Professional Documents
Culture Documents
Gan : Urease
§u ®ñ : papain
Døa : bromelin
Sung ; fixin
Malt ®¹i m¹ch: amylase
Gi¸ ®Ëu: Urease
MÇm h¹t thÇu dÇu : lipase
ChÌ : polyphenoxydase, protease, pectinase,
amylase, invertase
Enzyme vi sinh vËt
§a pH=9
40% (NH4)2SO4
KÕt tña Hoµ tan kÕt tña KÕt tña SÊy kh«
0,1 photphat buffer 1M NACl
T¸ch vµ tinh chÕ pepsin
Röa s¹ch
NghiÒn
5%HCl, 42oC, 42 g
22% NACl
Ph©n huû Läc KÕt tña ChÕ phÈm
C¸c ph¬ng ph¸p thu chÕ phÈm enzyme vi sinh
vËt
Qui tr×nh s¶n xuÊt chÕ phÈm enzyme vi sinh vËt bao
gåm c¸c giai ®o¹n chñ yÕu sau :
Siªu läc
-C¸c ph©n tö nhá ®îc läc qua nhê ¸p lùc
- Dïng ®Ó c« ®Æc protein
TÝnh ph©n cùc
S¾c ký trao ®æi ion
-S¾c ký ¸i lùc
- C¬ chÊt hoÆc chÊt øc chÕ liªn kÕt víi gi¸ thÓ
- Ph¶n hÊp phô nhê sù ®Èy c¬ chÊt hoÆc thay ®æi pH, lùc ion
S¨c ký ¸i lùc
C¸c protein hçn hîp (fusing protein)
-Glutathione-S-transferase: glutathione
- Maltose binding protein:maltose
-Hexahistidine:Ni2+ (t¸ch röa nhê imidazole hoÆc
thrombine vÞ trÝ c¾t ®îc bæ sung sau His-tag.
C¸c lo¹i s¾c ký kh¸c
¸i lùc t¸ch röa
- Sau khi xuÊt hiÖn ë bíc ph¶n hÊp thô
- Cã thÓ gi¶i quyÕt mét sè vÊn ®Ò cña s¾c ký ¸i lùc
vµ dÔ n©ng cÊp.
S¾c ký dye – ligand
-Cibacron Blue F3G-A cã thÓ g¾n víi nhiÒu lo¹i
dehydrogenase vµ kinase
- Procion Red He-3B g¾n tèt víi NADP+ -tuú thuéc
vµo dehydrogenase.
S¾c ký hËp phô miÔn dÞch
- Cè ®Þnh kh¸ng thÓ vµo Sepharose xö lý CNBr
- §¹t ®îc tinh s¹ch cao
S¾c ký covalent
- T¸ch cysteine chøa protein sö dông thiol-Sepharose 4B
C¸c d¹ng chÕ phÈm enzyme