DETECCIN DE LA ACTIVIDAD PROTEOLTICA Y HEMOLTICA COMO FACTORES DE VIRULENCIA EN CEPAS DE ESPECIES DE CANDIDA PROVENIENTES DE MUESTRAS CLNICAS

Puigdomenech, G 1, Bulacio, L 1,2, Garca, M 1, Lpez, C 2, Ramadn, S 2, Scaramucci, A 1 1 ISPI N 9009 - Instituto Superior San Juan Bautista de La Salle (Mendoza 444- Rosario- Argentina), 2CEREMIC - Centro de Referencia Micologa UNR (Suipacha 531- Rosario)- Argentina germanpuigdomenech@hotmail.com ; lcbulacio@hotmail.com Introduccin:
Debido al incremento en la incidencia de las infecciones causadas por levaduras del gnero Candida, hay un gran inters en el estudio de sus factores de virulencia con la finalidad de establecer una relacin entre estos factores y la severidad de los cuadros clnicos. La secrecin de enzimas hidrolticas, como as tambin la actividad hemoltica, pueden correlacionarse con la agresividad de las levaduras ya que facilitan la colonizacin aumentando la posibilidad de invasin y diseminacin de las infecciones.

Objetivos:
El objetivo de este trabajo es evaluar, en cepas de hongos levaduriformes recuperados de pacientes con cuadros de candidiasis: la secrecin de enzimas proteinasas la actividad hemoltica de los aislamientos

Materiales y metodologa:
Se analizaron 130 cepas provenientes de pacientes con clnica de candidiasis mucosas: 76 de Candida albicans, 7 C. dubliniensis, 9 C. krusei, 25 C. parapsilosis y 13 C. tropicalis. La produccin de enzimas proteinasas se determin mediante cultivo en agar suplementado con albmina srica bovina como nica fuente de nitrgeno, seguida de la cuantificacin del halo de hidrlisis alrededor de las colonias. Se determin ndice Prz, relacin entre el dimetro de la colonia y el dimetro de la colonia ms halo de hidrlisis. La actividad hemoltica se evalu en placa de Agar Sabouraud Glucosa suplementado con 5% de sangre de carnero y 3 % de glucosa, seguida de la observacin de la presencia de hemlisis parcial ( hemlisis, con un caracterstico color verdoso) o total ( hemlisis, con halo transparente). En los casos de presencia de hemlisis de procedi a la medicin del dimetro de las colonias y del halo producido por la misma, determinndose el ndice Hz de igual forma que para ndice Prz.

Resultados:
Produccin de proteinasas: Un total de 45 cepas de C. albicans, 2 C. dubliniensis, 2 de C. krusei. 4 de C. parapsilosis mostraron ndice Prz menor a 0,69 (alta actividad proteinasa); por otro lado 10 cepas de C. albicans, 1 de C. dubliniensis, 1 de C. krusei y 1 de C. parapsilosis arrojaron Prz entre 0,70 y 0,80 (actividad moderada de produccin), mientras que en 5 cepas de C. albicans, 1 de C. krusei, 3 de C. parapsilosis y 1 C. tropicalis el ndice Prz fue de 0,81 a 0,9 (baja actividad). El resto de las cepas no presentaron actividad enzimtica (Prz = 1).

Actividad hemoltica: En todos los casos en los que se observ hemlisis a las 24 H, la misma continu, por lo que a las 48 H se evidenci como hemlisis. Un total de 64 cepas de C. albicans, 9 de C. dubliniensis, 4 de C. krusei, 13 de C. parapsilosis y 13 C. tropicalis mostraron ndice Hz menor a 0,69 (mxima actividad hemoltica); 9 aislamientos de C. albicans, 4 de C. krusei, 3 de C. parapsilosis arrojaron Hz entre 0,7 y 0,8 (actividad hemoltica moderada). Finalmente se observ ndice Hz de entre 0,81 y 9,0 (baja actividad) en slo 2 cepas de C. albicans y 2 de C. parapsilosis. El resto de las cepas no tuvieron actividad hemoltica (Hz = 1).

Discusin:
Como puede observarse, una gran proporcin de estas cepas provenientes de pacientes con micosis de localizacin mucosa, arrojaron actividad enzimtica moderada a fuerte. Esto contrasta con estudios previos de nuestro grupo de trabajo en los que, al analizar el comportamiento de cepas de levaduras aisladas de microbiota de individuos sanos, la actividad de enzimas proteinasas y as como de enzimas hemolticas fue significativamente menor. Dado el comportamiento oportunista de estos agentes, es importante el conocimiento precoz de las caractersticas bioqumicas, incluso de las cepas comensales, especialmente en los casos de riesgo aumentado debido a compromiso del sistema inmunolgico.

Bibliografa:
1-ODDS, F (1994): Pathogenesis of Candida infections. J Am Acad Dermatol. 31; S2-S5. 2-Monod M, Tongi G.(2004) Multiplicity of genes encoding secreted proteinases in Candida species. Mol Microbiol 1994;13:357-68 3-Luo G y col. (2001) Candida species exhibit differential in vitro hemolytic activities. J Clin Microbiol 39, 2971-2974. 4-Ombrella A, Ramos L. (2008). Actividades proteinasa y fosfolipasa de aislamientos de especies de Candida. Rev Iberoam Micol; 25: 12-16