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LABORATORIO DE
INMUNOLOGIA Y METODOS
DE INMUNOENSAYO
QUE ES UN LABORATORIO
CLINICO?
ORGANIZACION DEL
LABORATORIO
Inmunologa: realiza pruebas sobre
ORGANIZACIN DEL
LABORATORIO
Podemos organizar el laboratorio en
distintas reas de trabajo.
Sala de espera y recepcin: se recibe
a los pacientes
Toma de muestras: esta es la zona
donde se toman las muestras a los
pacientes, para luego distribuirlas a las
diferentes secciones del laboratorio
ORGANIZACIN DEL
LABORATORIO
Microscopio
Centrifuga
Balanza Analtica
Espectrofotmetro
Esterilizadores
PARTES DE LA
CENTRIFUGA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Tapadera
Cmara
Base
Interruptor de
encendido
Marcador de tiempo
Tacmetro
Freno
Control de velocidad
CENTRIFUGA
BALANZA ANALITICA
PARTES DEL
ESPECTROFOTOMETRO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Chasis
Porta cubeta
Selector de filtro
Selector de modo
Ajuste grueso
Selector de longitud
de onda
Indicador de longitud
de onda
Pantalla
ESPECTROFOTOMETRO
ESTERILIZADORES
Reacciones de
Aglutinacin
Cuando
el antgeno libre o unido a un soporte se enfrenta al anticuerpo,
el complejo antgeno-anticuerpo resultante se observa como una
aglutinacin
El proceso tiene dos fases: unin reversible y aglutinacin por formacin
de puentes entre los anticuerpos IgG divalentes o IgM multivalentes y los
antgenos
Dan fenmeno de prozona (aglutinacin aparente por exceso de
antgeno o anticuerpo sin aglutinacin
Reacciones de Inhibicin
Basadas en la incapacidad de algunos microorganismos para realizar
determinadas actividades biolgicas en presencia de anticuerpos
especficos. Las mas utilizadas son dos:
Inhibicin de la Hemaglutinacin
Esta aglutinacin puede ser inhibida por la presencia de anticuerpos
especficos en el suero del paciente
Neutralizacin
Algunos virus (poliovirus) no desarrollan su efecto citoptico habitual en
clulas de cultivo celular cuando hay presentes anticuerpos especficos.
Reacciones de
Precipitacin
Formacin de estructuras insolubles por unin ente el antgeno soluble y
el anticuerpo especfico incapaces de permanecer en solucin
El precipitado puede ser puesto de manifiesto mediante tcnicas de
nefelometra o inmunoturbidimetra.
Inmunodifusin doble
Se enfrentan concentraciones conocidas de antgeno soluble con un
antisuero problema en un medio gelificado
Tras un perodo en el que se permite difundir a ambos elementos
puede observarse en el caso de que existan anticuerpos, bandas de
precipitacin que pueden ser identificadas a simple vista o mediante
tincin proteica.
Inmunodifusin Radial
Se disuelve el anticuerpo en el agar y se colocan en pocillos
diluciones del antgeno.
Si se corre simultneamente una curva patrn puede cuantificarse
por regresin la cantidad de antgeno.
Es mas til para para la deteccin de antgenos que de anticuerpos
Contrainmunoelectroforesis
Puede ser utilizada tanto para detectar antgenos como anticuerpos
Combina la electroforesis (migracin de antgenos y anticuerpos en un
gel de agarosa por accin de un campo elctrico) con la precipitacin
(formacin de lneas de precipitado en un gel de agarosa cuando se
produce la reaccin antgeno-anticuerpo).
Inmunohistoqumica enzimtica
Se usa el tejido del paciente, al que se le agrega anticuerpos marcados con
enzimas.
Se revela el marcador y se observa la presencia o ausencia de color.
Usado para detectar antgeno, en ocasiones post mortem, por ejemplo
pacientes infectados con Rabia
Inmunoensayos
Para detectar antgenos Metodologa ELISA
Utilizan anticuerpos de captura pegados a un elemento fijo, portaobjetos,
esfera de poliestireno, pocillo de microplaca, etc.
Inmunoensayos
Para detectar anticuerpos Metodologa ELISA
Utilizan antgenos unidos a un elemento slido
(esfera de poliestireno, pocillo de microplaca al
que se le aade suero del paciente.
Si el suero tiene anticuerpos especficos se unen a Los antgenos.
La reaccin se revela mediante un segundo anticuerpo conjugado con:
Enzima
Enzimoinmunoensayo (EIA)
Istopo radioactivo (I125)
Radioinmunoensayo (RIA)
Sustancia fluorescente
Fluoroinmunoanlisis (FIA)
Se lee la seal con un espectrofotmetro (EIA), contador de centelleo (RIA)
o un fluormetro (FIA)
TECNICAS DE
INMUNOENSAYO
La intensidad de la coloracin o de la
inmunofluoresencia es proporcional a la
cantidad de elemento analizado
presente en la muestra.
TECNICA DE ELISA
VENTAJAS
Mtodo sensible.
Bajo costo.
Fcil manejo.
Permite desarrollar un gran nmero de
muestras en un corto perodo de
tiempo.
Buen equilibrio entre sensibilidad y
especificidad.
ETAPAS DE LA TECNICA
ELISA
MUESTRA CON
ANTICUERPO
O
ANTIGENO
FOSITO
TAPIZADO
CON ANTIGENO
O
ANTICUERPO
CONJUGADO DE
AG O AC
CON ENZIMA
INCUBACION
LAVAR
FOSITO
TAPIZADO
CON ANTIGENO
O
ANTICUERPO
S
U
S
T
R
A
T
O
I
N
C
U
B
A
R
FOSITO
TAPIZADO
CON ANTIGENO
O
ANTICUERPO Y
CONJUGADO
LAVAR
FOSITO
TAPIZADO
CON ANTIGENO
O
ANTICUERPO Y
CONJUGADO
FOSITO
TAPIZADO
CON ANTIGENO
O
ANTICUERPO Y
CONJUGADO
COLOREADO
SOL.
SUBSTRATO
CONTROLES
CONJUGADO
MATERIALES Y EQUIPO
PUNTAS DESCARTABLES
MICROPIPETAS
ESPECTROFOTOMETRO
RECOMENDACIONES
MODO CORRECTO DE
UTILIZAR LA MICROPIPETA
TIPOS
ELISA INDIRECTO
DETECCION DE
ANTICUERPOS
ELISA COMPETITIVO
ANTICUERPOS
ELISA DIRECTO
CAPTURA DE ANTIGENO
SANDWICH