiempo, además de la
Universidad de Cuenca.
capacidad de aplicar los principios de la
cinética microbiana y la posibilidad de OBTENCIÓN Y PRETRATAMIENTO DEL
encapsular estas estructuras y obtener MATERIAL VEGETAL
semillas artificiales (Freire-Seijo, 2003).
El material vegetal se obtuvo a partir de las
A su vez la escaza información acerca de mejores condiciones que se encontraran
un protocolo exacto para regeneración de en cada uno de sus tres diferentes
nuevas plantas babaco, dificultan una estados: maduro, semimaduro e
buena multiplicación del mismo. Es por inmaduro. Los frutos seleccionados se
eso que este trabajo investigativo tiene lavaron con abundante agua y jabón, para
como objetivo dar una primera instancia una primera desinfección del material.
en el protocolo de multiplicación de Cada fruto se colocó en un recipiente para
su desinfección con 500ml de cloro al 5%;

2
estos recipientes se sellaron y se agitaron
suavemente durante 10 min con el fin de
lograr una mejor desinfección. Una vez
transcurrido el tiempo de desinfección con
la solución esos fueron lavados 3 veces
consecutivas con agua estéril.
MEDIO DE CULTIVO
El medio utilizado tuvieron las sales
basales de Murashige y Skoog (1962),
según el protocolo de MS este cuenta con
las siguiente adiciones a menos que se
indique lo contrario, las siguientes
adiciones (en mg/litro): piridoxina.HCl,
0.5; tiamina.HCl, 0.4; myo-inositol, 1;
sacarosa, 30,000 y agar.
SIEMBRA DEL NUCELO
15°C a 20C° dado las condiciones
ambientales externas.
EVALUACIÓN ESTADÍSTICA
La toma de datos se realizó a la segunda
semana después de haber establecido la
siembra del nucelo para cada variable. Los
datos incluían el diámetro de crecimiento
del callo y su desarrollo en el medio de
cultivo. El diseño experimental fue
completamente en bloques sistemáticos. Los
datos obtenidos fueron sometidos a un
análisis de varianza para cumplir con los
supuestos de normalidad y homogeneidad de
la varianza (Little & Jackson, 1989).
Posteriormente estos datos fueron sometidos
a un análisis de varianza (ANOVA) y prueba de
Tuckey (P < 0.05) (SAS Institute Inc., 1989).

Se obtuvo el nucelo de los 3 frutos, este se RESULTADOS Y DISCUSIÓN

colocó en papel esterilizado para su
respectivo corte y extracción. Se colocó el FORMACIÓN DE
nucelo extraído (2x2cm ±0.2) de cada CALLOS POR
fruto en el medio de cultivo MS en una
cámara de flujo previamente REPETICIÓN
desinfectada, una vez sembrado el nucelo Inmaduro Semimaduro
se lo selló e identifico en las cuatro Maduro
diferentes repeticiones por cada estado de
4 4
fruto, finalmente los mismos fueron
llevados al cuarto de incubación. 3

CONDICIONES MEDIOAMBIENTALES 2 2 2

Las distintas cajas Petri fueron colocadas 1 1 1

en el cuarto de incubación, este contaba
con un temporizador que dotaba de un 0 0 0
Semana 2 Semana 3 Semana 4
fotoperiodo de 16 horas usando lámparas
fluorescentes blancas. En cuanto a la Presencia de callo
temperatura del aire fluctuaba entre los
Fig 1. Formación de callos a través del tiempo
según el número de repeticiones.

3
Según la formación de callos por las
repeticiones, el nucelo del fruto inmaduro
tuvo hasta un 100% de la formación de callos
en medio de cultivo Murashige & Skoog
(1962), a diferencia de los frutos semimaduro
que tuvo hasta un 50% y el fruto maduro que
tuvo hasta un 25% de presencia de callos.
En la capacidad de regeneración de un
explante es inversamente proporcional a la
edad del cultivo, es por ello que se tiende a
utilizar material juvenil, embriones y semillas
para regeneración in vitro (Pierik, 1990). De
esta manera se explicaría como los frutos
inmaduros tienen una mejor formación de
callos atraves del nucelo.
Fig 2. Formación de callo a partir del fruto
inmaduro en medio M.S.
En cuanto a las pruebas realizadas para el
díametro en la formación de los callos para
cada fruto, mediante las pruebas de tukey
(α=0.05) se obtuvieron los siguientes
resultados.
4
Fig 3. Establecimiento de los diferentes
medios de cultivo para cada estado frutal
Tabla 1. Diferencia de diametro para los
diferentes estados de fruto para babaco para la
segunda semana.
Tabla 2. Diferencia de diametro para los
diferentes estados de fruto para babaco para la
tercera semana.
Tabla 3. Diferencia de diametro para los
diferentes estados de fruto para babaco para la
cuarta semana.
Según los datos establecidos para el díametro
se establece que en la segunda semana de la
toma de datos existieron dos niveles de
significancia entre los frutos muduro,
semimaduro con respecto al verde.
A partir de la tercera semana de la toma de
datos se establecieron diferencias
significativas entre los tres frutos obteniendo
tres niveles para cada uno de los frutos (A, B,
C). Finalmente, para la última semana de la
toma de datos de igual manera se
establecieron tres diferentres niveles para
cada uno de los tratamientos.
(Pierik, 1990), sugiere para este propósito
utilizar algunas sustancias químicas. Etanol
(alcohol) al 70% para material vegetal, se debe
sumergir durante unos segundos, aunque esto
no es suficiente para matar todos los
microorganismos, es decir de esta manera
reducir los niveles de contaminación en los
cultivos in vitro de cada sistema.Ademá, en la
mayoría de las especies la embriogénesis
somática se obtiene a partir de embriones
cigóticos inmaduros, (Karamian & Ghasemlou,
2014), confirmando así como los frutos
inmaduros tuvieron una mayor generación en
callos a partir del nucelo de cada una de las
mismas.
CONCLUSIÓN
Para los diferentes estados del fruto existió
una clara diferencia en la generación de callos
por repetición, teniendo en cuenta que el
fruto inmaduro presentó hasta un 100% de
generación de los mismos, a diferencia del
fruto semimaduro y maduro con 50% y 25%,
respectivamente.
En cuanto al diámetro medido para cada una
de las fechas se estableció una clara diferencia
entre los tres estados frutales, teniendo en
cuenta que el fruto inmaduro tuvo una mayor
media de generación (X=3.6cm) a diferencia
de el fruto semimadura y maduro (X=2.58cm;
X=1.03cm, respectivamente).
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REGULADORES DE CRECIMIENTO
PARA LA REGENERACIÓN DE
PLANTAS COMPLETAS”. ESCUELA
POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO.
ANEXOS