TECNICAS DE HIBRIDACION EN PAPA Introduccin Las especies silvestres y cultivadas de papa que se extienden desde el sur de Estados Unidos

de Amrica hasta el extremo sur de Chile representan un recurso gentico nico en el mundo para mejorar las papas cultivadas. Estas especies crecen desde los desiertos hasta las selvas hmedas, desde los campos cultivados, en forma de malezas, hasta los lugares montaosos, ridos y escarpados. Su variabilidad es tan grande que sus genes pueden aprovecharse en disciplinas tan diferentes como bioqumica, citogentica, fisiologa, entomologa, nematologia, patologa, procesamiento de alimentos, gentica y fitomejoramiento. En las especies silvestres se encuentran resistencias a las plagas, enfermedades, heladas, sequias, caracteres para mejorar el procesamiento y la calidad del tubrculo. La papa supera a los dems cultivos en cuanto a su variabilidad potencial porque posee cinco niveles de ploidia y casi todas sus especies se pueden usar en cruzamientos sexuales, a pesar de las diferencias de ploidia debido a la capacidad de polinizacin de los diploides y triploides. Se puede obtener hbridos vigorosos con alta fertilidad y adecuado apareamiento cromosmico, debido a la escasa diferenciacin estructural de sus genomas. Objetivos   Conocer los procedimientos de cruza Adiestramiento de la tcnica de emasculacin y polinizacin

Revisin literaria FLORACION CITOLOGIA Y FERTILIDAD La mayora de los clones de papa florecen, en alguna medida, bajo condiciones de da largo. Tpicamente, Solanum tuberosum subsp. andigena florece bajo fotoperodos largos y cortos. Sin embargo, los clones de la subsp. tuberosum usualmente no florecen bajo condiciones de das cortos y fros. Adems, algunos clones, especialmente los muy precoces, raramente florecen bajo cualquier condicin y, si lo hacen, es por un perodo muy corto. Por estas razones, es deseable inducir artificialmente la floracin por los mtodos del "injerto" y del "ladrillo".

El propsito en ambos mtodos es inducir a que la planta permanezca en la fase de floracin el mayor tiempo posible y que no cambie a la fase de tuberizacin y senescencia. Otras prcticas tradicionales ayudan a inducir y mantener la floracin, tales como luz artificial para conseguir das ms largos, aplicaciones de cido giberlico (40 ppm a intervalos de cuatro das) y fertilizacin con nitrgeno y fsforo. La temperatura y la humedad tambin son importantes: la temperatura ptima es 20C en el da y 16C en la noche, con una humedad mayor de 80 por ciento. La emasculacin se efecta eliminando las anteras con pinzas, agujas, lpices, etc. Esta operacin no es difcil, pero debe hacerse cuidadosamente debido a que el estilo es muy delicado y no se debe tocar. El polen es extrado de las flores abiertas cuando las anteras estn en dehiscencia; esto puede observarse por la aparicin en la parte apical de la antera de un rea oscurecida, la cual, ante un examen ms minucioso, se nota que es un orificio. El polen sale de la antera por vibracin. Un vibrador puede construirse fcilmente con una linterna de mano en el extremo de la cual se coloca un timbre al que se suelda en la parte delantera una varilla delgada. Cuando vibra el timbre, la varilla se pone en contacto con las anteras para extraer el polen.

Fig. Diseccin floral de Solanum ambosinum (Ochoa 14557), cerca de la localidad tipo.

Por el mtodo del injerto, las yemas de la planta de papa se injertan en los tallos de tomate. Por el mtodo del ladrillo, los tubrculos se colocan sobre ladrillos, se entierran superficialmente en el suelo y se deja desarrollar la planta hasta el inicio de la tuberizacin. En esta etapa se lava con un chorro de agua el suelo que cubre la base de la planta se lava con un chorro de agua para exponer al aire los estolones emergidos o los pequeos tubrculos, cuidando de no romper el sistema radicular que ha penetrado en el ladrillo. Luego se eliminan los estolones (tuberculillos que emergen de la planta). Conservacin El polen puede ser almacenado en frascos o en cpsulas de gelatina. Se puede mantener en un ambiente seco y a baja temperatura, aproximadamente 5C. Bajo estas condiciones se puede asegurar una buena fertilidad (viabilidad) del polen por 2 a 3 semanas. Si se coloca a -10C 20C en el congelador, ser viable por un perodo entre 4 y 8 meses. En algunos casos, el polen congelado permanece frtil por un ao. Si el polen almacenado es usado con frecuencia, es recomendable separarlo en varias cpsulas; congelarlo y descongelarlo continuamente originara prdidas de fertilidad.

Para que un cruzamiento sea exitoso, el polen frtil debe ser colocado sobre el estigma receptivo; all germina, y el tubo polnico se desarrolla a lo largo del estigma hasta alcanzar el vulo. El tubo entra en el saco embrionario y los ncleos germinativos se fusionan con la ovoclula y los ncleos polares. El proceso es complejo. El primer paso es colocar el polen sobre el estigma y hay pocas recomendaciones sobre la mejor forma de hacerlo. Usualmente, la polinizacin se hace en la maana, pero si los das son muy calurosos, la polinizacin por la tarde puede ser mejor. El xito de un cruzamiento se observa cuando los pedicelos muestran un pronunciado crecimiento y se doblan hacia debajo de 2 a 4 das despus de la polinizacin. El desarrollo de la baya es el signo ms seguro; sin embargo, pueden desarrollarse frutos partenocarpicos, los cuales pueden dar origen a una baya bien formada pero sin semilla. Despus de 25 a 40 das, segn la especie las bayas estara alcanzada su madurez.

Fig. Frutos de Solanum ambosinum (Ochoa 14605).

Se puede efectuar los siguientes tratamientos para practicar un cruce entre lneas y mejorar el material gentico efectuando:  Mtodo I: Poda de estolones y eliminacin de tubrculos. Eliminando la mayora de los tubrculos escarbando el contorno de la planta y luego tapando nuevamente las races. Mtodo II: Eliminacin de tallos. Dejando desarrollar slo entre 2 a 4 tallos principales de una planta. De stos se eliminaron los tallos laterales inferiores. Los tallos eliminados constituyen aproximadamente 30 - 40% del peso fresco total. Mtodo III: Soportes con ramas de arbustos. Plantas con libre desarrollo pero acondicionndoles un soporte a los tallos decumbentes. Mtodo IV: Cultivo normal sin intervencin. FLORACION Y FRUCTIFICACION La produccin de flores y formacin de frutos en variedades comerciales es innecesaria y constituye un desgaste de alimentos de la planta, pero son esenciales desde el punto de vista gentico. En la generalidad de las variedades europeas, - tipo tuberosum - norteamericanas y chilenas hay muy poca o ninguna produccin de frutos (vinas florecen, y otras no) lo cual so atribuye a esterilidad del polen; pero en cambio en las variedades nativas colombianas, ecuatorianas, peruanas, y bolivianas - tipo andigemun - se observa una abundante floracin y fructificacin y son muy buenas variedades polinizadoras, La floracin y fructificacin tienen un efecto negativo sobre el rendimiento de tubrculos.

 

Esterilidad e incompatibilidad Generalmente la esterilidad que ocurre en las variedades se deben al polen y no al ovulo. Tambin se presenta esterilidad como resultado de cruzamientos entre especies de diferente nmero de cromosomas como se observa en hbridos triploides y pentaploides. Adems existe la incompatibilidad especialmente notable entre las diploides, siendo algunas autoincompatibles y otras pueden formar fruto solamente por polinizacin entre clones. Tambin el efecto ambiental es muy importante en la fertilidad de la papa, lo cual ha sido enunciado por varios investigadores y comprobado por el autor. Efecto de la autofecundacin La autofecundacin ocasiona en la papa une prdida do vigor y una reduccin en el rendimiento. La endocra por dos generaciones causaba una disminucin apreciable en el rendimiento, la cual era menor en las generaciones posteriores. Sin embargo, se han producido muchas variedades comerciales mediante la autofecundacin Para fines prcticos, la endocra que busca obtener mayor homocigosis de caracteres deseables no es aconsejable por ms de 3 generaciones, por lo cual su principal valor ser para procurar nuevas combinaciones de caracteres en selecciones de F1 y para duplicar los genes que controlan los caracteres individuales. Efectos del cruzamiento La mayora de variedades de papa europea y norteamericanas son muy heterocigotas, debido a que son variedades agronmicas o mejoradas y por ello ya han llegado a un lmite en el aprovechamiento de la heterosis. En cambio con las variedades nativas, (andigenum) que parecen hasta cierto punto ser lneas puras, se obtiene mucha heterosis en los hbridos entre ellas, o con las variedades del tipo tuberosum. Por cruzamiento de lneas endocriadas, no se logra como el maz recobrar la heterosis perdida. Pueden obtenerse soluciones de alto rendimiento mediante intercruzamiento de variedades comerciales y lneas endocriadas. Sin embrago, el efecto de los cruzamientos varan mucho y depende ms de las constituciones hereditarias de los progenitores. Algunas variedades combinan ms efectivamente que otras, sus caractersticas se complementan con mayores ventajas y esta habilidad combinatoria puede lograrse siguiendo un sistema de cruzamientos por di alelos. Una vez establecida la potencialidad de un grupo de variedades, puede limitarse al cruzamiento con las combinaciones que ms prometan. La inclusin de las especies silvestres en los programas de mejoramiento implica necesariamente la hibridacin. En tales casos, el objeto principal en combinar algunas ventajas de las especies silvestres con las cualidades comerciales de las variedades comunes. La hibridacin en estos casos debe incluir un mtodo de retrocruzamientos repetidas con el fin de

reunir a todos los caracteres que se desean y eliminar los malos que poseen las especies silvestres. Hibridacin interespecfica La familia de papas comprende muchas especies diferentes. Algunas son muy afines y pueden cruzarse fcilmente, pero otras no, aunque tengan igual nmero de cromosomas, debido a que estn muy apartadas sistemticamente, factor que debe observarse al planear las hibridaciones.

Materiales Plantas de papa en floracin, pinzas, lupa placas Petri, bolsas de papel, bolsitas de malla tul , capsulas de gelatina, frascos de vidrios, vibrador, lpiz y etiquetas. Procedimientos Para cruzamientos ejecutados manualmente: en nuestro medio, solamente en clones que tienen su carga gentica S. tuberosum ssp tuberosum (provenientes del sur de chile = das largos) hay que inducir a floracin ampliando las horas de iluminacin, para ello se utilizan focos de luz blanca. Tambin se puede utilizar injertos sobre tomate con los mismos propsitos. I. Preparacin del progenitor femenino 1. En una planta vigorosa elegir la inflorescencia con botones an no abiertos 2. Elegida la inflorescencia seguir cualquiera de las dos alternativas: a. Preparar las flores para la cruza en la misma planta

b. Cortar la inflorescencia con parte de tallo (30 a 35) cm y poner en botella con solucin acuosa para su posterior preparacin y cruza, esta alternativa es ventajosa porque toda la energa almacenada se aprovecha solo para producir bayas que contienen las semillas. Tambin en plantas conservadas en macetas se podan estolones para evitar que se formen los tubrculos, lo cual favorece la floracin y la fructificacin. 3. Dependiendo de la abundancia de botones florales se pueden eliminar los botones muy jvenes, para evitar la competencia. 4. Eliminar las flores que ya estn polinizadas (flores abierta) 5. Emasculacin, cuyo proceso es como sigue: Se coge un botn floral sujetando del cliz y con la yema de los dedos de la otra mano, se abren tos acmenes de la corola, a continuacin se eliminan las anteras ayudndose con una pinza (pueden utilizarse con este fin estiletes con mango de madera simplemente la punta de lpiz). II. Preparacin del progenitor Masculino La preparacin consiste en colectar los granos de polen de las flores recientemente abiertas para luego polinizar, para tal coleccin, se puede determinar la viabilidad del polen, como sigue:  Con colorantes como el acetocarmn, se tien los granos de polen, los cuales se observan en microscopio: los polen frtil presentar sus paredes turgentes y totalmente coloreados (rojizos); y los infrtiles son plasmolizados y sin pigmentacin.  Con prueba de germinacin en un medio semislido: en agar al 0.5%, 15 - 20 % de sucrosa y 25 a 50 ppm de cido brico. El polen debe formar su tubo polnico el doble de su dimetro para cuantificar como viable. En ambos casos se cuentan los granos de polen viable y no viable para estimar el % de viabilidad. La viabilidad del polen al medio ambiente es aproximadamente 1 semana, en refrigeracin es de 3 a 4 semanas y a 4 C aprox. 2 aos. Es decir a menor T y H el periodo de conservacin es mayor. 1 Escoger flores cuyas anteras tengan un color amarillo intenso o anaranjado (estos generalmente presentan buena fertilidad), esto debe ser antes de la dehiscencia de las anteras. Coleccin del polen, hay varias alternativas:  Colectar en placa petri las anteras y guardar en ambiente seco por 24 horas, tiempo como para que se deshidrate. Al da siguiente se recoge en capsulas de gelatina y colocar en frasco de vidrio con su respectivo identificacin.  Coleccin con vibrador: Las flores recolectadas en bolsas de papel debidamente identificada, se secan al medio ambiente durante 1 da, luego se coge una flor y se le acerca el vibrador, recibiendo el polen en la

III.

cpsula de gelatina debidamente identificada, se colocan en frascos o soporte de tecnoport .  Mtodo manual: Consiste en coger la flor progenitor masculina y la femenina, para polinizar directamente, juntando las anteras con el estigma Polinizacin: Aplicacin de los granos de polen sobre el estigma. Algunas consideraciones:  El momento ms adecuado para la polinizacin es en horas nublados, clima templado o fro, porque la mayor radiacin solar produce plasmlisis en el tubo polnico.  La alta humedad relativa estimula la germinacin del tubo polnico, por lo que a veces se asperja agua sobre el estigma. Para favorecer una fecundacin ms rpida.  La polinizacin es mejor al da siguiente de la emasculacin.  El perodo de receptividad de los vulos es ms o menos 5 das.

Conclusiones Naturalmente algunas variedades de papas son incompatibles y por ende no permiten cruzarse entre s, y esta denominado como esterilidad que es por efecto del polen. Existen varios mtodos para realizar el cruzamiento gentico de la papa, y estos deben ser seleccionados de acuerdo a las mejores condiciones y a la realidad en cada campo para realizar el mejoramiento gentico.

Bibliografa Ochoa M., C. (1999). Las Papas de Sudamrica: Per (parte I). Centro Internacional de la Papa. Lima, Per. Estrada Ramos, Nelson. (2000). La biodiversidad en el mejoramiento gentico de la papa. Centro de Informacin para el Desarrollo. Plural Editores. La Paz, Bolivia. Estrada Ramos, Nelson. (1956). Mejoramiento gentico de las variedades de Papa. En: Curso Internacional sobre produccin y fitomejoramiento de la papa. Instituto interamericano de Ciencias Agrcolas. Del 13 de marzo al 12 de mayo, Lima, Per.