Qué es derivatización y para qué se utiliza en cromatografía?

La derivatizacion consiste en una amplia gama de reacciones químicas fundamentalmente

orientadas hacia la transformación de los analitos en nuevas especies ( compuestos derivados) que
sean compatibles con el sistema cromatógrafo en sus diferentes modulos : con la fase móvil, con
el sistema de inyección, con la columna cromatografica y con el detector continuo. Por ello al
derivatizar una muestra la convertimos en otro compuesto derivado que brinda mayor cantidad de
señal en el detector que se utilizara en el equipo. Se utiliza derivatizacion en cromatografía
debido a que son escasas la muestras reales que pueden introducirse directamente en
cromatografía de gases o de liquidos. Es preciso casi siempre algún tipo de operación previa de
adecuación de la muestra para evitar las dificultades como: complejidad de la matriz, analitos
excesivamente diluidos, cuya concentración esta por debajo del limite de detección y
cuantificación del sistema cromatografico e incompatibilidad de la muestra con el sistema
cromatografico. En la literatura al respecto se distingue normalmente entre dos tipos de procesos
que, en realidad, podrían ser tratados de manera conjunta que son preparación de la muestra y
derivatizacion, esta ultima convierte al compuesto en un derivado del mismo para que se pueda
separar e identificar con el sistema cromatografico.

En los detectores usados en cromatografía se utiliza un parámetro llamado Factor de respuesta. ¿Qué es
el factor de respuesta y cómo se calcula?

Es un método que permite cuantificar rápidamente un compuesto de

interés en una mezcla, evitando que sea necesario medir áreas, alturas o pesos para todos los
compuestos. El factor de respuesta se determina inyectando en el cromatógrafo una cantidad
conocida del compuesto de interés, en igualdad de condiciones en las cuales se inyectó la mezcla.
Se analiza la forma del pico tanto en la inyección sola del compuesto como en la mezcla y se define
si se calcula con factor de respuesta considerando la altura, el área o el peso. El factor de respuesta
vendrá dado por la relación más conveniente entre uno de estos parámetros y el volumen o peso del
compuesto inyectado y será igual a la altura o área o peso del pico del compuesto sobre el peso o
volumen de la cantidad de compuesto inyectado. Las unidades del factor de respuesta serán
entonces: altura en milímetros o centímetros por unidad del compuesto en peso o volumen (g, mg, o
mL). Área en mm2 o cm2 por unidad del compuesto en peso o volumen. Peso en g o mg por unidad
del compuesto en peso o volumen

Para la cuantificación del método cromatografico se utiliza el factor respuesta que, al usar un patrón
interno, se prepara primero una mezcla conocida de patrón y analito, y luego se mide la respuesta
relativa del detector a las dos especies. En el cromatograma el área debajo de cada uno de los picos es
proporcional a la concentración de las especies inyectadas en la columna. Sin embargo, el detector de
ordinario da una respuesta diferente frente a cada componente. Por ejemplo, si tanto el analito(X) como
el patrón interno (S) tienen concentraciones de 10 mM, el área debajo del pico del analito puede ser 2,3
veces mayor que el área debajo del pico del patrón.En ese caso se dice que el factor de respuesta,F, es
2.3 veces mayor para X que para S