Concepto: Tcnica del ADN recombinante o Manipulaciones genticas.
Es la tcnica con que se forman artificialmente combinaciones nuevas de material hereditario (ADN, ARN).
Reigar et al: la define como las manipulaciones genticas (que desvan el ciclo sexual), por medio de las cuales se crea un individuo con combinaciones de propiedades hereditarias.
Enfoque celular: corresponde al cultivo de tejido o cultivos in vitro (Procesos biolgicos realizados fuera del organismo vivo).
Enfoque molecular: comprende la manipulacin del ADN, donde genes especficos pueden insertarse y luego expresarse.
Cultivos de tejido: consiste en cultivar en medios nutritivos adecuados y en forma asptica tejidos o partes de rganos de plantas
Objetivos: Permite realizar estudios bsicos de fisiologa, gentica, bioqumica. Permite incrementar la variabilidad gentica. Se puede obtener plantas libras de patgenos. Propagar plantas. Conservar e intercambiar germoplasma. Micropropagacin: Es la multiplicacin masiva in vitro.
Etapas de la micropropagacin
Establecimiento del cultivo asptico: a) Seleccin del explante. (seccin de tejido u rgano de una planta). b) Desinfeccin (con hipoclorito de Na, Ca, etanol, solucin de Cl). Crecimiento del inculo. El explante se multiplica formando callo o no. Enrraizamiento de brotes y transplante. a) Se trasladan a medios con menor concentracin de sales y menor balance hormonal) b) Se transplantan a recipientes con suelo estril y cubiertos con fundas perforadas.
Ventajas de la micropropagacin: Incremento ascelerado del nmero de plantas derivadas por genotipo. Reduccin del tiempo de manipulacin. Multiplicacin de grandes cantidades de plantas en reas reducidas (a bajo costo). Mayor control de la sanidad del material que se propague. Facilidad de transportar el material in vitro de un lugar a otro. Posibilidad de multiplicar variedades o especies que se encuentren en vas de extinsin.
Factores que influyen en la micropropagacin: Edad fisiolgica de la planta que dona el explante. El explante utilizado. Plantas de reproduccin sexual (partes embrionales o de plntulas). Plantas de reproduccin asexual (brotes jvenes, pices meristemticos). Factores fsicos: Luz (intensidad, fotoperiodo, calidad), Temperatura (entre 24 a 28 oC). Medio de cultivo: composicin qumica y forma fsica. Medio de cultivo: Es un medio de composicin qumica definida. Componentes Sales inorgnicas Compuestos Sacarosa Carbohidratos Fructosa Almidn
Auxinas AIA, AIB Sustancias hormonales Citocininas: zecetina Giberelinas: cido giberelico Vitaminas (tiamina, estimula el proceso de crecimiento especfico) Aminocidos y aminas. Complejos naturales: pulpa de pltano, endospermo de coco, estracto de malta, de levadura, emulsin de pescado, jugo de naranja, de tomate. Materiales inertes o de soporte: (agar, silicagel).
Preparacin del medio de cultivo
Preparacin de la solucin madre. Ajuste del pH. Disolucin del agar y distribucin del medio Esterilizacin del medio de cultivo. Almacenamiento del, medio de cultivo
Calidad fsica del medio de cultivo
Medio gelificante Medio lquido estacionario Medio lquido agitado Cultivo de raz:
Se usa en fisiologa vegetal, conocimientos del metabolismo de los hidratos de carbono, funciones de los minerales, vitaminas, hormonas, as como diferenciacin y desarrollo de races.
Investigaciones realizadas:
Induccin de ndulos por Rhizobium: para entender el proceso de simbiosis entre las bacterias nitrificantes con las plantas superiores (leguminosas).
Cultivo de fitonemtodos parsitos: con el fin de demostrar que Pratylenchus minyus era un patgeno primario y que causa lesiones en las races en ausencia de otros microorganismos.
Cultivos de antera y polen:
Se utilizan para producir plantas haploides, para desarrollar lneas homocigticas para la produccin de hbridos en especies incompatibles entre s.
Factores determinantes de esta tcnica:
Etapa de desarrollo de las anteras al momento del cultivo Condiciones fisiolgicas de las plantas Medio de cultivo Cultivo de callos:
Callo es un tejido obtenido por medio de aislamiento de rganos o tejidos diferenciados, posteriormente son llevados a una diferenciacin celular, estas clulas presentan proliferaciones continuas, aceleradas y de apariencia desorganizada que da origen a una masa amorfa de tejido.
Se usa con fines de estudios de fisiologa vegetal (organognesis y embriognesis), en estudios de gentica (estructuras celulares) y propagacin.
La caracterstica importante de los callos es la totipotencialidad capacidad de sus clulas de desarrollar brotes, races, embriones, etc. Pudiendo llegar a formar plantas completas. Etapas del cultivo de callo:
Induccin: Las clulas del inculo comienzan su crecimiento tanto en nmero como en tamao.
Proliferacin celular: El tejido calloso aumenta su masa celular al mximo.
Induccin de diferenciacin: A partir de la masa celular del callo se obtienen meristemas apicales, radiculares, embriones.
Envejecimiento: prdida de la capacidad de crecimiento acelerado. Aislamiento y fusin de protoplastos: Se usan para el estudio bsico de la embriologa, se usan como explantes tejidos de hojas.
Cultivos de clulas en suspensin: Se obtienen transfiriendo fragmentos de tejidos de callos a medios lquidos en agitacin. Se usan para estudios de embriognesis, crecimiento y diferenciacin, organognesis, ciclo celular, gentica, bioqumica, metabolismo, etc.
Cultivos de meristemos: Se utilizan meristemos apicales. Sirven para propagacin de plantas y para recuperar plantas libres de patgenos.
Cultivos de hojas: se utilizan primordios foliares. Sirven para propagacin masiva. Adaptacin de plantas obtenidas in vitro a condiciones naturales:
Fase de aclimatacin
Fase de invernadero
Fase de campo Insertacin de genes: Es una transformacin de las molculas de ADN dentro de la clula vegetal, sin mediacin de microorganismos.
Transferencia directa de genes: Empleando tcnicas de microinyeccin o biolstica (bombardeo con partculas de oro, con ayuda de un acelerador de partculas).
Transferencia indirecta: Mediante el uso de bacterias (vector). Este mecanismo utiliza las propiedades biolgicas de la bacteria Agrobacterium tumefaciens para introducir el ADN forneo.
Modificacin de plantas transfiriendo indirectamente ADN extrao:
Plantas de tabaco resistentes a insectos: Insertando a las plantas subfragmentos de genes de la bacteria Bacillus thuringiensis que codifican para la deltatoxina
Este nuevo gene fue transmitido como un carcter dominante en la generacin siguiente.
Plantas resistentes a herbicidas: Insertando a plantas el gene del hongo Streptomyces hygroscopicus, que codifica para la enzima fosfinotricina acetil transferasa.