TECNI CAS

HEMATOLOGI CAS
REALI ZACI N Y TI NCI N DEL
FROTI S SANGU NEO
La prctica del frotis sanguneo, tambin
llamado extendido, es de gran importancia en
hematologa ya que el diagnstico de muchas
enfermedades hematolgicas puede realizarse
con slo observar las caractersticas
morfolgicas de las clulas sanguneas, de
manera que ste no debe ser excesivamente
grueso ni excesivamente fino.
Fundamento

Consiste en la
extensin de
una gota de
sangre sobre un
portaobjeto (25
x
75),empleando
el canto
biselado de otro
portaobjeto de
igual
dimensin.




Luego se procede a deslizarla suavemente
hacia el extremo opuesto tratando de arrastrar
la gota en forma constante y uniforme dejando
una pelcula fina de sangre distribuida.

El secado del frotis es a temperatura ambiente
y en posicin horizontal.
COLORACI ONES USADAS
Una vez seco el frotis, se procede a la tincin
hematolgica. Dentro de stas tenemos:

Colorante de Giemsa.
Colorante de Wright.
Colorante de May-Grunwald.
Colorante de Leishman.
Preparacin de colorantes

Para el estudio de las clulas sanguneas utilizar el
colorante Wright y Leishman

Para el estudio de hemoparsitos utilizar el colorante
Giemsa.

Utilizar el colorante May-Grunwald para casos
especiales en que se desee observar con mayor
claridad y especificidad los grnulos de los
neutrofilos.
FUNDAMENTO DE LAS COLORACIONES
Coloracin de los frotis.
Los colorantes cidos se unen a los
componentes bsicos de las clulas
(citoplasma).

Los colorantes bsicos son atrados por
los componentes cidos de la clula
(ncleo).
May Grunwald-Giemsa
La ms usada es la de May Grunwald-Giemsa,
se basa en la propiedad basfila (captar
componentes bsicos) y Acidfila que tienen
los elementos sanguneos.

Esta tincin utiliza azul de metileno como
colorante bsico y eosina como colorante
cido.

Debe realizarse el extendido con una gota
pequea de sangre preferentemente sin
anticoagulante.

El proceso de tincin consta de 3 pasos:

Fijacin del extendido: Utiliza May-
Grunwaldt que es una mezcla de azul de
metileno con metanol. Debe dejarse en
contacto durante 5 minutos.

Enjuague con agua: debe dejarse en contacto
5 min. Tambin puede usarse agua
tamponada o estabilizada.
Tincin con Giemsa: Se utiliza el colorante de
Giemsa con una dilucin 1 en 10 ( 1 ml del
colorante en 10 ml de agua). Cubrir
completamente el extendido y dejar en
contacto durante 15 a 20 min.

Finalmente se hace un enjuague rpido en agua
y se deja secar al aire.

Observar en extendido en 100x (lente con aceite
de inmersin)

TI NCI N CON COLORANTE DE
WRI GHT

FUNDAMENTO
El colorante de Wright va a permitir suministrar
un medio para estudiar la sangre y determinar las
variaciones y anormalidades de estructura, forma
y tamao de los eritrocitos, su contenido de
hemoglobina y sus propiedades de coloracin.
TI NCI ON DE WRI GTH:
Material:

Colorante de Wright (contiene una
mezcla de colorantes rojos y azules)
Rejilla horizontal o cubeta de tincin o
soporte
Agua destilada
TECNI CA
Colocar el frotis secado al aire en una
cubeta de tincin o soporte.
Aadir el colorante gota a gota hasta cubrir
bien la preparacin. Dejar actuar de 2 a 4
minutos.
Aadir igual nmero de gotas de agua
destilada
Dejar actuar de 5 a 6 minutos.
Lavar con agua destilada y dejarlo secar.
se coloca en el
microscopio y con
pequeo aumento
se revisa la calidad
de la coloracin, la
cantidad
aproximada de
glbulos blancos y
se escoge el sitio
para iniciar el
recuento.


Se coloca una gota de aceite, de inmersin y se
pasa a mayor aumento (100x) enfocando
simultneamente.

La forma de los
glbulos rojos se
examinara
detenidamente,
observando adems del
color (cantidad de
hemoglobina).

Se observar la
presencia de Plaquetas,
su agrupacin y
distribucin.


Posteriormente se
hace el recuento
diferencial de
glbulos blancos en
100 clulas y las
diferencias entre
neutrfilos,
eosinfilos,
basfilos, linfocitos y
monocitos.

Hemograma
Es un anlisis de sangre en el que se mide en global y en
porcentajes los tres tipos bsicos de clulas que contiene la
sangre, las denominadas tres series celulares sanguneas:

-) Serie eritrocitaria o serie roja
-) Serie leucocitaria o serie blanca
-) Serie plaquetaria

Cada una de estas series tiene unas funciones
determinadas, y estas funciones se vern perturbadas si
existe alguna alteracin en la cantidad o caractersticas de
las clulas que las componen.
Para que sirve?
Es una prueba que sirve para orientar hacia el
diagnstico de diversas enfermedades que se
han sospechado por la historia clnica y la
exploracin fsica.

A veces, los datos que nos da son suficientes
para confirmar o descartar la enfermedad
sospechada, pero con frecuencia se necesita
utilizar otras pruebas diagnsticas que
aporten ms informacin.
Datos Entregados en el Hemograma
Recuento de plaquetas.
Recuento de leucocitos.
Recuento de eritrocitos.
El hematocrito (Hto).
Hemoglobina (Hb).
Hemoglobina Corpuscular media (H.C.M.).
Concentracin de la HCM (C.H.C.M.).
Volumen Corpuscular medio (V.C.M.).


PARA QUE SE REALI ZA
Los hemates (cantidad) ofrece datos de salud o
la presencia de una anemia.
La concentracin de hemoglobina nos ofrecer
datos complementarios sobre la posible
alteracin del nmero de hemates.
El hematcrito, es el porcentaje de la masa del
eritrocito con relacin al volumen sanguneo.
Con esos datos son calculados los ndices
hematimtricos (VCM, HCM, CHCM). La
alteracin de estos parmetros nos ayudarn a
orientar ciertas alteraciones en
enfermedades.(Diferentes tipos de anemias)
RECUENTO DE PLAQUETAS

Las plaquetas o trombocitos
son pequeos fragmentos
celulares, irregulares, sin
ncleo, de unos 3 um de
dimetro, que se encuentran
en la sangre y que se forman a
partir de un tipo celular
denominado megacariocito.

I MPORTANCI A DE LAS CELULAS
PLAQUETARI AS
Tienen gran importancia en
la coagulacin sangunea
por su capacidad para
agregarse unas con otras
en respuesta a diversos
estmulos.
Son importantes ya que
ayudan a evitar las
hemorragias y forman un
cogulo de sangre cuando
se produce un corte o
ruptura de un vaso
sanguneo.

RECUENTO DE PLAQUETAS
Un recuento sanguneo
puede utilizarse para
determinar muchas
anomalas, ya sea en la
produccin o en la
destruccin de las clulas
sanguneas.
Las variaciones de la
cantidad, tamao o madurez
normal de las clulas
sanguneas pueden
utilizarse para indicar una
infeccin o enfermedad.
MATERI ALES Y REACTI VOS PARA EL
RECUENTO DE PLAQUETAS
Materiales:
Sangre venosa anticoagulada
Pipeta
Hemocitmetro o Cmara de
Neubauer
Capsula petri
Papel filtro hmedo
Microscopio

Reactivos:
Merck art. nro. 1.13795
Nmero de trombocitos 50 ml


PROCEDI MI ENTO
Llenado de la pipeta
Mezclar bien la muestra de sangre
obtenida con el reactivo en la pipeta
durante 5 min.
entremezclar brevemente otra vez.

Llenado de la cmara de recuento
Desechar las 5 primeras gotas del lquido y llenar la cmara
de recuento o de Neubauer y dejar sedimentar unos 15
minutos, efectuar el recuento.
Si es necesario, para la sedimentacin de los componentes
celulares colocar durante 20-30 minutos en una cpsula de
Petri revestida con papel de filtro hmedo.

PROCEDI MI ENTO
Recuento en el microscopio

Hacer el recuento con objetivo 40x
en los 5 cuadrados agrupados de
tamao medio del centro de la
cmara.
Los trombocitos redondos se
reconocen al enfocar por su brillo
sedoso caracterstico.
Las impurezas, que no deben ser
confundidas con los trombocitos
redondos, muestran generalmente
brillo cristalino.

RESULTADOS

Calculo:

N de plaquetas contadas x 1000

Valores de referencia

Adultos/nios/as: 150.000 - 400.000/mm3
Lactantes: 200.000 - 475.000/mm3
Recin nacidos: 150.000 - 300.000/mm3

SI GNI FI CADO DE LOS VALORES
ANORMALES
Si el nmero de plaquetas est por debajo de lo normal
(trombocitopenia), la causa puede ser:

Coagulacin intravascular diseminada (CID)
Anemia hemolitica
Purpura trombocitopenica idiopatica (ITP)
Leucemia
Transfusin masiva de sangre
Vlvula cardaca protsica

SI GNI FI CADO DE LOS VALORES
ANORMALES

Si el nmero de plaquetas es ms alto de lo normal
(trombocitosis), la causa puede ser:

Anemia
Leucemia mieloctica crnica (LMC) temprana
Policitemia vera
Sndrome posesplenectoma
Trombocitosis primaria

RECUENTO DE HEMATI ES
Principio:
La sangre se diluye en un lquido que nos
permite observar claramente los hemates,
luego esta dilucin se coloca en una cmara
de Neubauer con la ayuda de una pipeta
automtica o pipeta Pasteur y se cuentan en el
microscopio a un objetivo de 40x para
calcular el nmero de glbulos rojos por mm3.
Equipos
Microscopio.
Hemocitmetro (cmara de Neubauer)
Materiales y reactivos
Pipeta de glbulos rojos o pipeta automtica (de 0-
100 mL).
Diluyente de glbulos rojos: Citrato de Sodio al
0,9%.
Diluyente de Hayem
Contador manual (slo si fuera necesario)
Papel filtro.
PROCEDIMIENTO
Consiste en hacer el recuento en una dilucin de
sangre entera anticoagulada.
Lquido diluyente: solucin fisiolgica o citrato de
sodio
Introducir la pipeta en el tubo o frasquito
conteniendo diluyente (Hayem)
Se coloca en un rotador automtico o se hace rotar
manualmente de2 a 3 minutos.
Hacer el recuento con objetivo de 40x.
VALORES NORMALES DE LA SERI E
ROJ A
Hemates
Varones adultos: 4.7 - 6.1 millones/mm3
Mujeres adultas: 4.2 - 5.4 millones/mm3
Recin nacidos: 4.8 - 7.1 millones/mm3


DETERMI NACI N DEL VOLUMEN
GLOBULAR (Hematocrito)
El hematocrito (Hto) es la relacin existente
entre el volumen de eritrocitos y el volumen
total de sangre, expresado como porcentaje.

Mtodo de microhematocrito:
Materiales requeridos:
-Capilares rojos y azules (75 mm x 1,5 mm).
-Plastilina.


Procedimiento:
Tomar la muestra en capilares
Ocluir (tapar) un extremo del capilar con
plastilina.
Colocar el capilar sobre la plataforma del
cabezal de una centrfuga de
microhematocrito, con el extremo ocluido
adherido al reborde externo de la plataforma.
Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 - 12
000 rpm.
Resultados (lectura)
La lectura se realiza con una escala estandarizada.

Uso de la escala:
Sostenga el tubo frente a la escala de manera que el
fondo de la columna de eritrocitos (no el extremo
inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel
de la lnea horizontal correspondiente al cero.
Vigile que el fondo de la columna de eritrocitos
contine sobre la lnea cero.
La lnea que pase al nivel del tope de la columna de
eritrocitos indicar la fraccin de volumen de stos
VALORES NORMALES DE HTO
Hematocrito
Varones adultos: 42 - 52%
Mujeres adultas: 37 - 47%
Lactantes - nios: 30 - 43%
Recin nacidos: 44 - 64%
Posible valor crtico: <15%

HEMOGLOBI NA
Es el componente proteico del glbulo rojo
encargado de transportar el O2 y CO2.
Esta formado por una protena (globina) en
un 95% y un ncleo proteico (hem) en
proporcin del 5%
Toda causa que interfiera su sntesis produce
una baja total y da los diferentes tipos de
anemias.
DOSAJ E DE HEMOGLOBI NA
Principio
La sangre se diluye en lquido de Drabkin, el cual
hemoliza los hemates y convierte la hemoglobina en
cianometahemoglobina (cianuro de hemiglobina).

La solucin que se produce se lee por medio de un
espectrofotmetro o fotocolormetro. Su grado de
absorbancia es proporcional a la cantidad de
hemoglobina que contenga la sangre.
Materiales y reactivos
Un espectrofotmetro.
Pipetas: Una pipeta para sangre (pipeta de
Sahli) graduada hasta 0,02 mL, con tubo de
goma y boquilla. Una pipeta de vidrio
graduada de 5 mL.
Tubos de ensayo.
Reactivo de Drabkin para dilucin.
PROCEDI MI ENTO
Colocar en un tubo de ensayo 5 ml de reactivo de
Drabkin
Homogeneizar bien la sangre
Llenar en sangre hasta la marca de la pipeta de Sahli
Dejar Reposar 10 min. Para la formacin de
cianometahemoglobina
leer a 540 nanmetros en el espectrofotmetro contra
un blanco de reactivo.
comparar con la curva calibrada de estndares.
VALORES NORMALES
Hemoglobina
Varones adultos: 14 - 18 g/dl
Mujeres adultas: 12 - 16 g/dl
Lactantes - nios: 11 - 16 g/dl
Recin nacidos: 14 - 24 g/dl

HCM: ndice que traduce el peso promedio de la CHb
que tiene un glbulo rojo.
(Hb) x (10) / (N hemates en millones).
Valores normales: 27-31 picogramos.

CHCM: ndice que mide la concentracin promedio
de la Hb en los glbulos rojos.
(Hb) x (100) / (hematocrito) = %
Valores normales: 32-36%

VCM : ndice q describe el tamao del glbulo rojo.
Es el mejor ndice para clasificar el tipo de anemia
(Hematocrito) x (10) / (N hemates en millones)
Valores normales: 84-95 femto litros



Alteraciones en la Morfologa de los Eritrocitos

TAMAO
Anisocitosis Diferentes tamaos.
Microcitosis Menor tamao.
Macrocitosis Mayor tamao.
Megalocitosis Grandes y ovalados.

COLORACION
Hipocroma C.H.C.M. disminuida 30%
Hipercroma Esferocito,Hb concentrada
Factores que Interfieren en los Resultados

Serie Eritrocitaria o Serie roja:

-Alteracin en el tamao de los hemates.
-Un nmero muy alto de leucocitos.
-Aumento de la cantidad de agua en la sangre
(hemodilucion)
-Prdida de agua del organismo
(Deshidratacin)
-Embarazo - hemodilucin.
-Hemorragia inmediatamente previa a la
prueba.
-Medicamentos.

RECUENTO DE GLOBULOS
BLANCOS
Los glbulos blancos o leucocitos son los
encargados de las defensas de la
persona, por ello en cuadros de infeccin
estn aumentados, o en ciertas
enfermedades estn disminuidos.

RECUENTO DE LEUCOCITOS
Principio:
La sangre anticoagulada se deposita en un
lquido que permite evidenciar los leucocitos,
mantenindolos visibles, mientras que los
eritrocitos son hemolizados.

El recuento del nmero de leucocitos o
glbulos blancos se ex-presa por mm3.
Equipos
Microscopio.
Hemocitmetro (Cmara de Neubauer).

Materiales y reactivos:
Pipeta de glbulos blancos o pipeta automtica
(de 0 a 100 mL)
Diluyente de glbulos blancos: Solucin de
Turk al 1%
Contador manual (Slo si fuera necesario).
Papel filtro.
PROCEDIMIENTO
Una vez obtenida la sangre con anticoagulante
se procede a aspirar la sangre con la pipeta de
glbulos blancos hasta la marca de 0,5.
Introducir la pipeta en el tubo que contenga
solucin de Turk y absorber (no debe haber
burbujas).
Tapar ambos extremos y proceder a mezclar
manualmente o en un rotador automtico por 2
3 minutos.
Monte la laminilla de vidrio en la cmara para
recuento.
Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras
gotas para luego colocar una gota pequea de
esta solucin en la cmara.
Deje reposar por espacio de 3 minutos para
que las clulas se sedimenten.
Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4
cuadrados grandes angulares.

Leucocitos totales
Adultos/nios > 2 aos: 5.000 - 10.000/mm3
Nios < 2 aos: 6.200 - 17.000/mm3
Recin nacidos: 9.000 - 30.000/mm3

Neutrfilos o segmentados: 55 - 70%
Linfocitos: 20 -40%
Monocitos: 2- 8%
Eosinfilos: 1 -4%
Basfilos: 0.5- 1%

AUMENTO EN EL NUMERO DE LEUCOCITOS
1.- Leucocitosis Aumento del n de leucocitos.
Infecciones bacterianas
Inflamaciones.
Cnceres.
Quemaduras.
Infarto al miocardio.

2.- Leucopenias Reduccin del n de leucocitos.
Enfermedades virales.
Tuberculosis.
Fiebre tifoidea.
SIDA
Hepatitis.
ALTERACIONES EN LOS EOSINOFILOS
3.-Eosinofilia Aumento de eosinfilos.
Infecciones parasitarias.
Reacciones Alrgicas.
Triquinosis (parasitosis tisular).
Drogas.

4.-Eosinopenia Disminucin de eosinfilos.
Infecciones bacterianas.
Infecciones virales.
Stress traumtico, fsico, emotivo.
Tratamiento con Adrenalina
ALTERACION DE BASOFILOS Y MONOCITOS
5.-Basofilia Aumento de basfilos.
Leucemia.
Sinusitis crnica.
Coexiste con eosinofilia en alergias.

6.-Monocitosis Aumento De monocitos.
TBC
Leucemias.
Infecciones virales y protozoarias.

Alteraciones en el Nro de linfocitos
7.-Linfocitosis - Aumento de linfocitos por
Enfermedades virales, como: varicela, mononucleosis
infecciosa, parotiditis, hepatitis, TBC.
Inflamacin.

8.-Linfopenia - Disminucin de linfocitos por:
Anemias aplsicas.
Terapia con esteroides.
Quimioterapias.
Inmudeficiencias (SIDA).
Alteraciones en el numero de neutrofilos
9.-Neutrofilia - Aumento de neutrfilos.
Infecciones Bacterianas Agudas.
Comienzo de infecciones virales.
Quemaduras.

10.-Neutropenia - Disminucin de
neutrfilos.
Anemia perniciosa o aplsica.

I MPEDANCI A
Es un autoanalizador
hematolgico que ha
contribuido de manera
decisiva al aumento de
la rapidez y la fiabilidad
del recuento de las
clulas sanguneas.
Se basa en la propiedad
de las clulas sanguneas
de no conducir la
electricidad.

Informa resultados numricos y tres
grficos de histogramas: glbulos blancos,
glbulos rojos y plaquetas.

Para la deteccin de Hemoglobina utiliza
un reactivo libre de cianuro que no
contamina el ambiente y posee alta
precisin

Perfil hematolgico: 18 parmetros

Recuento de Glbulos blancos y glbulos rojos
Hemoglobina
Hematocrito
Volumen Corpuscular medio
Hemoglobina corpuscular media
Concent.de hemoglobina corpuscular media
Plaquetas
Porcentaje y valor absoluto de Linfocitos
Porcentaje y valor absoluto de Neutrfilos
Ancho de distribucin de plaquetas (PDW)
Volumen plaquetario medio (MPV)
Porcentaje de macroplaquetas (P-LCR)

CI TOMETRI A DE FLUJ O
FLUORESCENTE
Es una tcnica de anlisis celular multiparametrico cuyo
fundamento se basa en hacer pasar una suspensin de
partculas (generalmente clulas) alineadas y de una en
una por delante de un haz de lser focalizado.

En hematologa es de primordial importancia la
utilizacin de la citometra de flujo pues permite realizar
el diagnstico diferenciales y factores pronsticos as
como tambin tipificacin y conteo de clulas ,
reticulocitos y anlisis de medula sea .
La citometra de flujo es
una tecnologa (proceso)
que permite la medida
simultnea de mltiples
caractersticas fsicas de
una sola clula.

Estas medidas son
realizadas mientras las
clulas (partculas) pasan
en fila, a una velocidad
de 500 a 4000 clulas
por segundo, a travs del
aparato de medida en
una corriente de fluido.