BI 1: XC NH HM LNG CAFFEINE TRONG MU TR BNG SC K LNG HPLC

IMc ch: II- C s l thuyt:

1. Tng quan v HPLC

1.1.

Gii thiu chung:

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) cn gi l phng php sc k lng hiu nng cao, trc y gi l phng php sc k lng cao p (High Pressure Liquid Chromatography). Phng php ny ra i nm 1967 1968 trn c s pht trin v ci tin t phng php sc k ct c in. Hin nay phng php HPLC ngy cng pht trin v hin i ha cao nh s pht trin nhanh chng ca ngnh ch to my phn tch. N c ng dng rng ri trong cc nghnh ch to my phn tch kim nghim c bit l ng dng trong ngnh kim nghim thuc. 1.2. Cu to:

Cu to gm cc b phn chnh sau: Bnh cha dung mi, B phn kh kh Degasse, Bm cao p, B phn tim mu, Ct sc k, u d, H thng thu nhn v x l s liu.

1.3.

Nguyn tc hot ng

Sc k lng hiu nng cao l k thut phn tch sa vo s phn ly, phn b khc nhau ca cc cht gia hai pha: pha ng v pha tnh. Pha tnh c trng mt lp mng trn b mt vi nhng ht rt mn v pha ng l dng cht lng chy trn b mt ca nhng ht mn trng trn pha tnh. Ct c lm bng thp chng r l loi ct nhi trong HPLC, bn trong c nhi bng nhng phn t cht rn hnh cu. Pha ng c lp y trong ct vi tc dng khng i nh vo pump trong my. Mu c tim t bung tim mu gn u ct. Sau , mu c tim s i vo ct vi dng pha ng v nhng thnh phn trong mu s di chuyn qua ct gia pha tnh v pha ng. Khi , nhng thnh phn no c i lc mnh vi pha tnh s di chuyn chm hn qua ct, ngc li nhng thnh phn no c i lc yu vi pha tnh s di chuyn nhanh hn. Nh vy, mi thnh phn trong mu s c tch ra trong qu trnh qua ct. Sau dng dung mi ra gii s ra cui ca ct. Mi thnh phn trong ct s c ghi nhn bi u d. Qu trnh phn ly bt u c gim st bi thi gian ghi nhn khi bt u tim mu n khi th xut hin, th ny gi l sc k . 2. Tng quan v caffeine 2.1. Caffeine l mt cht rn tinh th mu trng, c v ng, hot ng nh mt cht kch thch. Caffeine c tm thy trong ht, l, tri cy ca mt s thc vt, chng hot ng ging nh thuc tr su t nhin c th lm t lit v git cht con su n thc vt. N c tiu th ph bin trong con ngi bng cch chit sut t ht c ph v l ca cy ch (tr). Caffeine l mt trong cc nghin cu ton din nht trong ngnh cung cp thc phm. 3. Tc dng dc l ca caffeine: i vi h thn kinh trung ng, cafein c tc dng rt mnh, ngi dng nhiu cafein hoc ung c cafein cm thy tnh to , mt bun ng, t mt mi v t duy minh mn.
2

Cafein dng vi liu ln th kch thch mnh thn kinh trung ng, xut hin trng thi bn chn, lo lng mt ng, nhng ngi hay dng c ph th nhng biu hin ny thng khng r, liu cao c th lm c th lm co dt cc b hoc ton thn. Cafein cn c tc dng kch thch h hp, i vi h tim mch, cafein c th lm tr ngi khng ngoi vi, kch thch tim. Liu 250 300g cafein gy nn nhp tim nhanh, huyt p tng nhanh c huyt p tng thu v huyt p tng trng. Nhng cng vi liu lng trn i vi ngi thng dng c ph th triu chng trn s khng xut hin. nng cao hn cafein kch thch h hp, i vi h tim mch, cafein c tc dng lm tng nhp tim r rt, nhng ngi mn cm c th xy ra hin tng lon nhp tim. i vi thc vt, cafein l mt th thuc tr su t nhin. N lm t lit v git cht su b n thc vt. Phn t ny c chit xut ln u tin vo nm 1819, bi nh ho hc Php, Friedrich Ferdinand Runge. Nu l loi tinh khit, cafein dng bt mu trng v cc k ng. N c thm vo cla, v nhiu loi thc ung khc em li mt v ng th v rt c bit. Tuy nhin, cafein cn l mt cht kch thch c th gy nghin. Trong c th ngi ta, n gy s kch thch ln cc dy thn kinh, nhp tim, s h hp, lm thay i tnh cch con ngi , v hot ng cng ging nh mt cht li tiu. Ngi ta tin rng cafein lm tr ngi s tip nhn thng tin ca no b v cc c quan khc. Vic gim s tip nhn thng tin ny s lm chm li cc hot ng ca t bo. Nhng t bo thn kinh b kch thch v tit ra hc-mn epinrin (arenalin) lm tng nhp tim, huyt p, v lng mu chy trong cc c, gim mu chy n da v cc b phn khc. V gy ra s gii phng glucose trong c th. cafein cn lm tng mc truyn t ca thn kinh. cafein nhanh chng c o thi khi no hon ton. N ch c hiu qu trong mt
3

thi gian ngn v c khuynh hng khng lm nh hng nhiu n s tp trung hay nhng chc nng khc ca no. Tuy nhin, sau mt thi gian s dng cafein, ta s tng sc chu ng i vi n. Sc chu ng khin cho c th d nhy cm. V th vic cai nghin s khin cho huyt p gim, c th gy ra au u v mt s triu chng khc. Vi qu nhiu lng cafein c th gy ra ng c cafein. Mt s c im nh: nng tnh, thng xuyn ri vo tnh trng b kch ng, lm gim s tiu tin, gy mt ng, mt ng, lm lnh tay, chn, bnh ng rut, v thnh thong li b o gic. Liu gy c LD-50 ca cafein (l lng cafein c th lm cht 50% dn s) khong 10 g, tng ng vi 100 tch c ph. LD-50 ca cafein cho mt con chut cng nng 1 kg l 381 mg. c bit rng, nc bi c kh nng ko di thi gian bn hu ca caffein, bi cht ng trong qu bi s km hm qu trnh trao i cht ca caffein trong gan. Mt s ngi mc phi cc triu chng ng c cafein sau khi dng khong 250 mg mi ngy. i vi ngi ln, c tnh khong 13-19 gam, cafein c th gy cht ngi. Trong khi c coi l an ton i vi con ngi, cafein c th rt c i vi th nui, nh ch, nga hay vt. Cafein c chng minh c th lm gim bnh tiu ng (dng II). Ngoi vic dng cafein nh mt cht kch hay l mt thi quen, chng cn c th lm thuc gim au u kh hiu qu. 4. dfd III- Tin hnh th nghim 1. Dng c v ha cht: Dng c: Bnh nh mc 25ml, 50ml, 100ml Pipette 10ml, 5ml, 1ml Beaker 500ml, 50ml, 100ml ng nh git Mung thy tinh Chn cn Ha cht: Na2CO3 CH2Cl2
4

Caffeine Ethanol 2. Pha chun:

2.1.

Nc ct

ng chun ln (nng t 10 50 ppm) u tin pha chun 1000 ppm bng cch cn 0.1g chun caffeine ha tan trong dung mi l pha ng acetonitrile : nc vi t l 6 : 4; sau ly 5ml dung dch chun 1000 ppm pha trong pha ng v nh mc ln 50ml thu c dung dch chun 100 ppm. Pha dy chun nng t 10 50 ppm: Nng (ppm) 10 20 30 40 50 Th tch ht (ml) 2.5 5 7.5 10 12.5 nh mc (ml) 25 25 25 25 25

2.2.

ng chun nh (2 10 ppm)

T chun 100 ppm, ly chnh xc 5ml v nh mc bng pha ng thnh 50ml c chun caffeine 10 ppm v pha dy chun sau: Nng (ppm) 2 4 6 8 10 Th tch ht (ml) 2.5 5 7.5 10 12.5 nh mc (ml) 25 25 25 25 25

3. Qu trnh chit caffeine t tr Thc hin 2 mu: tr Bo Tn v tr ti Lipton.

-

Cn 20g tr l kh, i vi tr ti Lipton th ly 5 gi, thm vo 5g Na2CO3 v khong 200ml nc ct. un trong ni cch thy cho n khi nc si trong khong 1 ting, nh rng va un va khuy cho ha tan ht Na2CO3.

Nhc xung khong 5 pht, sau lc nng (i vi Lipton th bp ti ly cho ht phn cn li ca nc) Lm ngui ti nhit phng Tip tc lm lnh bng nc (khong 200C) trc khi tin hnh chit bng phu chit g trong dung mi l dichloromethane (nhit si = 400C). dung dch tr va lm lnh vo phu chit, thm 30ml CH2Cl2, sau y np li v lc phu nh va phi. Cn thn khng nn lc mnh trnh vic hnh thnh nh tng. Nhng cng phi nh rng nu lc khng mnh cho caffeine b tch ra v to mt lp hu c di y.

Ch trong mt khong thi gian khi tch thnh 2 lp v c mt lp trong sut di chnh l mt lp hu c tan trong dichloromethane. Chit lp di vo mt flask v y np li. Li thm 30ml v thc hin tng t t nht 3 ln m bo lng caffeine c chit ht.

4.

IV- Kt qu v tho lun:

1. Kt qu ng chun v o mu 2. Hiu sut 3. Tho lun Cu 1: Ti sao khi dng Na2CO3 trc khi em un si tr? Tr li: Trong l tr, caffeine tn ti di dng mui kt hp vi tannin. V vy tch caffeine ra khi r tr th tt nht l un nng l tr trong dung dch kim nh. y, dng Na2CO3 khi ha tan trong nc to thnh dng kim v s gip caffeine tch ra khi l tr. Phng trnh phn ng: Na2CO3 + 2 H2O --> H2CO3 + 2 NaOH Cu 2: Ti sao phi dng dichloromethane lm dung mi chit caffeine t tr? Tr li:
6

Cu 3: Trong giai on lm kh mu ti sao dng mt lng Na2CO3? Tr li: