Nội dung tiết học

4.4. Thu nhận protein

4.4.3. Phương pháp sắc kí
4.4.3.2. Phương pháp sắc kí trao đổi ion
Phương pháp sắc kí trao đổi ion
Nguyên tắc
 Dựa vào điện tích thực của protein tại một
điểm pH nhất định.

 Tương tác giữa protein mang điện với các

hạt nhựa trao đổi ion.

 Tách giải bằng cách tăng nồng độ của ion

trong pha động.
Phương pháp sắc kí trao đổi ion
Nguyên tắc Mô hình sắc kí trao đổi ion
Phương pháp sắc kí trao đổi ion
Nguyên tắc Tương tác protein – nhựa trao đổi ion

(a) Những hạt mang điện tích
dương sẽ trao đổi ion âm với
dung dịch đệm. Protein tích điện
âm cũng trao đổi ion dương
tương tác với nó.
b)protein thay thế những ion âm
tương tác với hạt, như hạt thay
thế những ion dương tương tác
với protein.
Phương pháp sắc kí trao đổi ion
Các phương pháp

- Sắc kí trao đổi ion dương

- Sắc kí trao đổi ion âm

Phương pháp sắc kí trao đổi ion
Các phương pháp
Sắc kí trao đổi ion dương
 Nhựa trao đổi mang điện tích âm: thường
sử dụng cột diethylaminoethyl-cellulose
(DEAE-cellulose)
 Tương tác với protein mang điện tích
dương.
 Tách giải bằng cách tăng nồng độ của ion
trong pha động, ion dương (Na+)sẽ thay thế
phân tử protein
Phương pháp sắc kí trao đổi ion
Các phương pháp
Sắc kí trao đổi ion âm
 Nhựa trao đổi mang điện tích dương:
thường sử dụng cột carboxymethyl-cellulose
(CM-cellulose)
 Tương tác với protein mang điện tích âm.
 Tách giải bằng cách tăng nồng độ của ion
-
trong pha động, ion âm trong dung dịch(Cl )
sẽ thay thế phân tử protein
 Phương pháp sắc kí trao đổi ion
Các lưu ý

 Thực hiện ở pH thích hợp.

 Nồng độ ion trong dung dịch đệm.
 Có thể sử dụng biến thiên pH (gradient pH)
hoặc biến thiên nồng độ ion (gradient nồng
độ ion) để đạt được kết quả phân tách
protein tốt nhất.