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OBJETIVOS
GENERALIDADES
FUNDAMENTO
NOTAS
Cuando se utiliza el medio de agar bilis rojo violeta (ABRV) para la cuenta en placa de
coliformes, debe considerarse lo siguiente:
• Si el alimento contiene mono o disacáridos en altas concentraciones, éstos
pueden ser fermentados por otro grupo de microorganismos, generando colonias
semejantes a las de coliformes.
• El medio no debe esterilizarse ni sobrecalentarse por lo que se debe utilizar antes
de 3 h. a partir de su preparación; en cuanto se disuelva el agar se debe colocar
en baño de agua a 45 °C para mantenerlo fundido, hasta el momento de utilizarlo.
• Debe ponerse una sobrecapa de medio una vez que las placas vertidas han
solidificado, para favorecer las condiciones de microaerobiosis, más adecuadas
para los coliformes.
• El sobrecalentamiento del medio y las variaciones en las condiciones de
incubación, especialmente la incubación prolongada, pueden ocasionar la
formación de colonias rojas de cocos Gram positivos.
• El rango estadístico para tener confiabilidad en el aspecto cuantitativo (de
sensibilidad del método) es de 15 a 150 UFC por placa.
• El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al
diluyente hasta que finalmente se vierten los medios de cultivo en las cajas con
las muestras de diluciones, no debe exceder de 20 minutos.
MATERIAL Y EQUIPO
• Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 1.0ºC, provista con
termómetro calibrado. a
• Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal
cuadrículada y lente amplificador. b
• Registrador mecánico o electrónico b
• Microscopio óptico b
• Baño de agua con termómetro calibrado, que mantenga la temperatura a 45 ±
1.0 °C. a
• Utensilios estériles (cuchillo, tenedor, cuchara, pinzas) para tomar muestra a
• Propipetaa
• Pipetas bacteriológicas de 10 mL, estériles, con algodón en el extremo superior
(las necesarias de acuerdo con el número de diluciones). a
• Pipetas bacteriológicas de 1 mL, estériles, con algodón en el extremo superior.
(las necesarias de acuerdo con el número de diluciones) a
• Pipetas Pasteur estériles a, b
• 4 a 8 cajas Petri estériles, de 15 x 100 mm. a
• Stomacher (homogeneizador peristáltico). a
• Bolsas estériles para stomacher. a
NOTAS
a
Material necesario al inicio de la práctica
b
Material necesario a las 24 y 48 horas de iniciada la práctica
Homogeneizar
Pesar 10 g de la muestra con
muestra en 90.0 mL de
condiciones de diluyente
Homogeneizar la muestra
con el agar haciendo
movimientos rotatorios Incubar las cajas
en posición
invertida Contar aquellas placas que tengan
entre 15 a 150 colonias y reportar
24 h/ 37°C como UFC/g o mL de muestra
Versión para Administrador de Manuales y Documentos (AMyD) de la Facultad de Química, UNAM 4
Camacho, A., M.Giles, A.Ortegón, M.Palao, B.Serrano y O.Velázquez. 2009. Técnicas para el
Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de Química, UNAM. México.
PROCEDIMIENTO
BIBLIOGRAFÍA
http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-1.htmL