DISEO Y ANLISIS DE REACTORES BIOLGICOS

FERMENTADORES Parte III: Anlisis de fermentadores

Daniel Ferrari
dferrari@fing.edu.uy
2003-03-25 Ingeniera Bioqumica 1

5.0

Anlisis de fermentadores

El anlisis de los fermentadores se basa en manipular aquellas variables que controlan la velocidad de crecimiento. Desde el punto de vista prctico son las siguientes: Concentracin de un nutriente esencial limitante; Concentracin de biomasa; Variable ambiental: temperatura, pH, etc.

2003-03-25

Ingeniera Bioqumica

5.1 Fermentador continuo tipo tanque agitado

La fermentacin continua permite un alto nivel de productividad en trminos de transformacin por unidad de tiempo y por unidad de volumen. No obstante su difusin est restringida a un grupo reducido de aplicaciones debido a los siguientes obstculos: Dificultad para mantener asepsia por largo tiempo; Cambios genticos de la cepa; Desconocimiento dinmico del sistema; Baja velocidad del bioproceso. Ejemplos de aplicacin: tratamiento de efluentes, produccin de levadura de panadera, protena unicelular, etanol, cerveza, vino, cido actico, seleccin de inculos, etc.
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Ejemplo: variacin de la morfologa de la levadura Kluyveromyces fragilis cultivada en suero de leche segn el modo de operacin del biorreactor.

Batch (clulas vivas)

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Batch (frotis)
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Continuo, tanque agitado (frotis)

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Fermentador continuo tipo tanque agitado

X0 S0 P0 F X S P F

X, S, P, V

Suposiciones generales
Mezcla perfecta; Flujo de entrada y salida iguales (Fi = Fo = F); Volumen de lquido en el biorreactor constante (dV/dt = 0); Temperatura, pH, velocidad de transferencia de oxgeno, etc. constantes.
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Balance de biomasa
Combinando las ecuaciones 3, 4 y 5 y dividiendo por V se tiene:

dX/dt = (F/V) . X0 (F/V). X + .X kd . X Suponiendo: Estado estacionario: dX/dt = 0 Alimentacin estril, X0 0 Velocidad de muerte despreciable, kd 0
(F/V) . X + . X = 0 Por definicin, D: Velocidad de dilucin = F/V (h-1) Cancelando X (si X 0)
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(17)

=D
6

(18)

Balance de substrato limitante

Combinando las ecuaciones 6 y 7 y dividiendo por V se tiene:

dS/dt = (F/V) . S0 (F/V) . S . X/YG m . X qP . X/YP

Suponiendo:
Estado estacionario: dS/dt = 0
Consumo de substrato para mantenimiento

despreciable, m 0

Consumo de substrato para formacin de producto

despreciable, qP 0

Introduciendo ecuacin 17 y 18 se tiene:

X = YX/S . (S0 S)
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(19)
7

Balance de producto
Combinando las ecuaciones 9 y 10 y dividiendo por V se tiene:

dP/dt = (F/V) . P0 (F/V) . P + qP . X

Suponiendo: Estado estacionario: dP/dt = 0 Alimentacin sin producto, P0 0 Introduciendo ecuacin 17 P = qP . X / D Un fermentador tipo tanque agitado en estado estacionario se denomina quimiostato.
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(20)

El quimiostato de Monod
Es un quimiostato donde el crecimiento sigue el modelo cintico de Monod, ecuacin 11. Introduciendo dicha ecuacin en 18 se tiene:

D = (m . S) / (KS + S)
S = KS . D / (m D)

Despejando S, se tiene:
(21)

Sustituyendo S en ecuacin 19: X = YX/S . [ S0 KS . D / (m D) ]

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(22)
9

Velocidad crtica de dilucin El quimiostato puede ser operado hasta un valor lmite mximo de D a partir del cual se tiene la situacin de lavado: el medio de cultivo egresa tal cual entr sin sufrir transformacin. Ese valor se conoce con el nombre de velocidad crtica de dilucin, DC. Cuando S S0, X X0 , se tiene D DC DC = (m . S0) / (KS + S0)
DC m Generalmente S0 >> KS En un quimiostato se trabaja a una fraccin de m El fermentador continuo impone una condicin selectiva adicional para el crecimiento microbiano: el microorganismo debe crecer a una velocidad definida por el sistema.
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(23)

Productividad volumtrica de biomasa QX = Productividad volumtrica de biomasa = (X X0) . D (g/Lh) Si X0 = 0 QX = YX/S . D . [ S0 KS . D / (m D) ] (24) Clculo de QX mxima, (QX)m (X.D)/D = 0 (25) Dm = m . [ 1 [ KS / (KS + S0) ]0.5 ]
Sm = [ KS / (KS + S0) ]0.5 KS
(26)

Xm = YX/S . [S0 + KS [ KS . (S0 + KS) ]0.5 ]

(QX)m = YX/S . m . [ (KS + S0)0.5 KS0.5 ]2 Generalmente S0 >> KS Dm est prximo a m y por lo tanto cerca de DC . Dm est en una zona de inestabilidad Si S0 >> KS (QX)m = YX/S . m . S0
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(27) (28)

El subndice m indica los valores de D, S y X a QX mxima

(29)

Representacin grfica del quimiostato de Monod

(QX)m
Ecuacin 28 Ecuacin 22

Sm
Ecuacin 24

Ecuacin 26

Xm
Ecuacin 26 Ecuacin 21

Ecuacin 25
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Ecuacin 23
12

X (S0 = 1.0 g/L)

X Ecuacin 22

S
m = 1.0 h-1 KS = 0.005 g/L YX/S = 0.5 g/g X (S0 = 0.2 g/L)

Ecuacin 21 D
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QX = XD (g/Lh)

Ecuacin 24
m = 1.0 h-1 KS = 0.005 g/L YX/S = 0.5 g/g

S0 = 1.0 g/L

D (h-1)
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Formacin de producto
Suponiendo un modelo cintico de formacin de producto asociada al crecimiento de acuerdo a la ecuacin 13, es posible expresar la ecuacin 20 de la siguiente manera: P = . . X / D Si = D (ecuacin 18) se tiene P=.X (30) Sustituyendo = qP / = YP/S/YX/S , y la ecuacin 22 en la 30 se tiene: P = YP/S . [ S0 KS . D / (m D) ]
(31)

Productividad volumtrica de producto: QP = (P P0) . D

Si P0 = 0
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QP = YP/S . D . [ S0 KS . D / (m D) ]
Ingeniera Bioqumica

(32)
(33)
15

(QP)m = YP/S . m . [ (KS + S0)0.5 KS0.5 ]2

Comparacin de la productividad volumtrica de biomasa con cultivo discontinuo (batch) Productividad volumtrica mxima de biomasa en cultivo discontinuo: (Qx)m discontinuo = YX/S . S0 / (tF + tM) con

Tiempo muerto: tM = tiempos de preparacin del biorreactor (limpieza, esterilizacin, carga, inoculacin, etc.) + tiempo de duracin de fase lag + tiempo de descarga.
Tiempo de fermentacin: tF: (1/m) . ln(X/X0) (S0 >> KS)

Productividad volumtrica mxima del quimiostato segn ecuacin 29: (Qx)m continuo = YX/S . m . S0 (S0 >> KS)
Ganancia de productividad: G = (Qx)m
continuo

/ (Qx)m

discontinuo

G = ln (X/X0) + m . tM (34) La ganancia aumenta cuando se usa inculo pequeo, el proceso es rpido y los tiempos improductivos son largos.
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t Pendiente A: productividad biorreactor discontinuo sin incluir tiempo muerto Pendiente B: productividad del biorreactor continuo (quimiostato)
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5.2 Fermentador continuo con realimentacin celular

Es un fermentador con alta concentracin de biomasa lograda por la realimentacin (reciclo, retroalimentacin) de una fraccin de la biomasa producida. En la realimentacin interna una fraccin de biomasa producida se separa y se mantiene dentro del mismo. En la realimentacin externa la biomasa producida se separa fuera del fermentador y una fraccin se retorna al mismo. Una concentracin elevada de biomasa activa permite mayor actividad metablica y por lo tanto mejorar la productividad del sistema.
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Los sistemas de fermentacin con alta concentracin de biomasa se requieren cuando:

Se necesita alta productividad general (Ejemplo: reducir

costo de equipo, falta de espacio, aprovechamiento eficiente de un substrato);

Reduccin de efectos de inhibicin ocasionados por alta

concentracin inhibidores;

de

substrato,

producto

compuestos

Mitigar el efecto de variables ambientales en valores no

ptimos (Ejemplos: temperatura o ptimo);

pH fuera del rango

Reducir limitaciones particulares de transferencia de masa

(Ejemplo: biodisponibilidad de substratos insolubles).

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Algunas limitaciones que pueden estar presentes:

Dificultad para manejar lquidos con alta concentracin de

slidos (tanto disueltos como suspendidos);

Dificultad para separar biomasa; Acumulacin en el sistema de slidos no deseables (slidos

suspendidos, biomasa muerta, etc.)

Limitaciones en las velocidades de transferencia de calor y

masa;
Limitaciones de mezclado; Consumo de substrato para mantenimiento celular no

despreciable;
Muerte celular no despreciable, (prdida de viabilidad

celular).
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X0 = 0 S0 P0 F

Esquema de un quimiostato con realimentacin externa X1 X S S P P F1 (1+).F SEPARADOR X, S, P, V .X S P .F .X S P F2

Separador: sedimentador, centrfuga, filtro. : relacin de realimentacin. : relacin de concentracin de biomasa.

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Balance de biomasa en el fermentador, estado estacionario

Considerando las suposiciones previas se tiene: . D. . X (1 + ). D.X + .X = 0

= (1 + . ).D
B = (1 + . )

(35)
(36)

Si no hay realimentacin: = 1 y/o = 0 B = 1

Si hay realimentacin: > 1, < 1 . (1 ) < 0

B = 1 + . (1 ) < 1 D = /B D>

Es posible trabajar a valores de D mayores que m sin que ocurra lavado.

Se aumenta el rango de operacin de D.
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Balance de substrato limitante en el fermentador, estado estacionario

D.S0 + .D. S (1 + ).D.S (/YX/S).X = 0 X = (D/) . YX/S . (S0 S) Introduciendo ecuacin 35 se tiene X = (1/B) . YX/S . (S0 S)
(37)

(1/B): factor de concentracin

Balance en el separador, suponiendo F2 0

(1 + ).D.X = . D . . X + D. X1
X1 = (1 + . ) . X X1 = B . X
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(38)
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Ingeniera Bioqumica

No puede ser realimentada toda la biomasa producida. Una fraccin debe ser sangrada del sistema para que el sistema alcance el estado estacionario. Introduciendo la ecuacin de Monod se tiene las siguientes ecuaciones:

S = KS.D.B / (m B.D)
DC = (m .S0) / [B. ( KS + S0)] X = (1/B).YX/S . [ S0 KS.B.D / (m B.D) ]

(39)
(40) (41)

La velocidad de dilucin crtica se aumenta en un factor de 1/B.

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D x (Ecuacin 41)

X Ecuacin 41

X, g/L

Ecuacin 38

Q X,

g/Lh

QX

Ecuacin 22 Ecuacin 24

D, h-1
Valores: m = 1 h-1, KS = 0.2 g/L, YX/S = 0.5 g/g; S0 = 10 g/L, = 0.5; = 2
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Ejemplo
Se produce cido ctrico en un fermentador continuo a partir de un medio a base de glucosa. Se dispone de la siguiente informacin sobre la cintica y estequiometra del bioproceso: YG = 0.47 g/g YP = 1.07 g/g m = 0.027 g/gh

qP = . + = 0.16 . + 1.94 (g/gh)

(h-1) S (g/L) 0.5 80 0.37 20 0.20 5 0.074 1

Datos operativos: S0 = 80 g/L P0 = 1 g/L X0 = 0 g/L D = 0.37 h-1

Estimar concentracin de cido ctrico alcanzada, conversin de glucosa y coeficiente de rendimiento de producto (YP/S) para un quimiostato, con y sin realimentacin externa, segn diagramas.
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Quimiostato sin realimentacin

X0 = 0 g/L S0 = 80 g/L P0 = 1 g/L F

X, S, P, V

X S P F

D = F/V = 0.37 h-1

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Quimiostato con realimentacin X0 = 0 g/L S0 = 80 g/L P0 = 1 g/L F X, S, P, V

X S P
SEPARADOR

X1 S P F

0.2 . F
D = F/V = 0.37 h-1
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5.X

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Balance de materiales

Sin realimentacin Biomasa =D (1)

Con realimentacin

= (1 + 0.2 0.2 . 5).D

D.S0 0.2 . D.S (1 + 0.2).D.S .X/YG m.X qp.X/YP = 0

Glucosa (2) cido ctrico (3)

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D.S0 D.S .X/YG m.X qp.X/YP = 0

D.P0 + 0.2 . D.P D.P0 D.P + qP.X = 0 (1 + 0.2).D.P + qP.X = 0

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Ecuaciones cinticas (4) (5) = f (S) qP = 0.16 . + 1.94 (g/gh)

Incgnitas: X, S, P, , qP

Ecuaciones independientes:

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Resultados
Parmetro X (g/L) S (g/L) P ( g/L) Consumo de glucosa Sin realimentacin Con realimentacin 8.27 20 45.68 14.55 1 77.75

Crecimiento (g) Mantenimiento (g) Producto (g) Total (g) Conversin (%) YP/S (g/g)
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17.60 (29%) 0.64 (1%) 41.76 (70%) 60 75 0.74

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6.19 (8%) 1.08 (1%) 71.73 (91%) 79 99 0.97

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