I.

§Æt vÊn ®Ò
-
HiÖn nay, Xëng s¶n xuÊt v¾c xin thµnh phÈm ®ang cµi ®Æt nhiÖt
®é tiÖt trïng lä cña hÇm tiÖt trïng lµ 320 0C vµ b»ng viÖc thÈm ®Þnh
chóng t«i ®· chøng minh ®îc hiÖu qu¶ tiÖt trïng ë nhiÖt ®é ®ã. Tõ kÕt
qu¶ thÈm ®Þnh cho thÊy, nhiÖt ®é ®¹t ®îc cña lä tháa m·n trªn 3000C.
MÆt kh¸c, trong c¸c tµi liÖu cã ghi ë nhiÖt ®é trªn 250 0C th× míi cã hiÖu
qu¶ trong viÖc bÊt ho¹t Endotoxin vµ cã kh¶ n¨ng gi¶m nhiÖt ®é tiÖt trïng
cµi ®Æt. Do vËy, díi h×nh thøc nghiªn cøu qui tr×nh gi¶m nhiÖt ®é tiÖt
trïng lä cña hÇm tiÖt trïng ®Ó thay ®æi nhiÖt ®é tiÖt trïng lä chóng t«i
thùc hiÖn kiÓm tra nhiÖt ®é tiÖt trïng ë c¸c d¶i nhiÖt ®é tiÖt trïng kh¸c
nhau, sau ®ã dùa theo kÕt qu¶ ®Ó t×m ra nhiÖt ®é tiÖt trïng tèi u nhÊt.
Víi lý do trªn chóng t«i ®· tiÕn hµnh thùc hiÖn ®Ò tµi:

“Nghiªn cøu qui tr×nh gi¶m nhiÖt ®é tiÖt trïng lä cña hÇm tiÖt trïng ”

víi c¸c môc tiªu chÝnh lµ:

1. Gi¶m nhiÖt ®é tiÖt trïng lä ®Ó gi¶m chi phÝ cho ho¹t ®éng cña m¸y
tiÖt trïng lä.

2. Gi¶m lîng t¶i ®èi víi sensor K class 2 sö dông cho thÈm ®Þnh hiÖu
qu¶ tiÖt trïng lä tõ ®ã cã thÓ kÐo dµi tuæi thä cña sensor K.
 II. Tæng quan
-
§Ó quyÕt ®Þnh nhiÖt ®é tiÖt trïng vµ ®iÒu kiÖn thùc hiÖn trong
nghiªn cøu qui tr×nh gi¶m nhiÖt ®é tiÖ trïng lä cña hÇm tiÖt trïng (n¬i
®Æt sensor vµ lä tr¸ng Endotoxin) chóng t«i tiÕn hµnh ph©n tÝch sè liÖu
sè liÖu thu ®îc trong qu¸ khø theo c¸c môc díi ®©y.
-
ë b¶ng 1 díi ®©y thÓ hiÖn nhiÖt ®é ®¹t ®îc cao nhÊt cña sensor
trong thÈm ®Þnh hiÖu qu¶ tiÖt trïng lä ®· thùc hiÖn trong 3 n¨m tríc ®©y
(Cµi ®Æt nhiÖt ®é tiÖt trïng lµ 3200C)

Sensor
VÞ trÝ 2007 - 1 2007 - 2 2007 - 3 2008 2009
sè
Tr¸i 1 315.8 319.6 319.4 315.6 318.9
PhÝa tríc Gi÷a 2 310.4 312.4 311.5 313.8 317.2
Ph¶i 3 306.6 315.9 313.7 307.7 312.7
Tr¸i 4 321.3 320.8 318.8 321.9 320.3
Gi÷a Gi÷a 5 319 319.2 318.6 321.1 317.2
Ph¶i 6 316.5 316.9 314.9 317.5 316.3
Tr¸i 7 307.5 310 309.1 311.8 316.8
PhÝa sau Gi÷a 8 306.6 310.1 305.7 312.6 318.6
Ph¶i 9 308.7 308.1 306.5 310.3 316
B¶ng 1: NhiÖt ®é ®¹t ®îc cao nhÊt cña c¸c lä trong thÈm ®Þnh hiÖu qu¶
tiÖt trïng lä trong qu¸ khø
-
Dùa vµo viÖc so s¸nh nhiÖt ®é cµi ®Æt cña hÇm tiÖt trïng vµ nhiÖt
®é ®¹t ®îc thùc tÕ ®Ó ®a ra c¨n cø cµi ®Æt cña nhiÖt ®é tiÖt trïng lä
trong nghiªn cøu gi¶m nhiÖt ®é tiÖt trïng lä cña hÇm tiÖt trïng.
-
C¨n cø cña vÞ trÝ nhiÖt ®é ®¹t ®îc cña lä gi¶m nhiÒu nhÊt ®Ó x¸c
®Þnh vÞ trÝ cµi ®Æt sensor nhiÖt ®é vµ lä tr¸ng Endotoxin
Chän nhiÖt ®é tiÖt trïng b»ng viÖc so s¸nh nhiÖt ®é cµi ®Æt hÇm tiÖt
trïng vµ nhiÖt ®é ®¹t ®îc thùc tÕ cña lä.
-
Theo b¶ng 1 trªn ®©y, so víi nhiÖt ®é cµi ®Æt cña hÇm tiÖt trïng th×
nhiÖt ®é ®¹t ®îc thùc tÕ cña lä thÊp h¬n kho¶ng 150C. Do ®ã, tiÕn hµnh
chän nhiÖt ®é tiÖt trïng trong nghiªn cøu gi¶m nhiÖt ®é tiÖt trïng lä cña
hÇm tiÖt trïng b»ng 3 ®iÒu kiÖn nhiÖt ®é tiªu chuÈn díi ®©y vµ tËp
 trung vµo d¶i nhiÖt ®é ®¹t ®îc ph¶i vît qu¸ 2500C. H¬n n÷a, ®©y lµ nghiªn
cøu qui tr×nh gi¶m nhiÖt ®é tiÖt trïng nªn sÏ thùc hiÖn mét c¸ch c¬ b¶n vµ
coi d¶i nhiÖt ®é díi 2500C kh«ng cã hiÖu qu¶ tiÖt trïng lä
VÞ trÝ cµi ®Æt u tiªn cña sensor vµ lä tr¸ng Endotoxin trong ®iÒu tra s¬
bé
-
Theo nh b¶ng 1 trªn ®©y, vÞ trÝ mµ nhiÖt dé tiÖt trïng ®¹t ®îc thÊp
nhÊt ®îc ®¸nh gi¸ lµ ë phÝa tríc (Khi b¾t ®Çu röa lä) hoÆc phÝa sau (Khi
kÕt thóc röa lä). Do vËy trong ®iÒu tra giai ®o¹n ®Çu cña nghiªn cøu gi¶m
nhiÖt ®é tiÖ trïng cña hÇm tiÖt trïng, sÏ tiÕn hµnh cµi dÆt sensor nhiÖt
®é vµ lä tr¸ng Endotoxin ë vÞ trÝ thÝch hîp cña phÝa tríc vµ phÝa sau ®·
thùc hiÖn trong thÈm ®Þnh ®Þnh kú.
 III. vËt liÖu vµ ph¬ng ph¸p nghiªn cøu
3.1. Nguyªn vËt liÖu, thiÕt bÞ
3.1.1. Nguyªn vËt liÖu
-
Lä 10ml - V010111603B - SCHOTT (Indonesia)
-
Endotoxin 2300 EU - NhËt B¶n
3.1.2. ThiÕt bÞ
- Sensor nhiÖt:
o H·ng s¶n xuÊt: Okazaki (NhËt b¶n)
o Element: K Class 2
o Sai sè:
 Tríc thÈm ®Þnh: ± 2.60C
 Sau thÈm ®Þnh: ± 50C
o Sè lîng: 09 d©y
- Hybrid Recorder:
o H·ng s¶n xuÊt: Yokogawa (NhËt b¶n)
- M¸y tÝnh ®· cµi phÇn mÒm DARWIN
3.1.3. HÇm tiÖt trïng
o H·ng s¶n xuÊt: Bosch (NhËt b¶n)
o Sè seri: GAT04318
3.2. Ph¬ng ph¸p nghiªn cøu
-
Thùc hiÖn nghiªn cøu qui tr×nh gi¶m nhiÖt ®é tiÖt trïng lä cña hÇm
tiÖt trïng theo c¸c bíc sau:
 Bíc 1: TiÕn hµnh ®iÒu tra hiÖu qu¶ tiÖt trïng b»ng c¸c gi¶i nhiÖt ®é
tiÖt trïng chuÈn, tõ kÕt qu¶ ®ã sÏ t×m ra nhiÖt ®é tiÖt trïng cã kh¶
n¨ng tiÖt trïng ë nhiÖt ®é thÊp nhÊt (Tiªu diÖt Endotoxin >103)
 Bíc 2: X¸c nhËn hiÖu qu¶ tiÖ trïng cña nhiÖt ®é tiÖ trugnf tèi u b»ng
®iÒu kiÖn gièng víi thÈm ®Þnh ®Þnh kú
3.2.1. Bíc 1: X¸c nhËn hiÖu qu¶ tiÖt trïng ë c¸c d¶i nhiÖt ®é tiÖt trïng
3.2.1.1. Cµi ®Æt nhiÖt ®é tiÖt trïng cña hÇm tiÖt trïng trong nghiªn cøu
-
Tõ viÖc xem xÐt l¹i kÕt qu¶ thÈm ®Þnh trong qu¸ khø vµ môc ®Ých
®iÒu tra viÖc bÊt ho¹t Endotoxin, tiÕn hµnh ®iÒu tra hiÖu qu¶ tiÖt trïng
theo tiªu chuÈn nhiÖt ®é díi ®©y. NhiÖt ®é tiÖt trïng ®îc thùc hiÖn theo
tr×nh tù tõ nhiÖt ®é tiÖt trïng thÊp ®Õn cao.
-
NhiÖt ®é tiÖt trïng ®èi tîng ®iÒu tra: 2500C, 2700C, 2900C, 3100C
3.2.1.2. Röa vµ tiÖt trïng lä theo ®iÒu kiÖn ®ang thùc hiÖn vµ thÈm ®Þnh
®Þnh kú ngo¹i trõ nhiÖt ®é tiÖt trïng
3.2.1.3. ChuÈn ®Þnh sensor nhiÖt ®é
-
Sö dông sensor nhiÖt ®é míi, ®Ó thùc hiÖn chuÈn ®Þnh theo c¸c bíc
díi ®©y vµ tiÕn hµnh ghi biªn b¶n. So s¸nh kÕt qu¶ chuÈn ®Þnh tríc vµ
sau vµ so s¸nh ®é chÝnh x¸c cña sensor nhiÖt ®é
-
Tr×nh tù chuÈn ®Þnh:
 ChuÈn ®Þnh ®iÒu tra ë 2500C
 ChuÈn ®Þnh ®iÒu tra ë 2700C　
 ChuÈn ®Þnh ®iÒu tra ë 2900C
 ChuÈn ®Þnh ®iÒu tra ë 3100C
-
Ngoµi ra, trong trêng hîp khi ®iÒu tra ë bíc 1 mµ chuÈn ®Þnh kh«ng
®¹t th× sÏ tiÕn hµnh thay thÕ sensor míi.
3.2.1.4. VÞ trÝ l¾p ®Æt sensor nhiÖt ®é vµ lä tr¸ng Endotoxin
-
Dùa trªn viÖc kh¶o s¸t kÕt qu¶ thÈm ®Þnh trong qu¸ khø, tiÕn hµnh
l¾p ®Æt sensor nhiÖt ®é vµ lä tr¸ng Endotoxin theo nh díi ®©y:
-
L¾p ®Æt sensor: L¾p ®Æt tæng céng lµ 6 vÞ trÝ ®ang ®îc ¸p dông
trong chuÈn ®Þnh ®Þnh kú, phÝa tríc 3 vÞ trÝ, phÝa sau 3 vÞ trÝ (3 vÞ
trÝ ë gi÷a kh«ng ®Æt v× kh«ng cã ®iÓm l¹nh)
-
L¾p ®Æt lä tr¸ng Endotoxin: L¾p ®Æt theo vÞ trÝ l¾p ®Æt lä tr¸ng
Endotoxin trong thÈm ®Þnh ®Þnh kú, phÝa tríc 3 vÞ trÝ, phÝa sau 1 vÞ
trÝ (Mçi vÞ trÝ 1 lä tr¸ng Endotoxin).
3.2.1.5. Kh¶o s¸t vµ ph©n tÝch d÷ liÖu
 HiÖu qu¶ tiÖt trïng
 -
Dùa theo tiªu chuÈn c¸c nhiÖt ®é tiÖt trïng ®Ó tæng hîp nhiÖt ®é ®¹t
®îc cao nhÊt cña nhiÖt ®é tiÖt trïng ë c¸c vÞ trÝ vµ hiÖu qu¶ bÊt ho¹t
Endotoxin ®Ó quyÕt ®Þnh nhiÖt ®é tiÖt trïng tèi u nhÊt thùc hiÖn ë bíc 2.
Ngoµi ra, tiÕn hµnh cµi ®Æt sensor nhiÖt ®é vµ Endotoxin ë cïng 1 vÞ
trÝ, 3 vÞ trÝ phÝa tríc vµ 1 vÞ trÝ ë phÝa sau, theo h¹ng môc chó ý khi
kh¶o s¸t vµ ph©n tÝch d÷ liÖu ®Ó cµi ®Æt nhiÖt ®é tiÖt trïng tèi u nhÊt
sau ®ã ®iÒu tra mèi liªn quan gi÷a nhiÖt ®é ®¹t ®îc cña lä vµ kh¶ n¨ng
bÊt ho¹t Endotoxin
-
§é chÝnh x¸c cña sensor nhiÖt ®é: TiÕn hµnh so s¸nh kÕt qu¶ chuÈn
®Þnh tríc vµ sau khi ®iÒu tra ®Ó x¸c nhËn xem sensor cã bÞ gi¶m ®é
chÝnh x¸c do bÞ ¸p lùc vÒ nhiÖt hay kh«ng.
3.2.2. Bíc 2: X¸c nhËn hiÖu qu¶ tiÖt trïng cña nhiÖt ®é tiÖt trïng tèi u
nhÊt
-
TiÖt trïng lä víi nhiÖt ®é tiÖt trïng tèi u nhÊt ®· ®¹t ®îc trong ®iÒu
tra ë bíc 1 theo ®iÒu kiÖn thÈm ®Þnh thùc tÕ, x¸c nhËn hiÖu qu¶ tiÖt
trïng cuèi cïng ®ã cã thÓ bÊt ho¹t Endotoxin > 103
3.2.2.1. §iÒu kiÖn röa vµ tiÖt trïng lä
-
§iÒu kiÖn röa vµ tiÖt trïng lä gièng víi ®iÒu kiÖn cña thÈm ®Þnh
®Þnh kú
3.2.2.2. ChuÈn ®Þnh sensor nhiÖt ®é
-
Sö dông sensor nhiÖt ®é míi ®Ó thùc hiÖn chuÈn ®Þnh ë giai ®o¹n
tríc vµ sau khi ®iÒu tra ë bíc 2, sau ®ã tiÕn hµnh ghi biªn b¶n. So s¸nh kÕt
qu¶ chuÈn ®Þnh tríc vµ sau vµ so s¸nh ®é chÝnh x¸c cña sensor nhiÖt ®é
3.2.8. VÞ trÝ cµi ®Æt sensor nhiÖt ®é vµ lä tr¸ng Endotoxin
-
Cµi ®Æt ë c¸c vÞ trÝ gièng víi thÈm ®Þnh ®Þnh kú
3.2.2.3.. Kh¶o s¸t kÕt qu¶
-
HiÖu qu¶ tiÖt trïng: Tæng hîp nhiÖt ®é ®¹t ®îc cao nhÊt cña nhiÖt
®é tiÖt trïng ë c¸c vÞ trÝ vµ hiÖu qu¶ bÊt ho¹t Endotoxin X¸c nhËn hiÖu
qu¶ bÊt ho¹t Endotoxin ë tÊt c¶ c¸c vÞ trÝ lµ > 103
 -
　§é chÝnh x¸c cña sensor nhiÖt ®é: TiÕn hµnh so s¸nh kÕt qu¶ chuÈn
®Þnh tríc vµ sau khi ®iÒu tra ®Ó x¸c nhËn xem sensor cã bÞ gi¶m ®é
chÝnh x¸c do bÞ ¸p lùc vÒ nhiÖt hay kh«ng.
3.2.3. Thùc hiÖn thÈm ®Þnh 3 lÇn liªn tiÕp
§iÒu kiÖn thö nghiÖm:
- Lo¹i lä: Lä 10ml - V010111603B - SCHOTT (Indonesia)
- Sè lä: 3500 lä
- Tèc ®é b¨ng chuyÒn: ≤ 137 mm/min
- NhiÖt ®é thiÕt ®Æt tiÖt trïng: 2700C
- Lîng l¸ng Endotoxin: 6000 EU/lä
- VÞ trÝ thiÕt ®Æt lä l¸ng ®Òu Endotoxin: 45 lä (nh h×nh vÏ s¬ ®å 1)
- VÞ trÝ thiÕt dÆt sensor nhiÖt ®é: 09 lä (nh h×nh vÏ s¬ ®å 1)
S¬ ®å 1: VÞ trÝ thiÕt ®Æt lä l¸ng Endotoxin vµ sen sensor nhiÖt

III II I
1 1 1

2 2 2
I I
3 3 3

Lä s¹ch
Lä s¹ch ®­îc l¸ng Endotoxin
Lä s¹ch ®­îc g¾n sensor nhiÖt ®é

3.2.3. C¸c thao t¸c kh¸c vµ tr×nh tù thö nghiÖm QC

- QC tiÕn hµnh l¸ng ®Òu Endotoxin toµn bé bÒ mÆt trong cña lä tu©n
theo quy tr×nh thao t¸c l¸ng Endotoxin vµ chuyÓn cho Xëng s¶n xuÊt v¾c
xin Thµnh phÈm
- Xëng s¶n xuÊt v¾c xin Thµnh phÈm thùc hiÖn nghiªn cøu qui tr×nh
gi¶m nhiÖt ®é tiÖt trïng lä cña hÇm tiÖt trïng tu©n theo c¸c quy tr×nh vËn
hµnh m¸y röa vµ tiÖt trïng lä (Doc.#: M04-SOP-09-1[2]), xö lý lçi m¸y röa
vµ tiÖt trïng lä (Doc.#: M04-SOP-09-01[3]), vÖ sinh m¸y röa vµ tiÖt trïng
lä (Doc.#: M04-SOP-09-01[4]), l¾p ®Æt vµ thu håi sensor trong hÇm tiÖt
trïng lä (Doc.#: M04-SOP-10-09);
- KÕt thóc bíc 2 còng nh mçi lÇn thÈm ®Þnh cña qu¸ tr×nh nghiªn cøu,
Xëng s¶n xuÊt v¾c xin thµnh phÈm thu håi mÉu, b¶o qu¶n trong giÊy b¹c
sÊy v« trïng vµ hép ®ùng mÉu göi l¹i QC;
- Phßng QC sÏ tiÕn hµnh thö nghiÖm kiÓm tra lîng Endotoxin tån d cña
5 lä cho mçi ®iÓm lÊy mÉu vµ qui tr×nh kiÓm tra tu©n theo SOP thö
nghiÖm Endotoxin (Doc.#: M02-SOP-06-31).
 vi. kÕt qu¶ nghiªn cøu

4.1. KÕt qu¶ x¸c nhËn hiÖu qu¶ tiÖt trïng ë c¸c d¶i nhiÖt ®é tiÖt trïng

H¹ng môc NhiÖt ®é tiÖt trïng

VÞ trÝ 0
®¸nh gi¸ 250 C 2700C 2900C 3100C
Ph¶ 249,1 269,0 287,2 307,5
i
Tríc Gi÷ 250,4 270,6 289,6 310,1
NhiÖt ®é a
®¹t ®îc Tr¸i 250,0 270,5 290,4 310,3
cao nhÊt Ph¶ 248,5 269,4 289,0 305,6
cña lä i
Sau Gi÷ 250,1 271,0 291,5 307,8
a
Tr¸i 250,6 272,4 293,6 310,5
Ph¶ 104,002 104,061 104,061 104,002
i
HiÖu qu¶ Tríc Gi÷ 104,002 104,061 104,061 104,002
bÊt ho¹t a
Endotoxin Tr¸i 104,002 104,061 104,061 104,002
Ph¶ 104,002 104,061 104,061 104,002
Sau
i

4.2. KÕt qu¶ x¸c nhËn hiÖu qu¶ tiÖt trïng cña nhiÖt ®é tiÖt trïng tèi u nhÊt
VÞ trÝ NhiÖt ®é ®¹t ®îc cña lä HiÖu qu¶ bÊt ho¹t Endotoxin
Ph¶i 267,2 103,15
Tríc Gi÷a 268,4 103,15
Tr¸i 269,0 103,15
Ph¶i 270,7 103,15
Gi÷a Gi÷a 272,0 103,15
Tr¸i 272,4 103,15
Sau Ph¶i 267,8 103,15
Gi÷a 268,0 103,15
 Tr¸i 271,2 103,15

C¨n cø vµo c¸c d÷ liÖu thu ®îc trong qu¸ tr×nh ®iÒu tra nhiÖt ®é hÇm tiÖ
trïng t¹i 2500C, 2700C, 2900C vµ 3100C
C¨n cøa vµo ®iÒu kiÖn chÊp thuËn cña ®iÒu tra :
NhiÖt ®é tiÖt trïng : ≥ 2500C
HiÖu qu¶ diÖt Endotoxin : ≥ 103
C¨n cø vµo phiÕu tr¶ lêi kÕt qu¶ cña qu¸ tr×nh ®iÒu tra nhiÖt ®é tiÖ trïng
cña hÇm tiÖt rïng t¹i : 2500C, 2700C, 2900C vµ 3100C
HiÖu qu¶ diÖt Endotoxin : ≥ 104
KÕt luËn : Dùa vµo nh÷ng d÷ liÖu thu ®îcXëng s¶n xuÊt v¾c xin Thµnh
phÈm kiÕn nghÞ dïng d¶i nhiÖt ®é 270 lµm nhiÖt ®é tiÖt trïng cho hÇm
tiÖttrïng
§Ò xuÊt thay ®æi : LÊy gi¸ trÞ nhiÖt ®é 270 lµm gi¸ trÞ cµi ®Æt nhiÖt ®é
tiÖt trïng lä cña hÇm tiÖt trïng
4.3 KÕt qu¶ thÈm ®Þnh
Tiªu
Thö th¸ch sinh häc Endotoxin: Gi¶m ≥ 103 EU/ lä
chuÈn
NhiÖt ®é: TÊt c¶ c¸c vÞ trÝ thiÕt ®Æt sensor nhiÖt ®é ph¶i ®¹t ®îc
chÊp
≥ 2500C
thuËn
Endotoxin
Thêi gian
Sè lÇn Lîng l¸ng Lîng cßn l¹i sau Tû lÖ §¸nh gi¸
duy tr×
®Òu/lä khi tiÖt trïng/lä gi¶m
 §¹t
1 103,15 00 ≥ 103,15 ≥ 07 phót  Kh«ng
®¹t
 §¹t
2 103,09 00 ≥ 103,09 ≥ 09 phót  Kh«ng
®¹t
 §¹t
3 103,13 00 ≥ 103,13 ≥ 09 phót  Kh«ng
®¹t
§iÒu kiÖn thiÕt
　・ NhiÖt ®é thiÕt ®Æt tiÖt trïng: 2700C
®Æt nhiÖt ®é
・ Tèc ®é b¨ng chuyÒn: ≤ 137 mm/phót
tiÖt trïng
KÕt qu¶ chuÈn
®Þnh sensor Sau tiÖt trïng:  §¹t  Kh«ng ®¹t
nhiÖt

4.4. KÕt qu¶ chuÈn ®Þnh sensor tríc vµ sau thÈm ®Þnh

V. Bµn luËn

kÕt luËn

KiÕn nghÞ

Phô lôc

Tµi liÖu tham kh¶o

 c¸c ch÷ viÕt t¾t

CCID50....................................Cells culture infective dose 50

LiÒu g©y nhiÔm 50% tÕ bµo nu«i cÊy
§¦MD.........................................§¸p øng miÔn dÞch
HG............................................HiÖu gi¸
HGSSL.....................................HiÖu gi¸ sau siªu läc
HGTSL.....................................HiÖu gi¸ tríc siªu läc
IPV............................................Inactivated Polio vaccine
Vacxin b¹i liÖt bÊt ho¹t
NCTB.......................................Nu«i cÊy tÕ bµo
 OPV..........................................oral Polio vaccine
Vacxin b¹i liÖt uèng
PCR..........................................Polymerase chain reaction
Ph¶n øng chuçi polymerase
S-IPV........................................Sabin Inactivated Polio vaccine
Vacxin b¹i liÖt bÊt ho¹t (chñng Sabin)
SSL...........................................Sau siªu läc
SSLT.........................................Sau siªu ly t©m
TCMR.......................................Tiªm chñng më réng
TCTQ........................................Tiªm chñng toµn quèc
TCYTTG..................................Tæ chøc Y tÕ ThÕ giíi
TBTK........................................ThËn bµo thai khØ
TKTP........................................ThËn khØ tiªn ph¸t
TKTT........................................ThËn khØ trëng thµnh
TKT¦.........................................ThÇn kinh trung ¬ng
TSL...........................................Tríc siªu läc
VLDT.......................................VËt liÖu di truyÒn
VRBL.......................................Virus b¹i liÖt

Lêi c¶m ¬n
T«i xin bµy tá lßng biÕt ¬n ch©n thµnh ®èi víi:
- Ban gi¸m hiÖu, Phßng ®µo t¹o sau ®¹i häc Trêng §¹i häc Y Hµ néi.
- Ban gi¸m ®èc, Phßng ®µo t¹o sau ®¹i häc ViÖn VÖ sinh DÞch tÔ Trung ¬ng.
Víi lßng kÝnh träng vµ biÕt ¬n s©u s¾c, t«i xin ch©n thµnh c¶m ¬n:
- TS. NguyÔn ThÞ Quú ngêi thÇy ®· tËn t×nh, cho t«i nh÷ng kiÕn thøc quý b¸u,
trùc tiÕp híng dÉn t«i thùc hiÖn vµ hoµn thµnh luËn v¨n nµy.
- C¸c gi¸o s, phã gi¸o s, tiÕn sÜ trong Héi ®ång th«ng qua ®Ò c¬ng vµ Héi
®ång chÊm luËn v¨n tèt nghiÖp ®· cho t«i nhiÒu ý kiÕn quý b¸u, gióp t«i hoµn
thµnh luËn v¨n.
T«i xin bµy tá lßng biÕt ¬n ch©n thµnh ®èi víi:
- GS.TSKH. NguyÔn V¨n MÉn - Chñ nhiÖm ®Ò tµi
- TS. NguyÔn §¨ng HiÒn - Gi¸m ®èc Trung t©m Khoa häc S¶n xuÊt Vacxin
Sabin, ®· t¹o mäi ®iÒu kiÖn gióp ®ì t«i trong qu¸ tr×nh thùc hiÖn vµ hoµn
thµnh luËn v¨n.
- PGS. TS. Lª ThÞ Lu©n - Phã Gi¸m ®èc Trung t©m Khoa häc S¶n xuÊt Vacxin
Sabin, ®· t¹o mäi ®iÒu kiÖn gióp ®ì t«i trong qu¸ tr×nh thùc hiÖn vµ hoµn
thµnh luËn v¨n.
- C¸c anh, chÞ vµ c¸c b¹n ®ång nghiÖp Phßng nu«i cÊy tÕ bµo vµ s¶n xuÊt
vacxin th«, Phßng M«i trêng sÊy röa vµ c¸c Phßng ban thuéc Trung T©m Khoa
häc S¶n xuÊt Vacxin Sabin ®· nhiÖt t×nh gióp ®ì t«i hoµn thµnh luËn v¨n.
- Cn D¬ng ThÞ Nga, Cn §Æng Mai Dung vµ c¸c c¸n bé phßng KiÓm ®Þnh
vacxin ®· gióp ®ì t«i trong qu¸ tr×nh thùc hiÖn vµ hoµn thµnh luËn v¨n.

- GS.TS Lª Huy ChÝnh cïng tËp thÓ c¸c thÇy c« Bé m«n Vi sinh vËt Trêng §¹i häc
Y Hµ néi, ®· tËn t×nh truyÒn ®¹t kiÕn thøc vµ gióp ®ì t«i hoµn thµnh luËn
v¨n.

- GS.TS Tr¬ng Uyªn Ninh cïng tËp thÓ c¸c thÇy c« ViÖn VÖ sinh DÞch tÔ Trung
¬ng ®· d¹y dç gióp ®ì t«i trong qu¸ tr×nh häc tËp vµ hoµn thµnh luËn v¨n.

Cuèi cïng t«i xin dµnh lêi c¶m ¬n ®Õn:

- Ngêi th©n trong gia ®×nh, nh÷ng b¹n bÌ ®ång nghiÖp ®· gióp ®ì t«i rÊt
nhiÒu trong qu¸ tr×nh häc tËp vµ nghiªn cøu.

Ngµy 01 th¸ng 01 n¨m 2006

B¸c sü Lª Quèc Hïng
 môc lôc
§Æt vÊn ®Ò.....................................................................................................1
Ch¬ng 1. Tæng quan.......................................................................................3
1.1. Virus b¹i liÖt..........................................................................................3
1.1.1. Ph©n lo¹i virus................................................................................3
1.1.2. H×nh th¸i häc...................................................................................3
1.1.3. Thµnh phÇn hãa häc cña virus........................................................4
1.1.4. TÝnh chÊt hãa häc..........................................................................5
1.1.5. CÊu t¹o kh¸ng nguyªn......................................................................6
1.1.6. TÝnh chÊt miÔn dÞch....................................................................7
1.1.7. Sù nh©n lªn cña VRBL trong tÕ bµo c¶m thô................................8
1.1.8. Kh¶ n¨ng g©y bÖnh thùc nghiÖm................................................10
1.1.9. C¬ chÕ g©y bÖnh........................................................................12
1.1.10. VRBL trong tù nhiªn...................................................................12
1.1.11. Sù biÕn ®æi VLDT cña VRBL..................................................12
1.2. DÞch tÔ häc bÖnh b¹i liÖt...................................................................12
1.2.1.T×nh h×nh b¹i liÖt trªn ThÕ giíi....................................................12
1.2.2. T×nh h×nh bÖnh b¹i liÖt ë ViÖt Nam..........................................12
1.3. VÊn ®Ò sö dông vacxin sau khi thanh to¸n b¹i liÖt............................12
1.4. Vacxin bÊt ho¹t phßng b¹i liÖt.............................................................12
1.4.1. Vacxin bÊt ho¹t (IPV)...................................................................12
1.4.2. LÞch sö vacxin b¹i liÖt bÊt ho¹t....................................................12
1.4.3. S¶n xuÊt vacxin b¹i liÖt bÊt ho¹t..................................................12
1.5. VÊn ®Ò nghiªn cøu s¶n xuÊt vacxin b¹i liÖt bÊt ho¹t cña NhËt B¶n. 12
1.6. ViÖc sö dông IPV ë Mü.......................................................................12
1.7. T×nh h×nh nghiªn cøu s¶n xuÊt vacxin b¹i liÖt bÊt ho¹t ë ViÖt Nam 12
Ch¬ng 2. VËt liÖu vµ ph¬ng ph¸p nghiªn cøu............................................12
2.1. VËt liÖu...............................................................................................12
2.1.1. TÕ bµo..........................................................................................12
2.1.2. Chñng virus...................................................................................12
2.1.3. Vacxin ®¬n type...........................................................................12
2.1.4. Níc næi tÕ bµo..............................................................................12
2.1.5. M«i trêng, hãa chÊt.......................................................................12
 2.1.6. Kh¸ng sinh.....................................................................................12
2.1.7. M¸y mãc vµ dông cô.....................................................................12
2.2. Ph¬ng ph¸p nghiªn cøu.........................................................................12
2.2.1. Ph¬ng ph¸p cÊy truyÒn tÕ bµo Vero...........................................12
2.2.2. Ph¬ng ph¸p g©y nhiÔm virus.......................................................12
2.2.3. Siªu läc...........................................................................................12
2.2.4. Siªu ly t©m....................................................................................12
2.2.5. Ph¬ng ph¸p thö v« trïng................................................................12
2.2.6. Ph¬ng ph¸p chuÈn ®é hiÖu gi¸.....................................................12
2.2.7. X¸c ®Þnh hµm lîng protein/liÒu cña vacxin................................12
2.2.8. Ph¬ng ph¸p kÝnh hiÓn vi ®iÖn tö...............................................12
2.2.9. Ph¬ng ph¸p ®iÖn di trªn gel polyacrylamide................................12
Ch¬ng 3. KÕt qu¶ nghiªn cøu......................................................................12
3.1. Sù ph¸t triÓn cña tÕ bµo Vero trªn c¸c lo¹i m«i trêng.........................12
3.1.1. Sù ph¸t triÓn cña tÕ bµo trªn hai lo¹i m«i trêng DMEM vµ M199...12
3.1.2. Thêi gian hñy ho¹i vµ hiÖu gi¸ cña virus b¹i liÖt trªn tÕ bµo Vero.. .12
3.1.3. HiÖu gi¸ hçn dich virus khi g©y nhiÔm trªn tÕ bµo Vero vµ tÕ
bµo thËn khØ................................................................................12
3.2. HiÖu gi¸ hçn dÞch virus g©y nhiÔm trªn tÕ bµo vero vµ tÕ bµo
TKTP tríc vµ sau siªu läc....................................................................12
3.3. HiÖu gi¸ cña hçn dÞch virus g©y nhiÔm trªn tÕ bµo Vero vµ tÕ bµo
TKTP tríc vµ sau siªu ly t©m..............................................................12
3.4. TÝnh v« trïng cña vacxin ®¬n type.....................................................12
Ch¬ng 4. Bµn luËn........................................................................................12
4.1. Lùa chän dßng tÕ bµo vµ m«i trêng thÝch hîp ®Ó s¶n xuÊt vacxin b¹i
liÖt bÊt ho¹t.........................................................................................12
4.1.1. M«i trêng ph¸t triÓn thÝch hîp cho tÕ bµo Vero.........................12
4.1.2. Kh¼ng ®Þnh dßng tÕ bµo thêng trùc (Vero) lµ thÝch hîp ®Ó s¶n
xuÊt vacxin IPV............................................................................12
4.2. Sù c« ®Æc hçn dÞch virus sau siªu läc................................................12
4.3. Sù c« ®Æc vµ lo¹i bá mét sè protein trong hçn dÞch virus sau siªu ly t©m..12
4.4. VÊn ®Ò v« trïng trong s¶n xuÊt vacxin..............................................12
KÕt luËn........................................................................................................12
KiÕn nghÞ.....................................................................................................12
Tµi liÖu tham kh¶o
Phô lôc