PRACTICA 14. OBSERVACIN DE ESTOMAS DE PLANTAS SUPERIORES.

INTRODUCCIN El intercambio gaseoso, necesario entre las plantas terrestres y el medio ambiente, se realiza en las hojas, por medio de poros especiales denominados ESTOMAS. Los estomas son pequeas aberturas localizadas en ambas superficies (haz y envs) de la epidermis. Se encuentran en las partes verdes areas de la planta, particularmente en las hojas. Se forman a partir de divisiones diferenciales en la protodermis. Las partes de un estoma incluye dos clulas oclusivas (clulas guarda) que generalmente poseen forma arrionada, que se disponen simtricas y aclopladas de modo que dejan entre ambas una abertura u ostiolo, tambin denominado poro estomtico. Por fuera de estas clulas se suelen aadir dos o ms clulas anexas que son tambin clulas epidrmicas modificadas. Las clulas estomticas son clulas vivas mientras funcionan. Poseen un gran ncleo y abundancia de cloroplastos, mitocondrias, retculo endoplasmtico, dictisiomas y vacuolas. Hay plasmodesmos uniendo ambas clulas estomticas para que funcionen como una unidad fisiolgica, pero no se suelen observar plasmodesmos entre las clulas estomticas y las anexas. Hay abundantes granos de almidn, que se disuelven para volver a regenerarse, causando variaciones en la presin osmtica que provocan la aparicin y desaparicin de la turgencia celular para regular la apertura y cierre del estoma. Por debajo del estoma se forma una pequea cavidad, la cmara subestomtica, en comunicacin con toda la red de espacios intercelulares subyacentes. Las clulas estmaticas pueden quedar sobrealzadas, al mismo nivel que las restantes clulas epidrmicas, o hundidas. La funcin ms importante de los estomas es la de regular la transpiracin (mantener un adecuado nivel hdrico en la planta) y el intercambio gaseoso. La apertura del estoma se produce cuando se despolimeriza el almidn, que desaparece de los cloroplastos y entra en el citoplasma. Las clulas se hinchan al aumentar la presin osmtica y al mismo tiempo penetra el K+ . Al cerrarse el estoma ocurre lo contrario, formndose almidn en los cloroplastos. Los factores que regulan la apertura y cierre del estoma son diversos. El ms importante es la luz, a la que los estomas son muy sensibles. Tambin influye el contenido de agua de la planta y la concentracin de CO2.

La densidad, longitud y ancho de los estomas pueden variar entre y dentro de una misma especie, esto puede ser ocasionado por la constitucin gentica del genotipo, ambiente (riego o temporal), interaccin del genotipo con el medio ambiente, posicin y lado de la hoja, intensidad de luz, altura de planta, etc., adems, estos rasgos son altamente heredables y pueden manipularse con los mtodos de mejoramiento gentico de los cultivos. En algunas plantas el nmero de estomas en la superficie frecuentemente excede al de la superficie adaxial y segn la posicin de las hojas en las plantas se encuentran ms estomas en las superiores que en las inferiores. Adems, las plantas presentarn mayor frecuencia estomtica en las hojas expuestas al sol que a la sombra. Pueden presentar aspectos muy diferentes pero en el caso de las plantas superiores podemos hablar de dos tipos bsicos: a) En gramneas y otras monocotiledneas como la palmera, tienen una forma de barra plana ensanchada en sus extremos. Junto a las clulas guarda hay un conjunto de clulas llamadas subsidiarias que ayudan a controlar el grado de apertura del estoma. b) Las dicotiledneas, as como muchas monocotiledneas y las gimnospermas, tienen forma arrionada y a menudo estn ausentes las clulas subsidiarias. En ambos tipos hay zonas de la pared celular ms gruesas que otras. En las de tipo a) estn situadas en la zona ms estrecha y en las de tipo b) en las caras que estn en contacto con el poro estomtico. Adems, las microfibrillas de celulosa se disponen radialmente. OBJETIVOS Observar la morfologa de diferentes tipos de estomas y visualizar el proceso de apertura y cierre. Comparar el numero de estomas de la epidermis superior de la hoja con el de la epidermis inferior, tanto en plantas monocotiledoneas como en dicotiledneas. MATERIAL Hojas de basales, intermedias y apicales de monocotiledoneas, dicotiledneas y gimnospermas Portaobjetos Cubreobjetos Vaso de precipitados 100 ml Solucin de sacarosa 0.3 molal en un frasco con gotero (Como preparas 100 ml de una solucin 0.3 M de sacarosa?) Agua destilada en un frasco con gotero Papel de filtro Microscopio ptico Esmalte de uas transparente Pinzas Cinta adhesiva (Diurex)

MTODO En la primera parte de la prctica se observarn los estomas (tipos, disposicin y estructura) de distintos tipos de plantas: Selecciona una hoja . Muestrearla por el haz y por el envs en su parte basal, media y apical. Agrega esmalte sobre la superficie con uno o dos brochazos para dejar una pelcula delgada. Se deja reposar por diez minutos para que seque un poco el esmalte. Colocar un trozo de cinta adhesiva sobre la pelcula de esmalte, presionar ligeramente. Desprende la cinta y obtendrs la cutcula con estomas. Pegar las muestras sobre el portaobjetos. Identifica la muestra con una etiqueta y anota si pertenece a la muestra del haz o del envs y de la parte basal, media y apical, fecha, equipo y grupo. Las muestras sern observadas al microscopio a 10 X para localizar y 40 X para dibujar y cuantificar el nmero de estomas. En la segunda parte se escoger la epidermis de aqullas hojas en las que se ha visto con una mayor facilidad la estructura del estoma y su grado de apertura y se har que estos se abran o cierren hacindoles pasar agua destilada o solucin de sacarosa 0.3 M respectivamente. Para ello se sumerge una tira de epidermis en agua destilada durante 10 minutos. Se monta un fragmento pequeo en un porta con agua destilada, se coloca el cubre y se selecciona un estoma que se vea claramente abierto. A continuacin, se pone en un extremo del porta una pequea gota de solucin de sacarosa y con ayuda de un trocito de papel de filtro se hace que esta ltima pase a travs del porta y por tanto entre en contacto con el estoma. RESULTADOS Observa al microscopio la impresin que dejaron las clulas de la epidermis de la hoja y los estomas. Compara los estomas en cada caso, realiza un dibujo que muestre la diferencia. Los estomas observados tanto por el haz como por el envs presentaron la misma distribucin y nmero de estomas? Observas diferencias en las hojas apicales, intermedias y basales?

CUESTIONARIO 1.- Explica la accin de la solucin de sacarosa. 2.- Indica las diferentes clasificaciones que se hacen de los estomas. 3.- Esquematiza los diferentes tipos de estomas. 4.- Como determinaras el nmero de estomas por centmetro cuadrado? 5.- Describe el origen de los estomas. LITERATURA CITADA Salisbury, F. B. y C. W. Ross. 1994. Fisiologa vegetal. Iberoamericana. Mxico. 759 pp. Hopkins, W. G. y N. P. Hner. 2004. Introduction to Plant Physiology. John Wiley & Sons. New Jersey. 560 pp. pik, H. y S.Rolfe. 2005. The Physiology of flowering plants. Cambridge University Press. Cambridge Paniagua, R., Nistal, M., Sesma, P., lvarez-Ura, M. y Fraile, B. 1996. Citologa e Histologa Vegetal y Animal. Interamericana. pg. 654-656.