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ENZIMOLOGÍA
Alteraciones en la muestra.
Los anticoagulantes también interfieren, por ejemplo:
Muestra con EDTA, oxalato y citrato presentarán disminución las siguiente enzimas:
ALP, CK, SD, lipasa y amilasa, en cambio en muestras con fluoruro de sodio la
amilasa estará aumentada.
Hemólisis : las células hemáticas tiene concentraciones más altas que el suero de
algunas enzimas. Se encontrarán aumentadas por hemólisis las siguientes enzimas:
AST, ALT, LD, CK, lipasa. La amilasa estará disminuida, la ALP puede estar
aumentada o disminuida.
Lipemia: interfiere con varias determinaciones. Por ejemplo amilasa, PPT, glucosa,
calcio fósforo, bilirrubinas, sodio potasio, cloro.
Las enzimas se miden para diagnosticar, monitorear y pronosticar el curso de una
enfermedad.
Evaluación de enzimas
Se determinan indirectamente por el uso de ensayos o pruebas cinéticas. Estas pruebas
se afectan por temperatura pH, concentración de substrato, cofactores, inhibidores y la
estabilidad de los reactivos, por lo tanto, varía la actividad enzimática de cada
laboratorio y los rangos de referencia deben revalidarse cada cierto tiempo.
HIGADO
a. Albúmina
b. Alfa y beta globulinas
c. Factores de coagulación (II, VII, IX, X)
2. Síntesis y secreción de bilis medidos por:
a. Bilirrubina
b. Ácidos biliares
3. Excreción de aniones orgánicos medidos por pruebas de excreción de:
a. Bromosulfataleina (BSP)
b. Verde indocianina (ICG)
4. Metabolismo de amonio y amino ácidos medidos por:
a. Amonio
b. Urea (NUS)
5. Homeostasis de la glucosa.
III. Colestasis. Colestasis significa que los componentes de la bilis estarán presentes
en la sangre en concentraciones anormales. Se puede desarrollar por obstrucción física
intra o extra hepática o por una secreción anormal de los hepatocitos.
A. Obstrucciones del flujo biliar se produce con lesiones que afectan los canalículos
biliares, ductos biliares, vesícula biliar y ducto biliar común.
1. Obstrucción del flujo biliar produce paso de bilis al tejido intersticial y es drenado
por la linfa a la sangre, donde se detectan midiendo bilirrubina o ácidos biliares.
2. Generalmente hay bilirrubinuria.
A. Alteraciones metabólicas incluyen alteraciones en captación, conjugación y
secreción.
Pueden ser hereditarias (por ej. el síndrome de Dubin- Johnson en ovejas Corredale)
o adquiridos por (ej. Químicos hepatotóxicos, sepsis, anorexia).
B. La colestasis se detecta por varios tipos de pruebas.
1. Productos de la bilis se pueden medir en sangre y orina. ( Ácidos biliares y
bilirrubina).
2. Tinciones exógenas (BSP) administradas vía intravenosa y removidas de la
sangre por los hepatocitos y excretadas en la bilis. La concentración sanguínea
permanece anormalmente alta en colestasis.
3. Éstasis biliar puede inducir algunas enzimas diagnósticas, por ej. ALP y GGT.
4. La lecitina retenida durante el éxtasis biliar puede estimular la síntesis de
colesterol en el gato.
C. Colestasis intra o extra hepática está invariablemente asociada a cierto grado de
daño hepatocelular que se atribuye a la retención de algunos ácidos biliares.
III. Alteración en el flujo sanguíneo hepático.
A. Arteria y vena hepática.
1. Aproximadamente el 20% del producto cardíaco pasa por el hígado.
2. El flujo de sangre reducido, ya sea por disminución de la entrega arterial o
congestión crónica pasiva, causa hipoxia hepática y su principal efecto es
centrolobulillar.
3. Daño hepatocelular inducido por hipoxia, se caracteriza por alteración de la
permeabilidad y raramente es tan severa, como para causar una disminución en la
masa funcional que sea detectable. La colestasis es mínima.
4. A veces la remoción de tinciones exógenas desde la sangre por los hepatocitos
puede estar disminuida, por una disminución de la captación, por el flujo hepático
sanguíneo reducido.
B. Vena porta
1. Un shunt venoso porto-sistémico va a impedir la entrega de algunas sustancias al
hígado.
2. Shunts intra hepáticos se pueden adquirir posteriormente a una hipertensión portal
causada por fibrosis hepática. Los puentes (shunts) extrahepáticos generalmente son
congénitos.
3. Algunas sustancias, amonio, ácidos biliares que normalmente se absorben de
intestino y se remueven eficientemente por los hepatocitos, después de la entrega vía
vena porta son retenidas en circulación, por el flujo alterado de la vena porta.
4. La disminución de la disponibilidad de factores hepatotrópicos, normalmente en
sangre de vena porta, lleva a una atrofia hepática y reducción de la masa hepática
funcional.
5. Tinciones exógenas pueden ser removidas en forma anormal en animales con shunt
porto sistémico.
IV. Actividad alterada de las células de Küpffer
A. Las células de Küpffer, pueden estar involucradas en la patogénesis de muchas
enfermedades hepáticas, pero la disminución de estas células en desórdenes
fibrosos es quizás la única alteración detectable por pruebas de laboratorio.
B. La disminución de las células de Kupffer permite la entrega de antígenos entéricos
que normalmente fagocitan estas células, a circulación y su transporte a tejidos
linfáticos. Habrá hiperglobulinemia,
I. Enzimas séricas
1. Existen dos isoenzimas una forma citosólica y otra mitocondrial que catalizan la
transaminación de L- aspartato y 2-oxoglutarato a oxaloacetato y glutamato.
2. La enzima está presente en casi todas las células, pero se usa como diagnóstico
para hígado y músculo principalmente por su alta concentración en estos tejidos.
3. La AST tiene alta sensibilidad para enfermedades hepáticas, pero carece de
especificidad.
4. La AST está presente en los eritrocitos, por lo tanto la hemólisis aumenta su
actividad.
5. La vida media plasmática es mas corta que la de ALT, alrededor de 12 horas en
caninos, más corta en felinos, 18 horas en cerdos y probablemente más larga en
equinos y bovinos.
6. La actividad de la AST aumenta en cambios de permeabilidad hepatocelular
(subletales y necrosis). El daño debe ser mayor para que se libere la forma
mitocondrial.
7. La AST también aumenta con cambios en la permeabilidad muscular y se usa
para detectar daño muscular.
8. Las diferencias por especie incluyen:
a. En perros y gatos se usa con mayor frecuencia la ALT por su especificidad
hepática.
b. La actividad de la ALT es mayor que la actividad de la AST, en estas especies
con daño hepático.
c. En especies mayores, se usa a falta de una más específica, la AST para
enfermedades hepáticas a pesar de su falta de especificidad. Se elimina el daño
muscular como aumento de AST por signos clínicos o por la determinación de la
actividad de la creatinin quinasa (CK)
c. Isoenzima hepática.
(1.) Su actividad se encuentra en la membrana del hepatocito y membranas
canaliculares.
(2.) La vida media es aproximadamente de 6 horas en el gato y de 3 días en el perro.
(3.) La ALP en los animales sanos en primariamente de este tipo.
(4.) Su aumento se debe generalmente a una induccíón por colestasis ( ácidos
biliares). Se requieren algunos días para que la inducción cause un aumento de
la actividad sérica, pero puede estar marcadamente aumentado.
(5.) Los anticonvulcionantes también pueden inducir un aumento moderado de su
actividad (2-6 veces).
(6.) La actividad de la isoenzima hepática es inhibida por L-levamisol (90%) una
característica que se usa en el laboratorio para diferenciar el aumento de ALP
en perros.
d. Isoenzima esteroidal
(1.) Los corticoides inducen una isoenzima específica en el perro, solamente.
(2.) La vida media sérica es de 3 días, pero la inducción de su síntesis puede
mantener la actividad sérica aumentada varias semanas.
(3.) La isoenzima esteroidal es relativamente resistente al L- levamisol y calor.
e. Enfermedad ósea
(1.) La isoenzima ósea es responsable por el aumento de actividad de ALP, en
enfermedades de actividad osteoblástica extensa.
(a.) Periostitis
(b.) Raquitismo
(c.) Hiperparatiroidismo primario y secundario.
(d.) Algunos neoplasmas óseos
(e.) Fracturas. Los aumentos son transitorios.
(2.) La magnitud del aumento es bajo (2-4 veces), comparado con el aumento por
colestasis o inducción esteroidal.
f. Neoplasias. A veces las neoplasias malignas tendrán valores altos de ALP que no
pueden explicarse por las causas usuales.
g. Desconocidas. Es posible encontrarse con aumentos de ALP inexplicables. No es
tan inesperado, ya que esta enzima posee una alta sensibilidad, una baja
especificidad y una amplia distribución.
E. Otras enzimas que también aumentan en suero durante un daño hepático son:
Arginasa, deshidrogenasa glutamato, ornitina carbamoiltransferasa, deshidrogenasa
isocítrica y deshidrogenasa láctica. No se usan frecuentemente.
A. Bilirrubina
1. Metabolismo
a. La bilirrubina se origina de los eritrocitos viejos (80%) y de las porfirinas
nonhem (20%).
La Bilirrubina directa e indirecta (BC Y BNC) sólo tienen valor diagnóstico si la
bilirrubina total está aumentada.
Esta clasificación es totalmente variable, y depende del tiempo transcurrido desde que
se produjo la lesión hasta que se realizaron las pruebas para la evaluación de la ictericia.
B. Acidos biliares
1. Metabolismo
a. Los ácidos biliares principales son ácido cólico y el ácido quenodeoxicólico.
Se sintetizan en el hígado del colesterol, por feedback negativo de la
concentración de ácidos biliares séricos o por la cantidad que llega al hígado
para captación después de ser absorbidos desde el intestino.
b. Se requiere de su conjugación para ser secretados.
c. Se concentran en la vesícula biliar.
d. Después de comer y la liberación de colecistokinina los ácidos biliares
entran al intestino donde cumplen su función de digestión y absorción de
grasas.
e. La mayoría de los ácidos biliares son absorbidos desde el intestino a la
circulación portal, algunos se pierden con las fecas y una pequeña cantidad se
transforma por las bacterias del intestino en ácidos biliares secundarias que
son reabsorbidos o excretados en la fecas.
f. Los ácidos biliares absorbidos a la circulación portal están unidos a albúmina
y son extraídos eficientemente por el hígado (70 a 95% en su primera pasada),
donde son reexcretados a la bilis (circulación enterohepática.)
2. Procedimiento
a. Se miden en ayuno y dos horas post-prandial.
b. Durante el ayuno los ácidos biliares se extraen de la sangre y se almacenan en
la vesícula biliar. Los niveles séricos estarán bajos si la captación hepática es
normal
c. La alimentación estimulará la liberación de colesistokinina y la contracción de
la vesícula biliar, libera grandes cantidades de ácidos biliares al intestino.
d. Esto expone a la vena porta (circulación entero hepática) y por lo tanto al
hígado a un gran bolo de ácidos biliares, que pone a prueba la capacidad de
captación del hígado.
e. Este procedimiento es muy útil para identificar shunts venosos porto
sistémicos, que, pueden tener los valores de éstos en ayuno, en un rango
normal, porque la alta concentración de ácidos biliares en al vena porta pasan
directamente a la circulación general por el shunt, causando un aumento en los
niveles.
B. Concentración de globulinas.
1. En enfermedad crónica hepática, la reducción de masa de células de
Kupffer, permite una más amplia diseminación de antígenos extraños al
sistema de macrófagos. Al contrario de las células de Kupffer, los
macrófagos esplénicos y linfoides procesan los antígenos con producción de
anticuerpos y hay hiperinmunoglobulinemia.
Los signos clínicos están relacionados con la enfermedad general por ejemplo Diabetes
mellitus o Cushing o como en el gato una repentina anorexia y aveces ictericia y en los
animales mayores signos de encefalopatías.
El hígado está aumentado cambios grasos difusos.
Hallazgos de laboratorio.
1. Aumentan las enzimas del citosol.
2. Si la inflamación hepatocelular es severa, los canalículos se comprimen y las
pruebas de colestasis estarán aumentados.
3. El amonio puede estar aumentado en equinos y felinos.
A. Creatinínquinasa (CK)
1. La creatinínquinasa cataliza la fosforilación de creatina+ATP a creatinafosfato +
ADP.
2. Es una enzima citosólica con mayor actividad en músculo esquelético, músculo
cardíaco y cerebro
3. Casi toda la actividad es de músculo. La enzima es un dímero con dos subunidades,
B(cerebro) y M (músculo). Existen 3 isoenzimas, CK1 (BB), CK2 (MB) y CK3
(MM).
4. Niveles enzimáticos muy altos se encuentran es animales con enfermedad
degenerativa muscular.
5. Los cachorros recién nacidos pueden tener niveles muy altos de CK. (5 veces el del
adulto, o sobre 7 meses).
6. La vida media es corta 4 horas en bovinos, < de 2 en equinos, y vuelve a lo normal
en 2 o 3 días de cesada la mionecrosis. El que se mantenga aumentada indica
enfermedad activa.
7. Se usa para evaluar estado físico de F.S.C. a menor aumento de esta enzima, es mejor
su estado físico.
8.
B Deshidrogenasa láctica (LDH)
1. La LDH cataliza la reacción reversible de L. Lactato a piruvato en todos los tejidos.
Es un tetrapéptido con 5 isoenzimas. Está presente en todas las células y aumenta
en cualquier proceso inflamatorio y su defecto es la falta de especificidad. Su
concentración mas alta está en músculo hígado y eritrocitos.
Sistema digestivo
Páncreas exocrino
La amilasa y lipasa son dos enzimas que se miden más frecuentemente, como
marcadores de pancreatitis aguda. Enzimas y cimógenos pueden liberarse al plasma
durante el daño celular.
Amilasa
1. Características
a. Solamente alfa-amilasa esta presente en los animales, se secreta en forma activa,
hidroliza glucósidos, formando disacáridos y monosacáridos.
Existen 4 isoenzimas en perros sanos. Isoenzima 4 en la más activa y es
principalmente de origen pancreático, la mucosa duodenal contribuye con una
pequeña cantidad.
b. La amilasa salival no está presente en los animales excepto en los cerdos.
c. La amilasa sérica normal en la salud viene de fuentes extrapancreáticas
d. Los métodos sobre la base de almidón (sacarogénicos) no deben usarse en
perros por maltosa presente normalmente en perros lleva a valores falsamente
altos.
e. Los métodos modernos usan substratos más definidos, pequeños oligosacáridos.
2. Interpretación de hiperamilasemia.
a. Aumento de amilasa ocurre en la mayoría de los casos de pancreatitis.
(1.) El aumento, se debe a liberación de enzima de los acinos pancreáticos
degenerados, o ductos obstruidos a las vénulas o vía linfática a sangre.
(2.)A mayor aumento, (3- 4 veces el valor normal) es más probable que la causa sea
pancreática.
(3.)Aunque se considera una prueba altamente sensible, puede a veces estar normal
en pancreatitis aguda. Hay menos falsos negativos con la lipasa.
(4.)Los valores de amilasa y lipasa no se correlacionan bien necrosis pancreática
hasta que los valores de la lipasa exceden los 800 U/L.
b. Puede haber alta actividad de amilasa en enfermedades no pancreáticas. Tiene
baja especificidad.
(1.) Ejemplos de esto son falla renal, enfermedad gastrointestinal y hepatobiliar y
prostatitis.
(2.) Si el aumento es leve a moderado la causa probablemente sea de origen no
pancreático.
(3.) Se ha informado de aumentos y disminuciones de amilasa posterior a
administración de corticoides.
(4.) Se debe usar junto con lipasa por su poca especificidad.
Lipasa
1. Características
a. Se secreta en forma activa.
b. La actividad de la lipasa es óptima a pH alcalino y es incrementada por bilis.
c. El páncreas y la mucosa gástrica son únicas fuentes conocidas de lipasa.
d. La hemólisis inhibe la actividad de la enzima.
e. El riñón degrada la lipasa.
2. Interpretación
a. El aumento de 3 o más veces en la actividad sérica de lipasa indica pancreatitis
aguda, pero existen excepciones.
b. Ya que se degrada en el riñón, la actividad puede aumentar 2 a 3 veces en falla
renal.
Insuficiencia pancreática.
Detección de mal asimilación (mal digestión y/o mal absorción).
La mal absorción puede ser secundaria a mal digestión o puede ser el resultado el
resultado de lesiones intestinales caracterizadas por disminución de la superficie de
absorción, muerte de células epiteliales, interferencia con venenos o drenaje
linfático o distensión de la lamina propia. Se caracterizan por diarrea y perdida de
peso.
La mayoría de las pruebas que describiremos se han hecho en perros y un poco en
equinos.
I. Análisis de heces. Materiales no digeridos o no absorbidos.
1. Sudán III (detección de lípidos)
2. Tinción de yodo (detección de almidón)
3. Frotis fresco o yodo (fibras musculares).
La detección de lípidos, almidón y fibras musculares indican insuficiencia
pancreática.
II. Actividad proteolítica fecal.
1. Las principales proteasas fecales son de origen pancreático e incluyen, tripsina,
quimiotripsina y carboxipepidasa A y B.
2. Se secretan como proenzimas y se activan en duodeno.
3. El tripsinógeno se activa a tripsina por la enteroquinasa producida por la mucosa
duodenal y la tripsina activa las otras proteasas.
a. Prueba de digestión de la gelatina. (En tubo y film rayos X)
Es cualitativo, hay falsos positivos(bacterias) y negativos (enzima inhibida o
inactivada en intestino). Fluctúan a diario.
b. Trypsinógeno inmunoreactivo. (TLI)
Es una prueba especie específica que detecta una grupo de proteínas que se
reconocen por anticuerpos contra la tripsina. En animales normales se detecta el
tripsinógeno
El tripsinógeno se sintetiza exclusivamente por el páncreas por lo que es una prueba
muy especifica. Una pequeña cantidad difunde al plasma. La reducción ocurre en
insuficiencia pancreática exocrina (EPI), reducción de la masa por atrofia.
Páncreas endocrino
Corteza adrenal
Dos síndromes afectan a esta glándula: hiperadrenocorticismo e insuficiencia
adrenal. Hiperadrenocorticismo, separado en tres tipos: dependiente de la pituitaria
(Cushing), dependiente de las adrenales e iatrogénico.
I. Conceptos básicos
A. Glucocorticoides.
1. Los glucocorticoides(cortisol, corticosterona y cortisona) son secretados por
la zona fasciculata y reticularis de la corteza adrenal.
2. La secreción es estimulada por la hormona ACTH (hormona
adrenocorticotropica) de la pitiutaria anterior por la estimulación de la
hormona liberadora de corticotropina (CRH) del hipotálamo. El cortisol
inhibe la liberación de la CRH suprimiendo la secreción de ACTH.
Glucocorticoides exógenos también inhiben la secreción de ACTH.
3. Los efectos de los glucocorticoides incluyen hiperglicemia, supresión de la
respuesta de reparación de las heridas, de inflamación e inmunológicas.
B. Mineralocorticoides
1. Aldosterona se secreta de zona glomerulosa. El sistema renina angiotensina
es el principal mecanismo de control
2. En el riñón se promueve la reabsorción de Na+ tubular y excreción K +
tubular.
Paratiroides
Conceptos básicos
Paratohormona. (PTH)
1. La PTH es producida por la paratiroides en respuesta a hipocalcemia y en
menor grado por hipomagnesemia. Una hiperfosfatemia puede causar una
disminución de del calcio y estimular indirectamente la liberación de PTH.
2. El efecto neto de la PTH es aumento de calcio sérico, disminución del fósforo
sérico y aumenta la excreción del fósforo. La PTH promueve lo siguiente:
a. Reabsorción del calcio óseo
b. Excreción de fósforo por riñón.
c. Formación acelerada de la forma activa de Vit. D (1,25-dihidroxicalciferol)
por el riñón.
d. Absorción de calcio del intestino y su reabsorción por los túbulos renales.
3. Su medición se hace por radioinmunoensayo.
Calcitonina o Tirocalcitonina
1. La calcitonina se produce por las células parafoliculares tiroideas (las células
C), en respuesta a hipercalcemia.
2. Inhibe la reabsorción ósea estimulada por la PTH.
3. Aumenta la excreción de fósforo por riñón.
4. En conjunto con la PTH, la calcitonina regula la concentración de calcio en
límites precisos.
Forma activa de la Vit D.
1. La primera hidroxilación de la vit. D ocurre en el hígado, la siguiente en riñón
regulada por la PTH.
2. Promueve la absorción de calcio y fósforo d e la mucosa intestinal y facilita la
acción de la PTH en el hueso.
Calcio
1. El calcio sérico total está aproximadamente 50% ionizado, 40% unido a
proteínas especialmente albúmina, el 10% forma complejos con aniones como
citratos o fosfatos.
Tiroides
Hipotiroidismo
Hipertiroidismo.
Bibliografía
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Meyer, Coles and Rich 1992. Veterinary Laboratory Medicine.. W.B. Saunders
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