Extraccin del ADN

Original de Essy Levy, M.S. y Julie Mathern

Alianza para el Aprendizaje de Ciencias y Matemticas (AlACiMa)

Relevancia
del
Aislamiento
del ADN
La extraccin de ADN es el primer
paso en la tecnologa del ADN.
Determinacin del er!il de ADN
"l#nacin
Diagnstic# de en!ermedades
Determinacin de secuencias de ADN
$rans!erencia g%nica& Organism#s M#di!icad#s
'en%ticamente (OM'), agricultura,
!armac%utica
*rue+as am+ientales, +i#terr#rism#
Cules son las estructuras de una clula?

Tipos de
Clulas

Tipos de
Clulas

Tipos de
Clulas

Resumen
del
Protocolo:
Extraccin
de ADN
enmico
Utilizacin de agua como enjuague para la
recogida de las clulas bucales
A,adir el +-!er de lisis ara r#mer las
mem+ranas nucleares y celulares y li+erar el
c#ntenid# nuclear
Utilizacin de la proteasa para digerir las
protenas celulares
Precipitacin del ADN con alcohol ro ! alta
concentracin de sal.

"xtraccin
de ADN :
Paso!a!
Paso

Puesto com#n $Puesto del %aestro&
Bao a 50
0
C
Botella de isopropanol 91% o etanol 95%, en hielo
Puesto de trabajo de los alumnos
N#mero
(. Estudiantes/*uest# de tra+a0# )
Tubos de15 ml con 3 ml de agua 4
icrotubo rosa marcado !prot",
con 1#$5 ml de proteasa rehidratada con sal 1
Tubo de 15 ml tubo marcado !lisis" con 10 ml de b%&er de 1
'ipetas de pl(stico )
*radilla de hule espuma para los tubos 1
arcador de tinta indeleble 1
Ta+a de papel dispensable o un bea,er para sostener los 1
tubos de 15 ml - la subsiguiente colecci.n de basura
ateriales para hacer el collar de /01 o un micortubo de1#5ml 1
Gua rpida 1
"xtraccin !
Precipitacin
de ADN
Listado de
%ateriales
. Estudiantes/*uest# de
tra+a0# ara un t#tal de
12 Estudiantes

Es de vital
im#rtancia
reali3ar una
a+undante
rec#gida de
c%lulas.
*ara me0#res resultad#s, aseg-rese 4ue
l#s alumn#s emleen la su!iciente
cantidad de tiem# rec#giend# las
c%lulas de la muc#sa +ucal.
*ueda 4ue la c#leccin de muestra en el
tu+# de 56 mL sea di!7cil. *uede utili3ar
un vas# e4ue,# ara disensar y
c#lecci#nar la muestra.

Protocolo de
Prctica de
"a#oratorio
5. O+tenga del instruct#r un tu+# de 56 mL 4ue
c#ntenga 1 ml de agua. Mar4ue el tu+# c#n sus
iniciales.
8. "uidad#samente m#rdis4uee el interi#r de l#s
cachetes #r 19 segund#s. :N# sirve de nada
sacar sangre;
1. $#me el agua del tu+# de56 mL, y c#n el agua
en0uague #r 19 segund#s.
.. "uidad#samente escua el li4uid# de regres# al
tu+# de 56 mL.
Pasos $ % &

Protocolo de
Prctica de
"a#oratorio
6. O+tenga el tu+# de +-!er de lisis del uest# de
tra+a0# y a,ade 8 mL de +-!er de lisis a su tu+#
4ue c#ntiene el extract# celular.
2. "ierre el tu+# e invi%rtal# suavemente ara
me3clar l#s c#m#nentes. (:N# l# me3cle muy
dur#;). O+serve su tu+# < =>e algun#s
cam+i#s? Antel#s.
Pasos ' % (

Protocolo de
Prctica de
"a#oratorio
@. O+tenga el tu+# de r#teasa
(marcad# Ar#tB) de su uest#
de tra+a0#. A,ade 6 g#tas de
r#teasa a su tu+#.
C. "ierre el tu+# y v#lt%el#
suavemente varias veces.
D. "#l#4ue su tu+# en la gradilla #
en un +eaEer en el +a,# de
agua y d%0el# incu+ar #r 59
minut#s a 69F".
Pasos ) % *

"xtraccin !
precipitacin
de ADN
Por +u se lleva a ca#o
cada paso?

$, 'oleccin
de clulas
El m#rdis4ue# del
interi#r de la +#ca, en
c#m+inacin c#n el
en0uague de agua
!unci#na ara searar
las c%lulas del eiteli#
alineand# la +#ca.
Es cr7tic# rec#ger la
cantidad su!iciente de
c%lulas.

-, ./0er de
"isis
1u es el ./0er de
"isis?
69 mM $risGH"I, H C.9
5J SDS
K-!er deTris ara
mantener el H de la
s#lucin en el cual ADN se
mantiene esta+le
$2 3D3 ara r#mer y
a+rir las mem+ranas
celulares y nucleares
ermitiend# 4ue el ADN
4uede li+re en la s#lucin.
El detergente SDS
desnaturali3a y desd#+la
las r#te7nas de0Lnd#las
accesi+les ara las
r#teasas.
O
S
O
O
O
G
"H
8
"H
8
"H
8
"H
8
"H
8
"H
8
"H
8
"H
8
"H
8
"H
8
"H
8
"H
1
SDS
Na
M

4, Por +u
utili5amos la
proteasa?
La r#teasa se utili3a ara destruir las
r#te7nas nucleares 4ue crean un enlace
c#n el ADN y ara destruir en3imas
cit#lasmLticas 4ue degradan y
destruyen el ADN.
El tratamient# c#n r#teasa incrementa
la cantidad de ADN intact# 4ue es
extra7d#.

&, Adicin de
la solucin
salina La s#lucin de r#teasa ya c#ntiene sal.
L#s i#nes de Na
M
del Na"I !#rman enlaces
c#n l#s gru#s de !#s!at# de las
m#l%culas de ADN, neutrali3and# las
cargas el%ctricas del ADN.
La adicin de Na"I ermite 4ue las
m#l%culas de ADN se 0unten en lugar de
reelerse una a la #tra. De esta manera
se !acilita la reciitacin del ADN de la
s#lucin al a,adir el alc#h#l.

Na
M
NaM
NaM
NaM
O
"H
8
O
* O
O
O
Kase
"H
8
O
*
O
O
O
Kase
OH
A3-car
A3-car
O
"a
Estructura
del ADN
3lo se
muestra una
cadena de
ADN,

', Precipitacin
del ADN con
alcohol ro
El ADN n# se disuelve en alc#h#l.
El a,adir alc#h#l hace 4ue el ADN se agregue y
se reciite de la s#lucin.
Las m#l%culas del ADN reciitadas arecen un
material !i+r#s#, c#m# l#s hil#s +lanc#s de una
telara,a.
Las +ur+u0as micr#scicas de #x7gen#, 4ue se
generan al me3clar, se AagreganB al reciitarse
el ADN.
Las +ur+u0as visi+les mLs grandes, levantan el
ADN !uera de la s#lucin y l# llevan de la !ase
acu#sa a la !ase #rgLnica (!ase del alc#h#l).

Protocolo de
Prctica de
"a#oratorio
59. Lentamente a,ade 59 ml de alc#h#l !ri
manteniend# el tu+# a un Lngul# de .6F. Este as#
va a re4uerir de varias adici#nes utili3and# la
ieta de trans!erencia desecha+le.
55. De0e el tu+# en #sicin vertical en la gradilla, a
temeratura am+iente y en re#s#, durante 6
minut#s =Que ve?
58. "ierre el tu+# y v#lt%el# de lad# y de regres# en
#sicin vertical, c#n much# cuidad#, unas 59
veces, hasta 4ue las !ases de agua y alc#h#l
4ueden me3cladas y el ADN salga de s#lucin.
Pasos $6 % $-

Preparacin
de los
tapones para
los collares
5. Nemueva el tan de lLstic# del !rasc# de
vidri#.
8. Nec#rte las A#re0asB de d#s lad#s del tan de
lLstic#.
1. Negr%sel# al !rasc# ara crear l#s c#llares mLs
tarde.
=*#r4ue?
*ara 4ue el tan n# cree una +#lsa de aire
4ue revenga 4ue el !rasc# 4uede
c#rrectamente cerrad#

Preservando
la muestra
de ADN:
Preparacin
del collar de
ADN
5. Otili3and# una ieta desecha+le, trans!iera
las !i+ras de ADN 4ue ha extra7d# al e4ue,#
!rasc# de vidri#.
P $rans!iera la may#r cantidad de ADN c#n
la men#r cantidad de alc#h#l #si+le.
P El !rasc# se de+e rellenar de0and# #r l#
men#s 8 mm de esaci# su!iciente ara el
tan de lLstic#.

Preservando
la muestra
de ADN:
Preparacin
del collar de
ADN
8. Intr#du3ca el tan de lLstic# rec#rtad# en el
cuell# del !rasc# y resi#ne c#n !irme3a ara
cerrarl#
1. Deslice el c#rdn encerad# a trav%s del tan de
lata
.. Ali4ue una e4ue,a g#ta de egament# en el
interi#r del tan de lata.

Preservando
la muestra
de ADN:
Preparacin
del collar de
ADN
6. "#l#4ue el tan de lata s#+re la +#ca
del !ras4uit# y resi#ne c#n !irme3a
durante 19 segund#s. De0e 4ue el
egament# se se4ue durante 59G56
minut#s y desu%s c#mrue+e 4ue el
!ras4uit# estL c#mletamente sellad#.
2. "uand# el egament# se haya secad#, ate
el c#rdn encerad#.

enes en
un 7rasco
87elicidades9
8:as creado un collar con tu propio
ADN9

Cunto
tiempo
dura el
collar de
ADN?
El ADN puede durar
a;os en el 0ras+uito
de vidrio, Con el
tiempo puede a;adir
ms alco<ol si la
cantidad ori=inal se
<a evaporado

enes en un
7rasco
Componentes
del >it
DNA Extraction
?odule (522G8999EDO)&
(contains enough material for 36 students)
Lysis +u!!er, 569 ml
*#Qdered r#tease M salt, 5.6 g
56 ml tu+es, 69
"lear, !liGt# micr#tu+es, 29
Multic#l#r, !liGt# micr#tu+es, 29
Dis#sa+le lastic trans!er iets, 29
R#am micr#tu+e h#lders, 59
"urriculum, including a teacherSs
guide, a grahic 4uicE guide, and
searate student instructi#ns !#r
+asic and advancedGlevel instructi#n
DNA Nec>lace
?odule (522G8899EDO)&
(contains enough material for 18 DNA
necklaces; order modules for a
classroom of 36 students)
'lass vials, 5C
Silver cas, 5C
*lastic lugs, 5C
Taxed string, 5C
Suer glue gel, 5 tu+e
Instructi#n manual
Re+uired Accessories Not
@ncluded in Ait:
D5J is#r#an#l (availa+le !r#m
drugst#res) #r D6J ethan#l, 129 ml
"#ntainer #! ice, 5
*ermanent marEer, 5PC
Recommended BCptionalD
Accessories:
Tater +ath Qith therm#meter
522G969.EDO
B$((!-466EDED
Materiales ara 12
Estudiantes
A#ove Ait Contains:
(5) DNA Extracti#n
M#dule (522G8999EDO)
(8) DNA NecElace
M#dules (522G8899EDO)