Professional Documents
Culture Documents
THÖÏC VAÄT
(PLANT BIOTECHNOLOGY)
I. KHAÙI QUAÙT VEÀ COÂNG NGHEÄ SINH
HOÏC TV
II. NUOÂI CAÁY MOÂ & CÔ QUAN THÖÏC
VAÄT
III. CAÙC ÖÙNG DUÏNG NUOÂI CAÁY TEÁ
BAØO
IV. NUOÂI TEÁ BAØO THÖÏC VAÄT
V. CHOÏN GIOÁNG DÖÏA VAØO COÂNG
NGHEÄ TEÁ BAØO
I. KHAÙI QUAÙT VEÀ COÂNG NGHEÄ
SINH HOÏC TV
1. LÒCH SÖÛ CUÛA NUOÂI CAÁY MOÂ
THÖÏC VAÄT
-1937, Gautheret nuoâi thaønh coâng moâ teá baøo
caøroát.
-1941, Overbeck chöùng minh taùc duïng kích
thích sinh tröôûng cuûa nöôùc döøa trong nuoâi
caáy phoâi caây hoï caø
-1941, Overbeck chöùng minh taùc duïng kích
thích sinh tröôûng cuûa nöôùc döøa trong nuoâi
caáy phoâi caây hoï caø
-1957, Skoog vaø Miller : aûnh höôûng cuûa kinetin/auxin
ñoái vôùi söï hình thaønh cô quan cuûa moâ seïo thuoác
laù.
-1954-1959, KT taùch vaø nuoâi caáy teá baøo ñôn.
-1960, duøng cellulase taïo protoplast.
-1966, caây ñôn boäi töø nuoâi caáy tuùi phaán.
-1970, taïo caây hoaøn chænh töø protoplast.
-1980-1992, thaønh töïu môùi coâng ngheä gen thöïc vaät.
- 1995 ñeán nay : söï phaùt trieån nhanh sinh vaät bieán
vitro
c) Thöù ba, khai thaùc caùc
hoaù chaát baèng nuoâi teá baøo
ñôn
a) Thöù nhaát, vi nhaân gioáng
(micropropagation)
– Thöïc hieän trong phoøng thí nghieäm vôùi caùc chuaån
möïc oån ñònh, khoâng chòu aûnh höôûng dao ñoäng thaát
thöôøng cuûa thôøi tieát vaø khoâng phuï thuoäc muøa vuï.
Coù theå chuû ñoäng saûn xuaát gioáng ñoùn ñaàu muøa
vuï.
– Sinh saûn voâ tính taïo ra soá lôùn caây gioáng con giöõ
nguyeân caùc ñaëc tính toát nhö caây goác ban ñaàu ñaõ
löïa choïn cho naêng suaát toát vaø chuùng coù söï ñoàng
ñeàu cao, thuaän tieän cho thu hoaïch vaø cheá bieán ôû
quy moâ coâng nghieäp.
– Heä soá nhaân gioáng cao, toác ñoä taêng tröôûng nhanh
vaø ruùt ngaén thôøi gian ra hoa quaû vôùi nhöõng caây
laâu naêm.
b) Thöù hai, choïn gioáng in vitro döïa
treân caùc coâng ngheä teá baøo :
– Ruùt ngaén thôøi gian nhieàu naêm vaø ñöa nhieàu
thöû nghieäm ñoàng ruoäng vaøo PTN hoaëc nhaø
kính nhö choïn caùc doøng khaùng virus, chòu laïnh,...
– Söû duïng caùc biomarker saøn loïc nhanh caùc tính
traïng töø boä söu taäp gioáng vaø caùc caây lai maø
khoûi maát thôøi gian chôø caây moïc töø haït.
– Caùc caây löôõng boäi (2n) thuaàn chuûng seõ thu
ñöôïc nhôø ña boäi hoaù doøng ñôn boäi öu vieät
nhaän ñöôïc qua saøng loïc.
– Taän duïng gen im laëng thöôøng khoâng bieåu hieän
trong töï nhieân.
c) Thöù ba, khai thaùc caùc hoaù
chaát baèng nuoâi teá baøo ñôn
– Saûn xuaát chuû ñoäng vaø lieân tuïc trong phoøng thí
nghieäm, khoâng phuï thuoäc ñieàu kieän töï nhieân vaø muøa
vuï. Khai thaùc caùc chaát baèng sinh toång hôïp cuûa thöïc vaät
thay cho toång hôïp hoaù hoïc. Nhieàu hôïp chaát phöùc taïp
nhaän ñöôïc töø sinh toång hôïp cuûa caùc teá baøo thöïc vaät
ñöôïc nuoâi.
– Choïn doøng teá baøo saûn sinh caùc chaát vôùi naêng suaát
cao vöôït troäi so vôùi caây töï nhieân vaø thôøi gian saûn xuaát
nhanh hôn.
– Thu nhaän nhieàu chaát quyù hieám maø toång hôïp hoaù hoïc
ñaét giaù ; baûn thaân caây ñoù taêng tröôûng chaäm, sinh saûn
khoù khaên thì nhaân gioáng nuoâi caáy moâ vaø khoáng cheá
taïo moâ (nhö reã) seõ saûn sinh nhieàu chaát ñoù.
– Chuyeån hoaù sinh hoïc coù theå thöïc hieän nhôø teá baøo
ñôn hay teá baøo ñöôïc coá ñònh.
3. Vai troø cuûa CNSH TV trong töông lai
Trong 50 naêm qua, nhôø caùch maïng xanh vaø nhöõng
tieán boä cuûa CNSH TV, saûn xuaát löông thöïc ñaõ
taêng nhanh kòp ñaø buøng noå daân soá vaø ñaûm baûo
ñuû nhu caàu löông thöïc, maëc duø vaãn coøn naïn ñoùi.
Noâng nghieäp hieän ñaïi vaãn phaûi tieáp tuïc ñaûm
baûo an toaøn löông thöïc trong theá kæ XXI, nhöng
ñoàng thôøi phaûi gia taêng chaát löôïng saûn phaåm vaø
troàng troït caàn ñaùp öùng nhu caàu lôùn hôn cho chaên
nuoâi.
Ñeå thöïc hieän nhöõng nhieäm vuï treân, CNSH TV phaûi
giaûi quyeát haøng loaït vaán ñeà nhö : choïn gioáng coù
chaát löôïng thöïc phaåm toát, thích nghi vôùi nhöõng
ñieàu kieän khaùc nhau ; bieän phaùp choáng saâu beänh,
coû daïi ; phaùt trieån neàn noâng nghieäp saïch vaø
“xanh hôn” (greener agriculture).
Naêm 2001, hôn 5,5 trieäu nhaø noâng canh taùc
khoaûng 52,6 trieäu ha caây troàng bieán ñoåi
gen (GMO). Lieäu ñaây coù phaûi laø xu höôùng
phaùt trieån taát yeáu khoâng, khi maø vaán ñeà
GMO ñang tranh caõi gay gaét ?
Ngoaøi nhöõng nhieäm vuï truyeàn thoáng coù
töø nhieàu thieân nieân kæ vöøa neâu treân,
CNSH TV coøn phaûi gaùnh vaùc caùc ngaønh
saûn xuaát môùi vôùi caùc muïc tieâu :
– Taêng sinh khoái ñeå saûn xuaát naêng löôïng
thay theá nguoàn daàu moû.
– Phaùt trieån hoaù hoïc xanh ñeå moät maët
cung caáp sinh khoái cho saûn xuaát hoaù chaát,
maët khaùc phaûi bieán thöïc vaät thaønh nhaø
maùy hoaù chaát.
II. NUOÂI CAÁY MOÂ VAØ CÔ
QUAN THÖÏCVAÄT
Do teá baøo thöïc vaät coù tính toaøn theá
(totipotency), neân deã nuoâi caáy hôn so vôùi teá
baøo ñoäng vaät.
Ví duï, moâ ôû ñænh sinh tröôûng hay choùp reã
qua nuoâi caáy seõ taêng tröôûng thaønh caây ñeán
ra hoa, taïo haït.
Ñeå nuoâi caáy moâ thöïc vaät (NCMTV) coù hieäu
quaû caàn thaønh thaïo caùc kó thuaät voâ truøng,
bieát caùch pha cheá moâi tröôøng thích hôïp vaø
keøm theo laø caùc duïng cuï trang thieát bò töông
öùng.
1. Moâi tröôøng nuoâi caáy teá baøo
thöïc vaät
– Caùc chaát voâ cô ña löôïng : N (NO3 vaø
NH4), P, K, S, Ca vaø Mg.
– Caùc nguyeân toá vi löôïng : Fe, Mn, Zn,
Br, Cu, Co vaø Mo.
– Caùc vitamin : nhieàu loaïi (nicotinic acid,
biotin,...) maø quan troïng nhaát laø
thiamine (vitamin B1) döôùi daïng
thiamine-HCl.
– Nguoàn carbon : sucrose hoaëc glucose.
– Caùc chaát ñieàu hoaø taêng tröôûng thöïc
vaät : Caùc auxin vaø cytokinin kích thích söï
phaân baøo, kieåm soaùt söï bieät hoaù teá baøo
vaø phaùt sinh hình thaùi. Caùc auxin thöôøng
duøng : 2,4-D (2,4-Dichlorophenoxyacetic acid),
IAA (indole 3-acetic acid), IBA (indole 3-butyric
acid). Caùc cytokinin coù BAP (6-
benzylaminopurine), zea (zeatin),… Ngoaøi ra
coøn coù GA (gibberillic acid) vaø ABA (abscisic
acid).
Agar söû duïng cho moâi tröôøng ñaëc. Heä
thoáng chieáu saùng hôïp lí caàn cho söï phaùt
2. Maãu duøng cho nuoâi caáy
moâ
Noùi chung, gaàn nhö taát caû caùc phaàn cuûa
caây töôi ñeàu coù theå duøng laøm maãu ñeå
nuoâi caáy moâ nhö reã, laù vaø thaân hay phaán
hoa, noaõn, thòt laù laø caùc kieåu moâ chuyeân
bieät. Tuyø theo muïc ñích nghieân cöùu maø
choïn maãu töông öùng
Tuy nhieân, nguyeân taéc caên baûn laø maãu caáy
phaûi chöùa caùc teá baøo soáng töø caùc moâ non
coù caùc teá baøo ñang phaân chia maïnh chieám
tæ leä lôùn, nhaát laø deã taïo moâ seïo. Dó nhieân
laø caây goác phaûi coù phaåm chaát toát, naêng
suaát cao vaø khoâng coù daáu hieäu beänh cuõng
nhö ñang khoâng ôû traïng thaùi nguû
(dormancy).
Maãu caáy phaûi ñöôïc voâ truøng khi ñöa vaøo
moâi tröôøng nuoâi.
Maãu voâ truøng coù theå thu ñöôïc theo 2
caùch :
– Töø haït : Khöû truøng beà maët haït vaø gieo
haït vaøo ñieàu kieän voâ truøng ñeå moïc
thaønh caây vaø laáy maãu.
– Maãu caáy : Maãu laáy tröïc tieáp töø caây töôi
ñöôïc xöû lí baèng ngaâm trong dung dòch chaát
saùt truøng, maø chaát thöôøng duøng laø
sodium hypochlorite (5 – 20%). Noàng ñoä vaø
3. Nuoâi caáy moâ phaân sinh
Maãu cho nuoâi caáy coù nhieàu loaïi,
nhöng thöôøng duøng laø ñænh sinh
tröôûng (meristem).
Coâng vieäc tieán haønh theo trình
Hình 9.10. Sô ñoà toùm taét caùc khaû naêng taùi sinh khaùc nhau trong nuoâi teá
baøo
Moät ví duï minh hoïa roõ öùng duïng
cuûa caùc phöông phaùp naøy laø vieäc
nuoâi reã nhaân saâm caáy moâ. Caây
nhaân saâm (Penax ginseng) taïo chaát
saâm saponin chuû yeáu ôû reã. Duøng
nuoâi caáy moâ cho nhieàu auxin kích
thích taïo reã thu ñöôïc nhieàu saponin
vôùi thôøi gian nhanh hôn nhieàu so vôùi
troàng töï nhieân (hình 9.11).
Hình
9.11.
Nuoâi caáy
moâ reã
nhaân
saâm
trong
bioreactor
7. Nuoâi bao phaán (Anther) vaø haït
phaán (pollen)
Caùc haït phaán laø nhöõng teá baøo maø söï
phaùt trieån bình thöôøng daãn ñeán hình
thaønh oáng phaán vaø caùc giao töû ñöïc. Khi
ñaët treân moâi tröôøng thích hôïp, phaàn lôùn
haït phaán seõ phaùt trieån theo loái bình
thöôøng, nhöng moät soá ít haït phaán seõ taïo
moâ seïo. Thay vì nuoâi haït phaán rieâng leû
coù theå nuoâi caùc bao phaán nguyeân chöùa
caùc haït phaán ñang phaùt trieån (hình 9.9),
vaø caùch naøy daãn ñeán söï hình thaønh phoâi
soma tröïc tieáp töø haït phaán.
Caùc phoâi naøy ñöôïc kích thích coù
theå taïo ra nguyeân caây ñôn boäi. Söû
duïng caùc ñieàu kieän thích hôïp coù
theå nhaän ñöôïc haøng traêm caây ñôn
boäi töø moät bao phaán. Nuoâi caùc teá
baøo phoâi soma thì seõ nhaän ñöôïc caây
ñôn boäi neáu khoâng thì cuõng hình
thaønh caùc moâ seïo. Vieäc nuoâi teá
baøo ñôn boäi naøy giuùp ích nhieàu cho
coâng taùc choïn gioáng.
III CAÙC ÖÙNG DUÏNG CUÛA
NUOÂI CAÁY MOÂ TEÁ BAØO
1. Nhaân gioáng voâ tính quy moâ lôùn
Vi nhaân gioáng ñaõ ñöôïc öùng duïng roäng raõi
vôùi quy moâ lôùn, thaäm chí laø saûn xuaát coâng
nghieäp. Kieåu nhaân gioáng naøy öu vieät hôn so
vôùi nhaân gioáng baèng haït hoaêïc baèng cô quan
dinh döôõng nhö choài hay moät ñoaïn thaân.
Vi nhaân gioáng coù theå thöïc hieän theo caùch
Caây con
caây tröôûng thaønh
10 maàm nuoâi caáy
coá ñònh
Coá ñònh teá baøo thöïc vaät ñöôïc moâ taû laàn
ñaàu tieân naêm 1979.
Noù höùa heïn khaéc phuïc nhieàu khuyeát
ñieåm cuûa nuoâi teá baøo nhö : söï baát oån
ñònh cuûa teá baøo, tæ leä taêng tröôûng
thaáp,…
Tuy nhieân, öùng duïng cuûa caùc teá baøo coá
ñònh vaãn coøn nhieàu haïn cheá. Bôûi leõ,
trong quaù trình toång hôïp, moät soá chaát bò
baøi tieát khoûi teá baøo.
Ñaõ coù quan saùt vaø theo doõi quaù trình
chuyeån hoaù codeinone thaønh codeine, moät
loaïi thuoác quan troïng do teá baøo Papaver
somniferum nhoát trong alginate
Yamada ñaõ khaùm phaù khaû naêng taïo
biotin cuûa teá baøo hoï Lanvandula vera.
Ngoaøi enzyme, teá baøo vi sinh vaät, teá baøo
ñoäng vaät, teá baøo thöïc vaät cuõng laø moät
trong nhöõng chaát xuùc taùc sinh hoïc quan
troïng.
V. CHOÏN GIOÁNG DÖÏA VAØO
COÂNG NGHEÄ TEÁ BAØO
1. Bieán dò doøng soma (Somaclonal variation)
Khi nuoâi caáy moâ teá baøo thöïc vaät treân moâi
Baûng 9.5. Doanh soá baùn haït gioáng bieán ñoåi gen treân toaøn caàu
Naêm 2002 laàn ñaàu tieân doanh soá vöôït quaù 4 tæ USD :
ñaäu töông bieán ñoåi gen chieám 2,34 tæ USD, boâng bieán
ñoåi gen ñaït 849 trieäu USD, ngoâ bieán ñoåi gen ñaït 658
trieäu USD vaø caûi daàu bieán ñoåi gen ñaït 220 trieäu USD
Öôùc tính naêm 2001, haït gioáng bieán ñoåi gen chieám
khoaûng 13% trong toång thò tröôøng haït gioáng toaøn
caàu trò giaù laø 30 tæ USD. Naêm 2003, trò giaù thò
tröôøng caây troàng bieán ñoåi gen treân toaøn caàu öôùc
tính ñaït töø 4,5 tôùi 4,75 tæ USD, taêng so vôùi con soá 4 tæ
USD naêm 2002, chieám 15% trong toång trò giaù 31 tæ
USD thò tröôøng baûo veä caây troàng treân toaøn caàu vaø
chieám 13% trong toång trò giaù 30 tæ USD thò tröôøng haït
gioáng toaøn caàu. Giaù trò thò tröôøng caây troàng GMO
treân toaøn caàu döï kieán ñaït 5 tæ USD hoaëc hôn theá
nöõa vaøo naêm 2005.
3. Nhöõng baøn caõi veà GMO
Moät soá nöôùc nhö Mó, Canada, Argentina,… vaø
nhöõng taäp ñoaøn khoång loà saûn xuaát gioáng caây
troàng nhö Monsanto, Arventis, du Pont,… ñaõ ca
ngôïi nhieàu ñaëc tính öu vieät, an toaøn thöïc phaåm
vaø moâi sinh cuûa caùc caây GMO nhö vöøa neâu
treân. Coù theå noùi, chöa bao giôø caùc caây troàng
ñöôïc nghieân cöùu kiõ ôû nhieàu khía caïnh (moâi
sinh, an toaøn thöïc phaåm) nhö ñoái vôùi caùc GMO.
Quaû thaät, neáu ñöôïc öùng duïng roäng raõi thì caùc
caây GMO khoâng nhöõng laøm taêng voït saûn löôïng
maø coøn coù theå phaùt trieån treân dieän roäng ôû
nhöõng vuøng ñaát môùi khaéc nghieät (maën, khoâ
haïn, pheøn,…) khoù canh taùc cho ñeán nay.
vieäc öùng duïng roäng raõi GMO gaëp
phaûi söï phaûn ñoái gay gaét töø nhieàu
nhaø khoa hoïc, vì cho raèng chuùng taïo
neân :
– Caùc thöïc phaåm coù ñoäc toá tieàm