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AISLAMIENTO Y
CARACTERIZACIN DE ENZIMAS
Tamao del
genoma (Mpb)*
Nmero de
cromosomas
Nmero de
genes
Secuencias
codificadoras para
protenas(%)
Virus de la
Hepatitis B
0.5
12
99
Escherichia coli
4.6
4,288
88
Saccharomyces
cervisiae
12
16
6,000
70
Caenorhabditis
elegants
97
19,000
25
Arroz
440
~35,000
~10
Drosophila
180
13,600
13
Pollo
1,200
39
Ratn
3,000
20
Vaca
3,000
30
Humano
3,000
23
~35,000
1-1.5
Fuente
El ensayo
Como liberar una la protena de su nicho natural
Solubilidad, Tamao, Carga y Afinidad
PURIFICACIN
CARACTERIZACIN
Electroforesis
Secuencia peptdica
Mapeo Trptico
Intercambio inico
Interaccin hidrofbica
SEC
Fraccionamiento por
diferencia de coeficioente
de difusin
Ultracentrifugacin
analtica
Espectroscopa
Dispersin de luz
dinmica
Anlisis de glicosilacin
Espectrometra de masas
Calorimetra
Determinacin de
estructura
Homogeneizador
Potter-Elvehjem
Tejidos blandos
Polytron
Tejidos blandos y
duros
Prensa de French
Bacterias
Materiales
Vegetales
Bomba de nitrgeno
Clulas
Sonicador
Orgnelos y clulas
Medio hipotnico
Clulas de la sangre
Enzimas (lisozima)
Hidrlisis de la pared
celular bacteriana
El ensayo
Cromatografa de afinidad
Step
Total protein
(mg)
Total activity
(Unidades=mi
cromoles/min)
Specific
activity,
(U/mg)
Yield (%)
Purification
level
Homogenization
15,000
150,000
10
100
Salt fractionation
4,600
138,000
30
92
Ion-exchange
chromatography
1,278
115,500
90
77
Molecular
exclusion
chromatography
68.8
75,000
1,100
50
110
Affinity
chromatography
1.75
52,500
30,000
35
3,000
electroforesis
Elecroforesis de zona
Isoelectroenfoque
PAGE-SDS
PAGE-SDS
Isoelectroenfoque
2D
HPLC
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK56011/
Technique
Process
Application
Technique
Process
Application
HPLC/CE
HPLC/CZE
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