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Archivo Brasilero de Medicina Veterinaria y Zootecnia - correlacin de la actividad de la ceruloplasmin

Archivo Brasilero de Medicina Veterinaria y Zootecnia


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Arq Bras. Vet Med Zootecnia. Belo Horizonte vol.57 no.2 abril 2005
http://dx.doi.org/10.1590/S0102-09352005000200002

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La correlacin entre la actividad de la ceruloplasmina srica y el suero y los niveles hepticos de cobre en las vaquillas
Suero ceruloplasmina correlacin de la actividad con las concentraciones de cobre en suero y el hgado en las vaquillas Nelore

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Borges como yo , RM Amorim I ; MRG Kuchembuck I , RS Araujo II ; SB Smith III , HF Smith III , FJ Benesi IV , R. Mirandola IV , M. Morgano V

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I Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia - UNESP - Distrito Rubio Jr., s / n - 18618-000 - Botucatu, SP II PIBIC Beca / CNPq III PhD - FMVZ - UNESP, Botucatu, San Pablo IV, Facultad de Medicina Veterinaria y de la USP-Zootercnia So Paulo, SP V del Instituto de Tecnologa de los Alimentos -

Campinas, SP

RESUMEN Se evalu la actividad oxidativa de los niveles de ceruloplasmina srica como un indicador de cobre en el suero y el hgado y se compararon dos mtodos de determinacin de ceruloplasmina y la ortodianisidina parafenileno. recogieron 56 muestras de suero y el hgado (biopsia del hgado) de novillas para determinar la actividad de la ceruloplasmina suero y la concentracin de cobre. Las correlaciones entre los niveles sricos de cobre y la actividad de la ceruloplasmina srica determinada por mtodos paraphenylen y ortodianisidina fueron de 0,75 y 0,62, respectivamente. Las correlaciones entre las concentraciones de cobre del hgado y de la actividad ceruloplasmina srica por los mtodos citados fueron 0,15 y 0,12. No se observ correlacin entre el suero y el cobre del hgado. La correlacin entre la actividad ceruloplasmina srica, parafenileno que usa como sustrato, y el suero de cobre fue mayor que la correlacin entre este elemento y el mtodo utilizado para ortodianisidina. Palabras clave: ganado, cobre, ceruloplasmina, la biopsia heptica
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RESUMEN La actividad de la oxidasa ceruloplasmina un indicador de los niveles sricos de cobre y el hgado se evalu dos mtodos diferentes y la determinacin de ceruloplasmina (paraphenylen y ortodianisidine) se compararon. Cincuenta y seis muestras de suero y el hgado de las vaquillas Nelore se utilizaron para evaluar la concentracin de cobre en el suero y la actividad de la ceruloplasmina. Los coeficientes de correlacin entre los valores de cobre y ceruloplasmina srica de actividad srica utilizando ortodianisidine Fueron paraphenylen y 0,75 y 0,62, respectivamente. La correlacin entre la actividad de la ceruloplasmina en suero y las concentraciones hepticas de cobre fueron 00:15 y 12:12, respectivamente, y es ortodianisidine paraphenylen. Entre la relacin de los niveles sricos de cobre y el hgado se observ. La determinacin en suero por el mtodo de Cooper paraphenylen mostr una mayor correlacin con el nivel de hgado de cobre en comparacin con la determinacin de cobre en el suero por el mtodo de ortodianisidine. Palabras clave: bovino, cobre, ceruloplasmina, la biopsia heptica

INTRODUCCIN
Las deficiencias de elementos minerales son factores que limitan la productividad de la industria animal. La deficiencia de cobre ha sido identificado como el ms comnmente encontrado en el ganado bovino en todo el mundo (McDowell, 1999). Tokarnia et al. (1999), en un artculo de revisin sobre las deficiencias de minerales en el ganado bovino y ovino en Brasil, seal las deficiencias de cobre, el cobalto y el zinc como el ms frecuente. Moraes et al. (1994) encontraron el pastoreo en las regiones con deficiencia de cobre de Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Acre y Goias. En este estudio, la concentracin de este elemento ha sido menor que la requerida por los animales, alrededor del 50% de los resultados. La deficiencia marginal de cobre, siendo ms frecuente, provoca ms dao que el impedimento severo. La insuficiencia de las tasas de cobre en la dieta puede causar disminucin del crecimiento y las tasas de reproduccin de declive, sin signos patognomnicos (McDowell et al., 1993). La manada nutricional cuando la cubierta se puede evaluar en alimentos, agua, suero y el hgado, o mediante la determinacin de la actividad de la ceruloplasmina srica (Hidiroglou, 1980; Vermunt y Occidente, 1994). La evaluacin basada en un solo elemento puede conducir a conclusiones errneas (Wikse et al., 1992). Acerca de 40-70% de cobre absorbido se almacena en el hgado, desde donde se libera cuando hay una reduccin del consumo (Corah e Ives, 1991). Anlisis de hgado es fiable para evaluar la condicin de cobre orgnico, cobalto, manganeso selenio, y, opcionalmente, el zinc (Tokarnia et al., 1999). El suero actividad ceruloplasmina oxidativo se relaciona con la concentracin en suero de cobre, es decir, baja concentracin de este elemento se asocia con ceruloplasmina actividad reducida. Uno de los mtodos utilizados para verificar la actividad de la ceruloplasmina es la oxidacin de parafenilendiamina. El producto de esta reaccin es de color prpura, se puede determinar por espectrofotometra y es el mtodo para la mayora de las determinaciones (Ravin, 1961). Otro mtodo descrito consiste en la reaccin con ortodianisidina ceruloplasmina como un sustrato (Schosinsky et al, 1974;. Paynter, 1982). Los mtodos oxidativos detectar slo el cobre ceruloplasmina enlazado. Blakley y Hamilton (1985) encontraron que la correlacin entre la actividad de la ceruloplasmina suero y la concentracin de cobre en suero fue 0,83 y concluy que no se puede utilizar como un indicador de cobre orgnico en el ganado. Amer et al. (1973) encontraron en los terneros, la correlacin de 0,98 entre las mismas variables, y se encontr que el 96,5% de las diferencias en la actividad oxidasa ceruloplasmina puede explicarse por los cambios en la concentracin de cobre en plasma. Despus de la suplementacin con el ganado de cobre deficientes, Kapoor y Mahadevan (1970) encontr una alta correlacin entre los valores de cobre plasmtico y la actividad de la ceruloplasmina srica. Cerone et al. (1998) encontr una reduccin de la actividad de la ceruloplasmina srica en vacas con deficiencia inducida de cobre secundario, la administracin de molibdeno. correlacin entre la ceruloplasmina suero y el hgado de cobre es baja, aproximadamente 0,35 (Kincaid, 1986). Este estudio tuvo como objetivo comparar dos mtodos para la evaluacin de la concentracin srica de ceruloplasmina y estimar la correlacin entre ste y los niveles sricos de cobre y el hgado.

MATERIALES Y MTODOS
Hemos utilizado 56 novillas, no embarazadas, con un buen rendimiento y el peso corporal de aproximadamente 330kg, colocada en el potrero de B. decumbens, en una propiedad privada en el municipio de Paulistania-SP.
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pastos fueron sometidos a anlisis qumicos, obteniendo los siguientes resultados: N = 5g/kg, P = 0,8 g / kg, K = 8g/kg, 3g/kg = Ca, Mg = 2,6 g / kg, S = 0,6 g / kg, B = 6mg/kg, 6mg/kg = Cu, Fe = 153mg/kg, Mn = 278mg/kg, 23mg/kg y Zn = Mo = 2mg/kg. 20 ml de sangre se recogi en un tubo especial vaco primera , libre de contaminacin con el mineral, sin anticoagulante. Despus de retraccin parcial del cogulo y la centrifugacin, el suero se separa por aspiracin y se dividi en partes alcuotas y se congelan a -20 C para su posterior anlisis. Las biopsias de hgado se realizaron segunda junior Chapman et al. (1963). La actividad de suero ceruloplasmina en el suero sanguneo se determin utilizando dos mtodos. El primero fue utilizado oparafenilenodiamino 2 como sustrato, segn descripcin Ravin, (1961). En este mtodo, la actividad ceruloplasmina fue determinada por la velocidad de oxidacin de parafenilenodiamino a 37 C y pH 6,0. Se midi en la apariencia prpura espectrofotmetro como resultado de la oxidacin. La correccin se realiza debido a la catlisis oxidativa por Cu y Fe presentes en las muestras usando un blanco que fue inhibida por ceruloplasmina azidasdico 3 . Una unidad de actividad se define como un aumento de 0,001 en la absorbancia a 530 nm despus de 30 minutos de reaccin. La reaccin de oxidacin se incrementa por la exposicin a la luz por lo tanto, el procedimiento se realiz en la oscuridad. El segundo mtodo consisti en determinar la concentracin usando el ortodianisidina 4 como sustrato (Schosinsky et al., 1974). Ambos procedimientos se realizaron por duplicado y el resultado final expres que ellos significan. Para la cuantificacin de cobre en muestras de hgado y el suero se utiliz la tcnica de la fuente de emisin ptica con plasma acoplado inductivamente espectrometra espectrmetro de Simultnea 5 . Antes de las pruebas de anlisis se realizaron para verificar el mtodo de preparacin de hgado de bovino. Hemos llevado a cabo el anlisis de muestras hmedas (bloque digestor). Una muestra de hgadocertificada 6 , se sec en un horno a 110 C durante 12 horas, se utiliz para validar la metodologa. Para la determinacin de cobre se utiliz el mtodo de la digestin cida en el bloque digestor 7 (Asp y Lund, 1992) como sigue: pesaje 0,2000 0,0011 g de muestra de hgado de bovino en tubos de vidrio y la adicin de 15 ml de cido ntrico concentrado; calefaccin bloque digestor de 50 C , un aumento de 10 C a intervalos de 30 minutos hasta 160 C, calentando a alcanzar aproximadamente 5 ml de volumen, transferencia de la muestra a 25 ml matraces volumtricos, completando el volumen con cido clorhdrico al 5% v / v Para la determinacin de cobre en el suero, el mtodo de preparacin se bas en el procedimiento descrito por Evenson y Warren (1975), es decir, la colocacin de 400 m l de la muestra de suero en 10ml matraces volumtricos y se completa el volumen con cido clorhdrico 5N % v / v Las mediciones se realizaron tambin por espectrometra de emisin ptica con plasma acoplado inductivamente argn. Se realiz un anlisis descriptivo y se estim la correlacin de Pearson entre la actividad de la ceruloplasmina srica y el suero y los niveles hepticos de cobre (Zar, 1984).

RESULTADOS Y DISCUSIN
La Tabla Una muestra de los medios, desviaciones estndar y medianas de la actividad de la ceruloplasmina srica (mtodos y parafenileno ortodianisidina) en cobre en el suero (mg / l) e hgado (mg / kg / materia seca).

La media de cobre en el hgado se encuentra dentro del rango considerado normal para el ganado, de 100 a 300mg/kg/MS segundo Fick et al. (1979) 100 o el segundo McDowell 400mg/kg/MS (1992). Los valores encontrados 545mg/kg/MS 132 para mostrar la variacin individual de los animales, ya que se mantienen unidos bajo la misma direccin en los ltimos dos aos, un hecho que tambin ha sealado Suttle (1986). Los resultados son similares a Lisboa et al. (1996).
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El cobre suero media est dentro del rango normal, 0,7 a 1,4 mg / l segundo Fick et al. (1979) o 0,6 a 1,5 mg / l McDowell segundo (1992). El cobre del hgado estn ms cerca del lmite superior y el cobre en el suero se encuentran en el lmite inferior citado por estos autores. La evaluacin individual de cobre en el suero encontrado 22 animales con valores inferiores a 0,7 mg / l citado por Fick et al. (1979) y si se considera cuatro 0,6 mg / l se refiere a McDowell (1992). Segn l, los valores por debajo de 0,6 mg / l sera indicativo de la deficiencia en ovinos y bovinos. Sin embargo, la concentracin de animales suero por debajo de 0,6 mg / l mostraron niveles normales de cobre del hgado. Segn Claypool et al. (1975), los niveles sanguneos son slo acompaado por valores bajos hepticas cuando hay menos de 0,5 mg / l. 101 de las observaciones realizadas por estos autores, en los que los niveles plasmticos estaban por debajo de 0,5 mg / l, slo cuatro presentaron valores por encima del hgado 40mg/kg/MS. En el presente estudio slo un perro con un suero estaba por debajo de 0,5 mg / l, sin embargo, el valor de cobre en el hgado fue normal. Hubo correlacin negativa entre los niveles sricos de cobre y el hgado (r = -0,1), segn ha informado Fichtner et al. (1988). El menor hgado no fueron acompaados por la disminucin de los niveles sricos, ya que la homeostasis impide que esto suceda hasta que las reservas del hgado son muy bajos. Por lo tanto, se puede sugerir que los valores del hgado son ms confiables que los valores sricos para evaluar el estado nutricional del cobre en el cuerpo. Las desviaciones estndar de los medios y los obtenidos para la actividad de la ceruloplasmina en suero por mtodos y ortodianisidina parafenileno fueron 250,09 51,27 UI / L y 15,93 9,44 UI / l, respectivamente. fin de los mtodos de citacin, la correlacin entre la actividad de la concentracin srica de ceruloplasmina y cobre en suero fue de 0,75 y 0,62. En este orden, la correlacin entre la actividad de la ceruloplasmina srica y concentracin heptica de cobre fue de 0,15 y 0,12. Los resultados son similares a Kincaid (1986). La correlacin fue menor que el indicado por Amer et al. (1973) y Blakey y Hamilton (1985), utilizando como sustrato de la reaccin parafenileno. Esto surge debido a cero correlacin entre los valores de concentracin de cobre en el suero y el hgado. Los resultados de este experimento muestran que es posible indicar que los animales con mayor o menor valor de cobre suero basado en la determinacin de la actividad ceruloplasmina suero, lo que confirma las observaciones de Hamilton y Blakey (1985) y Kincaid (1986). La correlacin entre la actividad observada por el mtodo de ceruloplasmina y cobre ortodianisidina suero fue menor que la correlacin entre este elemento y la actividad de la obtenida por el mtodo de parafenileno ceruploplasmina. Esto se debi a la presencia de un valor extremo nico. La tcnica para determinar la actividad de la ceruloplasmina utilizando el sustrato como ortodianisidina es ms fcil de realizar, ya que la reaccin es inhibida por la adicin de azida de sodio (Scosinsky et al., 1974), que facilita el procedimiento de lectura. Adems, esta reaccin puede realizarse con reactivos preparados de antemano, lo cual no ocurre con el otro mtodo. Sin embargo, la reaccin con el resultado ortodianisidina muestra muy baja en su lectura final, lo que dificulta la percepcin de las pequeas variaciones. Otra desventaja de esta tcnica es el uso de reactivos txicos dos: una ortodianisidina y 50% de cido sulfrico.

CONCLUSIONES
La correlacin entre el mtodo de determinacin de la actividad ceruloplasmina suero utilizando el sustrato como parafenileno y la concentracin de cobre en suero es mayor que la correlacin entre este elemento y ortodianisidina metodologa. La actividad de suero ceruloplasmina es un indicador indirecto de cobre en el suero, lo que le permite ser usado como un mtodo de cribado para el diagnstico de la deficiencia de cobre marginal en el ganado.

Referencias
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Recibido para Recibido para Patrocinador: Investigacin

publicacin 13 de mayo 2003 su publicacin, despus de las modificaciones, 23 de junio 2004 Fundacin para el Desarrollo de la Investigacin en la UNESP y la Fundacin de Apoyo a la de So Paulo

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E-mail: asborges@fmvz.unesp.br A Becton Dickinson quirrgica Ind. Ltda., Brasil 2 Ref. 16 165 - Riedel-Dehaen 3 Labsynth Laboratorio, SA de CV. 4 Ref. D3252 - Sigma 5 Baird, el modelo de PIC 2000 (Massachusetts, EE.UU.) 6 1577b - hgado de bvidos - Instituto Nacional de Estndares y Tecnologa (NIST) 7 Sistema abierto, modelo TE-040-25-TECNAL

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